Cultivo Viral

Dr. Manuel González

Cultivo viral
• Es la replicación y propagación de un virus en condiciones in vitro.
• También se conoce como aislamiento viral.
• Se puede realizar en:
• Animales de laboratorio.
• Huevos embrionados.
• Cultivos celulares.

• Luego del aislamiento, se debe realizar la identificación viral.

• Requerimientos:
• Bioseguridad.
• Uso de EPP.
• Aplicación de buenas prácticas microbiológicas.
• Infraestructura.
• Equipamiento.
• Personal entrenado.
 Preparación de las muestras

• Antes de realizar un cultivo viral, las muestras deben descontaminarse

con:
• Antibiótico.
• Antimicótico.
• Centrifugación.

• Para eliminar la flora bacteriana.

 Animales de laboratorio
• Es el método más antiguo.

• Se puede realizar en:

• Ratones lactantes y adultos.
• Cobayos.
• Conejos.
• Primates.
• Actualmente casi no se usan por:
• Alto costo de mantenimiento de los animales.
• Infraestructura compleja y costosa (bioterios).
• Riesgo de manipulación.
• Virus latentes en los animales.

• Se usan con fines de investigación sobre infectividad, inmunidad,

oncogenicidad, vacunas, entre otros.
 Huevos embrionados
• Se usan huevos de gallina y a veces de pato, con embriones de 7 a 14 días.

• Pueden inocularse en:

• Cavidad anmiótica – mixovirus.
• Cavidad alantoidea – paramixovirus.
• Membrana corioalantoidea – herpesvirus.

• Ventajas:
• Son estériles.
• Carecen de respuesta inmune.
• Pocos virus latentes.

• Actualmente su uso está restringido a la producción de la vacuna contra influenza.

 Cultivos celulares
• Son células que se mantienen viables en frascos o tubos con medios
nutritivos enriquecidos con suero, antibiótico, vitaminas, a 37°C y en
condiciones estériles.

• Pueden ser:
• Cultivos primarios.
• Líneas celulares.
 Cultivos primarios

• Obtenidos del primer cultivo in vitro de células obtenidas directamente de

un organismo.

• Poseen un número normal de cromosomas.

• Al cabo de unos pasajes las células mueren.

• Los más usados son:

• Fibroblastos de riñón de primates.

• Sirven para multiplicar varios tipos de virus.

 Líneas celulares

• Pueden ser:
• Diploides.
• Continuas.
 Diploides

• Obtenidas a partir de cultivos primarios.

• Conservan morfología intacta.

• Número normal de cromosomas.

• Capacidad de replicación de 50 a 80 veces.

• Tienen sensibilidad a muchos virus.

• Las más usados son:

• MRC-5 – riñón de mono rhesus
 Continuas

• Son células de cultivo primario que se transforman.

• Características:
• Replicación ilimitada (líneas inmortales).
• Número de cromosomas variable.
• Son sistemas celulares nuevos.

• Algunas líneas continuas:

• VERO – riñón de mono verde africano.
• HeLa – cáncer de cervix.
• BHK – riñón de hámster.
• C6/36 – células de mosquito.
 Detección de virus en cultivos celulares
• La multiplicación del virus en el cultivo se puede identificar de varias
formas:
• Acción citopatogénica (efecto citopático).
• Inmunofluorescencia.
• Reacción en cadena de la polimerasa (PCR).
• Detección de antígenos virales.
 Medición de la actividad biológica viral
• La infectividad se mide la cantidad de inóculo viral necesario para
obtener una respuesta específica del hospedador.

• La determinación cuantitativa de la infectividad se llama titulación.

• Título viral es el número de unidades infecciosas presentes en el

inóculo por unidad de volumen.

• Unidad infecciosa es la mínima cantidad de virus que se necesita

inocular en un hospedador para obtener una respuesta específica.