DIAGNÓSTICO DE LAS

ENFERMEDADES VIRALES
ESTUDIANTE: CARLA PÁRRAGA
GRUPO: 1A
D O C E N T E : D R A . M A G A LY S E J A S
 OBJETIVOS Métodos de laboratorio
• Confirmar el diagnóstico identificando el agente
• Examen citológico
vírico de la infección
• Microscopia electronica
• Seleccionar un tratamiento antimicrobiano adecuado • Aislamiento y cultivo de virus
• Comprobar el cumplimiento de la toma de fármacos • Detección de proteínas víricas (antígenos y
antivirales enzimas)
• Definir la evolución de la enfermedad • Detección de material genetico vírico
• Hacer un seguimiento epidemiologico de la • Serologia

enfermedad
• Educar a medicos y pacientes

Estos métodos permiten llevar acabo diferentes tareas, como:

• Descripción de los efectos citopatológicos inducidos por el
virus en las células
• Detección de partículas víricas
• Aislamiento y crecimiento del virus
• Detección y análisis de componentes víricos
• Evaluación de la respuesta inmunitaria del paciente al
virus (serología)
OBTENCIÓN DE MUESTRAS
Tipos de muestras:
• Virus respiratorios: Lavado nasal, hisopo de garganta,
La sintomatologia del paciente, sus antecdentes de viajes, la
hisopo nasal, esputo
estación del año y el diagnóstico de sospecha ayudan a
• Virus gastrointestinales: Heces, hisopo rectal
determinar las técnicas adecuadas para identificar un agente
• Virus causantes de exantema maculopapular: Hisopo de
vírico.
garganta, hisopo rectal, orina
• Virus causantes de exantema vesicular: Líquido de
vesículas, raspado o hisopo
ASPECTOS A TOMAR EN CUENTA: • Virus del SNC: heces, LCR, sangre, biopsia cerebral,
tejido, saliva
LAS MUESTRAS SE DEBEN OBTENER • Virus del ap. urinario: orina
EN UNA ETAPA PRECOZ DE LA FASE
AGUDA DE LA INFECCIÓN, ANTES DE
QUE DEJE DE DIFUNDIRSE EL VIRUS
• Cuanto menor sea el intervalo transcurrido entre la
obtención de la muestra y su envió al laboratorio, mayor
será la posibilidad de aislar un virus.
 Citología Microscopia electrónica
• Muchos virus producen efectos citopatologicos característicos • Se puede emplear para la detección de virus cuando existe un
• Estos ECP, pueden ser: numero suficiente de partículas víricas
⚬ Modificaciones de la morfología celular • Se emplea la adición de un anticuerpo especifico del virus,
⚬ Lisis celular para que las partículas se agrupen, facilitando su detección e
⚬ Formación de vacuolas identificación
⚬ Formación de sincitios
⚬ Presencia de cuerpos de inclusión
• Las muestras se analizan mediante inmunofluorescencia o PCR
• Son pruebas específicas

• Las inclusiones nucleares de Cowdry de tipo A en las cél. son

un hallazgo característico en células infectadas por VHS o
VVZ.
• Presencia de cuerpos de Negri (inclusiones citoplasmaticas) en
tej. cerebrales, indican rabia
 AISLAMIENTO Y CULTIVO DE VIRUS
CULTIVOS CELULARES
CULTIVOS CELULARES PRIMARIOS
• Se obtienen por tratamiento de algún
órgano animal especifico con tripsina o
colagenasa
• Las células se cultivan en una monocapa o
en suspensión
• Requieren medios artificiales
complementarios
• Pueden dar lugar nuevas monocapas para
convertirse en cultivos secundarios.
• Capacidad de pasaje muy limitada
• Cél. primarias de riñon de mono:
aislamiento del virus de la gripe,
paramixovirus, enterovirus y algunos
adenovirus
LÍNEAS DE CELULAS DIPLOIDES
• Son cultivos de un único tipo de célula
• Permite un gran número de pases, hasta
100, antes de perder su capacidad
diploide
• Cél. diploides fetales humanas:
crecimiento de VHS, VVZ, CMV,
adenovirus, picornavirus.
LÍNEAS CELULARES TUMORALES y
LÍNEAS CELULARES
INMORTALIZADAS
• Iniciadas a partir de tumores humanos o
animales
• Se componen de un solo tipo de células
• Pueden ser sometidas a pases continuos
sin envejecer
• Células HeLa: excelentes para aislar el
virus respiratorio sincital, los adenovirus
y el VHS.
El aislamiento de los
virus permite su estudio
posterior y el archivo de
muestras, pero puede
poner al personal en
situación de riesgo de
infección.
 DETECCIÓN VÍRICA Cuantificación de los virus
Se pueden cuantificar mediante la determinación de la
Se puede detectar e identificar mediante:
dilución mayor que conserva las siguientes
• La observación de ECP
propiedades (título):
• Técnicas de inmunofluorescencia • Dosis de cultivo tisular (DCT 50): título de virus
• Análisis genómico del cultivo celular que provoca efectos citopatológicos en la mitad de
infectado las células de cultivo celular
Para algunos virus que crecen lentamente, • Dosis letal (DL50): título de virus que destruye el
y no provocan ningún ECP, para su 50% de un conjunto animales incluidos en la
prueba
diagnostico se emplea pruebas
• Dosis infecciosa (DI50): título de virus que
serologicas o la detección de proteínas o
provoca un síntoma identificable, formación de
genomas viricos. anticuerpos u otra respuesta en el 50% de animales
participantes

INTERPRETACIÓN DE LOS RESULTADOS DE LOS CULTIVOS

• La detección de culaquier virus en los tejidos, se considera un hallazgo significativo.
• En muchos casos la diseminacion de los virus no guarda relación con los síntomas de la enfermedad
• Algunos virus se eliminan de forma intermitente sin provocar síntomas
• Los resultados no son del todo fiables debido a que la muestra puede haber sido manipulada incorrectamente
 DETECCIÓN DE DETECCIÓN DE MATERIAL
PROTEÍNAS VÍRICAS GENÉTICO VÍRICO
La secuencia genética de un virus es una característica diferencial importante de la familia, el tipo
• Durante la replicación vírica se sintetizan enzimas y proteínas y la cepa del virus
detectables mediante métodos bioquímicos, inmunologicos y de Se emplea sondas genéticas especificas de secuencias y métodos de amplificación del ARN y
biologia molecular ADN semejantes a la técnica PCR
• Permite identificar y cuantificar virus específicos • Sondas de ADN: permite detectar virus incluso en ausencia de replicación virica.
• Hibridación in situ: permite detectar secuencias especificas en muestras de biopsias de tejido
• Emplea el uso de anticuerpos
fijadas y permeabilizadas
• La deteción de antígenos se puede hacer mediante:
• Southern blot o Dot blot: el genoma o los fragmentos se aplican sobre filtros de nitrocelulosa
⚬ Inmunofluorescencia y posteriormente se detectan mediante sondas de ADN que se hibridan con ellos
⚬ Enzimoinmunoanálisis (EIA) • PCR: permite la detección, cuantificación y identificación de virus de ADN
• El virus o el antígeno se puede detectar mediante: • PCR con transcriptasa inversa (RT-PCR): permite la detección, cuantificación y
⚬ Análisis de inmunoadsorcón ligadas a enzimas (ELISA) identificación de virus de ARN
⚬ Radioinmunoanálisis (RIA) • Espectrometria de masas con desorción/ionización láser asistida por matriz y tiempo de vuelo
(MALDI-TOF MS)
⚬ Aglutinación con látex (LA)
 LIMITACIONES DE LOS MÉTODOS SEROLÓGICOS
SEROLOGÍA VÍRICA • La presencia de un anticuerpo antivirico, indica una infección previa, pero no
cuando se produjo
• Hallazgo de IgM especifica del virus, incremento del titulo de anticuerpos o
Se utilizan estudios serologicos para identificar: los perfiles de anticuerpos especificos son indicativos de infección reciente
• Virus difíciles de aislar y cultivar en cultivos • Se pueden producir resultados falsos positivos o falsos negativos
celulares
• Virus que provocan enfermedades de larga
duración
Se pueden utilizar para identificar un virus y su cepa o
serotipo
Detección de anticuerpos IgM específicos del virus
indica una infección primaria reciente.

• Primeros anticuerpos que se detectan son los que

van dirigidos contra antígenos más accesibles para
el sistema inmunitario
• Anticuerpos contra proteínas y enzimas víricas
intracelulares se detectan en fases mas avanzadas
de la infección
 MÉTODOS DE ANÁLISIS SEROLÓGICOS
• Fijación del complemento
• Inhibición de hemaglutinación
• Neutralización: estudia los anticuerpos basándose en el
reconocimiento y la unión a los virus
• Inmunofluorescencia
⚬ Directa
⚬ Indirecta: se utiliza para detectar y cuantificar el antigeno
virico y el anticuerpo.
• Aglutinación con latex
• Enzimoinmunoanalisis (EIA)
• Enzimoinmunoanalisis de adsorción (ELISA)
• Radioinmunoanalisis (RIA)
• Western blot
¡GRACIAS!