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FACULTAD DE CIENCIAS BIOLÓGICAS
ÁREA DE FISICOQUÍMICA
LICENCIATURA EN BIOTECNOLOGÍA
LABORATORIO DE FISICOQUÍMICA II
EQUIPO 8
Espectrofotometría
Aplicaciones
Las aplicaciones principales son:
Determinar la cantidad de concentración en una solución de algún
compuesto
Para la determinación de estructuras moleculares.
La identificación de unidades estructurales específicas ya que estas tienen
distintos tipos de absorbancia (grupos funcionales o isomerías).
Determinar constantes de disociación de indicadores ácido-base
Espectrofotómetro
Ley de rapidez
Si se tiene la reacción: aA + bB p
La rapidez viene dada por la siguiente relación:
1 -d [A] 1 -d [B]
r = --- ---------- = --- --------------- = k [A]α [B]β
a dt b dt
Donde k es la constante de rapidez de la reacción.
Orden de reacción: la rapidez de reacción es proporcional a las concentraciones
de los reactantes elevadas a una potencia, por lo que es conveniente hablar de
orden de reacción.
r = k [A]
En este caso decimos que la reacción es de primer orden, ya que la potencia a la
cual esta elevada la concentración es igual a uno.
r = k [A]2 esta es una reacción de segundo orden así como la siguiente: r = [A] [B]
Entonces en general podemos tener:
r = k [A]α [B]β Donde n = α + β
n es el orden total de la reacción. Es importante señalar que el orden de reacción
es estrictamente una magnitud experimental, que depende exclusivamente de la
forma en que la rapidez se relaciona con la concentración de reactantes.
Molecularidad: cada etapa en el mecanismo de una reacción se denomina
reacción elemental; por lo tanto, una reacción compleja tiene dos o más etapas
elementales. A fin de establecer cuantas moléculas intervienen en una reacción
elemental se introduce el termino molecularidad. Esta representa una deducción
del número de moléculas que participan en una reacción química elemental.
Pseudo orden: Si en una reacción hay exceso de uno de los reactantes, de forma
tal que su concentración no cambia apreciablemente a medida que transcurre el
tiempo, la investigación cinética no revelara dependencia alguna de rapidez
respecto a la concentración de esa sustancia. El resultado es un orden diferente al
real llamado pseudo orden.
Curvas de calibración
LEY DEBOUGUER-LAMBERT-BEER
Donde, A = Absorbencia
ε = Coeficiente molar de extinción
d = Recorrido (en cm)
c = Concentración molar
A medida que la luz atraviesa un medio que la absorbe, la cantidad de luz
absorbida en cualquier volumen corresponde a la intensidad de luz que incide,
luego se multiplica por el coeficiente de la absorción. Frecuentemente la
intensidad de un haz de luz incidente declina significativamente a medida que
pasa a través del medio absorbente. Cuando esta relación se expresa como Ley
de BOUGUERLAMBERT-BEER, tenemos que:
Donde, T = Transmitancia
ε = Coeficiente molar de extinción
c = Concentración molar del absorbente
d = Recorrido en cm
La transmitancia se puede expresar como la intensidad de la radiación incidente,
Io. Esto puede dividir a la luz que emerge de la muestra, I. Se refiere a la relación
I/Io como transmitancia o como T. La transmitancia se puede trazar con relación a
la concentración, pero esta relación no sería Lineal. Aunque el logaritmo negativo
en base 10 de la transmitancia sí es lineal con la concentración. De esta forma, la
absorción es medida como:
HIPÓTESIS
o 1 Espectrofotómetro
o 1 Cronómetro
o Guantes de polietileno o látex
o Pañuelos desechables de bolsillo (no perfumados)
o 1 Termómetro
o 2 Matraces aforados de 25 ml.
o 2 Vasos de precipitados de 50 ml.
o 2 Pipetas graduadas de 5ml.
o Solución de Yoduro de potasio 0.075M
o Solución de persulfato de potasio 0.015M
DESARROLLO EXPERIMENTAL
(MÉTODO DE AISLAMIENTO)
1. Conectar el espectrofotómetro y dejar calentar durante 30 min. Para que se auto
verifique, regule y estabilice apuntando a 465 nm.
2. La tapa del porta celda debe estar siempre cerrada.
3. Tomar una alícuota de 5 ml de solución de yoduro de potasio y agregarla en
una primera celda hasta la marca indicada, la cual servirá de blanco.
4. Introducir la celda en la dirección correcta indicada en el porta celda y cerrar y
calibrar el aparato a cero de absorbancia.
5. Mezclar 5 ml de la solución de yoduro de potasio con 5 ml de solución de
persulfato de potasio, agitar e iniciar simultáneamente el tiempo de reacción,
tomar la temperatura de la mezcla de reacción.
6. Tomar una alícuota de la mezcla de la reacción y agregarla en una segunda
celda hasta la marca.
7. Cambiar la celda del blanco por la de reacción, cerrar y tomar valores de
absorbancia cada 3 minutos hasta completar 10 lecturas.
8. Sacar la celda, limpiarla con agua y apagar el equipo.
NOTA: Las lecturas deberán ser cada 3 minutos después de haber metido la
muestra ya que cambian muy rápido. Por lo tanto, podemos decir que el tiempo
total de reacción será de 30 minutos.
DATOS EXPERIMENTALES
2 R² = 0.995591372765505
0.008 1.294
1.5
0.006 0.857 1
0.5
0.004 0.479
0
0 0.002 0.004 0.006 0.008 0.01 0.012 0.014 0.016
0.002 0.138 [I3-], M
0.001 0.016
Tabla 2.- Valores de tiempo y absorbancia de la mezcla
de reacción realizada a 22 °C.
[K2S2O8]0K2S2O80
La concentración inicial del persulfato de potasio (0.015 M)
|¿|m ( I 2 ) +b
b+ ¿ =I 2 ¿
||
m
0.2475+ 0.136
Tiempo: 208 s I 2= =0.001960 M
195.6
0.2475+ 0.27
Tiempo: 388 s I 2= =0.002645 M
195.6
0.2475+ 0.4
Tiempo: 568 s I 2= =0.003310 M
195.6
0.2475+ 0.51
Tiempo: 748 s I 2= =0.003872 M
195.6
0.2475+ 0.624
Tiempo: 928 s I 2= =0.004455 M
195.6
0.2475+ 0.743
Tiempo: 1108 s I 2= =0.005063 M
195.6
0.2475+ 0.855
Tiempo: 1288 s I 2= =0.005636 M
195.6
0.2475+ 0.969
Tiempo: 1468 s I 2= =0.006219 M
195.6
0.2475+ 1.073
Tiempo: 1648 s I 2= =0.006751 M
195.6
0.2475+ 1.178
Tiempo: 1828 s I 2= =0.007287 M
195.6
0.2475+ 1.281
Tiempo: 2008 s I 2= =0.007814 M
195.6
0.2475+ 1.371
Tiempo: 2188 s I 2= =0.008274 M
195.6
0.2475+ 1.469
Tiempo: 2368 s I 2= =0.008775 M
195.6
0.2475+ 1.554
Tiempo: 2548 s I 2= =0.009210 M
195.6
0.2475+ 1.664
Tiempo: 2728 s I 2= =0.009670 M
195.6
0.2475+ 1.72
Tiempo: 2908 s I 2= =0.010058 M
195.6
Pseudo orden cero: [A]t=[A]0−ak′∗t
tiempo K2S2O8
(s)
Gráfica 1: Pseudo orden 0
208 0.013
388 0.0123 11
568 0.0116
748 0.0111
928 0.0105
1108 0.0099
1288 0.0093
1468 0.0087 [A]t
1648 0.0082
1828 0.0077
2008 0.0071
2188 0.0067
2368 0.0062
2548 0.0057
2728 0.0053
2908 0.0049
Tiempo s
Tiempo
In [A]
(s)
208 -4.339733
388 -4.393694 Gráfica 2: Pseudo orden 1
11
568 -4.449021
748 -4.498290
928 -4.552103
1108 -4.611490
1288 -4.670882
1468 -4.735164
-
1648
4.7976632 Tiempo s
-
1828
4.8648480
2008 -4.935620
2188 -5.001774
2368 -5.079181
2548 -5.151622
-
2728
5.2344040
2908 -5.309985
Pseudo orden dos: 1/ [A]0 - 1/[A]t = -ak´t
Tiempo (s) 1/At Grafica 3: Pseudo orden 2
208 76.3184 250
388 80.7335
568 85.3925 200
1/At
1108 100.6331 100
1288 106.7911
1468 113.8046 50
1648 121.1532
0
1828 129.5803 0 500 1000 1500 2000 2500 3000 3500
2008 139.0901 Tiempo s
2188 148.6088
2368 160.2421
2548 172.6437
2728 187.5484
2908 202.2776
COMENTARIOS
investigaciones biológicas.
CONCLUSIÓN
BIBLIOGRAFÍAS
(N.d.). Unam.Mx. Retrieved September 27, 2021, from
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