Cuaderno de Prácticas Lucia Marquez Lopez

Análisis bioquímico Curso 2018/2019
Práctica UD 1
PRÁCTICA Nº 1 ESPECTRO DE ABSORCIÓN

NOMBRE: Lucía Márquez López
FUNDAMENTO
El espectro de absorción es el conjunto de bandas (transiciones electrónicas) que indican la cantidad de luz absorbida por una sustancia a diferentes
valores de longitud de onda, y es único y característico de cada sustancia.
El espectro de absorción se puede representar gráficamente (absorbancia/longitud de onda), y se registran diferentes picos de mayor absorbancia a
determinadas longitud de onda.
OBJETIVO
Con esta práctica pretendemos recoger las absorbancias que una disolución de azul de metileno presenta a distintas longitudes de onda y construir su
correspondiente espectro de absorción para determinar las longitudes de onda a las que dicha absorción es máxima.
EQUIPOS, MATERIALES Y REACTIVOS
Equipo:
● Campana
● Espectrofotómetro
Materiales:
● Cubetas 2
● Vaso precipitado
● Frasco lavador
● Papel secante
● Papel filtro
● Gradilla cubeta
IES PROFESOR GONZALO HUESA 1

Práctica UD 1
● Rotulador indeleble
● Puntas azules
● Micropipeta P1000
Reactivos:
● Rojo de metilo.
● Agua destilada.
PROCEDIMIENTO
1º) Ponerse la bata y recogerse el pelo.
2º) Limpiar la zona de trabajo con alcohol preparado y papel secante.
3º A continuación preparar el material necesario que vaya a utilizar.
4º) Una vez preparado el material llenar 2 cubetas de agua destilada una para el blanco (no llenar más de la marca) y otra para añadir el rojo de metilo.
5º) A continuación en la campana con ayuda de una micropipeta tomar del rojo de metilo 10 µl y verter en la cubeta homogeneizar bien con la punta de la
micropipeta, tapar con parafina y homogeneizar bien (no llevar la cubeta en la mano siempre en su gradilla, en este caso el corcho).
6º) Pasar al espectrofotómetro para medir la absorbancia de la cubeta distinta longitud de onda lo primero es encender el espectrofotómetro y graduar la
longitud de onda que se vaya a usar, en este caso es 400 nm, introducir primero la cubeta con el blanco y esperar a que los números estabilice y pulsar el
botón blan y dará 0 que es la absorbancia del agua.

Práctica UD 1
7º) Una vez medida la absorbancia del agua introducir la cubeta que contienen rojo de metilo sin cambiar la longitud de onda y anotar en la tabla el
resultado que salga en la pantalla y sacar la cubeta.
8º) De nuevo cambiar a la siguiente longitud de onda en este caso es 420nm y volver a introducir el blanco (ya que hemos cambiado de longitud de onda)
de igual manera esperar a que se estabilice los números y dará cero de nuevo e introducir la cubeta con el rojo de metilo y anotar el resultado.
Y así sucesivamente con todas las cubetas sin olvidar que cada vez que se cambie de longitud de onda hay que introducir la cubeta que contiene el blanco.
9º) Una vez que hemos acabado con el procedimiento apagar el espectrofotómetro y desconectarlo de la corriente y recoger y fregar el material. Poner los
materiales a secar y asegurarse de que todo queda limpio y bien recogido.
RESULTADO

Práctica UD 1

Práctica UD 1
420 440 460 480 500 520 540 560 580 600 620
λ 400
A 1,2 1,36 1,10 1,13 0,87 0,4 0,14 0,0 0,0 0,0 0,0 0,00
43 0 0 2 0 06 2 39 19 07 05 5
CONCLUSIONES
He comprobado que conociendo la concentración de una sustancia y estableciendo distintas longitudes de onda , para esa sustancia se puede realizar la
gráfica de su espectro de absorción, de forma que conoceremos su pico máximo, en este caso sabemos que nuestra sustancia es rojo de metilo, pero si no
lo supiéramos, podríamos conocer la sustancia al comparar la gráfica del espectro de absorción con otras gráficas patrón, ya que las sustancias presentan
siempre la misma absorción con las mismas longitudes de onda.
INCIDENCIAS Y PRECAUCIONES PARA LA ÓPTIMA REALIZACIÓN DE LA PRUEBA
En mi caso no he tenido ningún tipo de incidencias en esta práctica

Práctica UD 1
PRÁCTICA Nº 2 CURVA DE CALIBRACIÓN

NOMBRE: Lucía Marquez Lopez
FECHA: 26 de septiembre
C
A
L
I
F
I
C
A
C
I
Ó
N
:
FUNDAMENTO
La curva de calibrado es uno de los dos métodos por los que se puede llevar a cabo el procedimiento de calibración en la espectrofotometría UV-VIS lo que
nos permite establecer una relación matemática entre la absorbancia de una muestra y la concentración del analito.
OBJETIVO
Con esta práctica pretendemos realizarla curva de calibrado del reactivo: permanganato de potasio para determinar, posteriormente la concentración de
una muestra problema de dicho compuesto.

Práctica UD 1
Equipo:
Materiales:
● Cubetas (6)
● 1 Vaso precipitado
● Frasco lavador
● Pipeta pasteur
● Papel secante
● Papel de filtro
● Micropipeta P1000 y P20
● Puntas azules y amarillas
● Gradilla cubetas (corcho)
● Contenedor puntas de pipetas
● Parafina
● Cuaderno y libreta para anotar

Práctica UD 1
Reactivos:
● Rojo de metilo.
● Agua destilada.
● Suero de paciente.
PROCEDIMIENTO

2º) Realizar los cálculos correspondientes(reflejados en el resultado).
3º)Preparar la zona de trabajo, y para ello:
● Limpiar la mesa con alcohol preparado ( diluido) y papel secante.
● Ahora lavarse las manos y colocarse los guantes.
● A continuación poner el papel de filtro sobre la zona de trabajo.
● Preparar el material que vayamos a necesitar, cuidándose de tener todo organizado y sin obstáculos para evitar accidentes Tener en la
mesa el mínimo de cosas posibles solo lo necesario.
4º) A continuación pasar a rotular tanto el corcho con las cubetas así como el vaso de precipitado que va a contener agua destilada.
5º) Con el frasco lavador verter un poco de agua destilada en el vaso de precipitado.
6º) Y a continuación con ayuda de la micropipeta de 1000 µl (comprobar que funciona bien, que el seguro está bien colocado,…), Y colocar la punta azul que
es la que le pertenece, graduar la micropipeta que en este caso es 1 ml lo que equivale a 1000 µ y verter el líquido en cada una de la cubeta es decir 1000 µl
a cada cubeta.
7º) Una vez llena pasar a llenar la cubeta del blanco de agua destilada sola. Recordar que en la cubeta no puede llenarse sobrepasando la marca que trae
(una flechita).
8º)A continuación, como ya tenemos los cálculos hechos, sabemos cuál es el volumen de paso que en este caso es 110 µl. Pasar a realizar un banco de
disoluciones.
12º) A continuación pasar al espectrofotómetro para medir la absorbancia de cada cubeta incluida la del blanco, el espectrofotómetro debe ser encendido
al empezar la jornada de trabajo o la realización de la técnica y lo primero que se hace es graduar el espectrofotómetro, es decir poner la longitud de onda
que queremos, que en este caso es 430nm. A continuación levantamos la tapa y sacamos la cubierta e introducir la cubeta del blanco cerrar la tapa y
esperar a que los números se estabilicen una vez estabilizado pulsar el botón bla y esperar a que nos de cero que es la absorbancia del agua. Sacar la
cubeta del blanco y colocar la cubeta número 1 sin cambiar la longitud de onda y anotamos en la tabla el resultado. Dejar constancia de los datos en la
tabla que está en el resultado.

Práctica UD 1
13º) una vez que terminamos de medir la absorbancia de todas las cubetas, tomar 2 cubetas diferentes y juntar el contenido de ambas introducirlas en el
espectrofotómetro y anotar el número que no salga(1,623nm, esta es la concentración desconocida ).
14º)Apagar el espectrofotómetro y pasar a recoger el material. Fregar las cubetas con jabón y ayudándose de una escobilla pequeña enjuagarlas y ponerlas
a secar, guardar todos los materiales en su sitio y asegurarse de que el laboratorio queda limpio y recogido.
RESULTADO.
A C
cubeta 1: 1,709 0,1 %
Cubeta 2:0,981 0,01 × 10 elevado a la -1

Práctica UD 1
Dato 0,000001 × 10 elevado a -5
CONCLUSIONES.

Práctica UD 1
Tuve un error a la hora de verter el rojo de metilo, que lo vertí en la cubeta del blanco, pero en el mismo instante me di cuenta y lo solucione rápido, volví a
lavar la cubeta y secarla y llenarla de nuevo de agua destilada y no me ha perjudicado en nada en la técnica.
Hay que tener en cuenta que la longitud de onda no se cambia se mantiene la misma para todo el procedimiento.
CUESTIONES
1. ¿Por qué has elegido dicha longitud de onda para realizar la medición?
Porque es la longitud de onda la que más absorbe a lo que se quiere medir.
2. Calcula la concentración de la muestra problema de permanganato de potasio indicando el procedimiento y el razonamiento del
mismo.
Con respecto a la X es el dato que nos pide en el que queremos conocer por tanto no lo sabemos, en cuanto al 1,623 que es la fórmula es la
absorbancia de la muestra problema es el número del resultado de ver juntado dos cubetas diferente que en este caso es 1,623, en cuanto al 0,981
que es la absorbancia patrón cogemos el cogemos ese número porque la profesora nos pide que lo hagamos de la segunda cubeta y por último el
0,01 que corresponde a la concentración patrón es la concentración del segundo y por último el resultado es 0,06 y esa es la X
3. En vista de la gráfica obtenida. ¿Podrías afirmar que la absorbancia y la concentración siguen una relación lineal? ¿Podrías indicar
el límite de linealidad? Razona las respuestas.

Práctica UD 1
No tienen una relación lineal.
PRÁCTICA Nº 3 QUÍMICA SECA EN ORINA

FECHA: 26 septiembre CALIFICACIÓN:
FUNDAMENTO
Las tiras reactivas son métodos de química seca, algunas de las cuales son de uso habitual en el ámbito de la atención primaria. Su
utilización permite realizar una aproximación diagnóstica y el seguimiento de algunas patologías sin tener que retrasar la decisión terapéutica a
tomar. Su utilización es sencilla y no requiere de complejos métodos que dificulten su empleo. Es posible el adiestramiento del paciente para un
uso adecuado.
Las tiras reactivas de urianálisis (orina) son tiras de plástico en las cuales se han fijado parámetros en áreas separadas de reactivos. La prueba es
para la detección semi-cuantitativa de uno o más de los siguientes analitos en la orina: Gravedad Específica, pH, Leucocitos, Nitritos, Proteínas,
Glucosa, Cuerpos Cetónicos, Urobilinógeno, Bilirrubina y Sangre. Observe el membrete de la caja del juego con el analito específico de la tira del
examen y compárelo al color del analito apropiado en el cuadro para el resultado. Las Tiras Reactivas de Urianálisis (Orina) pueden ser leídas
visualmente y automáticamente con un analizador de orina, y son diseñadas para el uso profesional solamente.

Práctica UD 1
INTRODUCCIÓN

Práctica UD 1
En esta práctica vamos a realizar un análisis semicuantitativo de orina mediante el uso de tiras reactivas visuales.
Materiales:
● Vaso de recogida de muestras

● Pipeta pasteur
● Cristalizador
● Barras paralelas
● Tiras reactivas
● Bote tira reactivas
Reactivos:
● Orina
PROCEDIMIENTO

Práctica UD 1
2º) Preparar la zona de trabajo, para ello:

● Primero limpiar la mesa con lejía diluida y papel secante.
● A continuación, lavarse las manos y colocarse los guantes.
● Seguidamente ponemos el papel de filtro en la zona de trabajo.
● Preparar el material que vayamos a necesitar cuidando siempre de tener todo organizado para evitar accidentes.
3º) Colocar las barras paralelas encima del cristalizador.
4º) Situar la tira reactiva (coger por la parte que tiene más soporte) encima de las barras paralelas.
5º) Con ayuda de una pipeta Pasteur, tomamos orina y la vertemos encima de la tira, empapando bien y esperar 2 minutos.
6º) A continuación escurrir la tira y proceder a la lectura (reflejado en el resultado).
7º). Una vez finalizada la lectura pasar a recoger el material, fregar y secar los materiales y asegurarse de que todo queda bien recogido, la orina se desecha
por el desagüe diluida con agua abundante del grifo.
RESULTADO
En este caso se puede observar que la persona tiene indicio de padecer algún tipo de infección urinaria ya que tiene los leucocitos y los nitritos
coloreados.
CONCLUSIONES

Práctica UD 1
Esta técnica es una de las más utilizadas en los centros de urgencias. Para mejores resultados, el desempeño de las tiras reactivas debe ser confirmado
probando conocidos especímenes/controles positivos o negativos cuando una nueva prueba es hecha, o cuando un nuevo frasco de un nuevo lote es
abierto. Cada Laboratorio debe establecer sus propias metas con adecuados patrones de desempeño.

Ningún tipo de incidencia a pesar de que la tira reactiva estaba caducada.
CUESTIONES
1. ¿Qué dificultades has encontrado al realizar la lectura de las tiras reactivas?
En este caso no, he podido diferenciar bien cada color y no he tenido ningún tipo de problema.
2. ¿Qué valoración hace de estas determinaciones frente a la determinación bioquímica clásica?
El estudio de alteraciones anormales se realiza mediante la química seca (tiras reactivas). Si se necesita un estudio más exacto para diagnosticar una
patología se recurre a un estudio bioquímico cuantitativo.
PRÁCTICA Nº4: MANEJO DEL REFRACTÓMETRO

FECHA: 3 de octubre CALIFICACIÓN:
FUNDAMENTO

Práctica UD 1
Su principio se basa en un rayo de luz que pasa oblicuamente desde un medio hacia otro de diferente densidad, cambia su dirección cuando traspasa la
superficie. Este cambio en la dirección se denomina refracción.
El efecto de la refracción se puede observar fácilmente introduciendo una varilla en agua. Se puede ver que parece quebrarse bajo la superficie. En realidad
lo que sucede es que la luz reflejada por la varilla (su imagen) cambia de dirección al salir del agua, debido a la diferencia de índices de refracción entre el
agua y el aire.
Cuando un haz de luz que se propaga por un medio ingresa a otro distinto, una parte del haz se refleja mientras que la otra sufre una refracción, que
consiste en el cambio de dirección del haz. Para esto se utiliza el llamado índice de refracción del material, que nos servirá para calcular la diferencia entre
el ángulo de incidencia y el de refracción del haz (antes y después de ingresar al nuevo material).
OBJETIVO
Medir la concentración de proteínas en el suero.
Equipo:
● Refractómetro

Práctica UD 1
Materiales
● Gradilla( una para tubos eppendorf)
● Pipeta Pasteur
● Papel de filtro
● Papel secante
Reactivos
● Agua destilada
● Suero paciente.
● Alcohol.
PROCEDIMIENTO
1º). Colocarse la bata y recogerse el pelo.

2º). Y a continuación preparar y limpiar la zona de trabajo,para ello:
● Limpiar la mesa con lejía diluida y papel secante.
● A continuación colocarse los guantes previamente lavarse las manos y colocar el papel de filtro sobre la mesa.
● Seguidamente preparar todo el material necesario intentando tener la zona de trabajo despejada solo con lo que vayamos a usar para
evitar accidentes.
3º). A continuación tomamos del vaso de precipitado previamente rotulado con agua destilada, con ayuda de una pasteur y la vertemos en la zona planita
de la parte delantera del refractómetro (levantar la tapa) y comprobar que esté calibrado, para ello fijarse en la letra WATER que es el agua y debe quedar
una línea recta , si no es así calibrar con ayuda del tornillo hasta que esté calibrada.
4º). Secar el agua, y verter una gota con ayuda de una pipeta pasteur del suero de nuestro paciente, cerramos la tapa y en una zona donde haya luz
(claridad) pasar a observar la columna central de las tres que nos salen y anotamos el resultado (5,2).
5º). Una vez finalizada la medición pasar a limpiar el refractómetro, asegurarse siempre de que se queda bien limpio y recogido.
6º). Una vez finalizado sacar un resultado recoger y fregar todo el material y asegurarse de que todo quede limpio y recogido.

Práctica UD 1
RESULTADO
Los valores de referencia están entre 6 y 8,3 g/dl. Por tanto en este caso mi paciente lo tiene bajo.
CONCLUSIONES
El refractómetro es de ayuda para soluciones orgánicas, para conocer sus concentraciones en cada una de ellas. Para esto es básico conocer las curvas de
calibración, el cómo obtenerlas, ya que respecto a ellas, se puede llegar a conocer, gran cantidad de concentraciones, de la misma solución. Con está
práctica aprendemos el método de la refracción así como a determinar mediante él , en este caso tiras reactivas (química seca).

Lo hicimos primero mirando en el espectrofotómetro y luego comprobarlo en el refractómetro y visualizamos una columna que no era(por tanto la
práctica salió mal ), así que nuestra supervisora nos da la práctica como no válida y la volvemos a repetir de esta manera detallada en la práctica.

Práctica UD 1
PRÁCTICA 5 : DETERMINACIÓN HEMOGLOBINA A2(CROMATOGRAFÍA)

FECHA: 10 octubre CALIFICACIÓN:
FUNDAMENTO
La cromatografía en columna es quizás el método más general, utilizado para la separación, a la vez que para la purificación, de diferentes compuestos
orgánicos que se encuentren en estado sólido o líquido
La separación de los diferentes componentes de una mezcla que se encuentran en un líquido o gas es el resultado de las diferentes interacciones de los
solutos a medida que se desplazan alrededor o sobre una sustancia líquida o sólida (la fase estacionaria). Las diversas técnicas para la separación de
mezclas complejas se fundamentan en la diversidad de afinidades de las substancias por un medio móvil gas o líquido y un medio absorbente estacionario
(papel, gelatina, alúmina o sílice) a través del cual circulan.
Tras realizar un hemolizado de la muestra de hemoglobina A, es retenida en una columna de resinas intercambio iónico, de este modo podemos separarlas
del resto de las hemoglobinas. Una vez separada, utilizando unas condiciones específicas de pH y concentración de iones se puede cuantificar mediante
lectura espectrofotometría a 415 nm.

Práctica UD 1
MATERIALES Y REACTIVOS
Equipo:
● Espectrofotómetro.
Materiales:
● Micropipetas de 1000 y 200 microlitros.
● Gradilla tubos de ensayo.
● Pipeta pasteur.
● Puntas azules y amarillas.
● Cubeta espectrofotómetro 3.
● Corcho.
● Toallita limpiadora.
● Rotulador indeleble.
● Papel filtro.
● Vaso de precipitado 2 (grande)
● Tubos eppendorf ( 1)
● Pipeta 20 ml
● Auxiliar de pipeta rojo
● Gradilla eppendorf
● Pie o soporte
● Columna cromatografía
● Contenedor puntas
● Parafina
Reactivos:
■ Kit Hemoglobina A2
■ Agua destilada
Muestra:
■ Suero paciente.

Práctica UD 1
TÉCNICA PARA REALIZACIÓN DE LA PRÁCTICA
1. Colocarse la bata y recogerse el pelo.
2. Limpiar la zona de trabajo con alcohol de 70 % y papel secante.
3. Lavarse la mano y colocarse los guantes.
4. Poner el papel de filtro sobre la mesa y preparar el material correspondiente que se vaya a utilizar.
5. Colocar la columna de cromatografía en el soporte o pie.
6. Luego con ayuda de una varilla o una pipeta Pasteur empujar la almohadilla (disco blanco) hacía abajo hasta llegar a la fase estacionaria, y esperar
a que el eluyente (líquido) se vacíe.
7. A continuación preparar el hemolizado, esto se hace con el objetivo de romper la célula, para prepararlo añadir 50 µl de sangre (tirar la punta) y
tomar 200 µl de agua destilada ( se añade agua destilada porque el agua destilada es hipotónica por lo cual va a hacer que el agua entre a la célula
y que ésta estalle y se rompa ) y homogeneizar por inversión y esperar 10 minutos.

Práctica UD 1
8. Cuando ya tenemos preparado el hemolizado, coger de él 50 µl con una P 200 y verterlo en la columna con la punta pegada al disco de la columna
cromatografía.
9. A continuación añadir 200 µl de reactivo 1 al disco (esto lleva las condiciones adecuadas para que se produzca un medio iónico y los iones que
favorecen el intercambio) y entonces va a gotear una pequeña cantidad de líquido pues esa pequeña cantidad se desecha (esto se añade con el
objetivo de arrastrar la muestra desde el disco hacia la resina)
10. Y ahora es cuando empieza la cromatografía, añadir 3 ml del reactivo uno sobre el disco y recoger en un tubo de ensayo limpio (el tubo de ensayo
debe estar apoyado sobre su gradilla).
11. Ya está la hemoglobina A2 separada, a continuación con ayuda de la toallita limpiadora limpiar tres cubetas y verter en una el agua destilada que
es para el blanco, en otra la hemoglobina A2 separada y en la última la hemoglobina total,que prepararemos a continuación.
12. En el espectrofotómetro vamos a realizar una lectura para conocer la absorbancia a 415 nm de longitud de onda, primero introducir el blanco que
es la cubeta que contiene el agua destilada y en segundo lugar meter la hemoglobina A2 separada y anotar el resultado que aparezca en la
pantalla.
13. A continuación preparar la hemoglobina total para ello coger 50 µl del hemolizado más 12 ml de agua destilada todo esto se añade para diluir el
hemolizado, ya que el hemolizado de primera al tener un color muy oscuro el espectrofotómetro no es capaz de medirlo por tanto hay que diluirlo
para que adquiera un color más claro y el espectrofotómetro nos pueda proporcionar su absorbancia.
14. Como hemos explicado en el paso 10 ahora es cuando se pasa al espectrofotómetro en primer lugar metemos el blanco pulsamos el botón blanco
y nos da 0 que es la absorbancia del agua y a continuación introducir la cubeta que contiene la hemoglobina A2 separada y anotamos el resultado
y en último lugar introducir la hemoglobina total y anotar el resultado.
15. . A continuación hay que calcular cuál es el porcentaje de la hemoglobina A2 y para ello utilizaremos realizar los cálculos necesarios (reflejados en
resultados).
16. Una vez finalizada la práctica pasar a recoger el material fregarlo y asegurarse de que el laboratorio queda limpio y recogido no olvidar limpiar la
mesa al finalizar.
CÁLCULOS Y RESULTADOS
El porcentaje de la hemoglobina ADO en individuos normales oscila entre 1,8 y 3,2 %. En este caso nuestra paciente la tiene en 1,05 % por tanto decimos
que la tiene baja pero tampoco excesivamente baja.

Práctica UD 1

Práctica UD 1
INCIDENCIAS
Una de las cubetas no la homogeneizamos. Se resolvió inmediatamente realizándose de nuevo.
CONCLUSIÓN
a. Valoración del resultado
Los valores de referencia de la hemoglobina A2 en general son de 2% a 3%.
La tiene excesivamente baja, ya que si comprobamos con los valores de referencia lo tiene por debajo de los valores normales.
PREGUNTAS
b. Diagnóstico en base a los resultados obtenidos.
Los valores de hemoglobina por debajo de lo normal son indicio de padecer algún tipo de anemia, generalmente los valores bajos de hemoglobina
ocurren para Factores nutricionales : deficiencia de algunos compuestos alimentarios debido a desnutrición, anorexia o dietas particulares como el
vegetarianismo mal planificado.
PRÁCTICA 6: DETERMINACIÓN DE LA GLUCOSA

Práctica UD 1
OBJETIVO
La determinación de urea en sangre se realiza para:
● Valorar el funcionamiento de los riñones.
● Valorar la evolución de las enfermedades renales.
● Comprobar el funcionamiento del tratamiento de las enfermedades renales (ej. diálisis).
● Valorar si existe deshidratación.
FUNDAMENTO
Realizar el método enzimático para la determinación de glucosa en suero. Conocer que la determinación de glucosa sanguínea es una de las mediciones
químicas más usada en clínica, y que se emplea para determinar el metabolismo de los carbohidratos y llevar el control de los diabéticos.
MATERIALES
- Papel filtro.
- Rotulador indeleble.
- Cubetas de espectrometría (3)
- Corcho o gradilla cubetas
- Gradilla eppendorf
- Micropipetas P1000 y P20

Práctica UD 1
- Puntas azules y blancas

- Contenedor puntas
- Parafina
- Kits reactivos de glucosa
- Espectrofotómetro
- Agua destilada
- Pipeta pasteur
- Vaso precipitado
- Suero paciente
PROCEDIMIENTO
1º).Recogerse el pelo y ponerse la bata.

2º). Limpiar la mesa de trabajo con alcohol preparado y papel secante. Lavarse las manos y colocarse los guantes.
3º).Preparar el material necesario.
4º). Rotular el corcho o el papel de filtro para identificar cada cubeta, previamente limpiar con la toallita limpiadora.
5º). Preparar las cubetas, para ello añadir con una P1000 a todas las cubetas 1 ml del reactivo previamente preparado. La cubeta del blanco se queda solo
con el mililitro de reactivo.
6º). A la cubeta que va contener el patrón aparte del mililitro de reactivo ya vertido añadir 10 ul de patrón. Tapar con parafina y homogeneizar bien ( no
olvidar previamente resuspender con la micropipeta).
7º). Y por último preparar la cubeta de la muestra que a parte del milímetro que contiene añadir 10 ul del suero de nuestro paciente. Tapar y homogeneizar
( de igual manera que en el paso anterior pero con la muestra)

Práctica UD 1
8º). Una vez preparadas todas las cubetas , esperar 15 minutos a temperatura ambiente
9º). En el espectrofotómetro( previamente encendido(, graduar la longitud de onda deseada, que en este caso es 500 nm. Y comenzamos a medir, primero
introducir la cubeta del blanco y realizar el blanco (pulsando el botón BLA), a continuación introducir la cubeta del patrón y anotar el resultado(0,313) y por
último la de la muestra y de igual manera anotar el resultado(0,232).
10º). A continuación realizar los cálculos correspondientes(reflejados en el resultado)
11º). Una vez finalizada la práctica, recoger todo el material, fregar lo que esté sucio con agua y jabón sin olvidar dar un último enjuague con agua destilada,
poner a secar y asegurarse de que todo quede limpio y recogido.
CÁLCULOS
RESULTADO
En personas sanas, los valores de glucosa en sangre deben encontrarse entre 70 mg/dL y 100 mg/dL.
Está dentro de los valores normales, por tanto no hay indicio de que padezca de glucemia.

Práctica UD 1
CONCLUSIONES
Tanto la determinación basal como a las 2 h son importantes en la curva de tolerancia a la glucosa; por lo tanto, la combinación de criterios utilizados en su
interpretación puede incrementar la frecuencia en la detección de alteraciones en el metabolismo de la glucosa.
PRÁCTICA 7 : DETERMINACIÓN DE COLESTEROL .
OBJETIVO
- Conocer los fundamentos de la determinación de colesterol total en sangre por el método enzimático del colesterol esteras
- Manejar los valores de referencia para el colesterol total en sangre y su utilidad diagnóstica.
- Desarrollar destreza en el manejo del espectrofotómetro.

- Interpretar los resultados obtenidos.
FUNDAMENTO
Este método para la determinación de colesterol total en suero 1,2 se basa en el uso de tres enzimas: colesterol esterasa (CE), colesterol oxidasa (CO) y
peroxidasa (POD). En presencia de este último la mezcla de fenol y 4-aminoantipirina (4-AA) se condensan por acción del peróxido de hidrógeno, formando
una quinoneimina coloreada proporcional a la concentración de colesterol en la muestra.

Práctica UD 1
El colesterol sanguíneo se presenta en forma de esterol libre y en forma esterificada. El conocimiento del nivel lipídico plasmático (colesterol y triglicéridos)
junto con el de las lipoproteínas de alta y baja densidad (HDL y LDL) son de gran ayuda en la detección de muchas condiciones ligadas a alteraciones
metabólicas de alto riesgo. El desequilibrio del nivel de lipoproteínas plasmáticas conduce a las hiperlipoproteinemias, grupo de desórdenes que afectan
los niveles de lípidos séricos causantes de la enfermedad cardíaca coronaria (ECC) y la arteriosclerosis, en las que los niveles de colesterol son importantes
en su diagnóstico y clasificación.
MATERIALES
● Reactivo A
● Micropipetas 1000 y 200 microlitros.
● Puntas azules y amarillas.
● Contenedor de puntas.

Práctica UD 1
● Kits de reactivos.
● Cubetas de espectrofotómetros 3.
● Gradilla.
● Suero paciente.
● Papel filtro.
● Rotulador indeleble.
● Parafina.
● Toallita limpiadora.
TÉCNICA O PROCEDIMIENTO
1. Colocarse la bata y recogerse el pelo.

2. Limpiar la zona de trabajo con alcohol a 70% y papel secante.
3. Lavarse las manos y ponerse los guantes.
4. Preparar el material correspondiente.
5. Primero limpiar las cubetas con las toallitas limpiadoras.
6. Rotular en el corcho o en el papel filtro justo al lado de cada cubeta para poder identificarlas.
7. A continuación con la micropipeta de 1000 microlitros añadir 1 ml en cada cubeta del reactivo, previamente rotuladas las cubetas.
8. Añadir 10 microlitros de suero del paciente a la cubeta de la muestra con una micro de 20 microlitros.

Práctica UD 1
9. Añadir 10 microlitros de patrón a la cubeta de patrón con una micro de 20 microlitros.

10. Esperar a que la reacción se de unos 15 minutos.
11. A continuación en el espectrofotómetro medir la absorbancia con una longitud de onda de 500nm, primero introducir el blanco (pulsar botón
BLA)y luego la cubeta de la muestra anotar el resultado y lo mismo con la cubeta del patrón y anotamos el resultado para proceder a realizar los
cálculos ( reflejados en el resultado).
12. Una vez finalizada la técnica pasar a recoger y fregar los materiales y asegurarse de que el laboratorio queda limpio y recogido.
CÁLCULOS
RESULTADO

Práctica UD 1
En este caso mi paciente tiene el colesterol alto ya que la cifra supera los 200 mg/dl. Con el colesterol alto, es posible que se formen depósitos grasos en los
vasos sanguíneos.
CONCLUSIONES
- Poniendo en práctica la aplicación de las normas de bioseguridad dentro del laboratorio para la extracción de una prueba sanguínea;
desarrollaremos habilidades para el manejo del espectrofotómetro y determinaremos con los resultados de
absorbancia, la concentración del colesterol en sangre.
- En esta práctica se puede conocer la importancia de la determinación de colesterol en sangre, como hallar su concentración, dar posibles
diagnósticos cuando los niveles están elevados o bajos y comprender que cuando el diagnóstico es temprano
Se pueden evitar problemas crónicos que puedan acabar con la vida del paciente si no son detectados a tiempo.
PRÁCTICA 8 : DETERMINACIÓN DE PROTEÍNAS TOTALES (TRIGLICÉRIDOS). Método enzimático colorimétrico a punto final.
FUNDAMENTO
Método enzimático colorimétrico a punto final.
Las proteínas del suero reaccionan con el reactivo de Biuret formando una coloración violeta, cuya intensidad es proporcional a la concentración de las
mismas en la muestra. El reactivo de Biuret contiene Cu2SO4 en solución acuosa alcalina (gracias a la presencia de NaOH o KOH). La reacción se basa en la
formación de un complejo de coordinación entre los iones Cu2+ y los pares de electrones no
compartidos del nitrógeno que forma parte de los enlaces peptídicos. Esta última reacción provoca un cambio de coloración: violeta púrpura o violeta
rosada. Debe señalarse que el color depende de la naturaleza de las proteínas; proteínas y péptidos dan un color rosado; la gelatina da un color azul
La técnica empleada en la determinación de proteínas, es una técnica basada en que los enlaces peptídicos de las proteínas reaccionan con el ión cúprico,
en medio alcalino, para dar un complejo color violeta con máximo de absorción a 500 nm, cuya intensidad es proporcional a la concentración de proteínas
totales en la muestra

Práctica UD 1
El método está basado en la hidrólisis enzimática de los triglicéridos séricos a glicerol y ácidos grasos libres (FFA) por acción de la lipoproteína lipasa (LPL).
El glicerol es fosforilado por el adenosin trifosfato (ATP) en presencia de glicerol quinasa (GK) para formar glicerol-3-fosfato (G-3-P) y adenosin difosfato
(ADP). El G-3-P es oxidado por la glicerofosfato oxidasa (GPO) en dihidroxiacetona fosfato (DHAP) y peróxido de hidrógeno.
En presencia de peroxidasa (POD) el fenol y la 4-aminoantipirina (4-AA) se condensan por acción del peróxido de hidrógeno (H2O2) formándose un
cromógeno rojo proporcional a la concentración de triglicéridos presentes en la muestra.
Los triglicéridos son extraídos selectivamente mediante una mezcla de heptanol-isopropeno-ácido sulfúrico. Se forman dos capas : la superior, no polar
contiene los triglicéridos y la inferior contiene los fosfolípidos, bilirrubina,glucosa, proteínas y glicerol.
MATERIALES
● Micropipeta P 20 y P1000
● Gradilla
● Contenedor de puntas
● Cubetas de espectrometría

Práctica UD 1
● Papel filtro
● Toallita limpiadora
● Suero paciente
● Kits de reactivos triglicéridos
● Cronometró
PROCEDIMIENTO
1º). Recogerse el pelo y colocarse la bata.
2º). Limpiar la zona de trabajo con alcohol preparado y papel secante. Lavarse las manos y colocarse los guantes.
3º). Poner el papel de filtro y preparar el material correspondiente.
4º) Rotulamos en el papel o en la gradilla (no en la cubeta) cada cubeta, la de blanco, muestra y patrón.
5º). Hacer el blanco, para ello añadir 1 ml (1000 ul) de reactivo y desechar la punta.
6º). A continuación preparar el patrón, para ello tomar del eppendorf que contiene el patrón 10ul y verterlos en la cubeta rotulada como patrón.
7º). Y preparar la muestra, para ello añadir a la cubeta del paciente 1ml de suero de nuestro paciente.
8º). Una vez preparado, esperar 10-15 minutos a temperatura ambiente.
9º). En el espectrofotómetro( encendido previamente), graduar la longitud de onda deseada, en este caso es 500 nm.
10º). Quitar la tapadera negra e introducir el blanco, esperar a que los números se estabilice y pulsar el botón BLA y obtenemos la cifra 0. A continuación
introducir el patrón (ya no dar al botón BLA), y anotar el resultado (0,177) y por último introducir la muestra y anotar el resultado (0,090).
11º). Si el espectrofotómetro no va a volver a ser usado se desconecta de la corriente y se deja recogido.

Práctica UD 1
12º). A continuación realizamos los cálculos correspondientes :
13º). Por último, recoger los materiales y fregar con agua y jabón y dar un último enjuague con agua destilada y poner a secar, asegurarse de que todo
queda limpio y recogido.
CÁLCULOS
RESULTADOS

Práctica UD 1
En este caso mi paciente, tendría los valores de triglicéridos dentro de los valores considerados normales ya que lo tiene en menos de 150 mg/dl.
CONCLUSIONES
El conocimiento del nivel plasmático de lípidos (triglicéridos y colesterol) y derivados lipídicos, especialmente lipoproteínas (HDL y LDL), ayudan en la
diagnosis de muchos desórdenes metabólicos o condiciones con alto riesgo. Un desequilibrio en el nivel de lipoproteínas plasmáticas conduce a un grupo
de trastornos que afectan a lípidos y lipoproteínas causantes de la enfermedad.
PRÁCTICA 9: DETERMINACIÓN DE PROTEÍNAS TOTALES ( MÉTODOS COLORIMÉTRICOS)
FUNDAMENTO
Los enlaces peptídicos de las proteínas reaccionan con el ión cúprico, en medio alcalino, para dar un complejo color violeta con máximo de absorción a 545
nm, cuya intensidad es proporcional a la concentración de proteínas totales en la muestra. 1.2.
Es un método colorimétrico a punto final.
OBJETIVO
Aplicar un método colorimétrico para determinar la concentración de proteína en una muestra problema.
MATERIALES

● Contenedor pipetas
● Parafina
● Papel filtro
● Kits de reactivos
● Agua destilada
● Pipeta pasteur

Práctica UD 1
● Vaso de precipitado
● Suero paciente
● Calculadora
● Cronómetro
● Tres cubetas de espectrometría
● Corcho
● Toallitas limpiadoras
PROCEDIMIENTO
1º).Recogerse el pelo y colocarse la bata .
2º)Limpiar la mesa con alcohol preparado y papel secante. Lavarse las manos y colocarse los guantes.
3º). Preparar todo el material necesario( previamente colocado el papel filtro).
3º). Rotular en el corcho o en papel de filtro las cubetas, patrón,blanco y muestra.
4º). Añadir 1ml de reactivo a cada cubeta con una P1000 y desechar la punta.
5º). A continuación tomar 20 ul con una P 100 ,tapar con parafina y homogeneizar suavemente. ( Resuspender con la micropipeta).
6º). A continuación preparar la muestra, tomar 20 ul del suero del paciente y resuspender ( homogeneizar con la pipeta). Tapar con parafina y
homogeneizar suavemente.
7º). Y al blanco solo añadir agua destilada, ya que va ha permitir que no se unan a más cosas a parte de las proteínas totales ( evita interferencias).

Práctica UD 1
8º). Una vez preparado, esperar 10 minutos a temperatura ambiente.

9º). En el espectrofotómetro ( previamente encendido), graduar la longitud de onda deseada, en este caso 545 nm.
10º). Medir primero el blanco, introducir y pulsar el botón BLA, y da 0. A continuación introducir el patrón y anotar el resultado (0,315) y por último la
muestra (0,245).
11º). Una vez finalizado, si no se va a usar más el espectrofotómetro se apagará.
12º) . Calcular la concentración( reflejada en el resultado).
13º). Una vez finalizada la práctica, recoger el material y fregar con agua y jabón y dar un último enjuague con agua destilada y poner a secar, asegurando
que todo esté recogido.
CÁLCULOS
RESULTADO

Práctica UD 1
CONCLUSIÓN
Al concluir la práctica se demostró la prevalencia de proteínas totales por debajo de los valores considerados como normales. Es necesario el control de la
paciente.
PRÁCTICA 10: DETERMINACIÓN DE HDL
OBJETIVO
La prueba del colesterol HDL se utiliza de forma aislada o como parte de un perfil lipídico para tratar de predecir el riesgo que tiene una persona de
desarrollar una enfermedad cardíaca y determinar el tratamiento idóneo en el caso de que el riesgo sea alto o se encuentre en el límite. El perfil lipídico
incluye las pruebas del colesterol total, el colesterol LDL y los triglicéridos).
FUNDAMENTO
Las lipoproteínas de muy baja densidad (VLDL) y de baja densidad (LDL) presentes en la muestra, precipitan en presencia de fosfotungstato y iones
magnesio. El sobrenadante contiene las lipoproteínas de elevada densidad (HDL). cuyo colesterol se cuantifica espectrofotométricamente mediante las
reacciones acopladas descritas a continuación.

Práctica UD 1
MATERIALES
● Suero paciente
● Papel filtro
● Gradilla tubos
● Tubos ensayo (3)
● Micropipetas P1000 y P200
● Puntas azules y blancas
● Contenedor de puntas
● Centrifugación
● Pipeta pasteur
● Kits de reactivos hdl
● Agua destilada
● Vaso de precipitado
● Pipeta pasteur

Práctica UD 1
PROCEDIMIENTO
Tanto el Reactivo como el Patrón están listos para su uso.
1º). Ponerse la bata y recogerse el pelo.

2º). Limpiar la zona de trabajo con alcohol al 70% y papel secante. Lavarse las manos y colocarse los guantes.
3º). Poner el papel de filtro y preparar el material necesario.
4º). A continuación rotular el corcho o el papel para identificar correctamente las cubetas.
5º). Preparar los tubos , para ello con ayuda de una P 1000 añadir 1 ml a cada una de la cubeta de reactivo A. A continuación con una P1000 añadir 500 ul
de reactivo A a un tubo eppendorf y con la misma P1000 con la punta cambiada añadir 200 ul de muestra y agitar bien y dejar 10 minutos a temperatura
ambiente.
6º). Centrifugar durante 10 minutos a un mínimo de 4000 revoluciones por minuto. Una vez centrifugado con ayuda de una pipeta Pasteur recogemos el
sobrenadante.
7º). A continuación pasar a preparar los tubos de ensayo. Primero preparar el blanco para ello con ayuda de una micropipeta P 200 añadir 100 µl de agua
destilada tapar con parafina y homogeneizar suavemente mediante inversiones suaves.
8º). Y a continuación con ayuda de una micropipeta P 200 añadir 100 µl de patrón al tubo que va a contener el patrón tapar con parafina y homogeneizar
suavemente mediante inversiones. Seguidamente preparar el tubo que va a llevar la muestra, con ayuda de una micropipeta P 200 añadir 100 µl de
muestra y con una P100 añadir 50 ul de sobrenadante tapar con parafina y homogeneizar.
9º). Una vez que todos los tubos están preparados dejarlas durante 30 minutos a temperatura ambiente. Con ayuda de una pipeta Pasteur pasamos el
contenido preparado de los tubos a las cubetas previamente limpiado con toallitas limpiadoras y rotuladas.

Práctica UD 1
10º). A continuación en el espectrofotómetro previamente encendido primero introducir la cubeta del blanco y hacer el blanco, a continuación medir la
absorbancia de la cubeta que contiene el patrón y anotar el resultado seguidamente introducir la cubeta que contiene la muestra y anotar el resultado, si
el espectrofotómetro no se va a volver a utilizar se deja apagado y desconectado de la corriente.
11º). A continuación realizar los cálculos correspondientes (reflejados en el resultado).
12º). Una vez finalizada la práctica pasar a recoger todo el material, limpiarlo, y ponerlo a secar y asegurarse de que el laboratorio queda limpio y recogido.
CÁLCULOS
RESULTADO
Los valores de referencia normales son:
- Para el LDL : por debajo de 100 mg/dl
- Para el HDL: por encima de 50 mg/dl
- Para el colesterol total : por debajo de 200 mg/dl
En este caso mi paciente, tiene el colesterol total alto, pero no excesivamente alto , los triglicéridos los tiene dentro del valor considerado normal ( -150
mg/dl) , el HDL ( nos daba muy alto , repetir), y por último el LDL lo tiene dentro de los valores considerados como normales.
CONCLUSIÓN
Con esta práctica aprendemos a determinar el colesterol HDL (el colesterol bueno), así como el manejo del espectrofotómetro.

Práctica UD 1
INCIDENCIAS
El HDL nos daba demasiado alto , por tanto hay que repetir de nuevo, esto puede ser debido a que el suero lleva mucho tiempo congelado o algo mal
hecho durante la técnica.
PRÁCTICA 11: DETERMINACIÓN DE UREA
OBJETIVO
La determinación de urea reviste gran importancia para el diagnóstico clínico de diversas afecciones generalmente de origen renal; por lo que contar con
un juego de reactivos que permita obtener valores confiables en esta determinación es un objetivo básico en la producción de reactivos para química
clínica.
En el laboratorio, el análisis de la urea sanguínea se solicita en una petición general de bioquímica en sangre. Puede expresarse en forma de nitrógeno
ureico en sangre (BUN) o de urea propiamente dicha y mide la concentración de urea o de nitrógeno ureico (BUN) en la sangre.
FUNDAMENTO
Actualmente solo presentan interés los métodos enzimáticos basados en la acción catalítica de la enzima ureasa. La urea es hidrolizada por la ureasa,
liberando anhídrido carbónico y amoniaco según la reacción:
Los métodos utilizados para la determinación de la urea pueden clasificarse en dos grandes grupos: métodos directos y métodos indirectos basados en la
determinación del amonio liberado por acción de la ureasa sobre la urea. En los métodos indirectos la reacción consta de 2 etapas, que comienza con la
ruptura de los enlaces amida en la molécula de laurea mediante la ureasa; posteriormente se utilizarán diversos métodos para cuantificar el amonio
liberado por la acción de la enzima.
La urea presente en la muestra origina, según las reacciones descritas a continuación, un indofend coloreado que se cuantifica espectrofotométricamente.
MATERIALES
● Tres tubos eppendorf

Práctica UD 1

● Papel filtro
● Gradilla
● Pipeta pasteur
● Kits de reactivos urea
● Corcho
● Tres cubetas de espectrometría
● Suero paciente
● Parafina
PROCEDIMIENTO
1º). Recogerse el pelo y colocarse la bata
2º). Limpiar la mesa con alcohol preparado y papel secante. Lavarse las manos y colocarse los guantes y preparar el material correspondiente ( previamente
colocado el papel de filtro).
3º). Rotular los tubos de ensayos con las iniciales P,M y B.
4º). Preparar cada uno ,para ello añadir 1 ml a cada tubo previamente preparado.
5º). En el tubo de patrón añadir 10 ul de patrón (bote pequeño). Tapar con parafina y homogeneizar.
6º). A continuación preparar el tubo de la muestra para ello añadir 10 ul del suero del paciente. Tapar con parafina y homogeneizar suavemente.
7º). Y por último el tubo del blanco, que solo se queda con el mililitro de reactivo.
8º). Esperar 10 minutos a temperatura ambiente.
9º). A continuación añadir 1 ml de reactivo B a cada tubo , homogeneizar y esperar otros 10 minutos a temperatura ambiente.
10º). A continuación rotular el corcho y limpiar las cubetas con la toallita limpiadora, y con ayuda de una pasteur pasar los tubos a las cubetas (sin
sobrepasar la marca).
11º). En el espectrofotómetro (previamente encendido) poner la longitud de onda,600 nm en este caso , y medir cada cubeta.
12º). Comenzamos la cubeta del blanco, introducir correctamente y pulsar el botón BLA y hacemos el blanco que es 0.
13º). A continuación introducir la cubeta de patrón y anotar el resultado y de igual manera con la cubeta de la muestra. Si el espectrofotómetro no se va a
volver usar apagar y desconectar de la corriente.
14º). A continuación realizar los cálculos correspondientes.

Práctica UD 1
15º). Una vez finalizada la práctica, recoger los materiales y fregar con agua y jabón y dar un último enjuague con agua destilada y poner a secar, asegurarse
siempre de dejar todo recogido.
CÁLCULOS
RESULTADO
Los valores de referencia o valores normales se encuentran en 15-39 g/dl / 2,5-6,5 g /L de urea
Y 7-18 g/dl de bun
Si comparamos el resultado de mi paciente ( mujer) podemos comprobar que lo tiene dentro del valor normal, por tanto no hay indicio de nada con
respecto a la urea.
CONCLUSIÓN

Práctica UD 1
Con esta práctica aprendemos a saber determinar la urea en suero así como a calcular el bun y poder establecer un resultado.
PRÁCTICA 12: DETERMINACIÓN DE CREATININA.
OBJETIVO
La prueba de creatinina se usa para averiguar si los riñones están funcionando bien. A menudo, se solicita junto con otra prueba de riñón llamada prueba
de nitrógeno ureico en sangre (NUS) o como parte de un panel metabólico completo.
FUNDAMENTO
Esta técnica se realiza tanto a punto final como en periodos iniciales más cortos (cinética), en los que se eliminan algunas de las interferencias más
corrientes.
Estos métodos han logrado amplia aceptación a nivel práctico. Otras técnicas que se han utilizado, pero que en la actualidad están más en desuso son la
cromatografía de líquidos de alta resolución (HPLC por sus siglas en inglés) y los métodos químicos que utilizan 3,5 dinitrobenzoico (DNBA). Método:
Picrato Alcalino sin Desproteinización, a tiempo fijo.
La creatinina en solución alcalina reacciona con el picrato para formar un compuesto rojo anaranjado (reacción de Jaffé), color que es medido por la lectura
de dos puntos
Es un análisis que mide el nivel de creatinina en la sangre. Se hace para ver qué tan bien están funcionando los riñones. La creatinina también se puede
medir con un examen de orina.
MATERIALES
● Papel filtro
● Kits Creatinina

Práctica UD 1
● Gradilla de eppendorf
● Corcho
● Cubetas 2
● Toallitas limpiadoras
● Parafina
● Micropipeta 1000 ul y 20ul
● Suero paciente
● Agua destilada
PROCEDIMIENTO
1º). Recogerse el pelo y colocarse la bata.
2º).Limpiar la mesa con alcohol preparado y papel secante. Lavarse las manos y ponerse los guantes. Preparar el material correspondiente ( previamente
colocado el papel de filtro).
4º).Rotular el corcho o papel de filtro de cada cubeta para poder identificarlas.
5º). A continuación en la cubeta de la muestra añadir 500 ul de reactivo A más 500 ul de reactivo B, tapar con parafina y homogeneizar. Con la cubeta que
contiene el patrón se hace exactamente igual.
6º). En el espectrofotómetro (previamente encendido), sacamos la carcasa negra de dentro y hacemos en blanco sin nada dentro a 500 nm. Pulsar el botón
BLA.
7º). A continuación introducir la cubeta del patrón y hacemos blanco, cuando está a 0, añadimos 100 ul de patrón, poner el cronómetro y esperar 30
segundos y anotar la cifra que esté en ese segundo, seguir esperando y cuando llegue al segundo 90 volver a anotar el resultado.
8º). Hacer lo mismo con la cubeta de la muestra pero añadir los 100 ul de suero de nuestro paciente.
9º). A continuación realizar los cálculos correspondientes.
10º). Una vez finaliza la práctica, pasar a recoger todo el material a fregar con agua y jabón y dar un último enjuague con agua destilada y poner a secar,
asegurarse de que todo quede recogido y limpio.
CÁLCULOS

Práctica UD 1
RESULTADO

Práctica UD 1
CONCLUSIONES
Esta prueba compara los niveles de creatinina en la sangre y en la orina, pero en esta práctica solo lo determinamos en sangre (suero paciente).
PRÁCTICA 13: DETERMINACIÓN DE BILIRRUBINA
FUNDAMENTO
Los métodos tradicionales para la determinación de la bilirrubina se basan en la reacción de ésta con el reactivo diazo para formar el compuesto colorido
azobilirrubina. Para la determinación de la bilirrubina total se adiciona un tensoactivo como agentes solubilizantes, como es el caso de la cetrimida, la cual
solubiliza la bilirrubina indirecta permitiendo su reacción junto con la fracción directa.

Práctica UD 1
OBJETIVO
Cuantificar el contenido de bilirrubinas en suero sanguíneo y dar interpretación diagnóstica del resultado
MATERIALES
- Papel filtro
- Rotulador indeleble
- Cubetas de espectrofotometría ( 5)
- Espectrofotómetro
- Vaso de precipitado
- Pipeta pasteur
- Micropipetas P1000 y P200
- Puntas azules y amarillas
- Contenedor de puntas
- Parafina
- Kits de reactivos bilirrubina
- Corcho o gradilla
- Gradilla eppendorf
- Suero paciente
- Agua destilada

Práctica UD 1
PROCEDIMIENTO
2º). A continuación limpiar la zona de trabajo con alcohol al 70% y papel secante. Lavarse las manos y ponerse los guantes.
3º). Preparar todo el material necesario, previamente puesto el papel filtro.
4º). A continuación pasar a rotular el corcho o papel para identificar las cubetas a la hora de prepararlas.
5º). Primero preparar el patrón , para ello resuspender 1 o 2 ml de agua destilada al patrón y homogeneizar. Luego hasta llegar a 5 ml seguir añadiendo.
Dejar en reposo 20 minutos a temperatura ambiente y se alicuota en tubos eppendorf (1 ml por cada tubo). y al congelador.
6º). Luego preparar el reactivo de trabajo, para ello añadir 1 ml del reactivo BT y 4 ml del reactivo AT ( esto es para 5 ml). Para 3 ml sería:
7º). Una vez preparado todo y rotuladas y previamente limpias las cubetas con la toallita limpiadora, preparar las cubetas para ello añadir:
BR BM M P
Agua destilada 100 ul
Muestra 100 ul 100 ul
Patrón 100 ul
Reactivo AT 1ml

Práctica UD 1
Reactivo T 1 ml 1 ml 1 ml
Sin olvidar que cada vez que esté una lista tapar con parafina y homogenizar mediante inversiones suaves y tampoco olvidar homogeneizar con la punta
de la micropipeta.
8º). Una vez que están todas preparadas, en el espectrofotómetro, previamente encendido, graduar la longitud de onda deseada, que en este caso es, 540
nm, y primero introducir el blanco ( está en una cubeta para todo el mundo).
9º). A continuación medir la absorbancia del blanco muestra y anotar el resultado. Luego medir la absorbancia del blanco reactivo y tarar a 0. Y
seguidamente medir la absorbancia de la muestra( M,AT,BT) y del patrón y anotar los resultados.
6º). Una vez finalizado apagar y desconectar el espectro si no se va a usar más y pasar a realizar los cálculos correspondientes (reflejados en el resultado).
7º).Una vez finalizada la práctica pasar a recoger todo el material, limpiarlo y secarlo y asegurarse de que el laboratorio quede limpio y recogido.
CÁLCULOS
RESULTADO
En este caso el resultado nos sale en negativo, por tanto no podemos sacar ninguna información de él, esto es debido a que el suero lleva mucho tiempo
congelado y por tanto no nos ha dado un resultado correcto a pesar de haber ejecutado la técnica de forma correcta.
Los valores normales de bilirrubina total oscilan entre 0,1 a 1,2 mg/dl.

Práctica UD 1
CONCLUSIONES
En este caso el resultado nos sale en negativo, por tanto no podemos sacar ninguna información de él, esto es debido a que el suero lleva mucho tiempo
congelado y por tanto no nos ha dado un resultado correcto a pesar de haber ejecutado la técnica de forma correcta.
PRÁCTICA 14 : DETERMINACIÓN DE BILIRRUBINA DIRECTA.
FUNDAMENTO
Los métodos tradicionales para la determinación de la bilirrubina se basan en la reacción de ésta con el reactivo diazo para formar el compuesto colorido
azobilirrubina. Para la determinación de la bilirrubina total se adiciona un tensoactivo como agentes solubilizantes, como es el caso de la cetrimida, la cual
solubiliza la bilirrubina indirecta permitiendo su reacción junto con la fracción directa.
OBJETIVO
Determinar la cantidad de bilirrubina directa presente en una muestra de plasma o suero.
El examen de bilirrubina en sangre se usa para examinar la salud del hígado. También se usa comúnmente para diagnosticar ictericia en recién nacidos.
Muchos bebés saludables tienen ictericia porque el hígado no ha madurado para eliminar suficiente bilirrubina. La ictericia en el recién nacido suele ser
inofensiva y se resuelve en pocas semanas. Pero en algunos casos, los niveles altos de bilirrubina pueden causar daño cerebral. Por este motivo, esta prueba
se hace comúnmente como precaución en bebés.
MATERIALES
- Papel filtro.
- Rotulador indeleble.

Práctica UD 1
- Gradilla eppendorf.
- Gradilla cubetas.
- Puntas azules y amarillas.
- Micropipeta P1000 y P200.
- Cubetas de espectrofotometría.
- Espectrofotómetro.
- Vaso de precipitado (2).
- Probeta 25 ml.
- Contenedor puntas.
- Kits bilirrubina directa.
- Agua destilada.
- Parafina.
- Suero paciente
PROCEDIMIENTO
2º).Limpiar la zona de trabajo con alcohol preparado y papel secante. Lavarse las manos y ponerse los guantes.
3º). Colocar el papel de filtro sobre la zona de trabajo y preparar el material correspondiente.
4º). Rotulamos la gradilla o soporte donde están las cubetas para poder identificarlas ( no rotular nunca en las cubetas).

Práctica UD 1
5º). Primero preparar la cubeta del blanco reactivo (BR) con ayuda la micropipeta P 200 ( si no hay libre coger una P1000) y añadir 100 ul de agua destilada y
1 ml lo que equivale a 1000 ul de reactivo de trabajo ( previamente preparado) , no olvidar homogeneizar con la punta. Aún así tapar con parafina y
homogeneizar por inversiones suaves.
6º). A continuación preparar la cubeta de blanco muestra (BM) , para ello añadir 100 ul de muestras ( con la P 200) y 1 ml de reactivo AD( con ayuda de una
P1000).De igual forma tapar con parafina y homogeneizar mediante inversiones suaves.
7º). Y por último preparar la cubeta de la muestra, para ello con ayuda de la micropipeta P 200 añadir 100 ul de muestra y con ayuda de una P1000 añadir 1
ml de reactivo de trabajo. Tapar con parafina y homogeneizar de igual forma.
8º). Llenar una cubeta que solo contenga agua destilada, que nos servirá para hacer el blanco.
9º). Una vez que todas las cubetas están terminadas, hay que esperar 10 minutos a temperatura ambiente. Y pasado el tiempo , hay que medir en el
espectrofotómetro. Lo primero en la jornada es encenderlo por tanto debería estar encendido, luego graduar la longitud de onda deseada, que en este
caso es 540 nm y empezar a medir.
Primero introducir la cubeta de agua destilada, esperar a que los números se estabilice y pulsar y botón BLA, y hacemos el blanco. A
A continuación introducir la cubeta de blanco muestra (BM) y anotar el resultado (0,109). Seguidamente introducir la cubeta del blanco reactivo (BR) y
tarar, para ello pulsar el botón BLA cuando los números se estabilicen.
Y por último introducir la cubeta de la muestra y anotar el resultado ( 0,120).
10º). Una vez que están todas medidas , realizar los cálculos correspondientes ( reflejados en el resultado).
11º). Una vez finalizada la práctica , pasar a recoger el material , fregar y dejar todo recogido.
CÁLCULOS

Práctica UD 1
RESULTADO
Los valores de referencia oscilan entre 0,1 a 0,3 g/dl.
Lo tiene bajo , ya que si comparamos con los valores de referencia se observa que lo tiene claramente bajo.
A partir de estos datos podemos calcular la bilirrubina indirecta pero en mi caso al no tener la bilirrubina total correcta porque nos daba un número
negativo no podemos calcularlo.
La fórmula sería:
BT-BD=BI
CONCLUSIONES
A través de está práctica podemos determinar la bilirrubina directa pero a través de esta y con la bilirrubina total podemos sacar la bilirrubina indirecta.
Que como se ha podido comprobar mi paciente lo tiene bajo.

Cuaderno de Prácticas Lucia Marquez Lopez

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Análisis bioquímico Curso 2018/2019

PRÁCTICA Nº 1 ESPECTRO DE ABSORCIÓN

EQUIPOS, MATERIALES Y REACTIVOS

IES PROFESOR GONZALO HUESA 1

1º) Ponerse la bata y recogerse el pelo.

2º) Limpiar la zona de trabajo con alcohol preparado y papel secante.

3º A continuación preparar el material necesario que vaya a utilizar.

IES PROFESOR GONZALO HUESA 2

IES PROFESOR GONZALO HUESA 3

IES PROFESOR GONZALO HUESA 4

INCIDENCIAS Y PRECAUCIONES PARA LA ÓPTIMA REALIZACIÓN DE LA PRUEBA

En mi caso no he tenido ningún tipo de incidencias en esta práctica

IES PROFESOR GONZALO HUESA 5

PRÁCTICA Nº 2 CURVA DE CALIBRACIÓN

EQUIPOS, MATERIALES Y REACTIVOS

IES PROFESOR GONZALO HUESA 6

IES PROFESOR GONZALO HUESA 7

1º) Ponerse la bata y recogerse el pelo.

IES PROFESOR GONZALO HUESA 8

cubeta 1: 1,709 0,1 %

Cubeta 2:0,981 0,01 × 10 elevado a la -1

Cubeta 3:0,226 0,001 × 10 elevado a la -2

Cubeta 4:0,017 0,0001 × 10 elevado a la -3

IES PROFESOR GONZALO HUESA 9

Cubeta 5:0,07 0,00001 × 10 elevado a la -4

Dato 0,000001 × 10 elevado a -5

IES PROFESOR GONZALO HUESA 10

INCIDENCIAS Y PRECAUCIONES PARA LA ÓPTIMA REALIZACIÓN DE LA PRUEBA

IES PROFESOR GONZALO HUESA 11

No tienen una relación lineal.

PRÁCTICA Nº 3 QUÍMICA SECA EN ORINA

IES PROFESOR GONZALO HUESA 12

IES PROFESOR GONZALO HUESA 13

EQUIPOS, MATERIALES Y REACTIVOS

● Vaso de recogida de muestras

1º) Ponerse la bata y recogerse el pelo.

IES PROFESOR GONZALO HUESA 14

2º) Preparar la zona de trabajo, para ello:

3º) Colocar las barras paralelas encima del cristalizador.

6º) A continuación escurrir la tira y proceder a la lectura (reflejado en el resultado).

IES PROFESOR GONZALO HUESA 15

INCIDENCIAS Y PRECAUCIONES PARA LA ÓPTIMA REALIZACIÓN DE LA PRUEBA

1. ¿Qué dificultades has encontrado al realizar la lectura de las tiras reactivas?

2. ¿Qué valoración hace de estas determinaciones frente a la determinación bioquímica clásica?

PRÁCTICA Nº4: MANEJO DEL REFRACTÓMETRO

IES PROFESOR GONZALO HUESA 16

Medir la concentración de proteínas en el suero.

EQUIPOS, MATERIALES Y REACTIVOS

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1º). Colocarse la bata y recogerse el pelo.

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INCIDENCIAS Y PRECAUCIONES PARA LA ÓPTIMA REALIZACIÓN DE LA PRUEBA

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PRÁCTICA 5 : DETERMINACIÓN HEMOGLOBINA A2(CROMATOGRAFÍA)

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TÉCNICA PARA REALIZACIÓN DE LA PRÁCTICA

1. Colocarse la bata y recogerse el pelo.

2. Limpiar la zona de trabajo con alcohol de 70 % y papel secante.

3. Lavarse la mano y colocarse los guantes.

5. Colocar la columna de cromatografía en el soporte o pie.

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