MACROPROCESO DE APOYO CODIGO: AAAr051

PROCESO GESTION APOYO ACADEMICO VERSION: 5

GUIA DE PRACTICA PAGINA: 1 de 5

PRACTICA Nº 2
Facultad: Ciencias Agropecuarias
Programa Académico: Ingeniería Ambiental
Núcleo Temático: Química Ambiental Grupo: 401 y 402
Gabriela Romo C.
Docentes:
Wolfang Andrés Rodríguez Soto
jromo@mail.unicundi.edu.co
Correo Electrónico
pr.andrescbi@hotmail.com

NORMAS DE BIOSEGURIDAD BASICAS DE USO OBLIGATORIO:

 Protector naso bucal.
 Bata manga larga, cerrada en color blanco.
 Zapato cerrado en suela antideslizante
 Pantalón largo (holgado)
 Gorro desechable (cabello recogido)
 Gafas de laboratorio
 Guantes de vinilo o nitrilo

 El uso de dispositivos electrónicos está limitado a la actividad académica que

se esté ejecutando.

ELEMENTOS DE BIOSEGURIDAD ESPECIFICOS

Ninguno

TITULO DE LA PRACTICA

LEY DE LAMBERT-BEER

OBJETIVO GENERAL
•Realizar una “curva de calibración”
•Determinar la concentración de una solución de permanganato de potasio de concentración
desconocida, usando la Ley de Lambert-Beer.

MARCO TEORICO
Para cualquier sustancia, la cantidad de luz absorbida depende de cuatro factores:
1. Concentración de las sustancias absorbentes
2. Distancia recorrida por la luz a través de la solución
3. Longitud de onda (λ) de la luz incidente
4. Identidad de las sustancias absorbentes presentes en la solución

Una de las maneras de expresar la cantidad de luz absorbida es llamada

porcentaje de Transmitancia (T), que es definida para una longitud de onda
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particular como:

T = (P/Po) x 100

Debido a que el solvente mismo puede absorber a la longitud de onda

seleccionada, el valor de lo será aquel que corresponda a la intensidad de la luz
transmitida cuando la cubeta esté llena sólo con solvente.
Otra magnitud común para expresar la cantidad de luz absorbida es la
absorbancia (A), que esta definida por
A = log10 (Po/P) = log10 (100/T)

Para el caso de una solución completamente transparente, el porcentaje de

Transmitancia será 100, lo que corresponde a una absorbancia de 0. Note que
tanto A como T son números adimensionales, es decir se expresan sin unidades.

La Absorbancia(A) está relacionada directamente con al concentración molar (C)

por medio de una ecuación, formulada por Beer en 1852:
A(λ) = d ε(λ)C
La que es aplicable sólo para soluciones diluidas (C < 10-2 mol/L.).
ε(λ) es conocido como el coeficiente de extinción molar, el que es característico de
cada sustancia a una determinada longitud de onda. Sus unidades son L moL -1
cm-1, ya que la concentración (C) se expresa en moles/L y el paso de luz (d) en
cm.
A pesar de que este número tiene unidades, es común encontrarlo informado sin
ellas en la literatura.

ELEMENTOS EDUCATIVOS REQUERIDOS

(Equipos, Materiales, reactivos, herramientas con su respectiva cantidad)
 Solución de Permanganato de potasio (KMnO4) 0,02M (Solución Madre)
 5 Balones aforados de 25 mL
 Micropipeta 0,5-20µL
 Frascos lavadores
 Espectrofotómetro UV/VIS
 Celdas para UV/VIS
 2 vasos de precipitados de 400mL
 1 pipeta pasteur

PROCEDIMIENTO Y/O MONTAJE EXPERIMENTAL

Obtención del espectro de absorbancia.
A. Con una micropipeta, tomar 160µL de la disolución 0,02M de KMnO 4 y
verterlo en un vaso de precipitado de 25mL. Añadir poco a poco, y agitando
cuidadosamente, agua destilada hasta que la disolución resultante presente un
color similar al de la muestra problema.
B. Con la disolución preparada se obtendrá el espectro de absorción como
sigue:
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- Debido al color púrpura de la disolución de KMnO 4 , se puede predecir la

zona del espectro en la que se obtendrá la máxima absorbancia.
Después de poner a punto el espectrofotómetro, con la ayuda del
profesor, seleccionar una longitud de onda 20 nm por debajo del límite
inferior del intervalo correspondiente. "Hacer el blanco" para dicha
longitud de onda. Es decir, tomar una de las cubetas y llenarla con agua
destilada (es el blanco para este caso particular), sitúar en el
portacubetas del espectrofotómetro y ajusta la lectura al cero de
Absorbancia.
- A continuación llena la otra cubeta con la disolución previamente
preparada, sitúala en el portacubetas y realizar un barrido para encontrar
el máximo de abosrbancia.
- Seleccionar la longitud de onda correspondiente al máximo de
absorbancia en el espectrofotómetro. Dicha longitud de onda será la
utilizada en el análisis cuantitativo del KMnO 4

Preparación de la recta de calibrado

En los matraces aforados de 25 ml, tomar alícuotas de 120µL, 80 µL, 60 µL y

20 µL de la disolución de KMnO4 0,02 M.

Medición de los patrones y obtención de la curva de calibrado

A. Siguiendo el procedimiento ya conocido, medir la absorbancia de cada

una de las 5 disoluciones patrón a la longitud de onda seleccionada.
Recordar que antes de la medición de cada patrón debe hacerse el
blanco. La medición de la absorbancia de los cinco patrones debe
realizarse en orden creciente de concentraciones y utilizando una misma
cubeta. Después de cada medida:
- Desechar la disolución patrón ya medida
- Limpiar la cubeta con agua destilada varias veces
- Limpiar la cubeta con la nueva disolución patrón una vez
- Llenar la cubeta con la nueva disolución patrón y medir

B. Con las absorbancias anotadas para cada una de las disoluciones patrón,
representar gráficamente, en un papel milimetrado, la curva de calibrado
en la forma: C vs. abs. Mediante un ajuste de regresión por mínimos
cuadrados, calcular la ecuación de la recta obtenida.

Medición de las muestra problema

A. Siguiendo el procedimiento conocido, medir la absorbancia de la muestra

problema.
B. Calcular la concentración de dicha muestra mediante dos métodos:
- Gráficamente, mediante interpolación del valor de absorbancia obtenido
- Matemáticamente, mediante la utilización de la ecuación de la recta de
calibrado
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Complete la siguiente tabla:

SOLUCION ABSORBANCIA CONCENTRACION

Nº (ppm)
1
2
3
4
5

Problema 1

Problema 2
ANALISIS, DATOS Y RESULTADOS

Para el Informe construya la curva de calibración y determine la

concentración de las soluciónes problema.

Escribir la ecuación de la recta de calibrado:

Indicar la longitud de onda seleccionada: nm

Analizar y comparar la concentración de KMnO 4 en las muestras

problema:
- Gráficamente: ppm
- matemáticamente: ppm

CUESTIONARIO PARA PREINFORME

1. ¿De qué manera están relacionadas la intensidad del color de las soluciones
y la concentración de las mismas?
2. Explique en sus propios términos la Ley de Lambert-Beer
3. ¿Qué fenómenos físicos se dan en la absorción de luz Visible por una
molécula?
4. ¿Cuál es el fundamento de la espectroscopia molecular y de la
espectroscopia de absorción atómica?
5. ¿Cuáles son las implicaciones de este tipo de técnicas analíticas en la
ingeniería ambiental?

RECOMENDACIONES Y/O OBSERVACIONES

Se debe ser cuidadoso en la manipulación de las celdas del espectrofotómetro

BIBLIOGRAFIA
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Skoog, D.A. & West, D.M. Química analítica. McGraw Hill. Séptima
edición. México. 2001

Visto Bueno Coordinador de laboratorio:

Firma: ____________________________

Nombre: _________________________________
jhhhhh Cargo:___________________________________