TP Extracción de ADN: Mucosa bucal

Integrantes: Sol Bardessono, Martina Stofenmacher, Sol Wexler

Objetivos:
1 - Aplicar una técnica sencilla para obtener ADN de la mucosa bucal.
2 - Comprender el proceso necesario para la extracción del ADN.

Introducción:
● ¿Qué es el ADN?
El ácido desoxirribonucleico o ADN es el material genético de los seres vivos. En los
eucariotas el ADN se encuentra en el núcleo de las células. Debido al tamaño pequeño
del núcleo, cada molécula de ADN se compacta formando lo que se denomina
‘cromosoma’. La unidad fundamental del ADN son los nucleótidos quienes forman un
enlace fosfodiéster entre cada unidad. Los nucleótidos son un compuesto monomérico
formado por un nucleósido (un azúcar y una base nitrogenada) y un grupo fosfato. A
diferencia del ARN tiene un estructura química de doble hélice con bases nitrogenadas
Timina-Adenina (quienes están unidas por 2 puentes de hidrógeno) y
Guanina-Citosina (unidas por 3 puentes de hidrógeno). Estas bases le dan la
estabilidad al doble hélice. El ADN se encuentra revestido por proteínas que se
denominan ‘histonas’.

● ¿Qué es el ARN?
El ácido ribonucleico, ARN, que constituye la mayor parte del ácido nucleico que se
encuentra en la célula, participa en la transmisión de la información genética necesaria
para operar la célula. Similar al ADN, las moléculas de ARN son polímeros no
ramificados de nucleótidos. Hay tres tipos principales de ARN en las células: ARN
mensajero, ARN ribosómico y ARN de transferencia. El ARN ribosómico (ARNr), el
tipo más abundante de ARN, se combina con proteínas para formar ribosomas. Las
bases que forman el ARN son la adenina, la guanina, la citosina y el uracilo. Su
estructura es de hebra sencilla
 ● ¿Cuál es el rol del NaCl?
El cloruro de sodio ayuda a separar las proteínas que están unidas al ADN,
manteniendolas disuelta en la capa acuosa impidiendo su precipitación de nuevo con
el ADN.

● ¿Cuál es el rol del detergente?

Las membranas de las células están formadas por dos capas de lípidos con proteínas
transmembrana. El detergente tiene una estructura similar a la de los lípidos por ende
al ponerse en contacto una con la otra, se rompen las uniones que conforman la bicapa
de fosfolípidos de las membranas plasmáticas. Cuando ocurre esto, la bicapa de
fosfolípidos se deshace y se combina con el detergente formando burbujas de
detergente y lípidos las cuales llevan a la rotura de la membrana plasmática liberando
el ADN.

● ¿Cuál es el rol del alcohol?

Una vez liberado el ADN de sus proteínas y lípidos que la envolvían, los grupos
fosfato del ADN son polar y están cargados negativamente. En este experimento el
alcohol es vital ya que si se pusiera el ADN en una solución acuosa, esta se disolvería
.El alcohol tiene la propiedad de reducir la constante dieléctrica de la solución acuosa,
así manteniendo insoluble al ADN. De esta manera, la adición de etanol frío es lo que
nos permite visualizar el ADN ya que lo hace precipitar en la solución (al adicionar
etanol se reducen las fuerzas repulsivas entre las cadenas y el ADN se pliega sobre sí
misma, separándose de la solución acuosa).

Materiales:
- Alcohol de 96º (o isopropanol helado)
- Un tubo de ensayo
- 2 Varillas de vidrio
- Vaso de precipitados de 50 ml
- Solución de detergente al 25%
- Solución de NaCl al 6%

Procedimiento:
a. Hacer buches enérgicamente durante al menos medio minuto para arrastrar el mayor
número posible de células de descamación de la mucosa bucal (antes de hacerlo
conviene haber tragado saliva para eliminar la acción de los enzimas contenidos en
ella y depositarlo en un vaso de precipitados.
b. En el mismo vaso añadir 20 ml de agua y 1 gramo de NaCl junto a un par de gotas
de detergente de lavavajillas removiendo suavemente con varilla de vidrio sin que se
forme espuma

c. Añadir la solución suavemente al tubo de ensayo que contiene el alcohol dejándola

resbalar por la pared del tubo inclinado. El filtrado, más denso que el alcohol y algo
turbio se deposita en el fondo del tubo. Dejar reposar durante 2 ó 3 minutos sin
moverlo en absoluto. El alcohol formará un sobrenadante por encima de la fase acuosa
en la que se encuentra el ADN en disolución provocando que éste precipite.

d. Agregar suavemente por volcado el Etanol a la mezcla. Se observan dos fases pero
mezclando suavemente van apareciendo los precipitados de DNA e. Dejar reposar
unos minutos y el precipitado se va a la superficie de donde se puede recuperar con
una varilla

Resultados:
Observaciones: Intentamos llevar a cabo el experimento lo más precisamente
posible, ya que existía la posibilidad de que no salga bien si no éramos cuidadosas.
Como detergente, utilizamos uno común de la marca CIF.

Imagen 1: detergente utilizado durante el experimento

Luego, seguimos por agregar el filtrado con el alcohol y esperar a ver los resultados.
 Imagen 2: Vertiendo el filtrado del buche, el NaCl y el detergente al tubo de ensayo con alcohol

En un principio, no se lograba ver mucho hasta que se fue asentando y luego de unos 3
minutos comenzamos a observar que se generó un precipitado blanco al fondo del
tubo de ensayo, aproximadamente dos minutos después de dejarlo en reposo.

Imagen 3: Tubo de ensayo a penas después de verter el contenido del filtrado, aún no se observaba precipitado
 Imagen 3: Tubo de ensayo luego de 2 minutos, se ve el precipitado blanco en el fondo

Conclusión:
Podemos concluir que el experimento resultó exitoso aunque no pudimos ver
muy claramente la forma del ADN. Además, sabemos que para ver únicamente el
ADN, sin estar mezclado con el ARN, deberíamos hacer otro experimento donde
podamos separar estos dos ácidos nucleicos. De todas maneras, pudimos llevar a cabo
el experimento entendiendo qué función tenía el NaCl, el detergente y el alcohol
durante el procedimiento. Al comprender la teoría, ver prácticamente una extracción
de ADN resultó muy interesante, pudiendo haber visto lo estudiado en clase.