EXTRACCIÓN DE ADN

I. OBJETIVO
Extraer de un tejido ADN y confirmar su estructura fibrilar. A partir de la longitud enorme de las
fibras también se confirma en el núcleo en ADN se encuentra replegado.
II. FUNDAMENTO TEÓRICO
La extracción de ADN requiere una serie de etapas básicas: En primer lugar tiene que romperse
la pared celular y la membrana plasmática para poder acceder al núcleo de la célula. A
continuación debe romperse también la membrana nuclear para dejar libre el ADN. Los jabones
utilizados como lavavajillas emulsionan los lípidos de las membranas celulares y las rompen.
La sal evita la unión de las proteínas al ADN.
Para aislar el ADN hay que hacer que precipite en alcohol. El ADN es soluble en agua, pero
cuando se encuentra en alcohol se desenrolla y precipita en la interface entre el alcohol y el agua.
Además de permitirnos ver el ADN, el alcohol separa el ADN de otros componentes celulares,
los cuales son dejados en la solución acuosa.
Las proteínas asociadas al ADN, de gran longitud, se habrán fraccionado en cadenas más
pequeñas y separadas de él por acción de detergente. Sólo queda, por tanto, extraer el ADN de
esa mezcla de tampón y detergente, para lo cual se utiliza alcohol isoamílico.

III. MATERIALES Y REACTIVOS

 III.1. Materiales
 Embudo.
 Pipetas.
 Varilla de vidrio.
 Papel filtro o tela.
 Vaso de precipitado.
 Porta y cubre objeto.
III.2. Reactivos
 NaCl 2M
 Dodecil – hodrogenio – sulfato sódico (SDS) AL 20%, en su lugar puede utilizarse un
detergente líquido.
 Alcohol etílico de 96ºC.
 Azul de metileno
III.3. Equipos
 Balanza.
 Microscopio.
III.4. Muestras
 Almidón.
IV. PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL
1. Triturar en frío 10g. de muestra de hígado en el mortero junto con arena. Este procedimiento
rompe las células liberando su contenido.
2. Añadir unos 50 ml de agua destilada o, en su defecto, agua mineral, y remover suavemente
pero mezclando a fondo.
3. Filtrar varias veces el resultado a través de un pedazo de tela. Un pañuelo viejo de algodón
va bien. Este filtrado es lento y difícil, pero retendrá en el pañuelo restos de tejido.
4. Añadir al filtrado resultante un volumen igual de solución de NaCl 2M. Esta disolución tan
concentrada tiene varios efectos. En primer lugar provoca un choque osmótico que es capaz
de romper algunas membranas no afectadas por el tratamiento anterior. Además, las cargas
positivas de los iones Na+ atraerán luego las cargas negativas del ADN manteniéndolo en la
disolución.
 5. Añadir ahora 1 ml de detergente y remover suavemente, mezclando bien pero evitando que
se forme espuma. Repetir la mezcla varias veces dejando reposar un minuto cada vez. Si se
forma espuma se puede retirar con una esquina de papel de filtro o con un cuentagotas.
El detergente completa la rotura de las membranas al disolver y separar los lípidos de las
mismas. También interviene en la separación de las proteínas que rodean al ADN. Si es
posible volver a filtrar, se obtendrá una solución más limpia de restos.
6. Con los pasos anteriores hemos conseguido tener el ADN libre en la disolución acuosa. A
continuación hay que separar el ADN haciéndolo precipitar:
7. Ahora se añaden unos 50 ml de alcohol muy frío, teniendo cuidado de hacerlo ladeando el
tubo o vaso de precipitados y dejando resbalar muy lentamente el alcohol por la pared de
aquel para formar una capa sobre la solución anterior. Es muy importante evitar que se
mezclen ambas soluciones, pues será en la interface donde precipitará el ADN.
8. El ADN irá apareciendo poco a poco en la interface agua-alcohol en forma de grumos
blancos. Se favorece la precipitación y recolección si se va recogiendo mediante la varilla de
vidrio, u otro instrumento similar, introduciéndola ligeramente bajo la interface y haciéndola
girar suavemente mientras se extrae. Así se irán pegando en la varilla unas hebras blancas
que corresponden a miles de fibras de ADN.
9. Se puede ahora tomar una muestra del ADN recogido, depositarla sobre un porta objeto y
teñir con azul de metileno durante 1 a 3 minutos. Tras limpiar bien el porta objeto, se
observa al microscopio.

V. RESULTADOS
1. Esquematice los procedimientos y reacciones observadas durante la práctica.
VI. DISCUSIONES

VII. CONCLUSIONES

VIII. RECOMENDACIONES

IX. CUESTIONARIO
1. Qué finalidad tiene el exponer las células a un detergente fuerte.
 2. Realiza un dibujo de la acción del detergente sobre las células.

3. Investiga y explica brevemente en qué consiste la electroforesis.

4. ¿Porque el ADN en solución se precipita en presencia de un alcohol frió?

5. ¿Cómo podrías cuantificar la cantidad de DNA de tu muestra?

6. ¿Cuál es la función y la importancia del DNA en los organismos?

7. Como se separamos de nuestra muestra el ADN del ARN?

8. ¿Cuál es la función del cloroformo?

I. BIBLIOGRAFÍA