Práctica 5 de Bioquímica

UNIVERSIDAD NACIONAL JOSE MARÍA ARGUEDAS
DEPARTAMENTO ACADÉMICO DE CIENCIAS BÁSICAS

Escuela Profesional de Ingeniería Ambiental
Laboratorio de Bioquímica Ambiental
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UNIVERSIDAD NACIONAL JOSÉ MARÍA ARGUEDAS

FACULTAD DE INGENIERÍA
ESCUELA PROFESIONAL DE INGENIERÍA AMBIENTAL
PRACTICA N° 05:
Determinación cualitativa y cuantitativa de proteínas
Alumna: Perez Alarcon Sheila Yhoalibeth
DOCENTE: Mg Edith Enciso Quilla
CICLO
III
ANDAHUAYLAS - APURÍMAC – PERÚ
2023
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1. INTRODUCCIÓN
Las proteínas son fundamentales para todos nosotros, puesto que cumple diversas funciones en
nuestro organismo, tales como fortalecer los huesos, los músculos y la piel. Por otro lado, las
proteínas se pueden definir como macromoléculas que realizan múltiples funciones de gran
importancia lo cual es fundamental para los seres vivos.
Debido a la gran importancia que cuentan las proteínas, se realizarán diversos métodos para la
identificación de las proteínas, uno de los métodos más conocidos tenemos a la prueba de Biuret,
este es un método que detecta la presencia de compuestos de tres o más enlaces peptídico y por
lo tanto, sirve para todas las proteínas y péptidos cortos.
Es de gran importancia tener conocimiento que el reactivo de Biuret consiste en una solución
acuosa de sulfato cúprico (CuSO4) en medio alcalino (NaOH). Este reactivo da un ensayo
positivo con los enlaces peptídicos entre aminoácidos, cuando la solución queda de color violeta.
Esto se debe a que el cobre tiene la propiedad de formar iones complejos, especialmente entre
los enlaces peptídicos.
A partir de este informe, se realizarán pruebas para la detección de proteínas que serán explicados
a profundidad en el desarrollo del informe.
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ÍNDICE
1. INTRODUCCIÓN................................................................................................................................... 13
2.- OBJETIVOS.............................................................................................................................................. 15
3. MARCO TEÓRICO .................................................................................................................................... 16
3.1.-Las proteínas .................................................................................................................................... 16
3.2.- Métodos para la identificación de las proteínas ............................................................................ 16
4. METODOLOGÍA ....................................................................................................................................... 19
4.1.- Materiales ....................................................................................................................................... 19
4.1.1.- Materiales para la desnaturalización de proteínas ................................................................. 19
4.1.2.- Materiales para la identificación de proteínas mediante el reactivo de Biuret ...................... 20
4.1.3.- Materiales para identificación de proteínas mediante el reactivo de Biuret con
diversos productos ..................................................................................................................21
4.1.4.- Materiales para las reacciones específicas coloreadas de Biuret ................................21
4.1.5.- Materiales para identificación de proteínas mediante el reactivo de Biuret en
alimentos que consumimos a diario. ......................................................................................22
4.1.6.- Materiales para la determinación de proteínas en pasta por el método Kjeldahl. .......23
4.2.- Procedimientos ..................................................................................................................24
4.2.1.- Procedimientos para la desnaturalización de proteínas...............................................24
4.2.2.- Identificación de proteínas mediante el reactivo de Biuret. ........................................26
4.2.3.- Procedimientos para identificación de proteínas mediante el reactivo de Biuret con
diversos productos. .................................................................................................................27
4.2.4.- Procedimientos para las reacciones específicas coloreadas de Biuret ........................28
4.2.5.- Procedimientos para identificación de proteínas mediante el reactivo de Biuret en
alimentos que consumimos a diario. ......................................................................................29
4.2.6.- Procedimientos para la determinación de proteínas en pasta por el método Kjeldahl.
................................................................................................................................................30
5.- RESULTADOS ........................................................................................................................31
6. CUESTIONARIO ......................................................................................................................35
7. CONCLUSIONES .....................................................................................................................36
8. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS ......................................................................................37
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2.- OBJETIVOS
2.1.- Objetivo general
• Realizar diversos métodos para la determinación cualitativa y cuantitativa de las
proteínas.
2.2.- Objetivos específicos
• Aplicar adecuadamente el método de Biuret para la identificación de proteínas en
diferentes productos.
• Analizar y hacer comparaciones con los resultados obtenidos.
• Determinar la concentración de proteínas en una muestra biológica.
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3. MARCO TEÓRICO
3.1.-Las proteínas
Las proteínas son moléculas grandes y complejas que cumplen muchas funciones importantes en
el cuerpo. Son vitales para la mayoría de los trabajos que
realizan las células y son necesarias para mantener la
estructura, función y regulación de los tejidos y órganos
del cuerpo. Una proteína está formada por una o más
cadenas largas, plegadas de aminoácidos (cada una
llamada polipéptido), cuyas secuencias están determinadas
por la secuencia de ADN del gen que codifica la proteína.
3.2.- Métodos para la identificación de las proteínas
Existen diferentes métodos para la cuantificación de proteínas. Muchos de estos métodos se basan
en:
a) la propiedad intrínseca de las proteínas para absorber luz en el UV,
b) por la formación de derivados químicos
c) Por la capacidad que tienen las proteínas de unir ciertos colorantes.
Por otro lado, se tiene gran cantidad de métodos entre ellos se mencionarán los siguientes:
3.2.1.- Ley de Lambert –Beer

Relaciona la absorción de luz con las propiedades del material atravesado. Relación exponencial
entre la transmisión de luz a través de una sustancia y la
concentración de la sustancia, Transmisión y la longitud
del cuerpo que la luz atraviesa
3.2.2.- Curva patrón

Relaciona la absorción de luz con las propiedades del material atravesado.
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3.2.3.- Método UV: Abs280nm

•Se basa en la propiedad intrínseca de las proteínas para absorber luz en el UV. Todas las proteínas
pueden ser detectadas, sin embargo, solo ciertos residuos
de aminoácidos son los que se leen en la región del UV.
Las bandas de absorción más significativas se encuentran
en el ultravioleta cercano, en el intervalo de longitud de
onda entre230 y 300nm.Concretamente absorben en este
rango las cadenas laterales de los aminoácidos
aromáticos , la histidina y la cistina.
3.2.4.- Métodos colorimétricos: Biuret, Lowry, bradford, BCA

Se basa en la formación de derivados químicos, es la capacidad que tienen las proteínas de unir
ciertos colorantes. Por reacciones colorimétricas: Enlaces peptídicos o ciertos aminoácidos
reaccionan y los
productos coloridos son
los que se cuantifican. La
intensidad de color se
mide a mayor cantidad de
proteína, mayor cantidad
de producto de reacción y
por lo tanto, mayor
intensidad de color.
3.2.5.- Metodode kjedhal

•Relaciona la absorción de luz con las propiedades del material atravesado. Mide el contenido en
nitrógeno de una muestra.
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3.2.6.- Cuantificacion de proteinas por el metodo colorimetrico de biuret

La reacción o prueba de Biuret es un método que detecta la presencia de compuestos de tres o más
enlaces peptídicos y, por tanto, sirve para todas las proteínas y péptidos cortos. El reactivo de
Biuret consiste en una solución acuosa de sulfato cúprico (CuSO4) en medio alcalino (NaOH).
Este reactivo da un ensayo positivo con los enlaces peptídicos entre aminoácidos, cuando la
solución queda de color violeta. Esto se debe a
que el cobre tiene la propiedad de formar iones
complejos, especialmente entre los enlaces
peptídicos. Se usa normalmente en el ensayo de
Biuret, un método colorimétrico que permite
determinar la concentración de proteínas de una muestra mediante espectroscopía ultravioleta-
visible a una longitud de onda de 540 nm (para detectar el ion Cu2+).
Se basa en la formación de un complejo coloreado entre el Cu 2+ y los grupos NH de los enlaces

peptídicos en medio básico.
• La intensidad de coloración es directamente proporcional a la cantidad de proteínas (

enlaces peptídicos ) y la reacción es bastante específica, de manera que pocas sustancias
interfieren.
• La sensibilidad del método es muy baja y sólo se recomienda para la cuantificación de
proteínas en preparados muy concentrados (por ejemplo, en suero).
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4. METODOLOGÍA
4.1.- Materiales
4.1.1.- Materiales para la desnaturalización de proteínas
Materiales e insumos/ reactivos Imágenes
Agua destilada
Solución de
ácido clorhídrico
Hidróxido de
sodio y Urea
Papa
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4.1.2.- Materiales para la identificación de proteínas mediante el reactivo de Biuret
Materiales e insumos/ reactivos Imágenes
Vasos de precipitado
Tubos de ensayo
Leche
Leche
Agua desionizada
Albúmina
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4.1.3.- Materiales para identificación de proteínas mediante el reactivo de Biuret con

diversos productos
Materiales o reactivos Imágenes
5 tubos de ensayo, con los

productos prevamente
listo.
Reactivo de Biuret
4.1.4.- Materiales para las reacciones específicas coloreadas de Biuret
Materiales y reactivos/insumos Imágenes
Gradillas y tubos de
ensayo
Leche, clara de huevo,

bicker, sulfato de cobre e
hidróxido de sodio.
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4.1.5.- Materiales para identificación de proteínas mediante el reactivo de Biuret en

alimentos que consumimos a diario.
Gradillas y tubos de
ensayo y pipetas.
Hidróxido de sodio y
Biuret
Leche. Gelatina, clara del

huevo, jamón y carne de
res molida.
Agua destilada
1
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4.1.6.- Materiales para la determinación de proteínas en pasta por el método Kjeldahl.
Ácido sulfúrico y disolución

de NaoH
Indicador ácido base (rojo

de metilo)
Pastilla catalizadora kjeldahl
Disolución de ácido bórico

y HCL
Digestor y destilador
kjeldahl
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4.2.- Procedimientos
4.2.1.- Procedimientos para la desnaturalización de proteínas
• Paso número 01: Primeramente, adicionamos 2gr de papa a los 5 tubos de

ensayo.
• Paso número 02: Luego, se procede a añadir al tubo 1 y al tubo 2, 3ml de

agua destilada respectivamente.
• Paso número 03: Continuando, se añade 3ml de ácido clorhídrico, hidróxido

de sodio y urea a los tubos 3, 4 y 5 respectivamente y luego agitamos
cuidadosamente.
• Paso número 04: Luego procedemos a encubar a 20 grados, los tubos 2,3,4 y
5, durante un periodo de 15 minutos.
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• Paso número 05: Prosiguiendo, al tubo 1 se encuba a 70 grados por 15

minutos
• Paso número 06: Después de realizar el encubado, se procede a añadir al

30% de peróxido a cada uno de los tubos y se observa minuciosamente los
resultados y tomamos nota.
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4.2.2.- Identificación de proteínas mediante el reactivo de Biuret.
• Paso número 01: Primeramente, se procede a alistar los 4 tubos de ensayo y los
productos, tales como la leche, clara de huevo, agua destilada y albúmina.
• Paso número 02: Luego, añadimos 3ml de leche al primer tubo de ensayo y al segundo
tubo 2ml de clara de huevo y también 1ml de agua desionizada al tubo de enayo que
contiene la clara de huevo.
• Paso número 03: Continuando, se procede a añadir al tercer tubo 3ml de agua
desionizada y al cuarto tubo se agrega 3ml de la solución de albúmina.
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• Paso número 04: Luego, añadimos a todos los tubos medio mililitro de hidróxido de
sodio, luego mezclamos y finalmente adicionamos 1ml del reactivo de Biuret y agitamos
y dejamos por 10 minutos y luego observamos los resultados.
4.2.3.- Procedimientos para identificación de proteínas mediante el reactivo de Biuret con

diversos productos.
• Paso número 01: Primeramente, debemos tener listos los tubos de ensayo previamente
rotulados con sus respectivos nombres de los productos a analizar.
• Pao número 02: Luego a los 5 tubos de ensayo se añade respectivamente la BSA
(albúmina de suero bovino), OVA (ovoalbúmina o albúmina del huevo), el almidón, la
clara del huevo y la harina de trigo.
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• Paso número 03: Finalmente, añadimos a todos los tubos el reactivo de Biuret y
observamos los resultados.
4.2.4.- Procedimientos para las reacciones específicas coloreadas de Biuret
• Paso número 01: Primeramente, se debe tener rotulados los dos tubos de ensayo,
posterior a ello se procede a añadir 5ml de leche al primer tubo y al segundo tubo se
añadirá 5ml de clara de huevo.
• Paso número 02: Posteriormente, se adicionan a los dos tubos de ensayo el sulfato de
cobre al 1%(10 gotas) para cada tubo.
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• Paso número 03: Finalmente, se adiciona la solución del hidróxido de sodio al 20% (5ml)
y agitar cuidadosamente y se observan los resultados.
4.2.5.- Procedimientos para identificación de proteínas mediante el reactivo de Biuret en

• Paso número 01: Primeramente, debemos tener listos las muestras que se requiere
identificar y previamente rotulados con números para poder identificarlos.
• Paso número 02: Luego se procede a añadir 1ml del reactivo hidróxido de sodio a cada
uno de los tubos y se agita cuidadosamente cada una de las muestras.
• Paso número 03: Finalmente, se añade 1ml de reactivo de Biurte a cada uno de las
muestras.
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4.2.6.- Procedimientos para la determinación de proteínas en pasta por el método Kjeldahl.
• Pas número 01: Primeramente, se pesa 1gr de muestra previamente molida y

homogenizada y se introduce en un tubo de digestión Kjeldahl.
• Paso número 02: Luego se añade al tubo con la muestra unas perlas de vidrio y una
pastilla de catalizador.
• Paso número 03: Seguidamente, se añaden 10ml de ácido sulfúrico concentrado, luego
se colocan los tubos de digestión con las muestras en el módulo digestor y se conecta la
bomba y se procede a realizar la digestión a una temperatura de 400° durante 90 minutos.
• Paso número 04: Finalmente, se deja enfriar la muestra a temperatura ambiente, luego
se dosifican 50 ml de agua destilada en cada uno de los tubos, por otra parte se introducen
25 ml de ácido bórico en un matraz y de 2 a 3 gotas de indicador mixto, por último ambas
muestras lo introducimos al modulo destilador y finalmente se observan los resultados
obtenidos.
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5.- RESULTADOS
5.1.- Resultados de la desnaturalización de proteínas
Cómo resultado final, tenemos que la

desnaturalización de las proteínas se dio
por los factores tanto físicos como
químicos.
Por ejemplo, en la práctica que se realizó
se usaron los reactivos, como el
hidróxido o urea lo cual afectaron la
estructura de las proteínas, cómo también
influye lo que es la temperatura a lo que
fueron sometidos. De tal forma, podemos
observar como coágulos en la muestra.
5.2.- Resultados de la identificación de proteínas mediante el reactivo de Biuret.
Tubo 01: Leche

En el tubo de ensayo, se ha formado una
especie de color lila claro, lo cual nos indica
que la leche contiene regularmente proteínas.
(Regular es la cantidad de proteína)
Tubo 02: Clara de huevo

En este caso observamos que presenta un
color morado muy intenso, lo cual indica
gran presencia de proteínas.
(Gran presencia de proteínas)
Tubo 03: Agua desionizada

Este es un caso muy particular, podemos
observar que no ha teñido a ningún color, lo
cual indica que no hay presencia de proteína.
(No hay presencia de proteína).
Tubo 04: Albúmina

Se observa que se ha teñido de un color
morado sumamente intenso, lo cual indica
mucha presencia de proteína.
(Gran presencia de proteínas).
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5.3.- Resultados para identificación de proteínas mediante el reactivo de Biuret con

diversos productos.
Tubo 01: BSA (Albúmina de suero bovino)

En este caso, observamos que se ha teñido de
un lila casi claro, esto indica que la BSA, sí
tiene presencia de proteína.
(Presenta regular de proteínas)
Tubo 02: OVA (Ovoalbúmina)

Al igual que los anteriores casos, observamos
que se ha teñido de un color lila, ello
indicando que hay presencia de una cierta
cantidad de proteínas.
(Regular de proteínas.)
Tubo 03: Almidón

Otro dato particular, se observa que no ha
teñido, lo cual indica que el almidón no
contiene proteínas.
(No hay presencia de proteínas).

En este caso observamos una cierta cantidad
del color lila, de tal modo se dice que hay
presencia de proteínas.
(Regular de proteínas).
Tubo 05: Harina de trigo

En este caso, se observa muy claro que no ha
teñido, lo cual no hay presencia de proteínas.
(No hay presencia de proteínas).
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5.4.- Resultados para las reacciones específicas coloreadas de Biuret.
Tubo 01: Leche

En e tubo de ensayo, se ha formado una
especie de color lila claro, lo cual nos indica
que la leche contiene regularmente proteínas.
(Regular es la cantidad de proteína)

En este caso observamos que se ha teñido un
color morado fuerte, esto indica que la clara
de huevo es rica en proteínas.
(gran presencia de proteínas).
5.5.- Resultados para identificación de proteínas mediante el reactivo de Biuret en

Tubo 01: Clara del huevo

Como resultado final, se puede observar que
se ha formado un color morado intenso, ello
quiere decir que la clara de huevo contiene
gran porcentaje de proteínas.
(Gran cantidad de proteínas)
Tubo 02: Leche

Se observa en la imagen que se ha formado
un lila claro, ello indica que la leche cuenta
con una cierta cantidad de proteína,
aproximadamente un 30 a 40%.
(Regular)
Tubo 03: Gelatina

Se observa en la imagen que a ciertos rasgos
hay presencia de un color lila, ello indica que
la gelatina cuenta con proteínas en mínima
cantidad. Aproximadamente en un 10%.
(baja cantidad de proteína)
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Tubo 04: Jamón

Observamos en la imagen un color morado
claro, lo cual nos indica que el jamón
contiene proteínas, pero en baja cantidad o
porcentaje.
(Mínima cantidad de proteínas)
Tubo 05: Carne de res

En la imagen observamos que se ha teñido de
un color morado intenso, lo cual nos indica
gran presencia de proteína.
(Gran presencia de proteínas).
5.6.- Resultados para la determinación de proteínas en pasta por el método Kjeldahl.
Cómo resultado final de la prueba,

observamos que se produce el viraje de
indicador al reaccionar con el amoniaco,
generado con el espeso del ácido bórico
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6. CUESTIONARIO
1.-¿En qué pare de la ingeniería ambiental vamos a usar estos métodos de la

identificación de las proteínas?
Ingeniería ambiental, es una carrera sumamente amplia, ello quiere decir; que un ingeniero
ambiental puede trabajar en diferentes ámbitos.
De tal forma es que todos los temas de la bioquímica ambiental son fundamentales para un
ingeniero ambiental y si nos enfocamos en la identificación de proteínas, este tema es muy
relevante, ya que gracias a estos métodos que aplicamos para identificar proteínas, a futuro como
ingeniero ambiental, se puede llevar a la investigación a profundidad, todos estos temas que
estamos realizando son primordiales, ya que es la base para centrarnos en la investigación.
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7. CONCLUSIONES
En conclusión, gracias al informe elaborado se logró adquirir grandes conocimientos acerca de

la identificación de las proteínas y la gran importancia que cuentan.
Por otro lado, satisfactoriamente se logró aplicar el método de Biuret para la identificación de
proteínas, si bien se sabe, nosotros a diario consumimos diversos productos, pero es fundamental
que tengamos conocimiento si nuestros alimentos que consumimos contienen proteínas y en qué
nivel o porcentaje, es por ello que en esta práctica se logró identificar diversos productos con el
Reactivo de Biuret, lo cual tuvimos varios resultados y conforme a ello se concluye que los
productos, tales como la leche y los huevos son ricos en proteínas y en un gran porcentaje.
Como también se logró realizar diferentes métodos para la identificación de proteínas y con
diferentes productos.
Finalmente, concluyo que esta práctica fue de suma importancia, puesto que a futuro lo podemos
aplicar en distintos ámbitos como ingenieros ambientales.
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8. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS
Alba Gutiérrez R., Eufrosina, Olivia Rodríguez Zavala, Catalina Carmona T.. (2004). La
química en tus manos. Ciudad de México: Dirección General de Publicaciones y Fomento
Editorial. Recuperado
de: https://books.google.com.mx/books?id=SPERRV5OggUC&pg=PA183&dq=practica
+carbohidratos+lugol&hl=es-
419&sa=X&ved=2ahUKEwjMkMrT3Z3sAhUMP60KHYypBvoQ6AEwAnoECAEQAg
#v=onepage&q=practica%20carbohidratos%20lugol&f=false
Jorge E. Ramírez Luna, Andrea Reyes López . (2003). Manual de prácticas de laboratorio de
biología. México: Pearson Educación .

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DEPARTAMENTO ACADÉMICO DE CIENCIAS BÁSICAS

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ANDAHUAYLAS - APURÍMAC – PERÚ

3.2.- Métodos para la identificación de las proteínas

3.2.1.- Ley de Lambert –Beer

3.2.2.- Curva patrón

3.2.3.- Método UV: Abs280nm

3.2.4.- Métodos colorimétricos: Biuret, Lowry, bradford, BCA

3.2.5.- Metodode kjedhal

3.2.6.- Cuantificacion de proteinas por el metodo colorimetrico de biuret

Se basa en la formación de un complejo coloreado entre el Cu 2+ y los grupos NH de los enlaces

• La intensidad de coloración es directamente proporcional a la cantidad de proteínas (

4.1.1.- Materiales para la desnaturalización de proteínas

Materiales e insumos/ reactivos Imágenes

4.1.2.- Materiales para la identificación de proteínas mediante el reactivo de Biuret

Materiales e insumos/ reactivos Imágenes

4.1.3.- Materiales para identificación de proteínas mediante el reactivo de Biuret con

Materiales o reactivos Imágenes

5 tubos de ensayo, con los

4.1.4.- Materiales para las reacciones específicas coloreadas de Biuret

Materiales y reactivos/insumos Imágenes

Leche, clara de huevo,

4.1.5.- Materiales para identificación de proteínas mediante el reactivo de Biuret en

Materiales y reactivos/insumos Imágenes

Leche. Gelatina, clara del

4.1.6.- Materiales para la determinación de proteínas en pasta por el método Kjeldahl.

Materiales y reactivos/insumos Imágenes

Ácido sulfúrico y disolución

Indicador ácido base (rojo

Pastilla catalizadora kjeldahl

Disolución de ácido bórico

4.2.1.- Procedimientos para la desnaturalización de proteínas

• Paso número 01: Primeramente, adicionamos 2gr de papa a los 5 tubos de

• Paso número 02: Luego, se procede a añadir al tubo 1 y al tubo 2, 3ml de

• Paso número 03: Continuando, se añade 3ml de ácido clorhídrico, hidróxido

• Paso número 05: Prosiguiendo, al tubo 1 se encuba a 70 grados por 15

• Paso número 06: Después de realizar el encubado, se procede a añadir al

4.2.2.- Identificación de proteínas mediante el reactivo de Biuret.

4.2.3.- Procedimientos para identificación de proteínas mediante el reactivo de Biuret con

4.2.4.- Procedimientos para las reacciones específicas coloreadas de Biuret

4.2.5.- Procedimientos para identificación de proteínas mediante el reactivo de Biuret en

4.2.6.- Procedimientos para la determinación de proteínas en pasta por el método Kjeldahl.

• Pas número 01: Primeramente, se pesa 1gr de muestra previamente molida y

Cómo resultado final, tenemos que la

5.2.- Resultados de la identificación de proteínas mediante el reactivo de Biuret.

Tubo 01: Leche

Tubo 02: Clara de huevo

Tubo 03: Agua desionizada

Tubo 04: Albúmina

5.3.- Resultados para identificación de proteínas mediante el reactivo de Biuret con

Tubo 01: BSA (Albúmina de suero bovino)

Tubo 02: OVA (Ovoalbúmina)

Tubo 03: Almidón

Tubo 04: Clara de huevo

Tubo 05: Harina de trigo

5.4.- Resultados para las reacciones específicas coloreadas de Biuret.

Tubo 01: Leche

Tubo 02: Clara de huevo

5.5.- Resultados para identificación de proteínas mediante el reactivo de Biuret en

Tubo 01: Clara del huevo

Tubo 02: Leche