PLANTILLA DE ACTIVIDAD 1.

“PROTOCOLO DE TOMA DE MUESTRA FARINGEA PARA

DIAGNÓSTICO DE SARS-CoV-2 POR PCR”
Objetivo: Descripción del procedimiento para la toma de muestra faríngea para el diagnóstico
de SARS-CoV-2

Sección 1. Descripción de materiales

En la tabla 1. Ingrese la lista de materiales, equipo de protección personal (para quien toma la
muestra), materiales de limpieza y para manejo de desechos que se requieren para la toma de
muestra de un solo paciente. De forma que indique la cantidad de cada material.

Tabla 1. Lista de materiales requeridos para la toma de muestra faríngea

Cantidad Materiales para la toma de muestra
2 Hisopo de poliéster estériles (1 de cabeza delgada para muestra nasal y 1 de
cabeza gruesa para muestra faríngea
1 Tubo con medio de transporte viral
1 Abatelenguas

Cantidad Equipo de protección personal

2 Pares de guantes
1 Careta
1 Cubrebocas
1 Bata desechable
1 Par de botas antideslizantes
1 Gorro quirúrgico
1 Lentes de protección
Cantidad Material de limpieza y para manejo de desechos

1 atomizador Alcohol 70%

1 Cinta adhesiva
1 Bolsa para bioinfecciosos
1 Bolsa negra para desechos comunes
1 Atomizador con hipoclorito de sodio al 0.5%

Sección 2. Descripción de procedimiento

Describa los pasos a seguir para la toma de muestra orofaríngea para el diagnóstico de SARS-
CoV-2 por prueba de PCR. Recuerde incluir cuidados o Tips que considere necesarios para la
seguridad del paciente, personal y del área de trabajo.
Paso 1. Realizar un correcto lavado de manos con agua y jabón

Paso 2. Colocarse los elementos de protección personal nivel 2 (Al momento de usar cubrebocas
N95 es recomendable no contar con la presencia de vello facial ya que esto disminuye la eficacia
del filtrado)

Paso 3. Rotular apropiadamente el tubo con nombre y apellido del paciente, número de
documento y tipo de muestra (Realizar esto fuera de la sala de procedimientos.)

Paso 4. Pedirle a la persona que se baje el cubrebocas

Paso 5. Inclinar la cabeza de la persona hacia atrás en un ángulo de 70° (Si es un paciente
pediátrico pedir ayuda de personal vestido con equipo de protección para inmovilizarlo)

Paso 6. Utilizar el abatelenguas para obtener mejor visibilidad de la faringe.

Paso 7. Tomar el hisopo grueso entre los dedos pulgar e índice para facilitar la manipulación y
rotación del hisopo.

Paso 8. Solicitarle al paciente que diga sostenidamente “Aa”

Paso 9. Tomar la muestra frotando ambas amígdalas y la faringe posterior (evitando tocar el
paladar blando y la lengua)

Paso 10. Colocar el hisopo con la muestra en el tubo con medio de transporte viral. (La punta del
hisopo debe quedar dentro del frasco)

Paso 11. Cerrar herméticamente el tubo e introducirlo en el frasco secundario de forma vertical.

Paso 12. Solicitarle al paciente que se coloque el cubrebocas y se desinfecte las manos.

Paso 13. Desinfectarse las manos y retirarse el primer par de guantes.

Paso 14. Cerrar herméticamente el frasco del embalaje secundario y desinfectar su exterior con
alcohol al 70%.

Paso 15. Cerrar la hielera o el embalaje terciario y descontaminar el exterior.

Sección 3. Referencias

Enlace visto en clase: https://www.youtube.com/watch?v=CKXumVocVFA

https://www.cpllabs.com/covid-19/covid-19-nasal-swab-collection
https://www.youtube.com/watch?v=NTpqIF30Fks

“PROTOCOLO DE EXTRACCIÓN DE ARN A PARTIR DE

MUESTRA OROFARINGEA PARA DIAGNÓSTICO DE
SARS-CoV-2 POR RT-PCR”
Objetivo: Describir materiales y procedimientos necesarios para la extracción de ARN a partir de
muestra orofaríngea para el diagnóstico de SARS-CoV-2
Instrucciones: Para realizar la siguiente actividad, además de revisar el video de clase, se
recomienda revisar el protocolo del kit de extracción de ARN viral QIAamp (Qiagen), el cual podrá
descargar en el siguiente enlace:
https://www.qiagen.com/mx/resources/resourcedetail?id=c80685c0-4103-49ea-aa72-
8989420e3018&lang=en
(Click en download, material solo disponible en versión en inglés)

Enlace al video de la clase:

https://unisonmx-my.sharepoint.com/:v:/g/personal/alejandra_lopez_unison_mx/
ET5DTRNE4sVCoG47K7-sawQBxV8OtBDMaMtNW-vjAjedjQ?e=Oksl56

En el siguiente documento, el procedimiento de extracción de ARN se dividirá en dos secciones,

uno para la inactivación del virus y otro para la extracción de ARN, dado que se realizan en áreas
diferentes del laboratorio. Complete los campos con la información que se solicita.

Si lo considera apropiado, puede añadir imágenes ilustrativas.

Sección 1. Área de inactivación

Área de trabajo

Fundamental que cuente con una campana de bioseguridad del tipo 2 ya que dentro de esta es en
donde se inactivarán las muestras.

Limpieza del área de inactivación:

Limpiar las mesas de trabajo e interior de campana de bioseguridad con atomizador con cloro a
0.5% y sanitas.

Limpiar interior y exterior de la campana con atomizador con etanol al 70% y sanitas.

Encender la lámpara UV de la campana de bioseguridad durante 15 minutos.

Materiales y equipos
En la tabla 1. Ingrese la lista de materiales, equipo de protección personal, materiales de limpieza y
para manejo de desechos que se requieren para la inactivación de ARN de 4 muestras, de forma
que considere la cantidad de cada material.

Tabla 1. Lista de materiales requeridos para proceso de inactivación

Cantidad Equipo y materiales para proceso de inactivación
1 Micropipeta de 200μl 
4 Puntas para micropipeta de 200μl, con filtro, estériles y libres de RNAsa
 1 Gradilla para tubos de 15ml
1 Marcador permanente de punto fino
1 Reactivo RNasa Zap
1 Caja de Parafilm
1 Paquete de sanitas
1 Hielera con geles refrigerantes
5 Microtubos con solución AV ARN acarreador
Cantidad Equipo de protección personal
1 Mascarilla N95
1 Careta
1 Bata quirúrgica desechable
3 Pares de guantes
1 Uniforme médico de protección desechable de tipo mameluco
1 Cofia
1 Par de Mangas de protección
1 Par de Cubre botas
1 Cinta adhesiva
Cantidad Material de limpieza y para manejo de desechos
1 Atomizador de etanol al 70%
1 Atomizador de cloro 0.5 %
1 Atomizador de sal cuaternaria de amonio
1 Recipiente con tapa para el descarte de puntas de micropipetas
1 Bolsa para basura biopeligrosa

Procedimiento de inactivación
Describa los pasos a seguir para realizar el proceso de inactivación del virus a partir de muestras
de hisopado orofaríngeo para el diagnóstico de SARS-CoV-2 por prueba de RT-PCR. Recuerde
incluir cuidados o Tips que considere necesarios para la seguridad del personal, área de trabajo y
manejo adecuado de la muestra.

Paso 1. Colocarse todo el equipo de seguridad (Mascarilla N95, careta, bata quirúrgica desechable,
3 pares de guantes, uniforme médico de protección desechable del tipo mameluco, cofia, mangas
de protección, cubre botas).

Paso 2. Ingresar las muestras y los microtubos en el área de inactivación

Paso 3. Etiquetar las muestras con códigos de identificación

Paso 4. Limpiar el material de trabajo y las muestras con RNAsa Zap

Paso 5. Introducir el material en la campana de bioseguridad.

Paso 6. Comenzar a marcar los microtubos que contienen la solución AV ARN acarreador con los
códigos de identificación de las muestras correspondientes.
Paso 7. Limpiar nuestras manos con etanol al 70% antes de comenzar a manipular las muestras
(Repetir esto antes de trabajar con cada muestra)

Paso 8. Transferir 140 μl de la muestra al microtubo con 560 μl de solución buffer AV ARN
acarreador y mesclar cuidadosamente por pipeteo e incubar a temperatura ambiente por 10
minutos.

Paso 9. Sellar cuidadosamente el tubo de la muestra y el microtubo y continuar con la siguiente

muestra. (No olvidemos limpiar nuestras manos con etanol al 70% antes de utilizar la siguiente
muestra)

Paso 10. Al finalizar el procesamiento de muestras debemos rociar el recipiente con puntas de
desecho con sal cuaternaria de amonio

Paso 11. Limpiarnos las manos por última vez con etanol al 70% y continuamos con el retiro de las
muestras de la campana.

Paso 12. Rociamos cada uno de los materiales que utilizamos antes de sacarlos de la campana.

Paso 13. Limpiar el interior y el exterior de la campana con etanol al 70%.

Paso 14. Sellar las tapas de las muestras utilizando Parafilm para posteriormente colocarlos dentro
de la hielera de transporte la cual se rocía su interior con hipoclorito de sodio.

Paso 15. Luego de haber limpiado todo el material de inactivación con etanol al 70%, sigue el
retiro del equipo de protección.

Sección 2. Área de extracción de ARN

Área de trabajo

Materiales y equipos
En la tabla 2. Ingrese la lista de materiales, equipo de protección personal, materiales de limpieza y
para manejo de desechos que se requieren para la extracción de ARN de 4 muestras, de forma
que considere la cantidad de cada material.

Tabla 2. Lista de materiales requeridos para proceso de inactivación

Cantidad Equipo y materiales para proceso de inactivación

Cantidad Equipo de protección personal

 Cantidad Material de limpieza y para manejo de desechos

Procedimiento de extracción
Describa los pasos a seguir para realizar el proceso de extracción de ARN a partir de muestras de
hisopado orofaríngeo previamente inactivadas para el diagnóstico de SARS-CoV-2 por prueba de
RT-PCR. Recuerde incluir cuidados o Tips que considere necesarios para la seguridad del personal,
área de trabajo y manejo adecuado de la muestra.

Sección 3. Referencias