ANÁLISIS CLÍNICO II

GUÍA PRÁCTICA

Docente: Mg. T.M. Renee Orrego Cabanillas

Apellidos y nombres del estudiante :

PRACTICA N° 01 : BIOSEGURIDAD

1
CONCEPTO: La bioseguridad es el conjunto de medidas preventivas destinadas a mantener
la vigilancia para proteger la salud y seguridad del personal frente a riesgos laborales.
También es la decisión, responsabilidad, cuidado y dirección; así como también
participación consiente de todos los recursos humanos involucrados en cada etapa del
proceso.

OBJETIVO:

1. Adiestrar y capacitar al estudiante en las técnicas y precauciones que debe tener en el

laboratorio.
2. Que el alumno pueda preparar soluciones de antisépticos y desinfectantes

CONTENIDO:

1. Finalidad
2. Microorganismos infectantes por grupos de riesgo
3. Niveles de bioseguridad.
4. Reglas importantes para lograr la seguridad.
5. medidas en caso de accidentes
6. métodos de esterilización y desinfección.

REACTIVOS Y MATERIALES:
- Horno
- Fenol cristalizado
- Alcohol etílico
- Agua destilada
- Tubos de ensayo 13 x 100 mm
- Pipetas volumétricas 5 ml. 10 ml.
- Matraz de 250 ml
- Papel kraft
- Algodón

PROCEDIMIENTO:

A) Preparar Fenol al 5%. Llevar a baño maría el fenol cristalizado. Medir 5 ml del fenol
líquido llevar al matraz y completar con csp 100 ml.
B) Preparar: Alcohol al 70% De una concentración de 96° llevar a 70° con agua
destilada. Utilizar: Regla de 3 simple C1V1 = C2V2
C) Preparar: concentraciones de 10,000 ppm y 5,000 ppm de Hipoclorito de sodio.
Teniendo en cuenta en que ppm (partes por millón) equivale a mgr/l.
D) Esterilizar tubos de ensayo.
E) Preparar torundas: tomar un trozo de algodón de tamaño adecuado para adaptar al
diámetro del tubo, hacer un dobles en tres y dar vuelta sobre el dedo índice.

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F) Las torundas preparadas poner en borde libre del tubo de ensayo.
G) Envolverlos con papel kraft y asegurar con pabilo.
H) Llevar al horno a 160° por 30 min.
I) Colocar en canastillas para facilitar su esterilización.
J) Esterilizar pipetas volumétricas:
K) Colocar algodón moderadamente ajustados en las boquillas de las pipetas, colocar
oblicuamente la pipeta y con tira de papel kraft hacer un dobles sobre este,
cubriendo hasta la punta de la pipeta. Evitar zonas descubiertas.
L) Llevar al horno a 160° por 30 min.

TOMA DE MUESTRA DE SANGRE:

COMO PRESENTAR LA APARIENCIA PROFESIONAL FRENTE AL PACIENTE

 Primero, debe tener una actividad tranquila. Pensar: “he realizado esto muchas veces
y puedo realizarlo muchas veces más”.
 No demostrar apresuramiento.
 Considerar al paciente con la persona más importante en ese momento.
 Sonría al momento de presentarse al paciente.
 Cause buena impresión al mostrarse correctamente.

EN CUANTO A SU APARIENCIA PROFESIONAL

 Su apariencia debe mostrarlo todo un profesional.
 Debe lucir limpio y convenientemente uniformado.
 Su uniforme y zapatos deben lucir limpios, bien arreglados.

COMO APROXIMARSE AL PACIENTE

 Se deben hacer tres cosas.
 Primero identifique al paciente.
 Después gane la confianza del paciente y explíquele en pocas palabras lo que hará.
 Luego tranquilice al paciente y alivie cualquier aprehensión que pueda sentir.
 Nunca pregunte “COMO ESTA USTED” generalmente esta persona está enferma y muy
deprimida y si usted comienza de esta manera probablemente se tomara la siguiente
media hora lamentándose.

OBTENCIÓN DE LA MUESTRA RECIENTE

 Siempre pregunte al paciente ¿Cuál es su nombre? Nunca pregunte ¿es usted la Sra.
García? Los pacientes frecuentemente “SI” a cualquier pregunta cuando no están
seguros de los que se les pregunto.
 Si tiene pulsera de identificación verifique en ella su nombre.
 Si el paciente esta inconsciente y no tiene pulsera de identificación, acérquese a la
estación de enfermeras para que esta lo identifique.

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 Nunca use las tarjetas de identificación de las camas o cunas porque estas
frecuentemente están erradas.
 Si el paciente pregunta ¿esto no dolerá? Nunca le digas que “NO”.
 Conteste “PUEDE DOLERLE UN POQUITO” pero será cuestión de un minuto.
 Cuando termine puede decirle al paciente “Ya ve no fue muy doloroso, muchas
gracias”.
Es absolutamente necesario que se tome la muestra de sangre del paciente correcto.

LA BANDEJA DE TOMA DE MUESTRAS

 La bandeja debe permanecer siempre limpia
 Debe verificarse frecuentemente que tiene todo lo necesario.
 Lo que debe contener toda bandeja de toma de muestra incluye: Porciones de algodón
o pedazos de gasa estéril
 Agujas descartables 20xl"
 Tubos o viales con EDTA o tubos morados
 Tubos sin anticoagulante o tubos rojos
 Tubos con citrato de sodio o tubos celestes
 Plumón o lapicero
 Esparadrapo
 Laminas portaobjeto
 Tubos capilares Heparinizados o capilares rojos
 Tubos capilares sin heparina o capilares azules
 Lancetas
 Alcohol at 70°
 Plastilina
 Etiquetas

TOMA DE MUESTRA VENOSA O VENIPUNCION

Por regla general las venas son la mejor fuente para obtener sangre. Puede ser necesario
usar las venas del Píe, cuando las venas de los brazos están muy maltratados o han sido
pinchadas repetidamente y están muy adoloridas Las venas de elección son las del dorso
de brazo, especialmente la vena cefálica y la vena mediana cefálica.

COMO REALIZAR LA VENIPUNCION:

 Primero, inspecciono el área que, ha escogido. asegurase que sea una vena
 Coloque el torniquete a la mitad de la distancia entre el codo y hombro.
 Pida al paciente que abre y cierre el puño.
 Limpie el área de la venipunción con un pedazo de algodón con alcohol.
 Introducir la aguja con el bisel hacia arriba.
 La vena debe ser fijada durante la venipunción.
 Para llevar a cabo esto ponga su dedo pulgas izquierdo a unos 2 centímetros por
debajo de donde va introducido la aguja.

4
 La aguja debe estar alineada con la vena.
 La aguja debe tener un ángulo de 15° con la piel.
 Cuando introduzca la aguja haga que su dedo índice permanezca a lo largo de la base
de aguja y en contacto con el brazo, así el paciente se moviera su dedo y la aguja
también se moverán con él.
 Tan pronto comience a fluir la sangre retire el torniquete.
 Inmediatamente después de recolectar la muestra escribir el nombre del paciente.

CUESTIONARIO

1. Defina asepsia, desinfección y esterilización.

2. Que es Bioseguridad defina
3. Dibuje los materiales que debe contener la bandeja de toma de muestra

Link Fortalecer los conocimientos de las normas en Bioseguridad

https://www.youtube.com/watch?v=xDYoA-NSoBU

PRACTICA No 02 UROCULTIVO

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PRINCIPIO:
El urocultivo, es la Investigación de gérmenes en la orina para determinarla presencia
de infecciones urinarias.
La orina excretada por el riñón es estéril a menos que el riñón se encuentre infectado.
La orina de la vejiga también es estéril, solo la uretra contiene flora microbiana normal
que contamina la orina a su paso es por ello que la orina miccionada contiene un
pequeño número de gérmenes.

TOMA DE MUESTRA DE ORINA:

Los cuidados en la toma de muestra, conservación y transporte de la misma son muy

importantes en este estudio. Debiendo tener en cuento
 Recolección de muestra
 Punción suprapubica

MATERIALES Y EQUIPOS:

 Horno
 Autoclave
 Microscopio
 Mechero
 Placas petri
 Tubos de ensayo
 Asa calibrada
 Agar Mack conkey o agar EMB
 Agar Manitol salado
 Medio de TSI, LIA, Citrato de simmons
 Reactivo de Kovacks
 Papel Kraft
 Discos de sensibilidad.

PROCEDIMIENTO
 Con el asa calibrada flameada coger la muestra de orina y sembrar en los medios
de Agar Mack conkey y Agar manitos salado llevar a incubar a 37° grados por 24
horas.
 Llevar unas gotas de orina a una lámina portaobjeto y cubrir con una lámina
cubreobjetos para el examen directo y observar al microscopio.
 Pasadas las 24 horas examinarlo sembrado si no hay crecimiento es un cultivo
negativo pero si hubo crecimiento lo primero es:
 Realizar el recuento de colonias
 Resembrar en los medios diferenciales y paralelamente realizar el antibiograma

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CUESTIONARIO:

1.- esquematiza el examen del urocultivo

Link para que los estudiantes adquieran mayor destreza en su aprendizaje

https://www.youtube.com/watch?v=GHMciZt1dIQ

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 PRACTICA 03 ANTIBIOGRAMA

INTRODUCCIÓN

Se entiende por antibiograma el estudio de la sensibilidad "in vitro" de las bacterias

a los antibióticos, aunque se extiende a algunos quimioterápeuticos. El antibiograma es un
método de diagnóstico rápido y preciso, ya que no se puede predecir la susceptibilidad de
las bacterias, hongos y virus a los agentes antimicrobianos, con frecuencia es necesario
estudiar la sensibilidad individual de cada patógeno a estas drogas, pudiéndose elegir
entonces el agente apropiado que provee mayores posibilidades de una evolución
favorable.

OBJETIVOS

Que el alumno conozca el efecto que tienen las bacterias ante los antibióticos.

Material de laboratorio por equipo Material del Equipo

Pinzas

Círculos de papel filtro estéril

Discos de sensibilidad de antibióticos

Cultivo bacteriológico Marcador indeleble o lápiz graso

Espátula de vidrio Hisopos estériles

Placas con agar Muller hinton

PROCEDIMIENTO

Método de la difusión en medio sólido Se siembra el microorganismo a estudiar

esparciéndolo por toda la caja de Petri. Las pinzas de disección se colocan en un vaso
precipitado con alcohol al 96%. Se toman las pinzas de disección se pasan por la llama del
mechero y se toma un disco de papel filtro estéril y sobre la superficie del medio se coloca
el disco (observar figura)

Se repite los paso 2,3 y 4 por cada disco Se le agrega a cada disco 5 l de un determinado
antibiótico o quimioterápeutico. Para que la concentración de antibiótico que impregna
los discos no sea ni excesiva ni insuficiente, realizar un banco de diluciones. La
concentración de 100 g/ml ya es adecuada para trabajar. Incubar a 37C por 24 hrs.

8
 C
Cl

Rf

St

T
E

Paso 4. Se muestra la forma como se colocan los discos en la superficie del medio de
cultivo. Ceftriaxona, amikacina, Ciprofloxacino, Norfloxacina, Gentamicina, Acido
nalidixico, Amoxicilina ac. clavulamico

Resultados

Reportar los resultados del antibiograma.

Recopilar sus resultados en el cuadro incluyendo el diámetro del halo de inhibición.

Discutir en cada caso cuáles fueron el rango de sensibilidad del microorganismo ante las
diferentes drogas. (resistente, intermedia y sensible) de acuerdo a el diámetro del halo de
inhibición.

Discutir en cada caso el rango de acción de las drogas con los diferentes microorganismos.
(de amplio espectro, de bajo espectro)

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 Bacteria 1 Bacteria 2 Bacteria 3

Esquema

Diámetro del halo

para:

Ciprofloxacina

Norfloxacina

Amikacina

Ceftriaxona

Ac. nalidixico

Gentamicina

Amoxicilina ac.
Clavulamico

cuestionario

1. dibuja la bacteria señalando sus partes y funciones de cada una de ellas

Link para dar mayor alcance a los estudiantes acerca del antibiograma
https://www.youtube.com/watch?v=PVQL9eAKK_g

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 PRÁCTICA N0 04 TINCION DE EXTENSIONES DE SANGRE RECUENTO DE PLAQUETAS:

PRINCIPIOS GENERALES
 Las extensiones de sangre se colorean con las tinciones de Romanosky.
 Entre las tinciones más usadas tenemos: Tinción de Wright
 Tinción de Giemsa Tinción de Leishman

MUESTRA:
Sangre venosa

MATERIALES
 Colorante de Wrigth
 Solución amortiguadora tamponada
 Materiales de toma de muestra de sangre venosa- frasco con EDTA o tubos
morados
 Alcohol
 Algodón
 Lanceta estéril
 Portaobjetos de vidrio limpio y desgrasados
 lamina extensora
 Aguja Nº 20 x 1
 Microscopio
 Aceite de inmersión.

PROCEDIMIENTO
1. Cubrir la extensión de sangre con el colorante Wright
2. Dejar actuar en reposo durante 1 - 2 minutos
3. Agregar sobre el colorante la misma cantidad de solución amortiguadora y mezclar
rápidamente que puede ser hecho soplando suavemente
4. Dejar reposar la mezcla por 10 minutos
5. Lavar con agua corriente
6. Dejar caer el chorro de agua en forma suave empezando por el borde de la
lámina inclinada
7. Dejar secar a temperatura ambiente
8. Observar en el microscopio con el objetivo de menor aumento (40x) y luego con
el objetivo de inmersión (100x)

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RESULTADOS

Cuando el método ha sido aplicado correctamente, se obtiene resultados

similares.
Recuento de plaquetas: Las plaquetas son fragmentos de células de 2 a 4 micras de
diámetro, son de color azul con gránulos púrpura centrales. El recuento de plaquetas
se basa en la observación en un frotis de sangre y el conteo de las plaquetas en 20
campos del mismo, en una zona donde los glóbulos apenas se toquen entre sí y en
número sean más o menos cien. Se hace la sumatoria de las plaquetas contadas en los
20 campos y se realiza el promedio y este resultado se multiplica por 22.000. El
resultado se informa como número de plaquetas.

CUESTIONARIO

1.- Realiza un cuadro determinando las características de los diferentes glóbulos

blancos.

Link para el recuento de plaquetas

https://www.youtube.com/watch?v=VzwCa8snv48

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 PRACTICA N 05 RECUENTO DE RETICULOCITOS

Un Reticulocito es un eritrocito que se halla circulando en sangre periférica en estado

inmaduro o sea que aún posee restos de cromatina nuclear.

Fundamentos de Método
Esta técnica de coloración se basa en la precipitación de dichos restos de ácidos nucleicos
por medio del Azul brillante de cresilo, formando una red granulada dentro del eritrocito,
sin destruirlo.

Reactivos:

Azul brillante de cresilo.

Muestra:
Sangre Venosa

MATERIALES
 Alcohol
 Algodón
 Portaobjetos de vidrio limpio y desgrasados
 lamina extensora
 tubos 12 X 75
 Aguja Nº 20 x 1
 Punteras amarillas
 Pipeta automática 100 ul
 Microscopio
 Aceite de inmersión
 Gradillas de tubos
 Guantes
 Mascarillas

Procedimiento:
Usando una pipeta para glóbulos rojos tome sangre capilar o venosa hasta la marca 0.5 y
luego a 1.0 con el colorante. Lleve la mezcla a incubar por 10 minutos en baño maría
Pasado el tiempo y descartando la primeras gotas, coloque una gota de la mezcla en una
lámina portaobjetos limpia y efectúe un extendido de la manera usual.
Deje secar y examine directamente al microscopio usando aceite de inmersión y objetivo
100x

Calculo % Reticulocitos = No de reticulocitos x 100

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 -----------------------------------
1000

Interpretación: Mediante este método normalmente se encuentran valores comprendidos

entre 0.5 y 1.5 % en adultos. En recién nacidos entre 3 y 6 %

Notas

Una buena coloración depende del extendido, este no debe ser muy grueso y se debe
evitar la formación de grumos y estrías.
Usar placas preferiblemente nuevas, sin ralladuras y libres de grasa.

CUESTIONARIO

1.- que es un Reticulocito?

2.- Esquematiza la práctica del reticulocito?

Link para el recuento de Reticulocitos

https://www.youtube.com/watch?v=pzuF38rFULU

PRACTICA N 06 RECUENTO DE HEMATOCRITO

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PRINCIPIOS GENERALES:
Se llama hematocrito al volumen total que ocupa los eritrocitos, dividido entre el
volumen de sangre.
Se tiene el método de micro escala, la sangre se deposita en un tubo capilar y se
centrifuga empleando una "centrifuga para hematocrito". Luego se mide el nivel de la
columna de eritrocitos por medio de una escala especial.

MATERIALES:
 Una centrifuga para microhematocrio.
 Una escala para medirlos resultados.
 Tubos capilares con heparina. Si la sangre venosa esta mezclada con EDTA no será
necesario que los tubos contengan heparina.
 Viales con EDTA. O tubos morados
 Lancetas
 Plastilina.

MUESTRA:
 Sangre capilar o sangre venosa

PROCEDIMIENTOS:
Tomarla sangre en los capilares
 Taponar el extremo contrario del tubo, que no ha estado en contacto con la sangre,
con cera o plastilina.
 Colocar los tubos en las ranuras del cabezal de la centrífuga.
 Centrifugara 1 4 , 0 0 0 rpm por 5 minutos.
 Realizarlas lecturas con la tabla de escalas.

INTERPRETACIÓN:
Hombres.................... 42-50%
Mujeres .......................... 37-42%
Recién nacidos .................. 49-56%

CUESTIONARIO:

1. A que se denomina poliglobulia y policitemia.

2. Qué relación existe entre hematocrito y hemoglobina
3. esquematiza la practica

Link para el recuento de hematocrito

https://www.youtube.com/watch?v=JdEWSiPJ6Hg
PRACTICA NO 07 VELOCIDAD DE SEDIMENTACIÓN

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PRINCIPIOS GENERALES:
La prueba de velocidad de sedimentación de los eritrocitos (VSE) se basa en el
principio que en la sangre con anticoagulante, los eritrocitos (glóbulos rojos)
sedimentan hasta formar una columna compacta en la parte inferior del tubo o
recipiente que se mantiene en posición vertical.
 La velocidad de este proceso depende varios factores, siendo los principales.
 La concentración del fibrinogeno en el plasma.
 La concentración de la globulina alfa y beta en el plasma.
 La diferencia entre la densidad del plasma y la masa de glóbulos.
 La medición de velocidad de sedimentación deberá efectuar en menos de 2 horas
después de que se haya obtenido la muestra de sangre.

MATERIALES:
 Materiales para toma de muestra de sangre venosa.
 Viales con EDTA o tubos morados
 Capilares azules
 Un cronometro o reloj

PROCEDIMIENTO:
 Realizar la toma de muestra y recogerla sangre en los viales con anticoagulante.
 Mezclar bien por inversión suave.
 Cargar la sangre en los tubos capilares azules.
 Evitar la formación de burbujas en el interior del capilar
 Colocar el capilar en posición completamente vertical.
 Esperar durante una hora exacta usar cronometro Reloj a continuación medirla
altura de la columna del plasma según a graduación en milímetros (mm) del capilar
a partir del extremo superior.

VALORES NORMALES:
Hombres .......... 0 - 8 mm/hora.
Mujeres ............ 0 - 18 mm/hora
Niños ............ 1 - 18 mm/hora.

CUESTIONARIO:

1. Cuales la utilidad de la velocidad de sedimentación.

2. Qué relación existe entre la prueba de velocidad de sedimentación globular y la

proteína C Reactiva.

Link para el proceso de la velocidad de sedimentación

https://www.youtube.com/watch?v=wM-pf1pKHh4
PRACTICA N°08 TIEMPO DE COAGULACIÓN TIEMPO DE SANGRÍA

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TIEMPO DE COAGULACIÓN
MÉTODO DE LEE Y WHITE

PRINCIPIOS GENERALES
 Este examen es útil para evaluar la eficacia del mecanismo de coagulación
 Es una prueba que debe realizarse a todo paciente que va a cirugía

FUNDAMENTO:
 Es una prueba que se debe realizar con sangre sin anticoagulante. Mide el
mecanismo intrínseco de la coagulación por activación de la sangre por el
contacto con las cargas negativas del vidrio. El tiempo que tarda en producirse la
coagulación depende de los factores que participan en la vía intrínseca.

MATERIALES:
 2 tubos de ensayo 75 x 10 mm, marcados para el nivel de 1 ml.
 1 cronometro
 1 baño maría a 37 grados
 Material para la toma de muestra de sangre venosa tubos sin aditivos

PROCEDIMIENTO:
 Obtener sangre venosa por punción.
 Poner a funcionar el cronometro tan pronto como la sangre empiece a entrar en
la jeringa. Extraer 2.5 ml
 Llenar con esta sangre cada uno de los dos tubos de ensayo hasta la marca de 1
ml.
 Colocar los tubos en baño maría a 37 grados
 Después de 3 minutos sacar el primer tubo del baño mana inclinar el tubo hasta
un plano de 45 grados para observar si la sangre se ha coagulado. Repetir el
mismo procedimiento para el segundo tubo.
 Si la sangre no ha coagulado. Colocarlos tubos otra vez en baño marca y
examinarlos cada 30 segundos hasta que se observe la formación del coagulo. La
formación del coagulo corresponde al momento en que resulta posible invertir
cada tubo sin que se derramen su contenido.

RESULTADO:
 El resultado definitivo del tiempo de coagulación ese promedio de los dos
resultados.

VALORES NORMALES
5 - 10 minutos
CUESTIONARIO:
1. Que factores de coagulación intervienen en la vía intrínseca.
2. Esquematice la cascada de la coagulación.

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 PRACTICA N0 09 TIEMPO DE SANGRÍA
FUNDAMENTO:

Es tiempo que transcurre para que se detenga el sangrado cuando se realiza un

pequeño corte el lóbulo de la oreja.
El corte no debe ser hecho sobre venas visibles, ni en lesiones de la piel.

MATERIALES:
 Una lanceta estéril
 Alcohol a 70 grados
 Papel filtro o papel secante
 Torunda de algodón
 Un reloj con segundero o un cronometro.

PROCEDIMIENTO:
1. Limpiar con suavidad el lóbulo de la oreja utilizando una pieza de algodón con
alcohol de 70 grados no frotar. Dejar secar.
2. Hacer un pequeño corte de 3 mm de profundidad con la lanceta, en el borde
inferior del lóbulo de la oreja a la vez poner a funcionar su reloj con segundero o
cronometro.
3. Dejar que la sangre salga libremente. No exprimir el lóbulo de la oreja
4. Recogerla primera gota en una esquina del papel del filtro o papel secante no
tocar la piel con el papel.
5. Esperar 30 segundos y recoger la segunda gota de sangre en el papel secante
pero un poco más delante de la primera gota.
6. Recogerlas siguientes gotas de sangre una cada 30 segundos las gotas serán cada
vez más pequeñas. Cuando las gotas dejen de salir y el papel secante ya no
absorba sangre Detener el funcionamiento del reloj o del cronometro.
7. Anotar el tiempo transcurrido, según el reloj o el cronometro.

VALORES NORMALES:
1 a 5 minutos.

CUESTIONARIO:
1. En qué casos se encuentra alargado el tiempo de sangría.

2. Que es la enfermedad de Von Willebrand.

Link para ayudar a los estudiantes a comprender el proceso del test de coagulación y
sangría
https://www.youtube.com/watch?v=aFijNjTslK4&t=30s
PRACTICA No 10 SISTEMA ABO Y FACTOR RH

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En el año 1900 Landsteiner descubrió que los glóbulos rojos humanos podrían ser
clasificados en A, B AB u O de acuerdo a la presencia (grupos A, B o AB o ausencia
(grupo O) de antigenos altamente reactivos en su superficie. También demostró que
existe anticuerpos (aglutininas) para los antígenos A y B y que el suero de un individuo
no contiene anticuerpos para el antígeno presente en sus propios glóbulos rojos pero
si contra los que no posee.

MUESTRA:

Sangre con anticoagulante

MATERIALES Y REACTIVOS
Materiales para toma demuestra venosa
Lamina serológica
Antisueros sanguíneos A, B anti D
Gradillas de tubos

PROCEDIMIENTO:

En una lámina serológica ponga 2 gotas de sangre

Añada una gota de antisuero A y Antisuero B 1 en cada gota de sangre Mezcle
Rote por 2 minutos Leer por aglutinación

PREGUNTAS
1. Defina que es aglutinógeno
2. Defina que es una aglutinina
3. Cuantos grupos sanguíneos posee el humano, mencione los principales
4. Explique como sucede la incompatibilidad RH (madre - hijo )

Link para el proceso del grupo sanguíneo

https://www.youtube.com/watch?v=zf1DZyEdQeE

PRACTICA No 11 TINCION DE EXTENSIONES DE SANGRE

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PRINCIPIOS GENERALES
 Las extensiones de sangre se colorean con las tinciones de Romanosky.
 Entre las tinciones más usadas tenemos: Tinción de Wright
 Tinción de Giemsa Tinción de Leishman

MATERIALES
 Colorante de Wrigth
 Solución amortiguadora tamponada
 Materiales de toma de muestra de sangre venosa- frasco con EDTA o tubos
morados

PROCEDIMIENTO
9. Cubrir la extensión de sangre con el colorante Wright
10. Dejar actuar en reposo durante 1 - 2 minutos
11. Agregar sobre el colorante la misma cantidad de solución amortiguadora y mezclar
rápidamente que puede ser hecho soplando suavemente
12. Dejar reposar la mezcla por 10 minutos
13. Lavar con agua corriente
14. Dejar caer el chorro de agua en forma suave empezando por el borde de la
lámina inclinada
15. Dejar secar a temperatura ambiente
16. Observar en el microscopio con el objetivo de menor aumento (40x) y luego con
el objetivo de inmersión (1 00x)

RESULTADOS
Cuando el método ha sido aplicado correctamente, se obtiene resultados similares.
 Los eritrocitos se observan de color naranja.
 Los núcleos se observan de color púrpura.
 Los gránulos basofilos de color púrpura azulado.
 Los gránulos neutrofilos de color rojo lila
 Los gránulos eosinofilos de color rojo naranja

CUESTIONARIO
1.- Dibuje las morfologías de tos diferentes elementos formes de la sangre.

Link para el proceso de la tinción de sangre

https://www.youtube.com/watch?v=ksAplYiF3Io&t=94s

PRACTICA No 12 TEST DE GLUCOSA

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FUNDAMENTO:
Puede dividirse en dos grupos químicos y enzimáticos. La mayoría de las determinaciones
químicas de la glucosa se basan en sus propiedades reductoras, y debido a la ausencia de
especialidad no son demasiado utilizadas. Los métodos enzimáticos proporcionan una
especificidad máxima en cuanto a las estimaciones de glucosa. Esta puede medirse por su
reacción con la glucosa oxidasa en la que se produce ácido gluconico y peroxido de hidrógeno
(H202 ). El peroxido de Hidrógeno reacciona con un aceptor de oxígeno del tipo de la
ortodianisidina. La fenilamina- fe nazona (reactiva de trinder) u otros aceptores cromogenicos
en una reacción catalizada por la peroxidasa para dar color.

Objetivos:

 Conocer la técnica mediante la cual se determina la glucosa en sangre

 Diferenciar pacientes con hipo e hiperglicemia

REACTIVOS Y MATERIALES:
 Material de toma de muestra.
 Reactiva de glucosa.
 Estándar de glucosa.
 Pipeta automática de 10 ul
 Punteras amarillas
 Pipeta automática de 1000 ul.
 Tubos de ensayo 75 x 100 mm
 Gradillas
 Baño Maria
 Cronometro
 Centrífuga
 Espectrofotómetro
 Cubetas para espectrofotómetro

PROCEDIMIENTOS
ESTANDAR BLANCO MUESTRA
ESTANDAR ST B M
AGUA 10ul - -
DESTILADA - 10 ul -
MUESTRA - - 10 ul
REACTIVO 1 ml 1 ml 1 ml

Incubar a 37 grados por 10 minutos Leer en el espectrofotómetro a 505 nm.

RESULTADOS:
Concentración del ST
CALCULO FACTOR = ----------------------------

21
 Absorbancia del ST
CUESTIONARIO:

1. Que es la prueba de glucosa post-prandial y en qué consiste.

2.- dibuja la practica

Link para el proceso de la glucosa en sangre

https://www.youtube.com/watch?v=0NqqS67uIMw&t=141s

PRACTICA N0 13 DETERMINACIÓN DE UREA (MÉTODO ENZIMÁTICO-COLORIMÉTRICO)

22
Fundamento teórico:
La urea es el principal compuesto nitrogenado no proteico más imporatnte en la mayoría
de los líquidos biológicos. En el hombre es el principal producto final del metabolismo
proteíco. Se produce en el hígado y es excretada en la orina a través de los riñones.

Una elevación de la concentración sérica de urea, se interpreta generalmente como una

posible disfunción renal. Sin embargo, no debe dejarse de lado el hecho de que los valores
séricos de urea se encuentran íntimamente relacionados con la dieta y el metabolismo
proteico, por lo que cualquier alteración en estas variables se traducirá en un cambio de la
concentración de urea en suero.

Fundamento del método:

La urea se hidroliza por acción de la ureasa en presencia de agua para producir amoníaco
y dióxido de carbono. En una reacción de berthelot modificada los iones amonio
reaccionan con hipoclorito y salicilato produciendo un complejo verde llamado indofenol
que se determina colorimétricamente.
ureasa
NH2 – CO – NH2 + H2O (NH4+)2 + CO2
Nitroprusiato (no es enzima)
+
(NH4 )+salicilato+ClONa+ 2-oxoglutarato Indofenol (verde)

Parte experimental:
Procedimiento (en suero o plasma):
En cuatro tubos de ensayo marcados como B (blanco), S (Standard), M1 (muestra 1) y M2
(muestra 2) agregar:

B S M1 M2
Standard - 10 ul
Suero o plasma - - 10 ul 10 ul
Reactivo 1 1000 ul 1000 ul 1000 ul 1000 ul
Enzima ureasa 5 ul 5 ul 5 ul 5 ul
Mezclar por agitación suave e incubar 10 minutos a 20-25º C o por 3 minutos a 37ºC
Reactivo 2 1000 ul 1000 ul 1000 ul 1000 ul
Mezclar por agitación suave e incubar 10 minutos a 20-25º C o por 5 minutos a 37ºC.
Leer la absorbancia de la muestra (∆A muestra) y del estándar (∆A Estándar) en
espectrofotómetro a Hg 578 nm frente a un blanco reactivo antes de 60 minutos

Cálculos de concentración de urea:

C (mg/dl)= ∆A_muestra x 80
∆A estandar

Valores de referencia en suero: 10 – 50 mg/dl

Parámetros a considerar:
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- El espectrofotómetro debe estar encendido 20 minutos antes de realizar las lecturas de
las muestras

Materiales y reactivos:
Materiales:
-Gradilla
-Cuatro tubos de ensayo
-Espectrofotómetro
-Pipetas automáticas
-Puntas de plástico para pipeta automática
-Cubetas de plástico para espectrofotómetro
-Reloj

Reactivos:
-Reactivo 1: Buffer fosfatos (pH 7.0), Salicilato de sodio, Nitroprusiato de sodio,
EDTA
-Reactivo 2: Buffer fosfato (pH≤ 13), hipoclorito
-Standard: solución de urea 80 mg/dl
-Ureasa (enzima): Solución estabilizada y tamponada de alta potencia
-Suero sanguíneo

TRABAJO EN CLASE:
Realizar el análisis de urea en un suero sanguíneo y luego reportar los cálculos en la
carpeta con la respectiva interpretación del resultado

Link para realizar la urea

https://www.youtube.com/watch?v=XLPjkBsG9QE

PRACTICA N0 14 PROTEINAS EN ORINA DE 24 HORAS

OBJETIVO

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Determinar si es mayor o menor de 3 gr % para diferenciar entre exudado y
trasudado

MATERIALES Y EQUIPOS
Espectrofotómetro
Timer
Cubetas
Pipetas automáticas de 1000 y 100 ul
Gradillas
Tubos 13 x 100
Punteras amarillas, azules
Guantes
Mascarilla

PROCEDIMIENTO

Muestra BLANCO
orina u otros líquidos 1 ml ----------
Solución salina ----- 1 ml
Reactivo sulfosalicilico 3 5 ml 5 ml
%

Leer a los 5 minutos a 420 nm multiplicar por el factor y por la dilución

LCR reportar en mg % en otros líquidos transformar en gramos %

Valores normales en LCR 10 -40 mg %

VALORACION
Mayor de 3 gr% exudado
Menor de 3 gr % trasudado

CUESTIONARIO

1.- Explique cuando es un exudado y cuando es un trasudado

2.- explique paso a paso el procedimiento de los líquidos corporales

Link para la determinación de proteínas en orina de 24 horas

https://www.youtube.com/watch?v=rJWZeHGV9Ig

PRACTICA No 15 TINCION DE ZIEHL NEELSEN

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OBJETIVO
Identificar los bacilos alcohol acido resistente
MUESTRA
Esputo
MATERIALES Y EQUIPOS
Microscopio
Laminas porta objeto
Mechero BUNSEN
Asa bacteriológica

REACTIVOS
Batería de coloración de Ziehl Neelsen (fucsina fenicada, alcohol acido, azul de metileno)

PROCEDIMIENTO

1. Se efectúa un extendido delgado del material a teñir, sobre un portaobjetos NUEVO,

se deja secar al aire y se fija a la flama.
2. Se coloca sobre un puente, se cubre con solución de fucsina fenicada y se calienta
suavemente hasta emisión de vapores dejando actuar por 5 minutos calentando varias
veces, reponiendo el colorante que se pierda por evaporación.
3. Se lava con agua, se decolora con alcohol acido hasta que el extendido tome un color
rosa pálido, se neutraliza con agua de la llave.
4. Se cubre con azul de metileno por 1 minuto, se escurre, se lava con agua, se deja secar
y se observa en inmersión.

Link para el proceso de la coloración de Ziehl-Neelsen

https://www.youtube.com/watch?v=HANr6xMdqjA&t=3s

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