Espectrofotometría

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Métodos visuales (colorimetría visual): detección ocular

Los métodos visuales se utilizan únicamente para medir las soluciones
coloreadas.
A) Método de la serie estándar:
La solución problema contenida en un tubo de ensayo se empareja
con una serie de patrones preparados de forma similar. La
concentración de la solución desconocida es igual a la de la solución
patrón cuyo color coincide exactamente con ella.
Ejemplo1: La determinación del cobre con amoníaco mediante la
formación de un color azul.
Ejemplo 2: Determinación de hierro (III) con anión tiocianato por
formando color rojo sangre.

Para evitar el efecto de longitud de

trayectoria, utilice un conjunto de cilindros
Nessler emparejados.
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Métodos instrumentales
Espectrofotómetros y colorímetros:
Un espectrofotómetro tiene una gama de longitudes de onda mucho más amplia
que un colorímetro, con un rango de 200 nm en la región UV a 1000 nm en la
región IR.
Partes esenciales del espectrofotómetro:
Todos los instrumentos espectroscópicos funcionan según el mismo principio y se
componen de
cinco componentes básicos:
1) Una fuente luminosa estable de energía radiante
2) Se utiliza un monocromador (selector de longitud de onda) para cambiar la luz
policromática en luz monocromática (es decir, dividir la luz en las diferentes
longitudes de onda y aislar las longitudes de onda de interés).
3) Un compartimento para muestras contiene la muestra.
4) Se necesita un detector para medir la luz que atraviesa la muestra y
convierte la energía radiante en una señal medible
5) Un medidor de lectura de señales (registrador) (dispositivo de lectura
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convierte la señal en una forma legible.
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1- Fuente de luz:
La fuente de luz proporciona la luz que atraviesa la solución de muestra.
La fuente luminosa debe emitir una radiación muy intensa, continua,
constante y uniforme que cubra la gama requerida.
a- Para mediciones UV: Lámpara de descarga de hidrógeno o deuterio
(dan radiaciones de 190 - 375 nm).
b- Para mediciones visibles: Se utiliza lámpara de tungsteno (da
radiaciones de 350 - 1000 nm).
b

Li g ht Wavelength Io E
Li g ht Result
S a m pl e n ados
sobre s el e c t o r d e s a rro di s pl a y
llo

. ,
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-Un ancho de banda más estrecho tiende a aumentar la sensibilidad y la
selectividad de las medidas de absorbancia y a proporcionar una relación más lineal
entre la señal óptica y la concentración de la sustancia que debe determinarse.
Se utilizan dos tipos de selectores de longitud de onda, los filtros y los
monocromadores.
a) Filtros: Para la selección de la longitud de onda se utilizan filtros de absorción y
de interferencia: Absorción de absorción; normalmente función a
través de selectiva absorción de longitudes de onda no deseadas y la
transmisión del color complementario.
Filtros de interferencia; Como su nombre indica, un filtro de interferencia se basa
en la óptica.
interferencia para proporcionar una banda relativamente estrecha de radiación.
b) Monocromadores:
i- Una rendija de entrada: permite que la luz de la fuente incida en el elemento
dispersor.
ii- un elemento dispersor: Divide la luz blanca en las longitudes de onda que la
componen (colores). Para ello se suele utilizar un prisma o una rejilla.
iii- Una rendija de salida: La rendija de salida pasa sólo una banda estrecha de las
longitudes de onda al compartimento de la muestra.
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Prisma Los prismas actúan por refracción de la luz
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Rejilla: Consiste en un gran número de ranuras paralelas regladas muy próximas
entre sí sobre una superficie muy pulida.
• Funcionan por refracción de la luz

3- El compartimento de la muestra (cubeta o célula)

Las cubetas se utilizan para contener muestras líquidas.
Existe una gran variedad de cubetas de diferentes formas y tamaños, como
cubetas cuadradas o tubos de ensayo.
El primer requisito de una cubeta es que sea capaz de transmitir la longitud de
onda.
• vidrio o sílice sólo se utiliza en la región visible y las muestras coloreadas
• se requiere cuarzo en la región ultravioleta y muestras transparentes
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4) ht Detectores:
Los detectores fotoeléctricos son los más utilizados para este fin. Deben emitir una
señal eléctrica (medida por un galvanómetro) , que es directamente proporcional a
la intensidad de la luz transmitida. Aquí se describen dos tipos de detectores:
a) Fotocélulas
b) Fototubos (tubos fotomultiplicadores y fotoemisores)
Dar mayor sensibilidad.
Se utiliza cuando la señal luminosa es muy débil.

5) ecorder (metro):
La señal eléctrica producida en el detector se alimenta a un galvanómetro
sensible, unido a una escala de tipo medidor (analógico) o medidor de lectura
digital diseñado para dar unidades de porcentaje de absorbancia o transmitancia.
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Tipos de espectrofotómetros:
1- Haz simple2- Haz doble
1-Espectrofotómetro monohaz
Espectrofotómetros monohaz (colorímetro o fotómetro de filtro) Toda la luz de los
monocromadores pasa a la muestra y luego al detector.
Ventajas: Relativamente barato y sencillo.
Desventaja: El punto de referencia (blanco) tiene que reajustarse con frecuencia
cuando
medir una serie de muestras a lo largo de un periodo de tiempo.
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2- Espectrofotómetro de doble haz:
Un divisor de haz divide la luz en dos trayectorias de igual intensidad. Una
trayectoria se dirige a través del compartimento de referencia y la otra a través
del compartimento de muestra.
• Ambos haces se dirigen al mismo detector o cada uno tiene su propio detector.
• La señal de absorción de la célula de referencia se sustrae automáticamente
de la célula de muestra, obteniéndose una señal neta correspondiente a la
absorción de los componentes de la solución de muestra.
Ventajas:
1- Estabilidad de las lecturas a lo largo del tiempo.
2- Capacidad para corregir simultáneamente
cualquier efecto de los disolventes.
3- Compensar cualquier fluctuación o
irregularidad en la fuente, el detector o la
electrónica.
Desventajas:
El gasto y la menor sensibilidad para medir
muestras muy absorbentes (en comparación
con los haces simples).
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Desviación de la ley de
Beer
1- Desviación real: debido a la elevada conc.
La ley de Beer es aplicable a soluciones diluidas dentro de ciertos límites de concentración
por encima de los cuales se produce una desviación. A mayor concentración, puede
producirse interacción y asociación molecular, lo que altera la capacidad de las especies para
absorber a una longitud de onda definida.
2- Desviación instrumental:
a) Desviación irregular debida a: Células no coincidentes, manipulación no limpia y óptica no
limpia.
b) Desviación regular debida a:
- Control de la anchura de la rendija: si la rendija se abre mucho, la longitud de onda que
pasa es inespecífica.
- La luz parásita es cualquier radiación de longitud de onda distinta de las que se
absorben. También incluye cualquier luz que llegue al detector sin atravesar la muestra.
3- Desviaciones químicas:
a- Efectos del pH
b- Interacciones con disolventes
c- Efectos de la temperatura
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d- Factor tiempo de las soluciones coloreadas (el color puede desvanecerse con el tiempo
debido al deterioro del
tinte orgánico por oxidación, reducción, hidrólisis y otras reacciones).
e- Fotoefecto, algunas sustancias como la vitamina K sufren degradación cuando se exponen
a la luz. Por lo tanto, debe protegerse de la luz, ya sea en forma sólida o como solución.
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Aplicaciones de la espectrofotometría UV-VIS
I- Análisis cualitativo:
Se utiliza para la identificación de nuevos fármacos y productos naturales. UV-
Visible
El espectro proporciona información útil sobre la sustancia mediante el examen de
max
II- Análisis cuantitativo:
A- Análisis cuantitativo de un solo componente:
1- La sustancia a analizar se disuelve en un disolvente adecuado, como metanol,
agua o éter. El disolvente se utiliza como blanco.
2- Las lecturas de absorbancia se toman en el intervalo esperado (200-400 nm
para la muestra incolora o 400-800 nm para la muestra coloreada).
3- Se elige la direcciónmax de la sustancia que se va a analizar.
5- Construir la curva de calibración en la característicamax .
La curva debe ser una línea recta que pase por el origen, su pendiente es a
(absortividad).