Nutrición y Crecimiento

bacteriano

M.Cs. Mercedes Iriarte P.

2022
 Requerimiento y toma de nutrientes por Difusión,
transporte y traslocación

• El 95% de la célula en peso seco esta formado

de elementos mayores: 1. macronutrientes o
macroelementos (requeridos en grandes cantidades)
• C,O,H,N,S,P componentes de carbohidratos, lípidos proteinas y
ácidos nucleicos.
• K,Ca,Mg,Fe macromoléculas que existen en la célula como
cationes y juegan un rol diverso.
2. Micronutrientes
• Mn,ZN,Co,Mo,Ni,Cu elementos trazas (microelementos o
micronutrientes). Regulan el crecimiento. Contaminan las aguas.
Ej; Zn+2 está presente como sitio activo de algunas enzimas, también en
asociación de subunidades catalíticas y regulatorias en E. coli
Mn+2 cataliza la transferencia de grupos fosfato molibdeno para la fijación de
N y Co, es un componente de la vitamina B12
 Nutrición bacteriana
• Los microorganismos pueden ser
categorizados en forma diferente respecto a
los requerimientos nutricionales.
• Elementos mayores son necesarios en grandes
cantidades
• Elementos menores --- requeridos en
cantidades por miligramo
• Elementos trazas ----- disponibles en
cantidades por microgramo
 Requerimientos de C,H y O
• A menudo satisfecho juntos
C --- esqueleto de todas las moléculas
orgánicas y moléculas que sirven como fuente
de carbono.
Mos. --- fijan CO2
Autótrofos -- pueden usar CO2 como su principal
fuente de carbono
Heterótrofos – usan, reducen las moléculas
preformadas de otros organismos como fuente de
carbon y energía.
 Requerimientos de C,H y O
• Característica importante: Extraordinaria
flexibilidad en cuanto a las fuentes de C
Ej: Pseudomonas cepacia puede usar mas de
100 diferentes componentes de C

Los requerimientos varian enormemente

entre diferentes especies
 Factores de crecimiento
• Componentes esenciales o precursores que no pueden
ser sintetizados por el organismo (carencia de enzimas)
3 clases de factores de crecimiento:
1. Aminoacidos – síntesis de proteinas
2. Purinas y pirimidinas – síntesis de ácidos nucleicos
3. Vitaminas – moléculas pequeñas, cofactores de
enzimas
Ej: Enterococcus faecalis – necesita 8 diferentes vitaminas
para su crecimiento
 Tipos nutricionales (pag.103)
• Son 2 las fuentes de energia disponible para los microorganismos:

1. Energia de la luz --- fotosíntesis (atrapada en el proceso)

2. Energia derivada de la oxidación de moléculas orgánicas e
inorgánicas

a) Fotótrofos – usan luz como fuente de energía

b) Quimiótrofos – energia de la oxidacion de compuestos químicos.
Necesitan sólo dióxido de carbono para obtener energía de elementos
inorgánicos.
c) Litótrofos – usan sustancias inorgánicas reducidas. Sustancias
inorgánicas sencillas (SH2 S0, NH3, NO2-, Fe, etc.)
d) Organótrofos – extraen e- o H de compuestos orgánicos. Requieren
compuestos orgánicos (hidratos de carbono, hidrocarburos, lípidos,
proteínas, alcoholes...).
 Tipos nutricionales
e) Auxótrofos o Autótrofos– no tienen habilidad para
sintetizar un nutriente escencial (obtencion de precursores de su
entorno). Crecen sintetizando sus materiales a partir de sustancias
inorgánicas sencillas. El concepto de autotrofía se limita a la
capacidad de utilizar una fuente inorgánica de carbono (CO2).
f) Heterótrofas. Su fuente de carbono es orgánica (si bien otros
elementos distintos del C pueden ser captados en forma inorgánica).
g) Fotoautótrofos – usan energia de la luz y CO2 como fuente de C.
utilizan la energía solar y producen azúcares. Son únicos y necesitan
la luz solar para producir energía, a partir de compuestos orgánicos.
h) Quimioorganotróficos heterótrofos – quimioheterotrofos – usan
compuestos orgánicos como fuente de energia, H, e- y carbono para
la biosíntesis (misma fuente orgánica). Utilizan moléculas orgánicas para
producir su energía necesaria.
i) Fotoorganotróficos heterótrofos – en lagos contaminados
 Tipos nutricionales
j) Quimiolitotroficos autotrofos – oxidan compuestos como Fe, N, o
moléculas de sulfuro --- obtienen energia y e- para la biosíntesis (ej.:
conversion de amonio a nitrato o sulfuro a sulfato)
k) Mixotróficas – combinan procesos metabólicos autotróficos y
heterotróficos.
Gran flexibilidad metabólica y alteran sus patrones
metabólicos en respuesta a cambios medioambientales.
Ausencia de O2 son fotoorganotróficas
heterótrofas

Ej: bacterias púrpuras Presencia de O2 oxidan moléculas

orgánicas --- quimiotróficas
 Requerimientos de N,P y S
• Microorganismos incorporan grandes cantidades
N --- síntesis de a.a., purinas, pirimidinas, algunos
carbohidratos y lípidos, enzimas y cofactores
Fotótrofos --- reducen nitrato a amonio e incorporan el
amonio.
P --- ácidos nucleicos, fosfolípidos, nucleótidos,
cofactores, algunas proteinas y otros compuestos.
S ---- necesario para síntesis de a.a., cis y met, algunos
carbohidratos, biotina y tiamina.
 Crecimiento microbiano
• Crecimiento --- incremento de constituyentes
celulares
• Coenocítico --- organismo multinucleado (división
nuclear, no div. celular)
• Crecimiento en tamaño de la célula pero no del
número celular. No es estudiado por su pequeño
tamaño.
• Elevación del número de células --- reproducción
por procesos como fisión binaria
• Microbiológos --- cambios en número total en la
población
 Crecimiento Bacteriano
• Atmósfera:
– Aeróbica, anaeróbica o microaerofílica
– Anaerobios facultativos u obligados
• Temperatura:
– 37 grados Centígrados usualmente
• Tiempo de incubación:
– La mayoría de bacterias clínicamente importantes crece en 24-48
horas
– Excepciones: las micobacterias necesitan meses para crecer y otras
bacterias no pueden ser cultivadas.
 Crecimiento bacteriano
• Cuando existen buenas condiciones de
crecimiento, una bacteria crece ligeramente
en tamaño o en longitud.
• Una nueva pared celular se forma por el
centro formando dos células hijas,
conteniendo cada una, el mismo material
genético que la célula madre.
• Si el ambiente es óptimo, las dos células hijas
pueden dividirse en cuatro en 20 minutos.
 Fases del Crecimiento bacteriano

• Fase LAG: El crecimiento es lento al principio, mientras las

bacterias se adaptan a los nutrientes que están en su nuevo
ambiente.
• Fase LOG: Una vez la maquinaria metabólica se ha
disparado, las bacterias se multiplican exponencialmente,
doblando su número cada pocos minutos.
• Fase ESTACIONARIA: Al haber más y más m.o. compitiendo
por el alimento y los nutrientes, el crecimiento acelerado se
detiene y el número de bacterias se estabiliza.
• Fase de MUERTE: Se forman productos tóxicos de desecho,
la comida se agota y las bacterias comienzan a morir.
Crecimiento bacteriano

Aumento de la población
 Curva de crecimiento
• Cultivo microbiano --- análisis de la curva de crecimiento
• En medio líquido – cultivo en batch o sistema cerrado
concentración de nutrientes declina
concentración de residuos incrementa

Crecimiento de microorganismos (reprod. Por fision binaria) –

log del número de células vs. tiempo de incubación.

La curva resultante tiene 4 fases:

Curva de crecimiento microbiano
 Curva de crecimiento
1. Fase lag
microorganismos --- cultivo fresco – no ocurre incremento inmediato
- La célula sintetiza nuevos componentes (cofactores esenciales,
ribosomas)
- Medio diferente del crecimiento previo del microorganismo ---
síntesis de enzimas nuevas para usar nutrientes diferentes
- Microorganismo dañado – tiempo para recuperarse fase varia en
tamaño ---- condición de microorganismos y naturaleza del medio
- Ej; cultivo viejo o refrigerado – fase larga o medio químicamente
diferente
- cultivo joven (cultivo fase exponencial) --- fase corta o ausente.
- Misma composición del medio
 Curva de crecimiento
2. Fase exponencial
exponencial o log --- crecimiento máximo – potencial
genético
- naturaleza del medio
- condiciones de crecimiento
Población es más uniforme --- químicamente y
fisiológicamente
Cultivos en fase log --- usados en estudios bioquímicos y
fisiológicos
Cada microorganismo divide en un momento ligeramente
diferente.
 Curva de crecimiento
3. Fase estacionaria
- Crecimiento cesa – curva horizontal
- Fase alcanzada por bacteria --- nivel de población
- Población final – depende: disponibilidad de
nutrientes y otros factores.
N° de microorganismos viables permanece constante
- División celular --- celulas muertas o cesa división
 Curva de crecimiento
• Microorganismos entran en fase estacionaria
por:
✓ limitación de nutrientes
✓Disponibilidad de O2
✓Acumulación de productos tóxicos
✓Muchos factores operan juntos
 Curva de crecimiento
4. Fase de muerte bacteriana
cambios en el medio --- ausencia de nutrientes
exceso de residuos tóxicos
Muerte ---- como crecimiento en fase exponencial --
- logarítmica
Proporción constante de células muertas cada hora
Número constante de células – verificar si son
viables --- cultivo fresco
 Medios de Cultivo
• solución acuosa (líquida o incorporada a un
coloide en estado de gel) en la que están
presentes todas las sustancias necesarias para
el crecimiento de determinado(s)
microorganismo(s).
• Los medios de cultivo se pueden clasificar, en
primera instancia, en tres grandes tipos:
– Complejos o indefinidos
– Sintéticos o definidos
– Semisintéticos
 Medios de Cultivo: complejos
• Se desconoce su composición química exacta, ya que son
producto de realizar infusiones y extractos de materiales
naturales complejos.
• Ejemplos:
– Digeridos crudos de extracto de carne
– Digeridos de extracto de levadura
– Digeridos de peptona de carne o de soya
– Digeridos de caseína (de la leche).
• Con ellos se logra un tipo de medio rico
nutricionalmente, aunque indefinido químicamente.
• Ideales para obtener un buen crecimiento bacteriano.
• Sin embargo, con ellos no podemos tener un control
nutricional preciso.
 Medios de Cultivo: sintéticos
• Se obtienen disolviendo en agua destilada
cantidades concretas de distintas sustancias
químicas puras, orgánicas y/o inorgánicas.
• La composición concreta de un medio
sintético dependerá de la bacteria que
queramos cultivar
• Un medio definido para una bacteria con
grandes capacidades biosintéticas será más
sencillo que el medio definido de otra
bacteria con menores posibilidades
biosintéticas.
 Medios de Cultivo: semi sintéticos

• "mezcla" de los anteriores

• llevan algunas sustancias químicas cuya
naturaleza y cantidad conocemos, junto
con sustancias de naturaleza y
composición indefinidas.
 Tipos de Medios de Cultivo
• Líquidos
• Selectivos
• Sólidos – permiten seleccionar un tipo
(o unos pocos tipos) de
– Origen líquido y se microorganismos.
– Inhiben el crecimiento de
agrega un coloide ciertas bacterias, pero
permiten el crecimiento de
– Gelatina otras.
– Agar-agar: más • Diferenciales
– permiten distinguir a simple
utilizado vista dos o más tipos de
bacterias en función de su
– Sílica gel distinto comportamiento
respecto de algún nutriente
del medio.
 Tipos de Medios de Cultivo
• Líquidos
• Selectivos
• Sólidos – permiten seleccionar un tipo
(o unos pocos tipos) de
– Origen líquido y se microorganismos.
– Inhiben el crecimiento de
agrega un coloide ciertas bacterias, pero
permiten el crecimiento de
– Gelatina otras.
– Agar-agar: más • Diferenciales
– permiten distinguir a simple
utilizado vista dos o más tipos de
bacterias en función de su
– Sílica gel distinto comportamiento
respecto de algún nutriente
del medio.
 Agar-Agar
• Casi perfecto para el crecimiento de microorganismos en
medio sólido
- No tóxico
- Se diluye a 100°C, solidifica cerca a 45°C (temperatura a la
que la mayoría de las bacterias puede sobrevivir
• Estable a temperaturas de esterilización
• Fisiológicamente inerte

Este ingrediente ha revolucionado la ciencia de la microbiología,

permite la separación y crecimiento de microorganismos en
superficies sólidas como un procedimiento de rutina.
Ganadores del concurso de arte en
agar ASM 2015
 Ventajas y desventajas de tecnologías de detección
microbiana

Tecnología de detección Ventajas Desventajas

Detecta solo células vivas No diferencia serotipos o subespecies
Mínima interferencia por matriz de muestra Diseño de prueba limitada (rRNA blanco)
Alta especificidad
Reactividad cruzada baja
Fácil de manipular
Sistema HybriScan Lectura rentable
Cuantitativo y cualitativo
Alto rendimiento de muestras (96
micropocillos)
Detección de microorganismos no cultivables
Alto rendimiento de muestras No diferencia entre células vivas de muertas
Sensitivo Sensible a la interferencia de la matriz
PCR
Cuantitativo Sensible a la inhibición por la polimerasa
Diferenciación de serotipos o subespecies Baja sensibilidad
Alto rendimiento de muestras Baja especificidad, alta reacción cruzada
ELISA
Cuantitativo y cualitativo
Relativamente bajo costo Consume tiempo (hasta 10 días)
simple No detecta microorganismos no cultivables
Métodos convencionales basados
específico Bajo rendimiento de muestras
en cultivo Método ampliamente aceptado laborioso
 Matemática del crecimiento

• Una célula se divide en dos, • Se puede obtener

como promedio en E. coli en información del índice de
20 minutos crecimiento medio y de la
constante de crecimiento de
una población bacteriana.
 Matemática del crecimiento
• Indice de crecimiento --- fase exponencial
• Investigaciones de fisiologia y ecologia de
microorganismos --- solución de problemas en
la industria.
• Fase exponencial --- cada microorganismo es
dividido a intervalos constantes
 Crecimiento exponencial
Ejemplo: tiempo hipotético donde la célula se divide
cada 20 minutos
Población
n
Tiempo No. De división 2 Log 10 Nt
(N0x2n)

0 0 20=1 1 0,000

20 1 21=2 2 0,301

40 2 22=4 4 0,602

60 3 23=8 8 0,903

80 4 24=16 16 1,204

100 5 25=32 32 1,505

120 6 26=64 64 1,806

 Matemática del crecimiento
• Población se dobla en cada generación –
incremento es siempre:
n= no de generaciones
Ej: cultivo --- célula que se divide cada 20
minutos
--- población de 2 células --- 20 minutos
--- población de 4 células --- 40 minutos

Ej:
Nt=N0x2n
 Matemática del crecimiento

Log Nt = logN0 + n log 2

n= logNt – log No log Nt – log N0

log 2 0,301

Constante del índice de crecimiento medio K

Esto es el número de generaciones por unidad de tiempo
o expresado: generaciones por hora
 Matemática del crecimiento
Tiempo de generación media o tiempo medio de doblaje:
tiempo que toma una población para doblar en tamaño.
Puede ser calculado:

t=g Nt= 2 No

0,301

K log (2No) – log No log 2 + log No – log No

0,301 g 0,301 g

K 1 g 1
g K
 Matemática del crecimiento
• Ej: si una población incrementa de 102 células
a 108 células en 10 horas

K log108 – log102 8–2 generaciones/hora

(0,301) (10 horas) 3,01 horas

g 1 hora/ generación o min. / generación

K
 Medida del número de células
• Conteo directo --- cámara de conteo (fácil,
rápido). Tamaño y forma de microorganismos
• Petroff Hausser ---- cámara de conteo para
bacterias
- profundidad conocida, grabado en rejilla o
grilla en el centro.
- volumen conocido – diluciones
- no distingue células vivas de muertas
 Medida del número de células

• Cámaras de conteo y contadores electrónicos

• Técnicas de plaqueado – simples, sensitivas y
ampliamente usadas para conteo de bacterias
Unidades formadoras de colonias – UFC
Técnica de filtro de membrana:
➢ membranas especiales - incubación (agar o caldo, o
selectivos)
➢ Conteo
 Medida de la masa celular
1. Determinación del peso seco microbiano:
centrifugación
enjuage
Cultivo líquido secado (estufa)
pesado
2. Medida en espectrofotómetro --- absorción
de la luz (incremento poblacion – turbiedad)
absorbancia transmitancia
 Cultivo continuo
➢ Condiciones medioambientales constantes
➢ Provision continua de nutrientes y remoción de
residuos
➢ En laboratorio: sistema continuo
➢ Fase de crecimiento exponencial
dos sistemas de cultivo continuo:
1. Quimiostato – medio estéril introducido y remoción
de microorganismos.
2. Turbidostato – fotocélula, mide absorbancia o
turbiedad del cultivo --- flujo regulado --- mantener
turbiedad o densidad celular
 Factores medio ambientales
• Influencia de factores ambientales
• El conocimiento permite:
✓ Control del crecimiento
✓ Distribucion ecológica de los microorganismos

1. Solutos y actividad de agua (Aw)

Mantienen concentración osmótica – uso de
solutos compatibles
Aminoácidos son solutos ideales porque no desorganizan la
esructura y función de las enzimas.
Continua…

• Cantidad de agua disponible para los

microorganismos puede ser reducida por
interacción con moléculas de soluto.
• Actividad de agua – expresa cuantitativamente el
grado de disponibilidad de agua
Aw solución – 1/100 (humedad relativa de la
solución 100%) indica la presión de vapor de la
solución en el agua pura
Aw --- inversamente proporcional --- presión
osmótica
Si una solución tiene presión osmótica alta ---- su
Aw es baja
Continua…

• Osmotolerantes: microorganismos que se adaptan a

habitad con Aw bajos (mantener concentración de
soluto interno altos para retener el agua)
Ej: Staphylococcus aureus --- ClNa 3M
Pocos son verdaderamente osmotolerantes
Aw = 0.98 (agua de mar)
halófilos --- niveles altos de ClNa
Ej: genéro Halobacterium (mar muerto), Great Salt Lake
UTAH y otros (Arqueobacterias).
- Modificacion de estructura de proteinas y membranas
- Requieren altos niveles de K
- Ion Na estabiliza la pared celular y membrana
 Efecto de la concentración del ion sodio sobre el
crecimiento con diferentes tolerancias o requerimientos
de sal
• La concentración de Na Cl optima para microorganismos marinos como V. fischeri
es de alrededor del 3%, para halófilos extremos esta entre el 15 y el 30 %
dependiendo del organismo.
 Factores medio ambientales

2. pH
Medida de la actividad de iones hidrógeno
Escala ---- pH 0,0 a pH 14
Habitat de microorganismos:
• Acidofilos
• Neutrófilos
• Alcalófilos
Normalmente pueden adaptarse a cambios de pH en su medio
ambiente
pH
Ej: pH por debajo de 5,5 a 6 (Salmonella
typhimurium y E. coli)
Sintetizan nuevas proteinas --- respuesta ácido
tolerante
Si pH 4,5 o menos --- chaperones: acido schock
proteins
Previenen la denaturación ácida de proteinas y
ayudan en el replegamiento de proteinas
denaturadas.
pH y crecimiento
microbiano

La escala de pH

Aunque algunos
microorganismos
pueden vivir a pH
muy alto o muy bajo,
el pH intracelular
permanece próximo a
la neutralidad.
 Factores medio ambientales
3. Temperatura
Microorganismos susceptibles: unicelulares y poikilotermos
- Reacciones catalizadas por enzimas
- Indice de cada reaccion incrementa el metabolismo – altas
temperaturas = microorganismos crecen más rapido
- Temperaturas altas dañan microorganismos – denaturación
de enzimas, transportadores y otras proteinas.
- Temperaturas cardinales ---- mínimo, óptimo y máximo
- Temperatura cardinal – depende de otros factores (pH,
nutrientes) varia entre microorganismos
- Rango de crecimiento de un microorganismo en particular
= 30 °
Continua…

Ej : Neisseria gonorroheae rango pequeño = Stenotérmicos

Enterococcus faecalis amplio rango = Eurytermicos

Crecimiento: 100 °C, 350 °C ---- aguas ricas en sulfuro

Importancia: uso industrial – enzimas

Bacterias psicrófilas tienen la mayoria de sus ácidos grasos de

tipo insaturado.
Lo que facilita el estado semifluido de las membranas a bajas
temperaturas.
 Temperaturas cardinales

Relación entre la temperatura y las velocidades de crecimiento de psicrófilos, mesófilos,

termófilos y dos hipertermófilos diferentes. En cada caso, se indican las temperaturas optimas
de microorganismos representativos.
 Factores medio ambientales
• En base a la temperatura se clasifican en:
1. Psicrófilos --- habitat antártico. La mayoría son miembros de:
Pseudomonas, Flavobacterium, Achromobacter y Alcaligenes
2. Psicrótrofos o psicrófilos facultativos – daño en alimentos
refrigerados
3. Mesófilos – mayoria de los patogenos humanos
4. Termofilos – membranas lipídicas son más saturadas (puntos
de fusión elevados)
5. Hipertemófilos – Pyricoccus abyssi y Pyrodicitum occultum Ej:
hipertermófilos marinos, áreas calientes del suelo marino
Temperaturas
cardinales

Efecto de la
temperatura sobre la
velocidad de
crecimiento y
consecuencias
moleculares para la
célula.

Las tres temperaturas

cardinales varian para
cada microorganismo.
 Factores medio ambientales
4. Concentración de oxígeno
✓ Aerobio --- presencia de oxígeno
✓ Anaerobio – ausencia de oxígeno
✓ Aerobios obligados – dependiente del oxígeno
✓ Anaerobios facultativos – no requieren oxígeno para su
crecimiento pero crecen mejor en su presencia
✓ Anaerobios aerotolerantes – ignoran el oxígeno
✓ Anaerobios obligados o estrictos --- no toleran el oxígeno y
mueren en su presencia
✓ Microaerófilos – son dañados por el nivel de oxígeno
atmosférico normal (20%) y requieren niveles de oxígeno
bajo (10%)
 Factores medio ambientales
• Diferentes grupos de bacterias en relacion al oxígeno --
- varios factores: inactivacion de proteinas, efecto de
derivados tóxicos del oxígeno (inactivación de enzimas,
oxidación de grupos sensibles coo sulfhidrilos)
Ej: enzima nitrogenasa (fijacion de nitrógeno) – sensible
al oxígeno
Reducción del oxígeno – productos: radical superoxido,
peroxido de hidrogeno, radical hidroxilo, destruyen los
constituyentes celulares rápidamente.
Microorganismos que se protegen de estos productos
poseen enzimas: superoxido dismutasa y catalasa
Catalizan la destruccion de O2 y H2O2
 Factores medio ambientales
5. Presión
Generalmente nunca son afectados significativamente por la
presión
Barotolerantes – presión incrementada afecta
adversamente pero no mucho
Barofílicos – crecen más rápidamente a
presiones altas – incapaz de crecer a presiones
menores a 400 atm.
 Factores medio ambientales
6. Radiación
Longitud de onda de radiacion decrece --- energia
de la radiación incrementa
Luz solar – mayor fuente de radiación en la tierra
Incluye:
- Luz visible – importante para la vida
- Ultravioleta – absorbida por el oxígeno – forma
una capa de ozono --- proteccion al sistema vivo.
- Daña a los microorganismos (corta longitud de
onda)
Factores medio Union anormal: Enlaces entre Timinas
ambientales adayacentes

La radiación mas
letal de UV es a
260 nm,
absorbida por el
DNA
Formación de
dímeros de
timina
Fotoreactivación y Reactivación en la
oscuridad
 Factores medio ambientales
Rayos infrarrojos (calor) --- 60% de la radiación
solar
Longitud de radio
Rayos gama y rayos X (radiación ionizante) – son
mucho más energéticos que la luz visible o
infrarroja – mutación y/o muerte
Resistencia a radiaciones ionizantes --- bacterias y
endosporas bacterianas.
Microorganismos que viven en el aire o expuestos en superficies -
-- pigmentos carotenoides para protegerse de la fotooxidación.