UNIVERSIDAD NACIONAL DE TUMBES

FACULTAD DE INGENIERÍA PESQUERA Y CIENCIAS DEL MAR

ESCUELA DE INGENIERÍA PESQUERA ACUÍCOLA
CARRERA DE INGENIERÍA PESQUERA ACUÍCOLA

PRÁCTICA 1: PREPARACIÓN Y ESTERILIZACIÓN DE MATERIALES PARA

MICROBIOLOGÍA, LIMPIEZA Y ESTERILIZACIÓN

I. INTRODUCCIÓN
En microbiología, como en cualquier otra ciencia es indispensable el uso del método
científico, por lo cual es necesario manejar para su práctica el menor número de variables
posibles, entre las variables que se pueden controlar se encuentra el material utilizado
dentro del laboratorio de microbiología. En primer lugar, el material de vidrio que
comúnmente se usa en el laboratorio de control microbiológico debe estar limpio, seco y
libre de cualquier tipo de contaminantes, ya que la presencia de éstos aún en pequeñas
concentraciones puede afectar los resultados analíticos. Otro paso importante es el
enjuague del material, éste debe ser suficiente y adecuado usando para ello agua
destilada con la finalidad de eliminar residuos de las soluciones detergentes, las cuales
se ha demostrado que pueden inhibir el crecimiento de los microorganismos o bien alterar
el pH de algunas reacciones. Finalmente, para poder estudiar el comportamiento de los
microorganismos en el laboratorio, el microbiólogo deberá contar, entre otras cosas, con
material y medio de cultivo estériles que eviten la presencia de microorganismos
indeseables que pudieran en un momento dado alterar los resultados obtenidos de un
análisis microbiológico.
ESTERILIZACIÓN
La esterilización es el proceso de destruir todas las formas de vida microbiana; un objeto
esterilizado, en el sentido microbiológico, está libre de microorganismos vivos. Los
términos estériles, esterilizar y esterilización se refieren a la ausencia o destrucción
completa de los microorganismos y no se utilizan en sentido relativo, una sustancia o un
objeto están estériles o no están estériles, pero no semiestériles o casi estériles. Los
métodos de esterilización son por: calor (ya sea seco o húmedo), filtración, radiaciones y
agentes químicos.
Esterilización por calor
La alta temperatura combinada con un alto grado de humedad es uno de los métodos
más efectivos para destruir microorganismos. Es importante distinguir entre calor húmedo
y calor seco en cualquier procedimiento de control microbiano; el calor húmedo mata a
los microorganismos porque coagula sus proteínas y es más rápido y efectivo que el
seco, que los destruye al oxidar sus constituyentes químicos. Los procedimientos
prácticos se dividen convenientemente en dos categorías:
1. El calor húmedo: que comprende los métodos de esterilización por vapor a presión
(autoclave) y la tindalización o esterilización fraccionada.
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2. El calor seco: que comprende la esterilización con aire seco o caliente (horno) y la
incineración.
Esterilización por radiaciones
Las radiaciones más comunes que se usan para destruir a los microorganismos son:
1. La luz ultravioleta. Se utiliza principalmente para la esterilización de áreas y
superficies, y cuya principal limitación es que debe ser absorbida para ser efectiva, no
pasa a través del vidrio transparente u objetos opacos e irrita los ojos y la piel.
2. La luz infrarroja. Se emplea para reducir la contaminación de ciertos alimentos y se
aplica durante la preparación de los mismos; el efecto esterilizante de este tipo de
radiaciones se debe a la energía térmica que imparte de manera rápida, y por ello
oxidan los componentes celulares de los microorganismos.
3. Radiaciones ionizantes. Se utilizan para la esterilización de material quirúrgico
sensible al calor y otros materiales usados en medicina.
Esterilización gaseosa
Algunos gases ejercen una poderosa acción letal sobre los microorganismos, ya que
destruyen varias enzimas y estructuras que son vitales para la duplicación de los mismos.
El óxido de etileno es un gas que se difunde a través de los materiales porosos y penetra
fácilmente la mayoría de los plásticos, tiene gran utilidad en la esterilización de artículos
desechables, como las jeringas de plástico, así como los instrumentos voluminosos, tales
como las máquinas cardiopulmonares. La esterilización se lleva a cabo a una
temperatura de 50 +/- 2 °C, con una humedad relativa de 33% durante tres horas; los
productos que han sido sometidos a este tratamiento pueden usarse hasta después de
24 horas de haber sido esterilizados, debido a que este gas es muy tóxico, especialmente
para los tejidos. Finalmente, se debe recordar, además, que el material biológico utilizado
en microbiología (bacterias, hongos, etc.) NO debe ser desechado del laboratorio sin
previa esterilización, pues este material ya sea patógeno o no, está contribuyendo a un
desequilibrio ecológico cuyas consecuencias no se pueden determinar.

II. OBEJETIVOS
1. Conocer los principios generales de las técnicas de esterilización de materiales de
vidrio de uso común en microbiología
2. Observar el efecto de las condiciones de asepsia en el control de la contaminación
microbiana en el laboratorio.
3. Esterilizar y limpiar los materiales de uso común en el laboratorio de microbiología
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III. MATERIAL Y MÉTODOS

2.1 Material:
 Autoclave
 Estufa
 Cajas Petri
 Matraz Erlenmeyer con torunda.
 Pipetas de 5 y 10 mL.
 12 tubos de ensayo 13x100
 12 tubos de ensayo 18x150
 Algodón.
 Papel de estraza o Kraft.
 Gasa.
 Tijeras
 Pinzas de disección punta roma.

2.2 Método
Lavado limpieza general u ordinaria
 Colocar el material en recipientes que contengan soluciones detergentes
apropiadas (de preferencia usar Dextrán), procurando que el material quede
totalmente sumergido; para eliminar materia orgánica, dejar actuar durante 24
horas, si el material tiene sales someterlo a un ligero calentamiento con HCl
concentrado por espacio de 30 minutos,
 Lavar el material con la solución detergente, auxiliándose de escobillones en
buen estado y de esponjas de celulosa o estropajos. No usar limpiadores
abrasivos.
 Enjuagar con abundante agua de la llave y al final con agua destilada por lo
menos tres veces.
Tratamiento severo
Si después del lavado ordinario en el material de vidrio permanecieran algunos
contaminantes que se manifiesten por la presencia de residuos o porque la
superficie del mismo no se humecta uniformemente, se recomienda sumergir el
material en mezcla crómica o en ácido sulfúrico como a continuación se indica.
Observando las medidas de seguridad adecuadas, sumergir el material en
mezcla crómica o en ácido sulfúrico durante 10-15 minutos.
Sacar el material y aplicarle el lavado ordinario como se indicó anteriormente.
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Preparación del material

 Envolver con papel las cajas de Petri como lo indique el profesor, anotar en el
papel el número de equipo y la fecha de preparación.
 Poner en la boquilla de las pipetas un filtro de algodón, de tal manera que el
aire pase libremente a través de él.
 Envolver con papel cada pipeta, marcando en la envoltura el volumen de cada
una de ellas.
 Tapar cada uno de los tubos y matraces con torundas de algodón, siguiendo
las indicaciones del profesor. Las torundas deben prepararse a la medida de
la boca del matraz o tubo, no deben deformarse, ni ser forzada su entrada, ni
de caerse al ser invertidos estos y deben llevar una cubierta de gasa para
evitar que la pelusa contamine al medio de cultivo.
 Colocar los tubos en un cesto de alambre o en un bote y cubrirlos con papel
Kraft (esta envoltura protege los algodones y evita que durante la
esterilización estos se humedezcan.
 Los hisopos se preparan con aplicadores de madera y algodón, el cual debe
ser enrollado con fuerza y en suficiente cantidad, de tal manera que no se
desprenda ni presenta asperezas.
 Todo el material debe ser identificado con su correspondiente etiqueta antes
de ser esterilizado.

Esterilización
Esterilización por calor húmedo (15 LB, 121 °C X 15-20 MIN).
 Este proceso se aplica al material que no resiste temperaturas arriba de135°
C (material de vidrio con torunda de algodón, jeringas desarmadas –no
agujas-, recipientes con tapón de rosca –no cerrados fuertemente-, tapones
de hule envueltos en papel).
 Todo material a tratar en forma individual o conjunta debe cubrirse
perfectamente con material permeable, resistente al calor, no debe usarse
papel aluminio o celofán.
 Operar el esterilizador (autoclave) de acuerdo a las instrucciones del equipo.
De manera general el procedimiento es el que se indica a continuación: meter
el material en la autoclave, cerrarla y esperar a que la presión suba hasta 15
lb/in2 (15 psia) y una temperatura de 121 °C. Mantener estas condiciones de
15 a 20 minutos (condiciones generales requeridas para esterilizar el
material).
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Esterilización por calor seco (180 °C durante una hora).

 Este proceso se aplica a todo material cuya resistencia térmica sea superior a
los 150 °C (material de vidrio o metal con cierre hermético, cera, vaselina,
aceite, talco).
 Todo material a tratar de forma individual o conjunta debe cubrirse
perfectamente con papel aluminio o colocarse en recipientes de acero
inoxidable. No usar fibras sintéticas o de algodón.
 Al final del proceso dejar enfriar el material dentro de la estufa.

Prueba De Esterilidad
Pueden utilizarse bioindicadores (por ejemplo, esporas de Bacillus
stearothermophilus) o tiras indicadoras.

Almacenamiento
Debe guardarse el material esterilizado al resguardo del polvo, pasado un
tiempo de 1 a 3 meses y dependiendo de las condiciones deberá ser
esterilizado nuevamente.

Documentación
Cada ciclo de esterilización debe registrarse en una libreta con los siguientes
datos:
 Fecha del proceso.
 Condiciones del proceso (tiempo, temperatura y presión).
 Material procesado.
 Nombre y firma del operador.
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Figura 1. Lavado, secado, sellado y envuelto en papel crack los materiales de laboratorio

Figura 2. Etiquetado con la fecha de la práctica y materiales sellados con papel aluminio

Figura 3. Colocar en la estufa por 1 hora a

180°C, con 30 psi