LABORATORIO N° 2 : Acción hormonal e interacción H-Recp

 PARTE 1: Efecto glucogenolítico de la adrenalina sobre el hígado de rata.

Objetivo: Realizar un estudio in vitro sobre cortes de tejido hepático en presencia o
ausencia de adrenalina, a diferentes tiempos de incubación, y así ver el efecto del
estímulo adrenérgico en la liberación de glucosa, a partir de la hidrólisis del glucógeno.
Protocolo de trabajo:

Observaciones :
 La similitud de las laminas permite que los resultados sean comparables ,
además el escaso espesor y mayor superficie aseguraran la accesibilidad de
O2 y de la hormona disuelta en el medio .También permite la liberación de
glucosa en el medio de incubación sea mas efectiva.
 Hay un factor de error al ir tomando las alícuotas de un mismo tubo ya que la
disponibilidad del medio en relación del tejido es menos pero s comete un error
mayor si utilizáramos diferentes laminas para casa tiempo , ya que varia el
espesor y el tamaño.

 El tejido debe manipularse rápido y en FRIO. El órgano se lava con sc

fisiológica y se coloca en hielo.
 PREINCUVACION  el tejido se encontrará en condiciones mas semejantes a
las condiciones fisiológicas antes del agregado del agonista. En esta etapa hay
liberación de glucosa que debe ser tomada en cuenta a la hora de realizar los
caculos.
 El T0 se produce con el agregado del agonista luego del tiempo de incubación
de 5’ a 37°C. Glucosa detectada a tiempo 0, corresponde a la liberación
durante los 5 minutos de preincubación.
  Luego del tiempo de incubación debemos verter su contenido sobre los tubos
de reacción que contendrán el reactivo 3,5dinitrosalicilico que dará lugar a una
reacción colorimétrica que luego se medirá en el espectrofotómetro.
 Para observar el efecto neto de la adrenalina EXOGENA

Determinación de la glucosa liberada:

Se realizará mediante la reacción con el ácido 3,5-dinitrosalicílico (S: 100 – 2000
μg).Se agregara 1 ml del reactivo que estará colocado en los tubos de reacción, luego
se hierve por 5’ y se enfría .
Se dará la producción de un color marro y su intensidad ira aumentando a medida que
aumente el tiempo de incubación con la adrenalina.
  PARTE 2: Acción de agonistas y antagonistas de la vía adrenérgica sobre el
hígado de rata
Objetivos:
- Análisis del aporte de cada vía adrenérgica (α y β) por la acción glucogenolítica de la
adrenalina empleando para ello antagonistas de estos receptores (propranolol (β) y
fentolamina(α)).
- Análisis del efecto de otros agonistas sobre la acción glucogenolítica a través de los
receptores α y β adrenérgicos (noradrenalina e isoproterenol).
Observaciones:
 Volumen final: 10 mL, se utiliza buffer fosfato.
 Condiciones 3 y 5, preincubación de 5 minutos. El resto 10 minutos (presencia
de aantagonistas).Debemos asegurarnos que el agonista este ocupando el
recptor antes que el agonistaa ya que son agonistas competitivos
 El tiempo del ensayo será de 20 minutos.Esdecir que solo hay dos tiempos de
trabajo t0 y t20.
 Se utilizará cortes de hígado de rata (de igual manera que la parte 1).
 Cuantificación de glucosa por reacción con el ácido 3,5-dinitrosalicílico.
 Curva de calibrado.
 Blanco de buffer.

Efectos medidos en cada condición :