Técnicas de Siembra y Aislamiento

TÉCNICAS DE SIEMBRA Y
AISLAMIENTO
TÉCNICAS DE SIEMBRA Y AISLAMIENTO
1.- Introducción.
2.- Instrumentos usados para la siembra de microorganismos.
3.-Consideraciones previas a la inoculación o siembra.
4.- Consideraciones generales para la siembra. Preparación del

material.
5.- Técnicas de siembra:
6.- Condiciones necesarias para el desarrollo de los

microorganismos.
7.- Observación del crecimiento de las bacterias en los medios de

cultivo.
8.- Técnicas de recuento.

INTRODUCCIÓN
Las bacterias u otros microorganismos que se desarrollan en medios
de laboratorio se llaman cultivos
SIEMBRA
Consiste en depositar el inóculo o muestra en un medio
de cultivo apropiado para su desarrollo.
SIEMBRAS EN AISLAMIENTO
Consiste en la separación de un microorganismo
determinado de la población mixta en la que se
encuentra
CULTIVO PURO
Aquél en el que solo existe un tipo de microorganismo.
RESIEMBRA
Consiste en pasar un microorganismo de un
medio de cultivo a otro
1.- Introducción.

material.

microorganismos.

cultivo.

INSTRUMENTOS USADOS PARA LA SIEMBRA DE MICROORGANISMOS
1.‑ Asa de inoculación o asa de "platino"

Consiste en un hilo de unos 6 cm de longitud
metálico, habitualmente de nicrom, cuyo extremo tiene la
forma de un círculo cerrado de 2‑3 mm. de diámetro,
fijado a un mango de Koller, generalmente aislante
Existen asas de un solo uso, desechables

y calibradas, de material plástico,
esterilizadas por radiaciones gamma.
Se habla de asa calibrada
cuando el volumen de muestra contenido
en el círculo del asa es perfectamente
conocido. Hay asas de 0,01 ml (10l) y de
0,001 ml (1l)
Las asas se utilizan para realizar siembras en

aislamiento, descarga en medios líquidos, estriación en
tubos de agar inclinado, etc
2.‑ Hilo de inoculación o de "platino
3.‑ Hisopo, escobillón o torunda de

algodón de un solo uso
Se trata de una varilla, generalmente de

plástico, que en uno de sus extremos lleva arrollada
una porción de algodón. Se adquieren esterilizados por
rayos gamma en envases individuales y son
desechables.
Se utilizan para la toma de muestras con las
que se prepara una suspensión, para la descarga de
productos patológicos, transferencia de cultivos
líquidos, siembra masiva de placas en superficie, etc
4.- Pipetas
5.- Varilla o espátula de Driglasky

Se utiliza para extender una muestra
líquida por toda la placa. Se usa muy poco.
6.‑ Jeringas
Son adecuadas para la inoculación de

las muestras tomadas mediante punción y
transportadas dentro de ellas. Además, se
utilizan para subcultivos en placa a partir de
frascos de hemocultivo y para transferir cultivos
líquidos
1.- Introducción.

material.

microorganismos.

cultivo.

CONSIDERACIONES PREVIAS A LA INOCULACIÓN O SIEMBRA
1.- Las muestras deben permanecer refrigeradas hasta

su procesamiento, excepto los líquidos biológicos que se
suponen estériles.
2.- Sacar los medios del lugar de almacenamiento

y esperar hasta que estén a temperatura ambiente,
atemperados.
Quitar el exceso de agua de condensación

de las placas, en estufa si fuera necesario.
Las placas no deben estar fuera del

refrigerador más de dos horas, para evitar la
desecación del medio
3.- Antes de sembrar, inspeccionar el medio para comprobar que no está

contaminado (opacidad, presencia de colonias, etc.) o en malas condiciones
4.- Las muestras líquidas con escaso contenido microbiano deben ser
concentradas mediante centrifugación en tubo estéril antes de proceder a
su inoculación. Inspeccionar las muestras sólidas para determinar la zona
más idónea
5.- Las muestras sólidas muy consistentes

deben diluirse y homogeneizarse en solución
salina fisiológica estéril antes de cultivarlas
6.- Las muestras viscosas pueden fluidificarse con N-

acetil-cisteína o acetato de amilo al 1,5%, en
condiciones estériles. Ninguna de estas soluciones
daña a los microorganismos
7.- Si es conveniente los fragmentos de tejidos

pueden triturarse antes de cultivarlos
8.- Algunas muestras con flora acompañante han de someterse a

procedimientos de descontaminación antes de la siembra
1.- Introducción.
4.- Consideraciones generales para la siembra. Preparación

del material.
5.- Técnicas de siembra

microorganismos.

cultivo.

CONSIDERACIONES GENERALES
PARA LA SIEMBRA DE MICROORGANISMOS
1.‑ Se debe preparar todo el material a utilizar
2.- Es necesario el uso de técnicas asépticas y de equipo esterilizado.
3.- Debe establecerse la secuencia de los pasos a seguir
4.-Identificar las placas, tubos, portaobjetos y cualquier recipiente de la

muestra para su reconocimiento posterior.
5.- Trabajar siempre cerca de la

llama del mechero
6.- No debe haber corrientes de aire y no se debe hablar durante la

siembra, para evitar contaminaciones
7.‑ Las placas, tubos, matraces, etc., se

abrirán sólo para realizar la siembra,
manteniéndolos cerca del mechero
8.- Los tubos deben mantenerse inclinados

durante la siembra, flameándose las bocas de
los mismos antes y después. Colocarlos
siempre en gradillas
9.- Se ha de flamear la boca de los

recipientes después de abrirlos y antes de
cerrarlos
10.‑ Para sembrar en placa, dejar la

tapa en la mesa, también hacia arriba,
y mantener la otra parte de la placa
cerca de la llama, inclinada de tal
manera que veamos la superficie del
medio
11.- Los instrumentos de siembra que se utilicen deben estar en buen

estado, porque de lo contrario en la siembra en medios sólidos se puede
producir la rotura de estos
12.- El asa de "platino" e instrumentos similares,

deben flamearse antes y después de su
empleo si no son de material desechable.
Debe evitarse introducir caliente el
instrumento de siembra dentro de la muestra
13.- Para realizar estrías sobre la

superficie de un medio se debe
DESLIZAR el asa de siembra sobre la
superficie del agar mediante un balanceo
sucesivo y rápido
14.- Evitar sacudir o soltar el instrumento

de siembra cargado con la muestra
15.- Las pipetas para tomar muestras deben

estar taponadas con algodón y se emplearán
siempre dispositivos de pipeteo
16.- Se evitará el golpeo brusco del asa, hilo,

17.- Descontaminar de manera apropiada el material usado en cada caso
Se debe disponer de:
* Recipiente con solución desinfectante para ir depositando material

contaminado no desechable.
* Recipiente adecuado para recoger el material desechable

contaminado para su posterior esterilización.
* Lejía o algodón impregnado de lejía para utilizarlo sobre posibles

salpicaduras, derrames, etc.
18.- La rapidez y habilidad en la realización de la siembra mejora los

resultados, ya que hay mayor probabilidad de contaminación cuanto más
tiempo estén abierto los medios
19.‑ Las placas sembradas se incubarán

de forma invertida y se mantendrán
siempre en esta posición
20.‑Las muestras que se crea conveniente, una vez procesadas, se

guardarán en refrigerador hasta finalizar su estudio. El resto se
eliminarán.
1.- Introducción.
4.- Consideraciones generales para la siembra. Preparación

del material.

microorganismos.

cultivo.

TÉCNICAS HABITUALES DE SIEMBRA
I.‑ MEDIOS SÓLIDOS EN PLACA
1.‑ Aislamiento en placa o inoculación por estrías

Con esta técnica pretendemos conseguir colonias perfectamente aisladas
a partir de la muestra para posteriormente poder trabajar con ellas. Seguiremos
Los siguientes pasos:
• Tomar la muestra con el asa previamente flameada y enfriada
• Diseminar en la placa siguiendo alguno de los siguientes esquemas:
a.-
b.-
c.-
d.-
e.-
• Incubar las placas, de forma invertida, a la tª adecuada durante 24‑48 horas

Si la muestra se presenta en un
escobillón, se puede realizar el
aislamiento directamente con éste o
bien realizar una descarga en la parte
superior de la placa y a continuación
proceder al aislamiento con asa
Si la muestra se presenta en jeringa (anaerobios), se realiza

una descarga en la parte superior de la placa, procediendo al
aislamiento con asa según alguna de las técnicas descritas.
2.‑ Siembra masiva en superficie

Consiste en distribuir la muestra por la superficie del medio de
cultivo contenido en la placa, de una manera uniforme.
Se puede utilizar como instrumento de siembra el asa o la pipeta. En
este último caso, después de dejar la muestra con la pipeta, la
extenderemos con el asa de inoculación
Técnica:
3.‑ Siembra masiva + siembra en aislamiento

Es una técnica que combina estas dos modalidades de
siembra y se utiliza cuando en una misma placa se quiere realizar
recuento y aislamiento. Da buenos resultados cuando se trata de
muestras con escasa densidad microbiana
I I.‑ MEDIOS SÓLIDOS EN TUBO

1.‑ Tubos de agar inclinado o en pico de flauta:
Este tipo de siembra se suele realizar para la obtención de masa de
cultivo puro a partir de colonias aisladas. También se utiliza para la realización
de determinadas pruebas bioquímicas.

2.‑ Siembra en picadura:
Se suele realizar en tubos con el medio no inclinado. Se utiliza hilo
de platino. Esta técnica se utiliza sobre todo con medios semisólidos, para el
estudio de movilidad de microorganismos
3.‑ Siembra en picadura + estriación en superficie (pico de flauta) :
Se pueden combinar los dos métodos anteriores, es decir, sembrar

en picadura y luego en estrías en la superficie del pico de flauta
III.‑ MEDIOS LÍQUIDOS EN TUBO

1.‑ Desde una muestra sólida (colonias en placa). Inoculación con asa

2.‑ Desde una muestra líquida
Es importante homogeneizar la muestra previamente. Los cultivos líquidos
se homogeneizan dando golpecitos con las yemas de los dedos
a) Inoculación con pipeta o jeringa


2.‑ Desde una muestra líquida
a) Con asa metálica o desechable

Se toma el volumen de muestra que queda adherido al asa
(película) al introducirla en el líquido, luego se introduce en el tubo
que contiene el caldo a sembrar agitando para que se desprenda
c) Inoculación con escobillón

1.- Introducción.

material.

microorganismos.

cultivo.

CONDICIONES NECESARIAS PARA EL
DESARROLLO DE LOS MICROORGANISMOS
Fuente de energía
Macronutrientes
Nutrientes Micronutrientes,
Factores de crecimiento
Condiciones atmosféricas
Temperatura
Tiempo de incubación
Condiciones
de cultivo pH
Presión osmótica
Humedad
Radiaciones
CONDICIONES NECESARIAS PARA EL DESARROLLO DE LOS MICROORGANISMOS
NUTRIENTES
Composición adecuada del medio de cultivo y preparación

reciente del mismo:
Es conveniente que los

medios de cultivo sean lo más
recientes posible, con lo que
se garantiza la existencia de
un cierto grado de humedad
evitándose la desecación
CONDICIONES ATMOSFÉRICAS
Según las necesidades de oxigeno podemos clasificar a las bacterias:
Aerobias: para su desarrollo les

hace falta oxígeno
Anaerobias: para su desarrollo

necesitan ausencia de oxígeno
Microaerófilas: para su desarrollo

necesitan una pequeña cantidad
de oxígeno
Anaerobias facultativas: pueden
crecer en ausencia o no de
oxígeno
Capnófilas
Para su desarrollo necesitan una concentración del 5-10% de CO2 en el aire
TEMPERATURA
La temperatura va a afectar al crecimiento bacteriano. Por debajo de
una temperatura (temperatura mínima) este no se produce, ni tampoco por
encima de otra (temperatura máxima)
Temperatura óptima de crecimiento es aquella que permite el máximo crecimiento

TEMPERATURA
Según el rango de temperatura de crecimiento se clasifican en

TEMPERATURA
Sicrófilos
Microorganismos capaces de crecer a bajas
temperaturas.
Ejemplos: bacterias marinas,
pseudomonas.
Sicrófilos facultativos
Rango: < 0 - 20°C, óptimo < 15oC
Sicrótofos facultativos
Rango: 0 - 35°C, óptimo 20-30oC
TEMPERATURA
Termófilos
Capaces de crecer a temperaturas
superiores a 40 ºC. Tienen enzimas
estables al calor
Rango: 40 - 70°C,
Óptimo de 55 - 65oC
Ejemplos:
-Bacterias de las aguas termales.
- Bacterias del compost
TIEMPO DE INCUBACIÓN
18 – 24 horas
Mayoría de las bacterias
48 – 72 horas
Sicrófilas 5 días
Hongos dermatofítos 15 días
Mycobacterium Semanas
pH DEL MEDIO
Las bacterias necesitan que el

pH esté controlado, manteniéndose
dentro de unos márgenes, para poder
crecer.
Por esta razón a los medios de
cultivo hay que añadirles sustancias
buffer o amortiguadoras.
La mayoría de las bacterias

patógenas para el hombre viven a un pH
neutro o ligeramente alcalino ( 7 - 7,6 ).
Existen excepciones como

Lactobacillus que vive a pH ligeramente
ácido y Vibrio que lo hace a pH alcalino
PRESIÓN OSMÓTICA
Generalmente se
suele trabajar en condiciones
de isotonía.
Las bacterias pueden

mantenerse vivas y crecer en
medios muy acuosos e
hipotónicos gracias a su
pared rígida que impide que el
agua penetre en la bacteria y
ésta se rompa
HUMEDAD
Para que se pueda producir un desarrollo normal de las bacterias,

estas deben encontrarse en un ambiente húmedo.
El ambiente seco es lesivo para muchos microorganismos.
En ambientes secos muchos virus, diversos géneros

bacterianos, Treponema y Neisseria, por ejemplo, mueren rápidamente;
mientras que otras especies como Staphylococcus aureus puede
sobrevivir semanas e incluso meses
RADIACIONES
La luz y otras radiaciones

influyen sobre los cultivos,
favoreciendo o impidiendo el
crecimiento.
La luz visible es buena para

las bacterias fotosintéticas.
En general para las bacterias

patógenas, la oscuridad favorece el
crecimiento, mientras que los rayos
ultravioletas del sol las destruyen
Las bacterias también son

destruidas por otros tipos de
radiaciones como las ionizantes:
Rayos X y rayos gamma
1.- Introducción.

material.

microorganismos.
7.- Observación del crecimiento de las bacterias en los

medios de cultivo.

CRECIMIENTO DE LAS BACTERIAS EN LOS MEDIOS DE CULTIVO
CRECIMIENTO EN LOS MEDIOS LÍQUIDOS

En los medios líquidos las bacterias poseen una gran
libertad de movimiento, formándose una suspensión de células
libres que se dispondrán con arreglo a sus necesidades
nutritivas y requerimientos de oxígeno.
Observaremos:
* Grado de crecimiento: muy leve, leve, etc.
* Turbidez: uniforme, granular, etc.
* Formación de películas: en anillo, superficie, etc.
* Sedimento: liso, granular, en cuerda (al agitar, el sedimento sube
como un remolino ), etc..
CRECIMIENTO EN LOS MEDIOS SÓLIDOS
Cuando una célula aislada e inmóvil comienza a crecer sobre un

medio sólido, el resultado del crecimiento al cabo del tiempo es una
colonia.
Unidad formadora de colonia (UFC) es una célula bacteriana viva

y aislada que da lugar a una colonia en breve espacio de tiempo
El aspecto macroscópico de una colonia es de gran ayuda para

la identificación del germen en cuestión, por cuanto difieren en tamaño,
forma, elevación, borde, color, olor, etc.
1.- Características del crecimiento en placa:
La inspección de los cultivos en placa se lleva a cabo sosteniendo

la placa con una mano y observando la superficie del agar para comprobar
la presencia de desarrollo microbiano
Se debe estudiar con cuidado cada placa debido a que las

bacterias aisladas inicialmente a partir de muestras pueden constituir
cultivos mixtos, observándose variedad colonial.
Por otro lado, las colonias puntiformes constituidas por bacterias

de desarrollo lento pueden pasar inadvertidas entre las de mayor tamaño

1.- Características del crecimiento en placa:
Para observar la placa se
utilizará una luz directa brillante e
inclinaremos las placas en todas las
direcciones. Se puede utilizar también
lupa para este estudio
En cuanto al tamaño: hay

colonias pequeñísimas o puntiformes,
pequeñas, medianas y grandes.
CRECIMIENTO EN LOS MEDIOS SÓLIDOS ( PLACAS )



Algunas bacterias, como las Pseudomonas, producen un pigmento
soluble que difunde alrededor de la colonia y que colorea al medio de
cultivo

Algunas bacterias prolongan el crecimiento superficial de la colonia
hacia el interior del medio. Se les llama colonias sumergidas.

Muchas colonias son blancas, blancas porcelana, blancas
apagadas, grises, y color beige brillante
También hay colonias con diferentes grados de amarillo, doradas,

naranjas, rosas o rojas.......etc.


El olor puede ser pútrido, desagradable, ácido,.. y va a depender

mucho del medio de cultivo empleado.. Estos olores pueden ser útiles
para la identificación de los microorganismos implicados
Emulsionabilidad: suspensión homogénea, granular, membranosa, etc..


CRECIMIENTO EN LOS MEDIOS SÓLIDOS ( TUBOS )
* Grado de crecimiento: muy leve, leve, moderado, denso, etc.

• Color
* Opacidad: opaca, semiopaco, translúcido,...
* Otras: crecimiento húmedo, arrugado, seco, etc.
1.- Introducción.

material.

microorganismos.

cultivo.

TÉCNICAS DE RECUENTO DE MICROORGANISMOS
En diversos estudios microbiológicos es importante conocer con
exactitud el número de microorganismos presentes en una muestra.
Así, en el campo de la alimentación y la higiene es esencial
conocer la carga microbiana de aguas, alimentos, superficies de
trabajo, etc., para determinar la repercusión sanitaria o la calidad de los
productos analizados.
En clínica no tiene tanta repercusión esta determinación, si bien

en algunas muestras como por ejemplo en orina, el recuento es de gran
interés con vistas al diagnóstico y tratamiento.
* Recuento directo al microscopio

MÉTODOS
* Técnicas turbidimétricas
* Recuento en placa de UFC

* Número más probable
* Otros
* Filtración por membrana
1.- Recuento directo al microscopio

La muestra es distribuida en un volumen conocido de una cámara
de recuento. El número de microorganismos presentes en un área definida
de la cámara de recuento multiplicado por el factor apropiado, determina el
número total de microorganismos presentes en la muestra.
Existen cámaras de recuento como las Cámaras de recuento de

Petroff-Hausser:

Es un porta que lleva en el centro una cuadrícula de 1 mm de lado
y 0,1 mm de profundidad (volumen total = 0,1 mm3), dividido en 25
cuadrados
Se carga con una

pipeta automática o
micropipeta y tras contar el
número de bacterias en 5
cuadrados, se halla la
media, se multiplica por 25,
para calcular el total de
células que hay en el
citómetro (0,1 mm3) y se
expresa luego el resultado
en bacterias por ml.
Esta técnica presenta una serie de limitaciones:
• Las células muertas no se distinguen de las vivas.
• Las células pequeñas son difíciles de ver al microscopio y

algunas de ellas probablemente no se cuentan.
• Se requiere tiempo y habilidad para obtener resultados precisos.
* No es un buen método para muestras poco densas; se puede

recurrir a concentrar la muestra por centrifugación
2.- Técnicas turbidimétricas

Los cultivos bacterianos actúan como suspensiones, absorbiendo
y difractando la luz que incide sobre ellos

Los cultivos bacterianos actúan como suspensiones, absorbiendo
y difractando la luz que incide sobre ellos
La turbidimetría
Se basa en la medida
de la cantidad de luz
transmitida por la suspensión.
Se usa el espectrofotómetro.
La nefelometría.
Se basa en la medida de la luz difractada. Se usa el nefelómetro.
Por estos procedimientos se puede calcular el número de bacterias en un

cultivo, ya que la luz absorbida o difractada por una suspensión bacteriana es
directamente proporcional a la concentración de células en el cultivo
Aplicaciones
a) Elaboración de una curva de crecimiento de la bacteria
Si medimos la absorbancia
de un cultivo a distintos intervalos de
tiempo, la curva que relaciona estos
parámetros representa el crecimiento
de la bacteria con sus distintas fases:
fase de latencia, fase de crecimiento
exponencial, fase estacionaria y fase
de muerte.
2.- Técnicas turbidimétricas Aplicaciones
Técnica para la construcción de una curva de crecimiento
1.- 2.- 3.-
4.- Medir la absorbancia del cultivo a distintos tiempos

Técnica para la construcción de una curva de crecimiento
5.-
C
D
B
A
b) Realización de una curva patrón en la que se relaciona la medida de

la absorbancia con el número de células del cultivo. Escala de Mac
Farland
Esta escala, útil para el recuento de microorganismos, relaciona la
turbidez de unos patrones de sulfato bárico (mezcla de cloruro de bario al
1% P/V y ácido sulfúrico al 1%V/V) con el número de bacterias presentes
en una muestra.
TURBIDEZ Nº MICROORGANISMOS
Así, si nosotros tenemos una suspensión de microorganismos y

tiene una turbidez determinada, que equivale a un tubo determinado de
la escala de Mac Farland, sabremos la cantidad aproximada de
microorganismos que hay en dicha suspensión.
Escala de Mac Farland
Tubo nº ClBa2 0,048M H2SO4 0,36 M Nº Microorg.

0,5 0,05 ml 9,95 ml 1,5 x 108/ml
1 0,1 ml 9,9 ml 3 x 108/ml
2 0,2 ml 9,8 ml 6 x 108/ml
3 0,3 ml 9,7 ml 9 x 108/ml
4 0,4 ml 9,6 ml 12 x 108/ml
5 0,5 ml 9,5 ml 15 x 108/ml
6 0,6 ml 9,4 ml 18 x 108/ml
7 0,7 ml 9,3 ml 21 x 108/ml
8 0,8 ml 9,2 ml 24 x 108/ml
9 0,9 ml 9,1 ml 27 x 108/ml
10 1 ml 9 ml 30 x 108/ml
3.- Recuento en placa de UFC
Esta técnica determina:
* Sólo microorganismos viables de una determinada muestra
* Proporciona información adicional (por ejemplo, el aspecto

de las colonias)
* Posibilidad de ampliar el estudio de las colonias hasta su

completa identificación.
Se presupone que cada colonia procede de una célula, pero esto

no siempre es así por lo que se habla de “unidades formadoras de
colonias” (UFC), considerándose que cada colonia procede de una UFC y
por lo tanto el número de UFC vendrá dado por el número de colonias.
Frecuentemente las muestras que hay que estudiar tienen un

número muy elevado de microorganismos, por lo que se requiere
diluirlas para poder contarlas.
En el caso de muestras biológicas humanas, las diluciones se

deben realizar en solución salina fisiológica estéril para que los
microorganismos mantengan las mismas condiciones ambientales a las
que están adaptados
3.- Recuento en placa de UFC Técnica
1.- Preparar la muestras y las diluciones que se vayan a sembrar

Dilución simple
Diluciones seriadas
Diluciones seriadas
Diluciones seriadas
Diluciones seriadas
2.- Siembra
Siempre se sembrará un volumen de muestra conocido,
utilizando asas calibradas o pipetas estériles para depositar la muestra.
La siembra en placa puede ser de dos tipos:
a) Siembra masiva en superficie

2.- Siembra a) Siembra masiva en superficie

2.- Siembra a) Siembra masiva en superficie

2.- Siembra
b) Siembra en masa
2.- Siembra b) Siembra en masa

2.- Siembra b) Siembra en masa

3.- Incubar a 37ºC durante 24 horas
4.- Contar las colonias de las placas que presenten un número

entre 30 y 300
5.- Calcular con estos datos el número de UFC/ml de muestra
Recuento = Nº U.F.C. x Factor de dilución
El resultado se ofrecerá referido al volumen de 1 ml.

Fuentes de error en el método de contaje en placa
• El número de colonias obtenido en un contaje de viables depende no

solamente del tamaño del inóculo, sino también del medio de cultivo y
de las condiciones de incubación empleadas.
• Influencia del tiempo de incubación: las células depositadas sobre

el medio de cultivo no desarrollarán colonias al mismo tiempo de modo
que si el tiempo de incubación es corto se obtendrá un número más
bajo del real.
• El tamaño de las colonias varia ampliamente de modo que colonias

muy pequeñas pueden no ser contadas
Estas limitaciones se pueden minimizar estandarizando las

condiciones de incubación (medio, temperatura, tiempo) para un
microorganismo determinado
Ventajas del método de contaje en placa
• Proporciona la mejor información .
• Presenta una alta sensibilidad, por tanto, es el más adecuado para

muestras con un número muy pequeño de células.
• Se pueden utilizar medios selectivos para el contaje de

determinados microorganismos a partir de muestras donde haya una
población mixta
• El método de siembra masiva en superficie presenta la ventaja

adicional de permitir tomar las colonias para su resiembra en otro
medio y/o para su identificación posterior
3.- Número más probable

3.- Filtración por membrana

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2.- Instrumentos usados para la siembra de microorganismos.

3.-Consideraciones previas a la inoculación o siembra.

4.- Consideraciones generales para la siembra. Preparación del

5.- Técnicas de siembra:

6.- Condiciones necesarias para el desarrollo de los

7.- Observación del crecimiento de las bacterias en los medios de

8.- Técnicas de recuento.

2.- Instrumentos usados para la siembra de microorganismos.

3.-Consideraciones previas a la inoculación o siembra.

4.- Consideraciones generales para la siembra. Preparación del

5.- Técnicas de siembra:

6.- Condiciones necesarias para el desarrollo de los

7.- Observación del crecimiento de las bacterias en los medios de

8.- Técnicas de recuento.

1.‑ Asa de inoculación o asa de "platino"

Existen asas de un solo uso, desechables

Las asas se utilizan para realizar siembras en

2.‑ Hilo de inoculación o de "platino

3.‑ Hisopo, escobillón o torunda de

Se trata de una varilla, generalmente de

5.- Varilla o espátula de Driglasky

Son adecuadas para la inoculación de

2.- Instrumentos usados para la siembra de microorganismos.

3.-Consideraciones previas a la inoculación o siembra.

4.- Consideraciones generales para la siembra. Preparación del

5.- Técnicas de siembra:

6.- Condiciones necesarias para el desarrollo de los

7.- Observación del crecimiento de las bacterias en los medios de

8.- Técnicas de recuento.

1.- Las muestras deben permanecer refrigeradas hasta

2.- Sacar los medios del lugar de almacenamiento

Quitar el exceso de agua de condensación

Las placas no deben estar fuera del

3.- Antes de sembrar, inspeccionar el medio para comprobar que no está

5.- Las muestras sólidas muy consistentes

6.- Las muestras viscosas pueden fluidificarse con N-

7.- Si es conveniente los fragmentos de tejidos

8.- Algunas muestras con flora acompañante han de someterse a

2.- Instrumentos usados para la siembra de microorganismos.

3.-Consideraciones previas a la inoculación o siembra.

4.- Consideraciones generales para la siembra. Preparación

5.- Técnicas de siembra

6.- Condiciones necesarias para el desarrollo de los

7.- Observación del crecimiento de las bacterias en los medios de

8.- Técnicas de recuento.

1.‑ Se debe preparar todo el material a utilizar

2.- Es necesario el uso de técnicas asépticas y de equipo esterilizado.

3.- Debe establecerse la secuencia de los pasos a seguir

4.-Identificar las placas, tubos, portaobjetos y cualquier recipiente de la

5.- Trabajar siempre cerca de la

6.- No debe haber corrientes de aire y no se debe hablar durante la

7.‑ Las placas, tubos, matraces, etc., se

8.- Los tubos deben mantenerse inclinados

9.- Se ha de flamear la boca de los

10.‑ Para sembrar en placa, dejar la

11.- Los instrumentos de siembra que se utilicen deben estar en buen

12.- El asa de "platino" e instrumentos similares,

13.- Para realizar estrías sobre la

14.- Evitar sacudir o soltar el instrumento

15.- Las pipetas para tomar muestras deben

16.- Se evitará el golpeo brusco del asa, hilo,