2º Curso C.F.G.S. Laboratorio Clínico y Biomédico.

Microbiología

Unidad 1-A
MATERIAL ESPECÍFICO DEL
LABORATORIO DE MICROBIOLOGÍA

CONTENIDOS

1.- Introducción.
2.- Material de uso en Microbiología.
3.- Fases de manipulación del material.
4.- Organización de un laboratorio de Microbiología Clínica.

1.- INTRODUCCIÓN

Todo el material de uso en laboratorio de Microbiología pertenece a una de las

siguientes categorías:

1.a.- Material fungible: es aquel de vida corta, ya que se deteriora con su uso. Puede
ser desechable, es decir, de un solo uso (placa de Petri, hisopo, punta de micropipeta, ...) o
reutilizable (tubos de vidrio, pipetas, ...).

Es competencia del Técnico de laboratorio el llevar el control de las existencias

anotando lo que falta y lo que se está agotando.

1.b.- Material inventariable: aparatos y equipos de vida larga y reparables mediante

sustitución de piezas. El técnico debe velar por su limpieza y mantenimiento avisando de su
deterioro o mal funcionamiento y dándolos de baja en el inventario cuando sea preciso.

2.- MATERIAL DE USO EN MICROBIOLOGÍA

En el laboratorio de Microbiología se utiliza el material común a todo laboratorio,

cuya descripción y manejo se conoce del curso anterior.
A continuación se va a enumerar el material específico del laboratorio de
Microbiología, dividiéndolo en los dos grupos vistos en el punto anterior, profundizando en
aquel de uso común a diversas técnicas y sólo nombrando el material de uso más específico
cuya descripción y manejo se verá en el tema correspondiente.

2.a.- Material fungible

• Algodón graso o hidrófobo: utilizado para tapar recipientes.

• Asa e hilo de siembra: consiste en un hilo de unos 6 cm de longitud (antes de platino) de

cromo-niquel (nicrom) o de acero unido a un mango de Koller, generalmente aislante. El
extremo puede estar recto, denominándose entonces hilo de siembra, o en círculo de 2-3
mm de diámetro, llamándose en este caso asa de siembra. Es muy importante su correcto
flameado antes y después de su uso.

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o Se habla de asa calibrada cuando el volumen de muestra contenido en el círculo del asa es
perfectamente conocido.
o En la actualidad se están imponiendo, por su comodidad y seguridad, los hilos
y las asas de siembra calibradas de un solo uso.

• Calibre o regla: para medir el diámetro de halos de inhibición de crecimiento o el

diámetro de las colonias.

• Campanas de Durham: son diminutos tubos de ensayo que introducidos invertidos en

tubos con cultivos líquidos hacen de campanas “caza gases”.

• Contenedores para material contaminado: bolsas para autoclave, recipientes especiales

para agujas, etc..

• Dispensador de discos de antibiograma.

• Frascos cuentagotas: si van a contener soluciones fotosensibles como por ejemplo

colorantes, son mejores los de cristal topacio.

• Hisopos o escobillones: estériles para recogida de muestras y siembras. Con y sin medio
de transporte.

• Medios de cultivo: son muy numerosos a fin de promover el crecimiento de las distintas
especies de bacterias y hongos.

• Mortero: para triturar colorantes. Pueden utilizarse para homogeneizar muestras de

tejidos.

• Placas de Petri: son cajas circulares de pequeña altura; las hay de tres tamaños y pueden
ser de vidrio o desechables aunque hoy día ya prácticamente sólo se utilizan desechables.
Su principal aplicación es la de contener medios de cultivo sólidos; pueden adquirirse sin
medio de cultivo o con medios de cultivo ya preparados para la siembra de
microorganismos.

• Portaobjetos excavados o células de Koch: son portaobjetos con una concavidad en el

centro; se utilizan para el estudio de la movilidad bacteriana. No son muy utilizados en
clínica.

• Recipientes de boca ancha: estériles para recogidas de muestras de orina, heces,...

• Tubos de ensayo y de centrífuga: de distintos tamaños, de vidrio o plástico, en general

con tapón. Los tapones pueden ser de algodón graso, metálicos o tapones roscados de
baquelita.

2.b.- Material Inventariable o Aparatos y Equipos Específicos

◉ Cámaras de recuento de Petroff-Hausser: para recuento microscópico directo. Es un

portaobjetos que lleva en el centro una cuadrícula, similar a la cámara de Neubauer,
expresándose el resultado en bacterias por ml.

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◉ Microscopios: ópticos ordinarios, de fluorescencia, de contraste de fase, de campo oscuro,

y electrónico (en laboratorios virológicos de referencia).

◉ Lupa: para observación de colonias.

◉ Mecheros: el que se suele utilizar es el mechero Bunsen que consta

de un pie sobre el que descansa un tubo por el que sale el gas. En la
parte inferior lleva además un orificio para la entrada de aire de
modo que se regule la calidad de la llama. Sirve para calentar
soluciones, suspensiones, colocando el recipiente sobre un trípode
con rejilla. Pero su principal aplicación en el laboratorio de
Microbiología es el flameado, siendo éste un método de
esterilización que consiste en someter a la llama de un mechero el
material que se vaya a utilizar. La mejor llama para este fin es la
azul. Se utiliza para esterilizar asas e hilos de inoculación metálicos, espátulas, bocas de
tubos y matraces, etc.. Presenta dos inconvenientes fundamentalmente:

• Al retirar el objeto de la llama se puede volver a contaminar fácilmente.

• El material se deteriora.

◉ Agitadores: son dispositivos con una

base imantada que nos van a permitir
mediante un imán auxiliar la
agitación de disoluciones y
suspensiones. Suelen llevar además
una fuente de calor de forma que se
calienta a la temperatura deseada el
líquido que se agita.

◉ Cabinas de Seguridad Biológica (CSB): son cámaras de circulación de aire forzada que,
según sus especificaciones y diseño, proporcionan diferentes niveles de protección. Son
fundamentales en un Laboratorio de Microbiología Clínica y se clasifican según el nivel y
tipo de protección, como veremos más adelante.

Las Cabinas de Seguridad Biológica son dispositivos que encierran un área de

trabajo en forma tal que evita la exposición del operador a los agentes infecciosos. Esto es
especialmente importante si se tiene en cuenta que muchas de las operaciones realizadas en
un laboratorio implican la formación de aerosoles. El aire que ha pasado sobre el material
infeccioso es esterilizado ya sea por calor, luz ultravioleta o más comúnmente por pasaje a
través de “filtros de alta eficiencia para partículas aéreas”( filtros HEPA), que retienen con
una eficiencia del 99,97% partículas de hasta 0,3 micrómetros de diámetro. Además,
algunas de ellas, ofrecen protección al material que se manipula.
Cuando una CSB es utilizada por personal debidamente formado y consciente de las
limitaciones de ésta, se convierte en un equipo de contención muy efectivo para reducir el
posible escape de contaminación biológica. Sin embargo, es conveniente tener muy en
cuenta que una cabina no es nunca un substituto de una técnica microbiológica adecuada.

Las CSB se dividen en tres categorías, según el grado de aislamiento biológico que
confieren: clase I, clase II y clase III.

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Cabinas de clase I : son cámaras cerradas con una abertura al frente para permitir el
acceso de los brazos del operador. El aire (procedente del ambiente sin esterilizar) penetra
por este frontal, atraviesa la zona de trabajo y todo él sale al exterior, ya esterilizado, a
través de un filtro HEPA. Es decir, esterilizan sólo el aire que se expulsa al exterior Son
apropiadas para manipular agentes biológicos de los grupos 1, 2 ó 3. La mayor desventaja
que presentan es que no proporcionan protección al material con el que se trabaja, no
evitando por lo tanto que éste se pueda contaminar.

 Cabinas de clase II : se diferencian principalmente de las de clase I en que, además de al

operario y su entorno, ofrecen protección al producto frente a la contaminación. La
superficie de trabajo está bañada por aire limpio que ha atravesado un filtro HEPA El aire
fluye en “láminas” que sirven de barrera a las partículas externas y que dirigen el flujo del
aire contaminado hacia los filtros. La salida del aire se produce a través de otro filtro
HEPA, es decir, esterilizan tanto el aire que fluye sobre el material infeccioso como el que
es expulsado Son equipos válidos para el manejo de agentes biológicos de los grupos 1, 2 ó
3. Existen varios tipos de cabinas de clase II, según sus características de construcción,
flujo de aire y sistema de extracción. La mayoría de los técnicos de laboratorio de
microbiología clínica emplean los gabinetes de clase II para el trabajo de rutina.

Cabinas de clase III : constituyen el máximo nivel de seguridad. Son recintos

completamente cerrados; su interior está completamente aislado del entorno. Se opera en
ellas por medio de unos guantes, con puerta para introducir el producto; el aire que entra y
sale es esterilizado a través de filtros HEPA. Se recomiendan para el manejo de agentes de
los grupos 1, 2, 3 ó 4.

Gabinetes de seguridad
biológica

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◉ Estufa de cultivo o de incubación: es una caja

metálica rectangular, provista de un sistema de calor.
Este calor se regula mediante un termostato que
dispone de un mando situado en el exterior de la estufa.
La temperatura alcanzada en el interior es indicada por
un termómetro visible en la parte frontal de la estufa.

En el laboratorio de Microbiología se utiliza a

diario para incubar cultivos de microorganismos.
Generalmente se emplean a 37 ºC para bacterias (existen
excepciones como Campylobacter a 42ºC), a 30 ºC para hongos y otras temperaturas en casos
especiales. Algunas poseen flujo continuo de CO2.

También se emplean para desecar material de vidrio. Siempre hay que tener la
precaución de utilizar las estufas con una sola de estas finalidades, es decir, no se debe secar
material en estufas que se están usando rutinariamente para incubar y al revés.

◉ Horno Poupinel: es eléctrico ( el Horno Pasteur era de

gas y está en desuso) alcanza una temperatura de hasta
200-300 ºC. Se emplea para secar el material de vidrio
y sobre todo para la esterilización de materiales. Se
explicará en el siguiente tema.

◉ Autoclave: se emplea para la esterilización mediante

calor húmedo.

◉ Sistema de filtración por membrana: para esterilizar soluciones o como soporte para
realizar el recuento de gérmenes en membrana de celulosa.

◉ Jarras de “anaerobios”: se trata de recipientes dentro de los cuales se va a crear un

ambiente con atmósfera controlada.

◉ BALANZAS: son instrumentos utilizados para medir masas.

Características de una balanza

• Exactitud: Será tanto más exacta cuanto más se aproxime al verdadero

• Sensibilidad: Es el peso más pequeño capaz de medir la balanza.
• Capacidad de carga: Es la máxima carga capaz de pesar una balanza
• Precisión: Una balanza es precisa cuando al pesar un objeto varias veces obtenemos el
mismo valor

Balanza granatario: se trata de una balanza convencional de dos platos constituida

por una cruz metálica que descansa sobre una base denominada fulcro. Existe un eje vertical
que es fijo y sirve de soporte a la cruz. Esta es móvil y de sus extremos cuelgan los platillos.
Unido a la cruz va el índice o fiel cuya función es indicar sobre una escala el valor de la
oscilación originada al cargar la balanza. En los extremos de la cruz existen unos tornillos
para el ajuste fino del cero.

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BALANZA GRANATARIO

1.- Plato 4.- Tornillos de ajuste 6.- Fiel

2.- Palanca 5.- Cruz 7.- Pesas
3.- Base

La manera de pesar en este tipo de balanza es la siguiente:

1. Nivelar. Si es preciso rectificar la nivelación. Comprobar que la balanza está en

posición de reposo.
2.- Comprobar que la punta del fiel coincide con el cero de la balanza (equilibrado
previo). Este paso se puede obviar.
3. Poner el papel o recipiente sobre el que se vaya a pesar el producto en el
platillo derecho (si se es diestro).
4. Equilibrar la balanza poniendo en el otro platillo un papel o recipiente
iguales al que va a utilizarse para pesar.
5. Disparar la balanza y acabar de equilibrar, si fuera necesario, utilizando los
tornillos del extremo de la cruz.
6. Volviendo de nuevo la balanza a la posición de reposo, se ponen las pesas
correspondientes a la cantidad a pesar en uno de los platillos (el izquierdo si se es diestro) y
se va añadiendo producto en el otro, disparando la balanza y comprobando que el fiel vuelva a
la posición de equilibrio. Cuando esto ocurra tendremos una cantidad de producto
igual a la suma de las pesas de partida.
7.- Si lo que queremos es saber lo que pesa un objeto, se colocará este en el platillo
izquierdo (si se es diestro) y se irán añadiendo pesas al derecho hasta que se equilibre la
balanza.

➢ Balanza compacta digital electrónica:

Es una balanza de platillo único que utiliza una fuente electromagnética para
compensar la carga colocada en el platillo. Actualmente, debido a su fácil manejo, han
desplazado a las balanzas mecánicas del laboratorio.

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En la práctica el pesaje consiste en depositar los objetos a pesar en el plato y leer en la

pantalla o display el resultado.
Si para pesar un objeto o una sustancia tenemos que hacer uso de un envase, pero no
conocer el peso de éste, colocaremos el envase vacío en el plato, taramos (pulsando el
botón de tara y automáticamente la pantalla se pone a cero) y a continuación colocamos la
sustancia u objeto en el envase. La pantalla nos dará el valor del peso del objeto sin
envase.

# Conservación y mantenimiento de las balanzas:

Detallaremos aquellas precauciones comunes a cualquier tipo de balanzas y

posteriormente detallaremos las específicas de cada tipo de balanza.
• Deben colocarse en un sitio del laboratorio limpio y seco, exento de vibraciones, alejado del
calor, de la luz solar directa, de la humedad, corrientes de aire, vapores, etc
• Deben estar colocadas en una base firme y perfectamente nivelada, evitando vibraciones y
corrientes.
• Evitar el derramamiento de líquidos.
• No pesar directamente sobre los platillos; se utiliza papel, vasos de precipitado, vidrios de
reloj,...
• No deben pesarse objetos húmedos o calientes.
• Hay que centrar las cargas en los platillos. No dejar caer objetos sobre los platillos
• No debe someterse a cargas superiores a su capacidad.
• Mantenerlas siempre perfectamente limpias.

Balanza granatario
• Si van protegidas por una vitrina, ésta se mantendrá cerrada siempre que la balanza esté
“disparada”, para evitar corrientes.
• Siempre que no se utilicen, así como entre dos manipulaciones , en una misma pesada, deben
mantenerse en posición de reposo.
• El "disparo" de la balanza debe hacerse de forma lenta y suave, así como la operación inversa.
• Coger las pesas con pinzas.
• Antes de utilizar la balanza debe ajustarse el nivel, así como el cero antes de cada pesada.

Balanza electrónica digital

• Utilizar exclusivamente el adaptador que se suministra con la balanza.
• Cuando la balanza no se use, desconectar el adaptador.

◉ Centrífugas: algunas son de seguridad y están preparadas para tubos con tapón a rosca,
disponen de apertura retardada para evitar la contaminación por aerosoles, etc.

◉ Analizadores semiautomáticos: para identificación de bacterias y de levaduras y cálculos

de las CMI (concentración mínima inhibitoria) para distintos antibióticos según el
microorganismo aislado. Para su uso se requiere de otro material accesorio como
micropipetas, dispensadores de un solo uso para microdiluciones, nefelómetros para
preparar suspensiones estandarizadas o escala de McFarland, etc. Algunos de los más
modernos funcionan con tarjetas para identificación por pruebas bioquímicas, que tienen
lugar en pequeños compartimentos en el interior de la misma. Otros realizan técnicas
inmunológicas.

◉ Ordenadores con programas informáticos que dirigen a los autoanalizadores y realizan el

registro impreso de los resultados, etc.

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3.- FASES DE LA MANIPULACIÓN DEL MATERIAL

La limpieza adecuada de todo el material que se emplee en el laboratorio va a ser

fundamental tanto para evitar contagios como para evitar errores al volver a usar dicho
material. Antes de estudiar el proceso a seguir en el tratamiento del material, aclararemos una
serie de conceptos:

a.- Descontaminación: es la eliminación de microorganismos de un material. Lo más

utilizado es el empleo de sustancias como la lejía, formol, fenol, cresol, etc... a las
concentraciones y tiempo adecuados. La esterilización con autoclave de vapor es barata y
efectiva. La incineración de material para eliminar no es posible en la mayoría de los
laboratorios. También se contratan empresas que retiren el material biopeligroso en
contenedores especiales.

b.- Limpieza: consiste en el arrastre mecánico de la suciedad mediante sustancias jabonosas y

la ayuda de cepillos, escobillones o estropajos. Después aclarado y si el material es para
pruebas bioquímicas, finalmente aclarado con agua destilada.
Si quedan restos visibles se utilizan disoluciones de ácidos fuertes, clorhídrico, nítrico,
sulfúrico, etc. o mezcla sulfocrómica (100 g de dicromato de potasio, 250 ml de H2SO4 y agua
destilada hasta 1.000 ml).
Una vez bien aclarado el material de vidrio debe secarse al aire o en estufa a 60ºC.
En líneas generales tras la utilización del material para Microbiología, deben seguirse
una serie de pasos antes de su reutilización o eliminación. Un esquema general podría ser el
siguiente:
En cuanto a las fases en la limpieza y recuperación del material utilizado en el
laboratorio,
según el tipo
de material,
podemos
concretar:

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1.- 3 Material no desechable (reutilizable) contaminado:

Se trata de material que debe ser sometido a un proceso de descontaminación, limpieza

y posterior esterilización si fuera necesario. En microbiología primero se destruye el germen,
después se limpia y por último, si es necesario se somete a técnicas de desinfección o
esterilización.
Detallaremos los casos concretos de instrumental (metálico o de vidrio), especificando
de forma separada el proceso a seguir con las pipetas de vidrio contaminadas y material que
contenga medios de cultivo inoculados y pipetas

9 Instrumental metálico

1º Se separa el material de uso séptico del de uso aséptico. Se destruyen los

microorganismos, teniendo la precaución de no dejar material metálico en
disoluciones acuosas durante mucho tiempo.
2º Se limpia el instrumento, primero con agua fría, ya que el calor hace que muchos de
los residuos, por ejemplo pus y sangre, se adhieran más.
3º Se lava con agua caliente y jabón procurando frotar bien los sitios más angulosos.
4º. Se seca.
5º Se protege si es necesario.
6º Se guarda o se pasa previamente a la desinfección o esterilización.

9 Pipetas:

Autoclave ÷ lavador de pipetas ÷ enjuagar ÷ estufa ÷ vitrina.

Se han de quitar los tapones antes de introducirlas en el lavador de pipetas.

9 Material que contenga medios de cultivos inoculados: esterilización previa a la limpieza;

una vez estéril eliminar el medio de cultivo y proceder al lavado del material con agua y
jabón, enjuagado y secado. Ej.: tubos de ensayo con medios de cultivo inoculados.

verter el contenido al fregadero directamente (m.c. líquido)

Autoclave verter el contenido en un barreño con agua (m.c. solido) limpiar con
con agua y jabón

enjuagar

secar

vitrina.

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2.- 3 Material desechable contaminado: este material se adquiere estéril y se emplea una
sóla vez, siendo posteriormente desechado(jeringas, guantes, placas de petri utilizadas, ...):
esterilización en contenedores apropiados previa a su eliminación.

Veremos dos ejemplos de este tipo de material:

9 Placas de petri desechables que contengan medios de cultivo inoculados: una vez
terminada su utilización, se suelen introducir en bolsas adecuadas, las cuales se esterilizarán
en el autoclave y posteriormente se tirarán. En los laboratorios con alto volumen de
muestras se introducen en contenedores especiales que son retirados por empresas
especializadas.

9 Material punzante y/o cortante: se deposita en recipientes especiales resistentes a la

punción y dentro de estos recipientes se somete a esterilización bien en el propio laboratorio o
bien a través de empresas especializadas.

3.- 3 Material de vidrio no contaminado:

1º Limpieza con agua y jabón.

2º Enjuagado (último enjuagado con agua destilada) y secado a 601C. Posteriormente
se introduce en horno si se necesitara estéril.

4.- 3 Mesas de trabajo:

Después de cada clase, o al finalizar un turno de trabajo y siempre que se manipule

material contaminado o posiblemente contaminado, se debe descontaminar, utilizándose
habitualmente lejía con esta finalidad.

4.- ORGANIZACIÓN DE UN LABORATORIO DE MICROBIOLOGÍA CLÍNICA

La organización de un laboratorio de microbiología clínica depende de numerosos

factores: del espacio y personal disponible, del número de muestras que en él se procesan y
las características de las mismas, de las técnicas que estén montadas , de si es puramente de
asistencia, de referencia o en él se realiza investigación, etc.

En cualquier caso y desde un punto de vista del personal, los responsables son
facultativos especialistas en microbiología, que directamente o a través de supervisores
organiza el trabajo de los técnicos de laboratorio.

El laboratorio de microbiología debe instalarse en una zona aislada , sin circulación de

personas ajenas y, en hospitales, con sistema de aire independiente.

Podemos encontrar desde laboratorios pequeños en los cuales la Microbiología no

está claramente diferenciada, en su ubicación física, de otras áreas (Hematología, Bioquímica,
etc..) hasta aquellos en los que existen numerosas secciones especializadas. Así nos podemos
encontrar:

I. Sección de Toma de muestras: destinada a obtención de muestras de pacientes

ambulatorios (en el caso de pacientes hospitalizados, las muestras se suelen tomar en
la planta). En esta sección debe existir un lavabo. Las muestras de sangre se extraen en
el área común de extracciones del laboratorio.

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II. Sección de recepción y registro de muestras: en él se reciben todas las muestras,

independientemente del lugar donde se obtuvieron. Entre la recepción y el procesado
debe transcurrir el menor tiempo posible. Es imprescindible el correcto registro y
marcaje de todas la muestras. Actualmente las muestras van identificadas además de
con el nombre del paciente con un código de barras y los datos del paciente se
introducen en un ordenador. Incluso las muestras que llegan de Centros de Salud van
acompañadas de disquetes con los datos correspondientes a las muestras enviadas.
En esta sección se preparan también los informes definitivos con los resultados,
previo registro de los informes emitidos y validados en cada sección.

III. Almacén, servicios, sala de estar, secretaría: deberían estar fuera del
laboratorio propiamente dicho.

IV. Sección de siembra de muestras: en ella se realizan las siembras en los

distintos medios de cultivo.

V. Sección de medios de cultivo, reactivos, colorantes, disoluciones, etc...: en ella se

preparan los medios de cultivo reactivos, etc... para su posterior utilización.

VI. Cámaras frigoríficas y de incubación: en los laboratorios con un gran

volumen de trabajo resultan insuficientes los frigoríficos y las estufas convencionales
por lo que se instalan habitaciones acondicionadas para estos fines.

VII. Sección de bacteriología: en esta sección se interpretan los cultivos, las

tinciones y otras técnicas, realizándose la identificación y las pruebas de sensibilidad
de los microorganismos.

VIII. Sección de micobacterias: es una sección aparte debido al riesgo de

contaminación. Su acceso está restringido.

IX. Sección de micología: para aislamiento e identificación de hongos patógenos.

X. Sección de antibióticos: en esta sección de llevan a cabo técnicas de sensibilidad

antimicrobiana y estudios epidemiológicos.

Las secciones de micología y antibióticos suelen estar integradas en la de

bacteriología.

XI. Sección de serología o inmunomicrobiología: en ella se desarrollan técnicas

de detección de anticuerpos y antígenos en sueros y otras muestras.

XII. Sección de biología molecular.

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