UNIVERSIDAD DEL ATLÄNTICO

FACULTAD DE CIENCIAS BÁSICAS

GUIA # 3: OBSERVACIÓN DE CORPÚSCULO DE BARR A PARTIR DE MUCOSA BUCAL

❖ JUSTIFICACIÓN

Cada organismo funciona de forma específica lo que depende en gran medida de la expresión de s
u material genético, que se estructura en forma de cromosomas que cargan los genes responsabili
zados de todas esas manifestaciones fenotípicas, por lo tanto es importante que todo ese conteni
do genómico se preserve y no sufra alteraciones. Dentro de todo el conjunto cromosómico se enc
uentran aquellos que contienen los genes responsabilizados entre otras cosas de los caracteres de
diferenciación sexual propios de un macho o una hembra, por ejemplo en la especie humana el ho
mbre es genotipo XY y la mujer XX, en el caso de esta última los dos cromosomas no se expresan si
multáneamente, entonces alguno de los dos se inactiva permitiendo un equilibrio en la expresión
de la carga génica característica del X para el normal desarrollo de dicho sexo. Por eso se consider
a fundamental revisar en esta técnica la heterocromatina correspondiente al corpúsculo de Barr o
X inactivo como un marcador diferencial de la mujer respecto al hombre.

❖ MARCO TEÓRICO

Hacia el año 1949 el señor Murray Barr, logra observar por vez primera la cromatina de forma con
densada en los núcleos celulares de gatos hembras, estructuras que fueron denominadas Corpúsc
ulo de Barr en su nombre. Posteriormente Mary Lyon indica que es correspondiente a la heretocro
matina propia del cromosoma x inactivo, situación que conduce a que en mamíferos placentarios l
a hembras sean de carácter hemicigota y en el caso de la heterocigosidad aproximadamente el 50
% de las células expresa un alelo y el otro 50% el otro alelo. La desactivación ocurre de forma aleat
oria durante las primeras etapas del desarrollo embrionario, generándose un patrón de expresión
en parches tipo mosaico para una característica ligada al X, sin embargo se puede presentar otra lí
nea celular por presentar activo el otro X.

❖ OBJETIVO GENERAL

Identificar corpúsculos de Barr en muestras de células de mucosa bucal para relacionarlo con la cr
omatina condensada según el sexo mediante tinción Wright

❖ OBJETIVOS ESPECIFICOS

Identificar la ubicación específica de la cromatina de Barr en las células de mucosa bucal.

Identificar a través del microscopio la presencia de la cromatina inactiva en muestras de mujeres.

Examinar la presencialidad del corpúsculo de Barr en la muestra de hombre

❖ MATERIALES:

Baja lengua estéril

colorante Wright

Aceite de inmersión

Microscopio

Porta y cubreobjetos,

Matraz de 25 ml

Agua destilada

Alcohol Etílico al 70%

Probeta

Mechero

❖ PROCEDIMIENTO:

Marca un portaobjetos con la leyenda Hombre y otro con la leyenda Mujer

Una estudiante y un estudiante(hombre) enjuagan la boca varias veces con agua y proceden a rasp
ar la mucosa interna de la mejilla utilizando un bajalenguas.

Coloca el raspado en el portaobjetos según corresponda

Evapora cuidadosamente hasta secar, para ello flamea utilizando el mechero

Agrega dos gotas de colorante Wright y deja actuar por 5 minutos

Realiza un lavado a la muestra cuidadosamente durante 3 minutos con etanol al 70%

Realiza un segundo lavado ahora con etanol al 50%

Finalmente observa al microscopio en 40X y 100X.

❖ PREGUNTAS.

1.Imágen(evidencia) del corpúsulo de Barr observado a partir de tu muestra

2.Cómo se relaciona la herencia ligada al sexo de carácter recesivo con los cuerpos de Barr?

La inactivación del cromosoma X tiene otras implicaciones genéticas. Una de ellas es que las mujer
es que son heterocigotas para algún locus situado en el cromosoma X presentan dos poblaciones c
elulares atendiendo a qué cromosoma X esté activo. A este fenómeno se le denomina mosaicismo.
Aquellos loci que se presenten en heterocigosis en el cromosoma X, expresarán distintos fenotipos
en cada una de las poblaciones celulares aludidas ya que sólo un alelo estará activo en cada célula.
Un ejemplo de este fenómeno lo tenemos en relación con la distrofia muscular de Dechenne. Esta
enfermedad es debida a un alelo recesivo situado sobre el

cromosoma X, por tanto, las mujeres heterocigotas no padecen la enfermedad, sin embargo, s
us células musculares, debido a la inactivación al azar de un cromosoma X, se presentan en mo
saico, unas están afectadas y otras no.
3. En las muestras de hombre y mujer observadas en cuantas células aproximadamente identificas
te corpúsculo de Barr?

4. ¿Qué representa el corpúsculo de Barr en las mujeres?

De acuerdo con la hipótesis de Lyon en 1966, uno de los dos cromosomas X en cada célula somá
tica femenina es genéticamente inactivo. El corpúsculo de Barr representa el cromosma X inacti
vo.

5. ¿Qué ocurre con los genes que se ubican en el corpúsculo de Barr?

En el proceso de inactivación en cualquiera de los cromosomas X que se encuentren en la célula,

se necesita de un segmento específico del cromosoma X: el Centro de Inactivación del X (XIC). E
sta región se localiza en: Xq13 donde encontramos genes específicos para este proceso.

El XIC contiene los siguientes genes:

XIST: Este gen es el más importante, sin él no ocurre la inactivación. Su función es la transcripció
n de varios RNAs que no generan proteínas, sino se mantienen en el núcleo comenzando la inac
tivación al cubrir al cromosoma que se va a inactivar.

TSIX: Este gen se encuentra en la cadena de ADN y es complementaria del gen XIST. Su función c
onsiste en silenciar el gen XIST y la selección del cromosoma que se inactivará.

Xite: Este gen potencía las funciones del gen TSIX.

DXPas34: Es una región reguladora del gen TSIX y participa en la selección del cromosoma para l
a inactivación.

Xce: Esta región participa en la selección del cromosoma que se va a inactivar.

Xpr: Es el sitio de apareamiento de los dos cromosomas X de la célula antes de la iniciación.

6.Indica cuántos corpúsculos de Barr se observan en individuos con los siguientes genotipos:

46, XX 45, X0 47, XXY

46, XY 47, XXX

7. De qué forma se lleva a cabo la inactivación del corpúsculo de Barr? Explica

 En el desarrollo temprano del embrión, se inactivará uno de los cromosomas X, este proceso se
divide en tres fases: la iniciación, la dispersión y el mantenimiento. La iniciación consta en la ele
cción del cromosoma que se inactivará y la expresión del gen XIST. Para iniciar este proceso, se
debe contar el número de cromosomas que se encuentran en la célula, en este caso, siguiendo l
a regla del número de X menos uno, se determinará la cantidad de cromosomas que serán inacti
vados. Después de conocer la cantidad que se inactivará, se hace énfasis en la hipótesis de Lyon,
donde declara que la inactivación del cromosoma X será aleatoria. En esta fase, ocurre el aparea
miento de varias regiones del XIC, como son Xpr, Xce, TSIX, DXPas34 y Xite, que por algún meca
nismo, escogen cuál de los cromosomas será inactivado.Simultáneamente, el gen XIST se activa,
sin causar efecto alguno en ambos cromosomas; al instante en que finaliza la selección, el gen XI
ST de un cromosoma se inhibe y en el otro cromosoma comienza a transcribirse en mayor canti
dad. Mientras la cantidad de ARNs de XIST aumenta, este se expande a lo largo de todo el crom
osoma tomando una ruta del XIC en la periferia del cromosoma. Aunque el cromosoma ya cubie
rto por los ARNs, el gen XIST se encuentrainactivo, este no se mantiene silenciado por completo,
para esto, tienen que suceder mecanismos epigenéticos, que son principalmente la metilación y
la desacetilación de las histonas, así como la acción de promotores génicos y otros factores que
tendrán como resultado la imposibilidad de queel ADN sea transcrito. Recordemos que la acetil
ación y la desmetilación de las histonas activarán el ADN, mientras que la metilación y la desace
tilación la inhibirán. Hay que resaltar que el proceso deinactivación no silencia por completo al c
romosoma, por lo cual hay aproximadamente un 15% de genes que se mantendrán activos. Esto
s genes son homólogos a los que encontramos en el cromosoma Y, esto permite un balance de l
os genes de ambos sexos y que cada uno contenga la misma cantidad de material genético funci
onal

8. ¿Qué tipo de modificaciones se presentan en las Histonas H3, H2A y en las islas CpG para favore
cer la inactivación del X?

Luego de la cobertura con el ARN de XIST, el X inactivo prosigue con una serie de modificaciones d
e la cromatina tales como desmetilación de la histona H3 en la lisina 4 (H3-K4), metilación de la his
tona H3 en la lisina 9 (H3-K9) y metilación de la histona H3 en la lisina 27 (H3-K27). Estas modificac
iones en la histona H3 no son suficientes por lo cual también se manifiesta la replicación asíncrónic
a del ADN, se hipoacetilan las histonas H4, se reclutan proteínas Polycomb, HP1 y la variante de la
histona H2, Macro H2A. Las modificaciones a las histonas inician el proceso irreversible de inactiva
ción del cromosoma X en las células embrionarias. Se han encontrado diferencias entre especies e
n las modificaciones de histonas que contribuyen al silenciamiento transcripcional, por ejemplo la
trimetilación de la lisina 9 en la histona H3 (H3 K9 me3) se observa en el cromosoma Xi en humano
s pero no en ratón, al igual que la trimetilación sobre la lisina 20 en la histona H4 (H4 K20 me3)(10,
58). Por último, se metilan regiones promotoras de un gran número de genes en el cromosoma.

En el Xi la metilación es uno de los eventos tardíos pero no menos importante, ya que está relacio
nado con el mantenimiento de la inactivación. Los promotores de los genes sobre el Xi están hiper
metilados comparados con los del Xa, al igual que los de aquellos genes que escapan de la inactiva
ción. En el Xa el promotor de XIST se encuentra metilado a diferencia del Xi donde la hipometilació
n garantiza su expresión. La metilación del ADN se ha asociado más al mantenimiento del proceso
de inactivación en las divisiones celulares somáticas que al proceso de inicio del silenciamiento gé
nico. Experimentos demuestran que en ausencia de las enzimas ADN metiltransferasas, se expresa
adecuadamente XIST y el proceso de inactivación se lleva a cabo, pero pueden ocurrir reactivación
de genes en el Xi en etapas posteriores. La metilación como regulador negativo de la expresión gé
nica se divisa más a nivel génico individual, ya que se encuentran promotores de genes metilados s
obre el Xa y no metilados en el Xi. Adicionalmente al comparar de manera global, el Xi es hipometil
ado comparado con el Xa.

BIBLIOGRAFÍA

Pierce, B.,(2015). Genética un enfoque conceptual. 5ta Ed. Editorial Panamericana. 766p.

Klug, W., Cummings M.,(2013). Conceptos de Genética. 10ª edición. Editorial Pearson. 986p.