La cromatografía de capa fina es una técnica simple y económica ampliamente utilizada para el

análisis cualitativo de mezclas de compuestos orgánicos.

La técnica se basa en la separación de las sustancias que componen una mezcla cuando
migran sobre una capa de adsorbente depositado sobre una placa cromatografica al ser
arrastradas por un eluyente

La separación de las sustancias se logra por exposición de las mismas a un sistema bifásico que
se deja llegar al equilibrio

Está compuesto por una fase estacionaria denominada adsorbente y por una fase móvil
denominada eluyente que se encarga de disolver y desplazar a las sustancias sobre el
adsorbente

Los adsorbentes más comúnmente utilizados son la alúmina o la gel de sílice, se depositan en
forma de capa delgada sobre una placa o lamina inerte de diferentes materiales como el
vidrio, plástico o el aluminio

El orden en el que se eluirán los compuestos es inmerso a su polaridad, las sustancias más
polares con mayor capacidad de unión al adsorbente tenderán a aparecer en la parte baja de
la placa, mientras que las sustancias menos polares se moverán más rápidamente sobre ella y
tenderán a aparecer en la parte superior de la misma

Los pasos a seguir en la realización de una cromatografía en capa fina son los siguientes:

1-preparacion de la capa cromatografica, se debe recortar a un tamaño adecuado según el

número de muestras que se desea aplicar, se utiliza una cuchilla y el corte debe hacerse por el
lado contrario a donde se encuentra el adsorbente

2- después se debe marcar suavemente con un lápiz para no dañar al adsorbente una línea
recta a un centímetro del borde inferior de la placa y señalar suavemente los puntos donde se
van a aplicar las distintas muestras, teniendo en cuenta que cada punto debe estar separado
por al menos 0,5 cm dejando 1 cm de distancia desde las aplicaciones laterales hasta el borde
de la placa

3- después hay que elegir el eluyente adecuado, para esto se toma una placa cromatografica y
se hace una línea horizontal en la cual se marcan varios puntos de aplicación separados por al
menos 1 cm

4- sobre cada punto se aplica con un capilar de vidrio la muestra (mezcla) con cuidado en cada
punto para la prueba
5- ahora se aplica sobre cada punto de muestra un tipo de eluyente entre los que se desea
probar

6- colocar en luz ultravioleta para visualizar los resultados; en estos se debe ver cual tiene
mejores condiciones de elución, atendiendo al siguiente criterio: POCO POLAR SI NO DESPLAZA
LA MUESTRA BIEN DESDE EL PUNTO DE APLICACIÓN, POLARIDAD SUFICIENTE SI LO DESPLAZA
DE MANERA CORRECTA LO CUAL SERA ADECUADO PARA REALIZAR LA CROMATOGRAFIA EN
CAPA FINA, DEMASIADO POLAR SI DESPLAZA LA SUSTANCIA DEMASIADO

7. Después de comprobar que eluyente se debe utilizar, se agrega la muestra con un capilar
limpio a la placa ya preparada anteriormente

8- se agrega a un beaker eluyente elegido previamente, cantidad necesaria de la placa que no

pase el cm marcado

9-se introduce un trozo de papel de filtro y se rodea con el eluyente por todos en donde esta el
papel de filtro,

10-una vez hecho esto, se introduce la placa cromatografica en el beaker apoyándola en el

papel de filtro, se debe asegurar que el eluyente este en el centímetro de la placa
cromatografica

11- dejar unos segundos para que el eluyente suba por la placa cromatografica sin dejar que
llegue al inicio de la parte superior de la placa cromatografica

12-se saca la placa cromatografica del beaker y se marca con un lápiz la línea hasta donde llego
el eluyente

13- se seca la placa al aire o con ayuda de una estufa dejando que se evapore todo el eluyente

14- tras la evaporación del eluyente si las sustancias diluidas son coloreadas la visualización de
sus manchas sobre la placa es directa, en caso de que no sean coloreadas la placa
cromatografica se vera blanca y habrá que usar una lámpara ultravioleta para revelar las
manchas correspondientes

15-se utiliza un agente revelador sumergiendo toda la placa cromatografica en este, puede ser
KMNO4

16-calentar en una estufa a 110ºc la placa cromatografica llena del agente revelador durante al
menos 10 min

17- si se ha escogido el revelador adecuado se verán las manchas correspondientes que quiere
visualizarse

18- una vez detectadas las manchas se deberán circulear con lápiz para tenerlas localizadas
sobre la placa y así poder determinar el Rf de cada sustancia

Ahora realizar la cromatografía en columna

-Se debe realizar el montaje de cromatografía de columna colocando la columna en un soporte
universal con una prensa universal, el tamaño de la columna debe ser adecuado a la cantidad
de mezcla que se desea separar

-debe situarse la columna a una altura tal que se pueda colocar un matraz Erlenmeyer debajo
de esta

-debe verificarse que la llave de paso de la columna este suficientemente apretado y cerrado
para evitar fugas de liquido

-se toma una pequeña porción de algodón y se le da forma de galleta para ser introducido en
la columna, no debe compactarse en forma de bola para no impedir el paso del eluyente

- se deja caer la galleta de algodón en el fondo de la columna, situándola con una varilla larga
de vidrio, debe tenerse cuidado que no quede posicionada en el vástago

-una vez situada la galleta se debe agregar a la columna con un embudo arena de mar de
manera que entre el algodón y la lleguen a la parte de la columna de máximo diámetro

- se prepara en un beaker una suspensión espesa del adsorbente en el eluyente y se añade

suavemente a través del embudo

- se deja que se asiente en poco tiempo y se abre la llave para que salga el exceso de eluyente
para asegurar un empaquetamiento uniforme del adsorbente

- a medida de que desciende el nivel de eluyente se debe añadir pequeñas porciones del
mismo para despegar las posibles porciones de eluyente que hayan quedado en las paredes de
la columna

Nota: es crucial que el adsorbente que se va empaquetando en la columna nunca se quede

seco ya que se crearían canales y burbujas de aire provocando una pobre separación de la
mezcla a separar

-una vez que todo el adsorbente esta empaquetado en la columna y cubierto por el eluyente
se añade cuidadosamente a través del embudo de solidos arena de mar hasta alcanzar
aproximadamente un cm de altura sobre el adsorbente

- con ayuda de la pipeta y la Propipeta se deposita la mezcla a separar por encima de la arena
previamente agregada, teniendo gran cuidado de no crear cráteres en el adsorbente ni salpicar
las paredes de la columna de vidrio o la mezcla de compuestos que se desea separar

-una vez depositada la mezcla sobre el adsorbente se abre la llave para que esta penetre en la
alúmina y se cierra en cuanto el nivel de la mezcla alcanza la interfaz entre la arena y la parte
superior del adsorbente

- se limpia la pipeta y se añade una pequeña porción de eluyente igual al volumen de mezcla
que se añadió anteriormente

-se abre la llave de la columna dejando que el nivel de eluyente descienda hacia la interfaz
arena adsorbente prestando atención a que nunca se se seque el adsorbente
-repetir la operación agregando pequeñas porciones de eluyente 3 o 4 veces para asegurarse
de que la mezcla queda adsorbida en el interior de la columna del adsorbente

- una vez adsorbida la mezcla de compuestos que se desea separar se llena la columna con el
eluyente con gran cantidad hasta alcanzar cierta altura (llena completamente)

- una vez llena se comienza a recoger abriendo la llave en un matraz Erlenmeyer identificado
con el número cero

-se recoge el volumen de la fase estacionaria (hasta el segundo piso de arena) en este matraz
cero

-ahora comenzar a recoger pequeñas porciones (4 o 5 ml) de la fase móvil en matraces

Erlenmeyer identificados de 1 en 1 hasta recoger por completo en los Erlenmeyer la fase móvil
de la columna

-ahora realizar cromatografía de capa fina con cada uno de los contenidos en los matraces
verificando cual es el que tiene más concentrado el producto de acuerdo a la mejor fase móvil

- Luego de tener el compuesto más concentrado se debe realizar recristalización para obtener
el compuesto puro y posteriormente determinar el punto de fusión para identificar el
compuesto