1) Investigue y describa el procedimiento (justificando cada paso crítico de la metodología) que se lleva a cabo

en el artículo: An Improved Method for the Extraction and Thin-Layer Chromatography of Chlorophyll a and b
from Spinach.

Responda a las siguientes preguntas

a) Para el simulador (numeral 4), coloque la captura de pantalla de lo obtenido para cada una de las
concentraciones y realice una explicación de cada uno de los experimentos.

Las fase móvil de 100% hexano, al presentar baja polaridad no tiene la capacidad de desplazar ninguna de las
moléculas, mientras que la fase móvil del disolvente #2 al ser muy polar desplaza por completo ambas moléculas,
sin importar su polaridad.

La fase móvil al presentar ligeramente polaridad tiene la capacidad de separar las dos moléculas, aún así la
mientras queda muy por debajo de lo esperado, otorgando un factor de retardado menor para ambas sustancias,
mientras que en la fase móvil del disolvente #2 el factor de retardado es muy cercano a 1 para la molécula menos
polar, que se ve atraída por el disolvente más polar.
Al presentar una mezcla de 50% de ambas sustancias, la polaridad que presenta es la necesaria para realizar el
experimento, la molécula más polar será la primera en adherirse por la interacción de las fuerzas intermoleculares,
mientras que la menos polar se verá atraída por la parte polar de los disolventes, subiendo aún más, los factores
de retardado serán los óptimos en esté experimento.

b) Compare lo obtenido del segundo link de la cromatografía de papel (numeral 2) y lo obtenido en el artículo:
An Improved Method for the Extraction and Thin-Layer Chromatography of Chlorophyll a and b from Spinach.
Explique en qué difiere y por qué los resultados obtenidos para espinaca fresca.

Los pigmentos obtenidos en el experimento del segundo link y la espinaca fresca en el articulo leído son
similares, difieren principalmente por sus factores de retardo, en la espinaca fresca del articulo los pigmentos se
resisten a subir en la columna de refracción, puede deberse a la diferencia de polaridad que existe entre la fase
móvil utilizada en distintos experimentos, la del segundo video es más adecuada, una mezcla de acetona con
alcohol que para el experimento que la utilizada en el articulo.

c) Explique la diferencia entre los resultados obtenidos para la espinaca fresca y la congelada, según el
artículoAn Improved Method for the Extraction and Thin-Layer Chromatography of Chlorophyll a and b from
Spinach.

Las impurezas de agua presentes en las muestras presentes en las sustancias forman distintos compuestos que
pueden afectar el factor de retardo, las muestras que llevan mucho tiempo resguardadas tienen a perder su ion de
magnesio, además la adhesión a la fase estacionaria se resiste más en la espinaca congelada que en la fresca,
debido a que las moléculas presentes se encuentran concentradas de manera más uniforme, es decir en un mismo
espacio se pueden encontrar moléculas mas empaquetadas.

e) Para la cromatografía de columna (numeral 5) Explique cada uno de los cuidados que se deben tener durante
la preparación de la columna y durante la extracción, realice una tabla explicado cada uno de los puntos de la
metodología y resultados.
Paso Acciones Cuidados
Colocación de la columna Armar el sistemas, colocando la El tamaño de la columna debe ser
columna en un soporte universal adecuada
Colocar un matraz El matraz recolectará las muestras Colocar el matraz a una altura
obtenidas y deberá ser cambiado adecuada, verificar que el volumen
mientras está pasa por sus distintas coincida con el deseado a obtener
fases.
Apretar llave de la columna Rotar la llave de la columna para Apretarla fuerte para evitar fugas.
que no pase la muestra antes o
después de colocar los matraces
 Introducir lana de vidrio
Colocar arena de mar
Preparar suspensión del
adsorbente
Se coloca arena de mar
Depositar la muestra de
compuestos a separar
Abrir la llave
Añadir eluyente
Abrir la llave
Repetir la operación anterior
Llenar la columna de eluyente
Abrir la llave y recoger el eluyente
Aplanarla en forma de bola, No hacerlo en forma de bola, esto
colocarla en la parte de abajo con evita que el líquido pase, no
la ayuda de una varilla de vidrió colocarlo en el estrechamiento de
la columna ni dejar que se acerque
a la llave de paso
Utilizando un embudo, introducir La altura debe ser desde la galleta
una pequeña cantidad de arena de de lana hasta la parte mayor del
mar diámetro de la columna
Se coloca a través del embudo, en Liberar el exceso abriendo la llave,
la torre, se coloca más diluyente no dejar que el adsorbente se
para que el adsorbente se seque
empaquete mejor
Esta debe estar un centímetro por No superar ni exceder la cantidad
arriba del adsorbente de arena
Con la pipeta y el espira dor de Ser extremadamente cuidadosos
pipetas se colocar en la parte de en que la mezcla no cree bombas
arriba del estacionario la mezcla de aire o caiga sobre las paredes
que se desea separar
Dejar que salga por la lumina una
cantidad de solución del
adsorbente, hasta que la mezcla
que se desee separar este al nivel
de la arena
Se añade eluyente, la misma
cantidad de colorante o mezcla de
la sustancia que se desea separar
Dejar que salga el líquido Ser cuidadoso en que nunca se
adsorbente hasta que el eluyente seque el adsorbente
llegue al nivel de la arena-
adsorbente
Hasta que se diluya la mezcla que
se desea separar
Luego de que se diluya por
completo la mezcla que se desea
separar se coloca eluyente hasta
llenar la torre
Recoger un volumen equivalente Verificar que los colores de la
al volumen muerto de la sustancia muestra se separen

f) Para la cromatografía de columna, indique de qué dependerá el largo de la columna.

De la cantidad de muestra que se desea separar

g) Proponga un procedimiento si en el laboratorio donde labora llega una muestra que se cree contiene un
pigmento prohibido por las autoridades sanitarias, usted cuenta con solventes y estándares para el desarrollo de
la investigación (realice un diagrama de flujo del procedimiento y una tabla con la justificación para cada paso).