“UNIVERSIDAD NACIONAL MAYOR DE SAN MARCOS”

(Universidad del Perú, Decana de América)

FACULTAD DE MEDICINA

ESCUELA DE TECNOLOGÍA MÉDICA

TEMA:

Factores que influyen en la actividad enzimática

CURSO:

Bioquímica y Nutrición
DOCENTE:

Yésica Llimpe Mitma

ALUMNOS SUBGRUPO 1A:

Aguirre Palomino, Elder Jefferson

Cajavilca Ordoñez, Alison Nayeli
Contreras Tamani, Josheph Abdul
Figueroa Yzaguirre, Maria Angelli
Garcia Mori, Alexandra Romina

LIMA - PERÚ

2022
 ÍNDICE

ÍNDICE 2

Objetivo de la práctica 3

Datos de la práctica 3
Materiales y Procedimientos (efecto de la T°) 3
Materiales y Procedimientos (efecto del pH) 3

Desarrollo de los cálculos 3

Efecto de la Temperatura 3
Efecto del pH 3

Interpretación de los resultados 3

Valores Referenciales 3
Cuestionario 3
Graficar en papel milimetrado: Actividad enzimática vs. Temperatura 3
Graficar en papel milimetrado: Actividad enzimática vs. pH 3
Graficar en papel milimetrado: Determinación del pH óptimo en las condiciones de
reacción 3

Referencias Bibliográficas 3

Anexos 3

1. Objetivo de la práctica / Datos de la práctica / Desarrollo de los cálculos (Efecto de la

temperatura)
2. Desarrollo de cálculos (Efecto del pH)
3. Graficar en papel milimetrado: Actividad enzimática vs. Temperatura
4. Graficar en papel milimetrado: Actividad enzimática vs. pH
5. Graficar en papel milimetrado: Determinación del pH óptimo en las condiciones de
reacción
** En valores referenciales se debe de poner los datos que nos dio el otro subgrupo
Objetivo de la práctica
● Explicar la actividad enzimática y sus formas de expresión
● Explicar los diversos factores que modifican la actividad enzimática
● Describir los efectos de la temperatura en la actividad enzimática de la pepsina
● Determinación de la temperatura óptima para la actividad de la pepsina.
● Describir los efectos del pH en la actividad enzimática de la pepsina
● Determinación del pH óptimo para la actividad enzimática de la pepsina es máxima.

Datos de la práctica
Para la práctica se utilizará como enzima a la pepsina y como sustrato de esa
enzima a la albúmina de huevo. En la siguiente práctica estudiaremos el efecto que el pH y
la temperatura ejercen sobre la actividad de la enzima pepsina.
El subgrupo 1A realizó el procedimiento de los efectos de la Temperatura

Materiales y Procedimientos (efecto de la T°)

Materiales

- 7 tubos de ensayo (1a, 2a, 3a, 1b, 2b, 3b y B)

- Agua (H2O)
- Ácido Clorhídrico 1N (HCl 1N)
- Albúmina 50 mg%
- Propipeta
- Pipeta graduada
- Gradilla

Procedimientos

1. Con uso de la pipeta graduada y la 2. Con uso de la pipeta graduada y la

propipeta colocar 3.5 ml de H2O en propipeta colocar 0.5 ml de HCl 1N
los tubos “a” y 4 ml en el tubo “B” en los tubos “a”

3. Con uso de la pipeta graduada y la 4. Con uso de la pipeta graduada y la

propipeta colocar 5 ml de albúmina propipeta colocar 1 ml de pepsina
50 mg% en los tubos “a” y “B” 1% en los tubos “b”
5. Incubar los tubos 1a y 1b por 5
minutos en hielo (refrigerador).

Incubar los tubos 2a, 2b y 3a por 5

minutos a 37°C (baño María).

Incubar el tubo 3b por 5 minutos a

100 °C

6. Agregar lo contenidos de los tubos 7. Leer las absorbancias de cada tubo

“a” a los tubos “b” y volver a incubar a 440 nm al espectrofotómetro.
durante 5 min
Materiales y Procedimientos (efecto del pH)

Materiales

- 7 tubos de ensayo (1a, 2a, 3a, 1b, 2b, 3b y B)

- Agua (H2O)
- Ácido Clorhídrico 1N (HCl 1N)
- Ácido Clorhídrico 0.1N (HCl 0.1N)
- Albúmina 50 mg%
- Propipeta
- Pipeta graduada
- Gradilla

Procedimientos

Tubo N° 1 2 3 4 5 6 7

1. Con uso de la pipeta 0 2 3.6 3.9 3 3.9 4.6

graduada y la propipeta
colocar ml H2O

2. Con uso de la pipeta 4.0 2.0 0.4 0.1 – – 0.4

graduada y la propipeta
colocar ml

3. Con uso de la pipeta – – – – 1.0 0.1 –

graduada y la propipeta
colocar ml

4. Con uso de la pipeta 5 5 5 5 5 5 5

graduada y la propipeta
colocar ml

5. Añadir 1 ml de pepsina a los tubos 1, 2, 3, 4, 5 y 6, mezclar e incubar a 37 °C por

10 minutos.

6. Transcurrido el tiempo de reacción en cada tubo leer a 440 nm.

Desarrollo de los cálculos

Efecto de la Temperatura
- Lectura de las absorbancias

Tubos N° 1a y 1b 2a y 2b 3a y 3b Blanco

Absorbancias 0.091 0.058 0.410 0.640

Blanco → Absorbancia inicial (Abs (i))

- Actividad Enzimática

Act. Enz. = Δ Abs = Abs (i) - Abs (tubo N°)

● Tubos 1a y 1b (hielo)
Act. Enz. = Abs(i) - Abs (tubo N°1) = 0.640 - 0.091
Act. Enz. = 0.549

● Tubos 2a y 2b (37°C)
Act. Enz. = Abs(i) - Abs (tubo N°1) = 0.640 - 0.058
Act. Enz. = 0. 582

● Tubos 3a y 3b (100°C)
Act. Enz. = Abs(i) - Abs (tubo N°1) = 0.640 - 0.410
Act. Enz. = 0.23

Efecto del pH
- Datos:
Tubo Nº 1 2 3 4 5 6 7(B)

3,6 3,9 3,9 4

ml H2O 0 2 3 ,
6

4.0 2,0 0,4 0,1 0

ml HCl 1N - - ,
4

ml HCl 0,1N - - - - 1.0 0,1 -

 ml albúmina 5 5 5 5 5 5 5
50 mg%

pH - -

Calculo de Ph en los tubos menos en T7(Blanco)

Formula: Ph= -Log[ ]

● pHT1=0.39
● pHT2=0.69
● pHT3=1.39
● pHT4=2
● pHT5=2
● pHT6=3

Absorbancias de los tubos luego de pasarlos por el espectrofotómetro

● T1= 0,572
● T2= 0,465
● T3= 0,045
● T4= 0,347
● T5= 0,305
● T6= 0,392
● T7(B)= 0,661

Cálculo de la actividad enzimática

Fórmula: Act. Ez=Δ Abs= Absi(Blanco) - Abs fi(Tubo n°)

● Act. Ez(T1)= 0,661 - 0,572= 0,089

● Act. Ez(T2)= 0,661 - 0,465= 0,196
● Act. Ez(T3)= 0,661 - 0,045= 0,616
● Act. Ez(T4)= 0,661 - 0,347= 0,314
● Act. Ez(T5)= 0,661 - 0,305= 0,356
● Act. Ez(T6)= 0,661 - 0,392= 0,269
Interpretación de los resultados

Cuestionario

Graficar en papel milimetrado: Actividad enzimática vs. Temperatura

Podemos observar en esta curva que las enzimas son muy sensibles a la temperatura. A
bajas temperaturas, la mayor parte de las enzimas muestra poca actividad porque no hay
suficiente cantidad de energía para que tenga lugar la reacción catalizada. A temperaturas
más altas, la actividad enzimática aumenta a medida que las moléculas reactantes se
mueven más rápido para generar más colisiones con las enzimas. La mayoría de las
enzimas humanas son más activas a temperatura óptima, que es de 37°C, o temperatura
corporal. En este caso la temperatura óptima en la que trabaja esta enzima pepsina es de
37 °C y vemos que a una baja temperatura su actividad enzimática es menor, y si está a
una temperatura de 100°C su actividad enzimática es mucho más baja, por lo tanto la
enzima no va a desenvolver su función de manera correcta o mejor dicho esta se va a
desnaturalizar (1).
 Graficar en papel milimetrado: Actividad enzimática vs. pH

Determinación del pH óptimo en las condiciones de reacción

ACTIVIDAD ENZIMÁTICA VS pH

Por último se puede observar otros de los factores que influyen en la actividad enzimática como el pH, cada
enzima tiene un rango óptimo de pH. Cambiar el pH fuera de este rango hará más lenta la actividad de la
enzima. Valores de pH extremos pueden causar la desnaturalización de la enzima (2). En la gráfica, se plasma la
actividad enzimática dependiente del pH, vemos que donde existe una mayor cantidad de actividad enzimática
(0.616) es en el pH de 1.3979, por lo tanto este sería el pH óptimo para la reacción de degradación de la
albúmina, dada por la enzima pepsina.
Referencias:

1. Factores que afectan la actividad enzimática.pdf [Internet]. [citado 9 de octubre de

2022]. Disponible en:
https://uruguayeduca.anep.edu.uy/sites/default/files/inline-files/Factores%20que%20afectan
%20la%20actividad%20enzim%C3%A1tica.pdf

2. Repaso de enzimas (artículo) [Internet]. Khan Academy. [citado 9 de octubre de

2022]. Disponible en:
https://es.khanacademy.org/science/ap-biology/cellular-energetics/environmental-impacts-on
-enzyme-function/a/hs-enzymes-review