Machine Translated by Google

2009
Comunicaciones de productos naturales de NPC Vol. 4
No. 11
1561 - 1564
Principios antioxidantes de Tanacetum vulgare L. Partes aéreas
Malindra Juan-Badaturugea , Solomon Habtemariama*, Caroline Jacksonb y
Michael JK Thomas

a
Laboratorios de Investigación de Farmacognosia, Facultad de Ciencias de Medway,
La Universidad de Greenwich, Central Avenue, Chatham-Maritime, Kent, ME4 4TB, Reino Unido
b
Hadlow College, Hadlow, Tonbridge, Kent, TN11 0AL, Reino Unido

s.habtemariam@gre.ac.uk

Recibido: 17 de abril de 2009; Aceptado: 22 de junio de 2009

Se investigó la actividad antioxidante del extracto metanólico de partes aéreas de Tanacetum vulgare L. (Asteraceae) y sus fracciones. El extracto
crudo mostró efectos de eliminación de radicales DPPH con un valor EC50 de 37 ± 1,2 µg/mL (n=3). Los fraccionamientos guiados por actividad
del extracto crudo dieron como resultado el aislamiento de tres compuestos antioxidantes; Ácido 3,5-O-dicafeoilquínico (3,5-DCQA), axilarín y
luteolina. 3,5-DCQA fue el componente principal con actividad antioxidante (IC50 = 9,7 µM) comparable con la de la quercetina estándar (IC50 =
8,8 µM). Aunque los compuestos aislados se conocían anteriormente por sus efectos antioxidantes, este es el primer informe sobre la
identificación de 3,5-DCQA de Tanacetum vulgare. La potente actividad antioxidante mostrada por el extracto crudo y los principios activos
aislados respalda los usos medicinales tradicionales de la planta para enfermedades como la cicatrización de heridas, la artritis reumática y otras
afecciones inflamatorias.

Palabras clave: Tanacetum vulgare, Asteraceae, ácido 3,5-O-dicafeoilquínico, axilarina, luteolina, antioxidante.

Informes recientes de varios laboratorios han demostrado
que la producción excesiva de especies reactivas de
oxígeno puede provocar daños oxidativos irreversibles en
las moléculas biológicas [1a]. Varios estudios establecieron
además un vínculola entre yellas
daño
condiciones
macromolecular
patológicas
que
oxidativo
incluyen aterosclerosis, artritis reumatoide, diabetes,
cáncer, daño tisular por isquemia-reperfusión y
enfermedades neurodegenerativas [1a, 1b]. Debido al
potencial terapéutico de los compuestos antioxidantes, ha
habido un interés creciente en la identificación de
moduladores de especies reactivas de oxígeno de fuentes
naturales. En este sentido, nuestros recientes estudios
fitoquímicos sistemáticos y de actividad antioxidante in
vitro han resultado en la caracterización de varios productos
naturales prometedores [1a, 1c-1g].
T. vulgare L. (Asteraceae), comúnmente conocida como
tanaceto, es originaria de las zonas templadas de Europa
y Asia, donde crece a lo largo de caminos, setos y lugares
baldíos [2a,2b]. Los valores medicinales de las
preparaciones de T. vulgare incluyen usos para condiciones
tónicas, reumáticas, erupciones cutáneas y diuréticas
[2c-2e]. Otros usos medicinales informados incluyen
antihelmíntico, antihipertensivo, estimulante, emenagogo, carminativo,
antiséptico, antihipertensivo y como agente antiespasmódico
[2a,2f]. También se sabe que T. vulgare se utiliza como
agente aromatizante de alimentos [2f]. La base científica
para los usos tradicionales informados de T. vulgare aún
debe establecerse, aunque algunos estudios hasta ahora
revelaron propiedades antiinflamatorias, diuréticas y
efectos curativos [3a-3e].Dado que varios estudios recientes
establecieron el vínculo entre la actividad antioxidante y
los efectos antiinflamatorios y/o cicatrizantes in vivo [3f y
las referencias allí incluidas], el presente estudio se diseñó
para evaluar el potencial antioxidante de T. vulgare y sus
componentes.
La actividad de eliminación de radicales dependiente de la
concentración del extracto crudo y las fracciones se
muestra en la Figura 1. Nuestros datos revelaron que el
extracto etanólico crudo mostró una potente actividad de
eliminación de DPPH con un valor IC50 de 37 ± 1,2 µg/mL (n = 3).
El fraccionamiento del extracto crudo con solventes de
polaridad creciente dio el siguiente rendimiento: éter de
petróleo (14,4 %, p/p vs extracto crudo), cloroformo (4,3
%), acetato de etilo (10,3 %), n-butanol (27,3 %). y agua
(34,3%). Como se muestra en la Figura 1, el orden de
potencia en la actividad de eliminación de radicales de
Machine Translated by Google

1562 Comunicaciones de productos naturales vol. 4 (11) 2009 Juan-Badaturuge et al.

120 OH
4 RO
HO 5 6
Extracto crudo OH 3 2
100 Mascota. éter 1 COOH
HO O O
Cloroformo
OH
80 EtOAc ARRULLO
R R
R= HO
n-butanol
60 oh oh
Agua
HO
carroñero
Efecto
de

R = H = luteolina
Porcentaje
Radical
DPPH

40 R = OMe = axilarina Ácido 3,5-O-dicafeoilquínico

Figura 2: Estructuras de los principios antioxidantes de la fracción de acetato

20
de etilo del extracto de T. vulgare .

0
-20
0.1 1 10
Concentraciones (ÿg/mL)
Figura 1: Actividad secuestrante de radicales DPPH del extracto crudo de T.
vulgare y sus fracciones (n=3).
las fracciones fueron las siguientes: acetato de etilo > n-
butanol > agua > cloroformo > éter de petróleo. A partir de
estos resultados (Figura 1) parece que la fracción de
acetato de etilo era de interés para un estudio de
fraccionamiento adicional, mientras que las fracciones de
éter de petróleo, cloroformo y agua mostraron una actividad
menor que el extracto crudo.
se aisló con el mayor rendimiento (21,1% del extracto
100 1000
crudo). Aunque el 3,5-DCQA y varios ésteres cafeoílicos
de ácidos quínicos, incluidos el 4,5-DCQA, el 3,4-DCQA y
el 1,5-DCQA, se han aislado de muchas plantas medicinales
[4a, 5c, 6a], este es el primer informe de 3,5-DCQA
encontrado en T. vulgare.
Se ha demostrado que los ácidos dicafeoilquínicos muestran
diversas propiedades biológicas, incluidas propiedades
antioxidantes, neuroprotectoras, hepatoprotectoras,
analgésicas y antiinflamatorias [6b, 6c]. También se han
informado propiedades antivirales potentes, incluido el anti-
VIH de 3,5-DCQA [4b, 6d]. Por lo tanto, los usos medicinales
de la planta que se alegan podrían atribuirse en parte al
principal componente biológicamente activo, el 3,5-DCQA.

El fraccionamiento adicional dirigido por actividad de la

Los flavonoides son metabolitos vegetales comunes con
acetato en columna
fracciónde
deSephadex
etilo usandodiocromatografía
como resultadodeel
diversas propiedades biológicas, como antioxidantes,
aislamiento de tres compuestos antioxidantes principales:
antiinflamatorios, antimicrobianos y quimiopreventivos [6e].
3,5-DCQA, luteolina y axilarina (Figura 2). La identificación
Varias agliconas flavonoides, incluidas la axilarina y la
de estos compuestos de H y 13C se basó en el análisis de
1 luteolina, se aislaron previamente de las partes aéreas de
de RMN junto con los estudios de UV, IR y MS. los datos
T. vulgare y una especie relacionada, T. parthenium [3a].
1
Los datos
asignaciones de confirmación dede H y 13C , así
asignaciones como las
estructurales,
se respaldaron aún más mediante experimentos de RMN
Tabla 1: Valores IC50 obtenidos para los compuestos aislados y el compuesto
2D (COSY, HSQC, HMBC y NOESY). Los datos obtenidos estándar de referencia, quercetina.
para estos compuestos en general coincidían con los
Compuestos IC50 ± SEM, µMa
publicados previamente para 3,5-DCQA [4a], luteolina [4b, 3,5-DCQA 9,70 ± 0,43
4c] y axilarina [3a]. Axilarín 23,10 ± 2,89
luteolina 111,90 ± 7,87

La actividad antioxidante comparativa de los principios quercetina 8,80 ± 0,15

a
activos y el compuesto antioxidante estándar, la quercetina, Los datos son valores medios y SEM de tres determinaciones separadas.

se evaluó mediante el estudio de captación de radicales

DPPH (ver Tabla 1). Mientras que el 3,5-DCQA y la
quercetina mostraron la mayor actividad eliminadora de
radicales, la axilarina y la luteolina mostraron una actividad
moderada y débil respectivamente (Tabla 1).
Estos resultados coincidieron con estudios previos de
actividad antioxidante en los que se observó actividad
eliminadora de radicales DPPH para 3,5-DCQA [5a 5c],
luteolina [5d], quercetina [5e] y axilarina [5f].
Cabe señalar que el 3,5-DCQA (Figura 2) es el componente
principal de la fracción de acetato de etilo que
Los estudios fitoquímicos previos sobre T. vulgare también
se extendieron al análisis de aceites esenciales donde la
tuyona, el eucaliptol, el alcanfor y el mirtenol se identificaron
como componentes principales [7a, 7b]. Se ha demostrado
que las lactonas monoterpénicas y sesquiterpénicas que
son comunes al género se encuentran en T. vulgare [2c,
7c-7e]. Todos estos constituyentes identificados pueden
desempeñar un papel en el efecto medicinal de T. vulgare
pero nuestro procedimiento de aislamiento guiado por
actividad dio como resultado la identificación de 3,5-DCQA,
luteolina, quercetina y axilarina como los principales
principios antioxidantes.
Machine Translated by Google
Principios antioxidantes Tanacetum vulgare
Materiales
experimentales y productos químicos utilizados: gel de
sílice (gel Kiesel, malla 70-230, 60), Sephadex LH-20
lipofílico (tamaño de perlas 25-100), 2,2-di-fenil-1-
picrilhidrazilo (DPPH) y quercetina fueron productos de
Sigma Aldrich Chemical Company (Dorset, Reino Unido).
Todos los solventes eran de grado analítico y se obtuvieron
de Fisher Scientific-UK (Loughborough, UK). T. vulgare de
una fuente autenticada se cultivó durante dos años en
Hadlow Horticultural Gardens (Hadlow Agricultural College,
Hadlow, Reino Unido). La planta establecida durante la
etapa de floración se cosechó en julio de 2006 y el
espécimen comprobante apropiado se depositó en las
colecciones de la Escuela de Ciencias (Universidad de
Greenwich).
Métodos generales: 1 mL), II (165 mL, ), III (90 mL), IV (15 mL), V (165 mL), VI
Los espectros de RMN H, RMN 13C
y RMN 2D (COSY, NOESY, HSQC y HMBC) se obtuvieron
en un instrumento JEOL de 500 MHz. Se utilizó el
espectrómetro de masas VG BIO-Q equipado con una
fuente de iones ESI z-spray. Las muestras disueltas en
metanol se inyectaron directamente en el espectrómetro de
masas que operaba en modo de iones negativos a una
velocidad de flujo de 50 ÿL/mL. Se usó Sephadex LH-20 o
Silica Gel 60 como adsorbente para la cromatografía en
columna abierta. Se utilizaron placas de gel de sílice 60
F254 (Sigma) para la cromatografía en capa fina (TLC). Se
usó rutinariamente una mezcla de disolventes de
cloroformo:metanol (1:1) para la cromatografía Sephadex
LH-20 en columna abierta.
Extracción y fraccionamientos iniciales: Las partes
aéreas secas en polvo de T. vulgare (750 g) se extrajeron
dos veces sumergiendo el material vegetal en metanol (2,5
L) durante dos semanas. La evaporación del disolvente de
extracción a presión reducida seguida de liofilización dio
como resultado 55,3 g (7,37%) del residuo del extracto. Una
porción del extracto crudo (30 g) se suspendió en 400 mL
de agua y luego se fraccionó usando solventes de polaridad
creciente: 500 mL cada uno de éter de petróleo (rendimiento:
4,3 g), cloroformo (rendimiento: 1,2 g), acetato de etilo
( rendimiento: 3,1 g), n-butanol (rendimiento: 8,2 g) y agua
(rendimiento: 10,3 g). Después de la prueba de actividad de
eliminación de radicales, la fracción de acetato de etilo que
mostró la mayor actividad se tomó para fraccionamientos
adicionales.
Se aplicó una porción de la fracción de acetato de etilo (2,2
g) sobre una columna de gel de sílice (18 cm x 2,5 cm) y
Referencias
[1] (a) Habtemariam S. (2008) Aislamiento guiado por actividad e identificación de componentes captadores de radicales libres del
extracto etanólico de Boneset (hojas de Eupatorium perfoliatum), Natural Product Communications, 3, 1317-1320; (b) Seifried HE,
Comunicaciones de productos naturales vol. 4 (11) 2009 1563
elución realizada con mezclas de cloroformo, acetato de
etilo y metanol de polaridad creciente. Después del análisis
de las fracciones por TLC, se obtuvieron un total de ocho
fracciones principales: Fracción A (40,1 mg, 0-25 % EtOAc),
B (59,3 mg, 25 %-30 % EtOAc), C (285,5 mg, 30-35 % %
EtOAc), D (131,9 mg, 35 %-45 % EtOAc), E (72,2 mg, 50-75
% EtOAc), F (353,0 mg, 80-90 % EtOAc) y G (826,6 mg,
100 % EtOAc) fueron eluidos con mezclas de EtOAc en
cloroformo; Se recogió H (409,8 mg) mediante elución con
metanol al 10-40 % en EtOAc.
Aislamiento de compuestos antioxidantes: la fracción C
(280 mg), que mostró una buena actividad antioxidante, se
aplicó a una columna de sephadex (34 cm x 2,0 cm) como
fase móvil que condujo a siete fracciones principales; I (90
(90 mL), VII (120 mL).
Las fracciones captadoras de radicales más activas, VI y
VII, se tomaron para separaciones posteriores. La fracción
VI que contenía predominantemente axilarina se purificó
mediante cromatografía en columna de gel de sílice (13 cm
x 1 cm) con metanol al 3%-10% en cloroformo como
disolvente para producir 75 mg del compuesto puro. De
manera similar, la fracción VII se purificó usando una
columna de gel de sílice (12 cm x 1 cm) y se eluyó con
cloroformo al 10%-30% en MeOH para producir luteolina pura (80 mg).
La fracción F (325 mg) se aplicó a una columna de sephadex
(34 cm x 2,5 cm) dando lugar a tres fracciones: A (176 ml),
B (150 ml) y C (100 ml). La fracción B produjo 3,5-DCQA
puro (50 mg), mientras que un tratamiento similar de la
fracción G (826 mg) dio como resultado el aislamiento
adicional de 410 mg de 3,5-DCQA puro.
Ensayo de eliminación de radicales DPPH: El ensayo de
eliminación de radicales DPPH se llevó a cabo utilizando
nuestro método descrito anteriormente [1d]. Brevemente,
se prepararon las muestras de prueba en diluciones triples
y se mezclaron con una solución 0,1 mM de DPPH. Después
de 20 minutos de incubación a temperatura ambiente, se
evaluó el blanqueo de color DPPH por los antioxidantes.
Agradecimientos - Este estudio fue apoyado por la
financiación de capacidades de HEFCE. Se agradece
enormemente la asistencia técnica del personal de los
Laboratorios Mass y NMR de la Universidad de Greenwich.
Machine Translated by Google

1564 Comunicaciones de productos naturales vol. 4 (11) 2009 Juan-Badaturuge et al.

Anderson DE, Fisher EI, Milner JA. (2007) Una revisión de la interacción entre los antioxidantes dietéticos y las especies reactivas de oxígeno.
Revista de Bioquímica Nutricional, 18, 567-579; (c) Habtemariam S. (2008) Aislamiento guiado por actividad e identificación de componentes
antioxidantes del extracto etanólico de Peltiphyllum peltatum (Torr.) Engl, Natural Product Communications, 3, 1321-1324; (d) Habtemariam S.
(2007) Actividad antioxidante de Knipholone anthrone, Food Chemistry, 102, 1042-1047; (mi)
Habtemariam S, Jackson C. (2007) Actividad antioxidante y citoprotectora de las hojas de Peltiphyllum peltatum (Torr.) Engl., Food Chemistry,
105, 498–503; (f) Habtemariam S. (2002) La hamamelitanina de Hamamelis virginiana inhibe la muerte de células endoteliales inducida por el
factor de necrosis tumoral-a (TNF) in vitro, Toxicon 2000, 40, 83-8; (g) Habtemariam S. (1997) Flavonoides como inhibidores o potenciadores
de la citotoxicidad del factor alfa de necrosis tumoral en células tumorales L-929, Journal of Natural Products, 60, 775-778; (h)
Habtemariam S. (1997) Modulación de la citotoxicidad inducida por el factor de necrosis tumoral-ÿ por polifenoles, Phytotherapy Research, 11,
277-280.

[2] (a) Grieve M. (1931) A Modern Herbal, (ed. CF Leyel 1985), Londres, 789-790; (b) Clapham AR, Tutin TG, Warburg EF. (1962)
Flora de las Islas Británicas, Cambridge, 404; (c) Ognyanov G, Todorova M. (1983) Lactonas sesquiterpénicas y flavonoides en flores de
Tanacetum vulgare, Journal of Medicinal Plant Research, 48, 181-183 (d) Ognyanov G, Todorova M, Dimitrov V, Ladd J, Irngartinger H , Kurda
E, Rodewald H. (1983) Cis-longipinane-2,7-dione, a sesquiterpene dicetone in flowers of Tanacetum vulgare, Phytochemistry, 22, 1775-1777;
(e) Lahlou S, Tahraoui A, Israili Z, Lyoussi B. (2007) Actividad diurética de los extractos acuosos de Carum carvi y Tanacetum vulgare en ratas
normales, Journal of Ethnopharmacology, 110, 458-463; (f) Barnes J, Anderson LA., Phillipson JD. (2002). Medicamentos a base de hierbas:
una guía para profesionales de la salud. Prensa farmacéutica, Londres, págs. 460.

[3] (a) Williams CA, Harbone JB, Geiger H, Hoult JRS. (1999) Los flavonoides de Tanacetum parthenium y T. vulgare y sus propiedades
antiinflamatorias , Phytochemistry , 51, 417-423 and its Erratum on the Phytochemistry, 52, 1181-1182; (b) Xie G, Schepetkin IA, Quinn MT.
(2007) Actividad inmunomoduladora de polisacáridos ácidos aislados de Tanacetum vulgare L., International Immunopharmacology, 7,
1639-1650; (c) Lahlou S, Tahraoui Z, Lyoussi B. (2007) Actividad diurética de los extractos acuosos de Carum carvi y Tanacetum vulgare en
ratas normales, Journal of Ethnopharmacology, 110, 458–463; (d) Lahlou S, Israili ZH, Lyoussi B. (2008) Toxicidad aguda y crónica de un
extracto acuoso liofilizado de hojas de Tanacetum vulgare en roedores, Journal of ethnopharmacology, 117, 221-7; (e) Pålsson K, Jaenson
TG, Baeckström P, Borg Karlson AK. (2008) Sustancias repelentes de garrapatas en el aceite esencial de Tanacetum vulgare, Journal of
Medical Entomology, 45, 88-93; (f) Schäfer M, Werner S. (2008) Estrés oxidativo en la reparación de heridas normales y dañadas,
Pharmacological Research, 58, 165-171. (a) Carnet AP, Heitz A, Fraisse D, Lamaison JL. (2000) Principales ácidos dicafeoilquínicos de
[4] Artemisia vulgaris, Phytochemical Communication, 71, 587-589; (b) Shi S, Huang K, Zhang Y, Zhao Y, Du Q. (2007) Purificación e identificación
de componentes antivirales de Laggera pterodonta mediante cromatografía de contracorriente de alta velocidad, Journal of Chromatography
B, 859, 119-124; (c) Owen RW, Haubner R, Mier W, Giacosa A, Hull WE, Spiegelhalder B, Bartsch H. (2003) Aislamiento, elucidación de la
estructura y potencial antioxidante de los principales compuestos fenólicos y flavonoides en drupas de aceitunas en salmuera, Food and
Chemical Toxicology , 41, 703–717; (d) Flamini G, Antognoli E, Morelli I. (2001) Dos flavonoides y otros compuestos de las partes aéreas de
Centaurea bracteata de Italia, Phytochemistry , 57, 559–564. (a) Hung TM, Nab M, Thuonga PT, Su ND, Sok D, Song KS, Seong YH, Bae K.
(2006) Actividad antioxidante de los derivados del ácido cafeoilquínico de las raíces de Dipsacus asper Wall, Journal of Ethnopharmacology,
[5] 108 , 188–192; (b) Kim HJ, Kim FJ, Seo SH, Shin C, Jin C, Lee YS. (2006) Glucósido del ácido vanílico y derivados del ácido quínico de
Gardeniae fructus, Journal of Natural Products, 69, 600-603; (c) Wu C, Chen F, Wang X, Wu Y, Dong M, He G, Galyean RD, He L, Huang G.
(2007). Identificación de compuestos fenólicos antioxidantes en matricaria (Tanacetum parthenium) por HPLC-ESI-MS/MS y NMR. Análisis
fitoquímico, 18, 401-410; (d) Wu C, Chen F, Wang X, Kim H, He G, Haley-Zitlin V, Huang G. (2006) Constituyentes antioxidantes en el extracto
de matricaria (Tanacetum parthenium) y su cuantificación cromatográfica, Food Chemistry, 96, 220- 227; (e) Okawa M, Kinjo J, Nohara T, Ono
M. (2001) DPPH (1,1-difenil-2-picrilhidrazilo) Actividad de eliminación de radicales de flavonoides obtenidos de algunas plantas medicinales,
Boletín biológico y farmacológico, 24, 1202- 1205; (f) Park EJ, Kim Y, Kim J. (2000) Glucósidos de flavonol acilados de la flor de Inula
Britannica, Journal of Natural Products, 63, 34–36.

[6] (a) Um BH, Polat M, Lobstein A, Weniger B, Aragon R, Declercq L, Anton R. (2002) A new dicaffeoylquinic acid butyl éster from Isertia pittieri,
Phytochemical Communication, 73, 550-552; (b) Thuong PT, Su ND, Ngoc TM, Hung TM, Dang NH, Thuan ND, Bae K, Oh WK. (2009)
Actividad antioxidante y principios del té amargo de Vietnam Ilex kudingcha, Food Chemistry, 113, 139–145; (c) Olmos A, Giner RM, Recio
MC, Ríos JL, Gil-Benso R, Máñez S. (2008) Interacción de derivados dicafeoilquínicos con peroxinitrito y otras especies reactivas de nitrógeno,
Archivos de Bioquímica y Biofísica, 475, 66-71; (d) Robinson WE Jr, Cordeiro M, Abdel-Malek S, Jia Q, Chow SA, Reinecke MG, Mitchell WM.
(1996) Inhibidores del ácido dicafeoilquínico de la integrasa del virus de la inmunodeficiencia humana: inhibición del dominio catalítico central
de la integrasa del virus de la inmunodeficiencia humana, Molecular Pharmacology, 50, 846-55; (e) Pawlowska AM, Camangi F, Bader A,
Braca A. (2009) Flavonoides de Zizyphus jujuba L. y Zizyphus spinachristi (L.) Willd (Rhamnaceae) frutas, Food Chemistry, 112, 858-862. (a)
Judzentiene A, Mockute D. (2005) Los aceites esenciales de inflorescencia y hoja de T. vulgare L., var. creciendo silvestre en Lituania,
[7] Bioquímica Sistemática y Ecología, 33, 487-498; (b) Tetenyi P, Kaposi P, Hethelyi E. (1975) Variaciones en los aceites de Tanacetum vulgare,
Phytochemistry, 14, 1539-1544; (c) Banthorpe DV, Mann J. (1972) Monoterpene Glucosydes from petals of Tanacetum vulgare, Phytochemistry,
11, 2589-2591; (d) Apéndice I, Garibold P, Nano GM. (1983) Tanacetols A y B, alcohol sesquiterpénico no volátil, de Tanacetum vulgare,
Phytochemistry, 22, 509-512; (e) Apéndice I, Gariboldi P, Nano GM, Tetenyi P. (1984) Terpenoides de tipo tetraédrico de Tanacetum vulgare,
Phytochemistry, 23, 2545-2551.