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Pharmaceutical Biology (Biología farmacéutica), 2012; 50(2): 147–154 Healthcare

© 2012 Informa Healthcare EE. UU., Inc.
ISSN 1388-0209 impreso/ISSN 1744-5116 en línea
DOI: 10.3109/13880209.2011.579980

ARTÍCULO DE INVESTIGACIÓN

Actividad del extracto de aloe vera en las células corneales humanas

Anna Woźniak1 and Roman Paduch2
1Departamento de Oftalmología, Universidad Médica de Lublin, Lublin, Polonia y 2Departamento de Virología e Inmunolo-
gía, Instituto de Microbiología y Biotecnología, Universidad Maria Curie-Skłodowska, Lublin, Polonia
Resumen
Contexto: Hoy en día, las enfermedades oftálmicas representan un problema relevante en las sociedades
modernas. Los pacientes padecen diversas afecciones oftálmicas como conjuntivitis, ojo seco, dacriocistitis
o enfermedades degenerativas. Por lo tanto, resulta necesario introducir nuevos métodos de tratamiento,
incluido el uso de plantas medicinales. El aloe vera [Aloe barbadensis Miller (Liliaceae)] posee propiedades
de cicatrización de heridas y muestra actividades inmunomoduladoras, antiinflamatorias o antioxidantes.
Materiales y métodos: A fin de comprobar la toxicidad, la actividad antiproliferativa, la reducción de las especies
reactivas de oxígeno (ERO), el nivel de óxido nítrico (NO) y de citoquinas, y la distribución de la F-actina en las
células, se utilizaron, respectivamente, la captación de NR, el MTT, la reducción del DPPH, la reacción de Griess y
la tinción con rodamina-faloidina.
Objetivo: El presente estudio analiza el efecto de los extractos de aloe vera que se obtienen mediante diferentes
disolventes sobre el cultivo in vitro de células corneales humanas 10.014 pRSV-T.
Resultados: No encontramos toxicidad de los extractos de etanol, acetato de etilo y heptano del aloe vera en las
células corneales humanas No se observó ninguna actividad reductora de ERO por parte del extracto de heptano y
una acción traza por parte del extracto de etanol (solo a una concentración alta de 125 μg/ml) de aloe vera. Solo el
extracto de acetato de etilo expresó un efecto distinto de barrido de radicales libres. Los extractos vegetales reduje-
ron la producción de NO por parte de las células corneales humanas en comparación con los controles no tratados.
La producción de citoquinas (IL-1β, IL-6, TNF-α e IL-10) disminuyó tras la adición de extractos de aloe vera a los
medios de cultivo.
Discusión y conclusiones: El aloe vera contiene múltiples sustancias farmacológicamente activas capaces de modu-
lar fenotipos y funciones celulares. Los extractos de etanol y acetato de etilo de aloe vera pueden utilizarse en gotas
oftálmicas para tratar inflamaciones y otras afecciones de las partes externas del ojo como la córnea.
Palabras clave: Citotoxicidad, barrido de especies reactivas de oxígeno, inmunomodulación

Introducción
El uso de los preparados a base de plantas medicinales responde no solo a la experiencia generacional, sino
también a estudios científicos. En la actualidad, las hierbas medicinales se utilizan en diversos productos comercia-
les debido a sus propiedades terapéuticas o cosméticas. Entre ellas, la suculenta perenne, aloe vera [Aloe barbaden-
sis Miller (Liliaceae)], ha sido reconocida como un remedio natural eficaz (Choi & Chung, 2003). El aloe vera se
utiliza de manera interna y externa en los seres humanos como forma de medicina alternativa, así como en el
hogar en los primeros auxilios. Se ha demostrado que el aloe vera tiene efectos de curación de heridas y quemadu-
ras, y muestra actividades inmunomoduladoras, antiinflamatorias, antiparasitarias, protectoras contra la radiación
UV, antioxidantes, antivirales, antitumorales y antidiabéticas (Lee et al., 2000; Choi & Chung, 2003; Sarkar
Address for Correspondence: Dr. Roman Paduch, Departamento de Virología e Inmunología, Instituto de Microbiología y Biotecnología, Univer-
sidad Maria Curie-Skłodowska, Akademicka 19, 20-033 Lublin, Polonia. Correo electrónico: rpaduch@poczta.umcs.lublin.pl
(Recibido el 10 de noviembre de 2010; revisado el 01 de abril de 2011; aceptado el 07 de abril de 2011)

Biología Farmacéutica

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et al., 2005; Yoo et al., 2008; Kigondu et al., 2009;
Ozsoy et al., 2009). Telefo et al. (1998, 2002, 2004)
demostró también el efecto del aloe vera sobre el
sistema reproductivo en ratas, donde el extracto
vegetal reguló la esteroidogénesis y los niveles
hormonales, el ciclo menstrual, el peso ovárico y
uterino, y se utilizó para tratar la dismenorrea o la
infertilidad. Estas propiedades medicinales están
mediadas en su mayoría por componentes biológica-
mente activos en el aloe vera y sus extractos, como
antraquinonas, flavonoides, ácidos fenólicos, vitami-
nas antioxidantes, enzimas y otros compuestos no
nutritivos de la planta (Choi & Chung, 2003; Hu et
al., 2003; Yoo et al., 2008). La acción farmacológica
de los extractos de aloe vera está estrechamente
relacionada con el mantenimiento de la red de
citoquinas o la estabilización del nivel de radicales,
entre otros, en el tejido ocular.
La actividad medicinal de los compuestos del aloe
vera contra las enfermedades oftálmicas debe consi-
derarse dentro de dos grupos de acciones: antioxi-
dante [barrido de especies reactivas de oxígeno
(ERO) y producción de óxido nítrico (NO)] e inmu-
nomoduladora (influye sobre todo en el nivel de
citoquinas proinflamatorias o antiinflamatorias).
La confianza en el uso de la medicina alternativa en
oftalmología se basa por lo general por sus efectos
secundarios relativamente bajos y tolerables por los
pacientes cuando se utilizan preparados a base de
hierbas en forma de, por ejemplo, gotas oftálmicas.
Sin embargo, durante el uso de la medicina herbaria,
no solo pueden producirse ventajas oculares clínica-
mente significativas, sino también efectos secunda-
rios (Fraunfelder, 2004). Además de los efectos
ventajosos, también se considera que el aloe vera
tiene efectos adversos en algunos órganos (Choi &
Chung, 2003; Can et al., 2004; Rabe et al., 2005). Por
lo tanto, es necesario reconocer estos eventos adver-
sos para reducir las posibles influencias perjudiciales
de los componentes del aloe vera en la estructura de
la córnea o la conjuntiva.
El objetivo del presente estudio fue analizar los
efectos del uso de extractos de aloe vera obtenidos
con diferentes disolventes sobre el cultivo in vitro de
células corneales humanas 10.014 pRSV-T.
Materiales y métodos
Material vegetal
Se depositó un espécimen de aloe vera en el Departa-
mento de Botánica Farmacéutica de la Universidad
Médica de Lublin (Polonia). El material vegetal en
cuestión se obtuvo en el verano de 2010 en el jardín
botánico de la Universidad Maria Curie-Skłodowska
de Lublin, Polonia. El profesor T. Krzaczek (Universi-
dad Médica de Lublin) identificó la planta. El número
del espécimen vegetal es el 1112.
Preparación de los extractos
Se pulverizaron tres porciones de planta fresca de 15
g cada una en un molino eléctrico (Zelmer, Rzeszów,
Polonia). Cada una se colocó en un matraz de fondo
redondo de 250 ml, y a cada una se le añadió 70 ml de
heptano al 1,1 %, acetato de etilo al 2,1 % y etanol al
3,96 %, respectivamente. Los matraces se transfirie-
ron a un baño de ultrasonido (Bandelin, Sonorex,
Alemania) y se realizó una triple extracción exhausti-
va a 45 °C, utilizando en cada uno el mismo volumen
de disolvente fresco. Las soluciones filtradas de cada
disolvente se combinaron (210 ml en volumen) y el
disolvente se destiló en un evaporador rotativo de
vacío IKA RV 05-ST1 (IKA-Werke, Staufen, Alema-
nia). El residuo seco obtenido se utilizó en las prue-
bas biológicas. Se analizaron las muestras del residuo
seco en la cromatografía de gases-espectrometría de
masas para comprobar la presencia de disolventes
(se utilizó un cromatógrafo de gases Varian 3400 en
combinación con un detector de trampa de iones
Finnigan MAT ITS 40), columna de cromatografía
capilar Restek Rtx-5 (0,18 mm i.d. × 20 m, película
de 0,25 μm; Restek Corp. Bellefonte, PA). Las prue-
bas fueron negativas: no se encontraron disolventes
utilizados en el material analizado. Una vez elimina-
dos los disolventes, la parte de la masa seca se disol-
vió en DMSO, obteniendo una solución madre (100
mg/ml). Luego, se prepararon las soluciones de
trabajo (8-125 μg/ml) mediante la disolución de los
extractos en el medio de cultivo.
Cultivo celular
Se utilizó la línea celular 10.014 pRSV-T (ATCC Nº
CRL-11515) de córnea humana normal. Las células se
cultivaron como monocapas en frascos de cultivo de
25 cm2 (Nunc, Roskilde, Dinamarca) recubiertos con
colágeno ultrapuro PureCol™ (INAMED Biomate-
rials, Fremont, CA) a una concentración de 3,1
mg/ml. La línea celular se mantuvo en un medio
definido K-SFM (medio libre de suero para querati-
nocitos) (Gibco) complementado con 75 μg/ml de
factor de crecimiento de células endoteliales (Sigma),
0,05 mg/ml de extracto de hipófisis bovina (Gibco),
500 ng/ml de hidrocortisona (Sigma) y 0. 0005
mg/ml de insulina bovina (Gibco) y antibióticos (100
U/ml de penicilina, 100 μg/ml de estreptomicina)
(Sigma, St Louis, MO) a 37 °C en una atmósfera
humidificada con 5% de CO2.
Incubación de células con extractos de aloe
vera
Para los fines de los experimentos actuales, se estimó
el número total de células por conteo utilizando un
hemocitómetro de Thoma. Se añadió una dosis de
100 μl de suspensión celular (1 × 105 células/ml) a los
pocillos de placas de microtitulación de fondo plano
de 96 pocillos (métodos del MTT y RN). Tras 24 h de
incubación, se desechó el medio y se añadió uno
nuevo, con concentraciones adecuadas de los extrac-
tos. Para los controles, también se incubó durante 24
h, y se utilizaron células cultivadas en 100 μl de
medio, con un número total de células equivalente al
de los pocillos de la muestra. Un control en blanco se
formó solo en el medio de cultivo.
Biología Farmacéutica
La incubación se realizó durante otras 24 h, estimán-
dose la citotoxicidad y la actividad antiproliferativa
de los extractos con métodos espectrofotométricos
(ensayos del MTT y RN).
Ensayo de captación de Rojo Neutro (RN)
El ensayo de citotoxicidad de RN se basa en la capta-
ción y acumulación lisosomal del colorante supravi-
tal, el Rojo Neutro. Las células muertas o dañadas no
captan el colorante (Ganbold et al., 2010).
Las células se cultivaron en placas múltiples de 96
pocillos en 100 μl de medio de cultivo (K-SFM) con
suplementos y extractos de aloe vera a tres dosis (25,
75 y 125 μg/ml) y estándares. A continuación, se
descartó el medio y se añadió a cada pocillo una solu-
ción de RN (Sigma) al 0,4 %. La placa se incubó
durante 3 horas a 37 °C en una incubadora humidifi-
cada al 5 % de CO2/incubadora de aire al 95 %. Tras
la incubación, se eliminó el medio que contenía el
colorante, se fijaron las células con CaCl2 al 1 % en
paraformaldehído al 4 % y, a continuación, se solubi-
lizó el colorante incorporado utilizando acetato acéti-
co al 1 % en una solución de etanol al 50 % (100 μl).
Las placas se agitaron con suavidad durante 20
minutos a temperatura ambiente y la absorbancia del
colorante extraído se midió espectrofotométricamen-
te a 540 nm utilizando un lector de microplacas
(Emáx; Molecular Devices Corp., Menlo Park, CA).
Ensayo del MTT
La sensibilidad de las células para los extractos de
aloe vera se determinó en un ensayo espectrofotomé-
trico estándar de bromuro de 3-(4,5-dimetiltiazol-
2-il)-2,5-difeniltetrazolio (MTT) según Mosmann
(1983). La prueba del MTT se basa en la conversión
de la sal amarilla de tetrazolio realizada por las
células viables en cristales morados de formazán. La
reacción es catalizada por la succinato deshidrogena-
sa mitocondrial.
Las células cultivadas en placas múltiples de 96 poci-
llos en 100 μl de medio de cultivo, se incubaron
durante 3 h con una solución de MTT (5 mg/ml, 25
μl/pocillo) (Sigma). Las células viables en cristales
púrpura de formazán metabolizaron la sal amarilla
de tetrazolio. La succinato deshidrogenasa mitocon-
drial catalizó la reacción. Los cristales se solubiliza-
ron durante la noche en una mezcla de dodecil sulfa-
to de sodio al 10 % en HCl 0,01 M. El producto se
cuantificó espectrofotométricamente mediante la
medición de la absorbancia a 570 nm de longitud de
onda utilizando un Emáx: Lector de microplacas
(Molecular Devices Corp.).
Prueba de barrido de radicales libres de DPPH-
La actividad de barrido de radicales libres de los
extractos se midió mediante el ensayo de 1,1-dife-
nil-2-picrilhidrazilo (DPPH-). Este método se basa en
la capacidad de los antioxidantes para reducir el
radical estable DPPH- de color violeta oscuro (Sigma)
a la difenil-picrilhidrazina de color amarillo. En resu-
men, se añadió 100 μl de solución de DPPH- (0,2
mg/ml en etanol) a 100 μl de concentraciones de
extracto (25-125 μg/ml) y estándares. Se utilizó
Trolox (Sigma) en concentraciones crecientes (1-50 μ
g/ml) como estándar para la actividad de barrido de
radicales libres. Tras 20 minutos de incubación a
temperatura ambiente, se midió la absorbancia de la
solución a 515 nm; cuanto menor fuera la absorban-
cia, mayor era la actividad de barrido de radicales
libres de los extractos. La actividad de cada extracto
se determinó comparando su absorbancia con la de la
solución de control (reactivos sin extracto) y un
estándar.
La capacidad de barrer el radical DPPH se calculó
mediante la siguiente fórmula:
Efecto de barrido del DPPH• (%) =
[(Xcontrol− Xextract/Xcontrol) × 100]
donde Xcontrol es la absorbancia del control y
Xextract es la absorbancia en presencia de los extrac-
tos (Paduch et al., 2008).
Medición de NO
El nitrato, un producto final estable del NO, se deter-
minó en los sobrenadantes del cultivo mediante un
método espectrofotométrico basado en la reacción de
Griess. El nivel de nitrito refleja la producción de NO
(Muzitano et al., 2011).
En resumen, las células corneales se incubaron
durante 24 horas con dos concentraciones de aloe
vera: 8 y 20 μg/ml y luego se recogieron los sobrena-
dantes de los cultivos. A continuación, se colocaron
100 μl de sobrenadante en placas de fondo plano de
96 pocillos por triplicado y se incubaron con 100 μl
de reactivo de Griess (sulfanilamida al 1 %/0,1 % de
N-(1-naftil)etilendiamina diclorhidrato) (Sigma) en
H3PO4 al 3 % (POCH Gliwice, Polonia) a temperatu-
ra ambiente durante 10 minutos. La densidad óptica
se midió a 570 nm utilizando un lector de micropla-
cas (Emáx; Molecular Devices Corp.). Se obtuvo una
curva estándar utilizando 0,5-25 μM de nitrito de
sodio (NaNO2) para la calibración.
ELISA
Los niveles de IL-1β, IL-6, TNF-α e IL-10 humanos se
analizaron inmunoenzimáticamente (ELISA) en los
sobrenadantes de los cultivos utilizando kits disponi-
bles en el mercado (Diaclone) según las instrucciones
del fabricante. La densidad óptica a 450 nm con la
longitud de onda de corrección de 570 nm de cada
muestra de ELISA se determinó utilizando un lector
de microplacas. Las concentraciones de IL-1β, IL-6,
TNF-α e IL-10 se calcularon a partir de una curva
estándar: los límites de detección fueron 7 pg/ml
(IL-1β), 2 pg/ml (IL-6), 8 pg/ml (TNF-α) y 5 pg/ml
(IL-10).
Etiquetado del citoesqueleto de F-actina
La tinción con faloidina es una herramienta útil para
investigar la distribución de la F-actina en las células
Biología Farmacéutica
(Chang et al., 2010).
Las células se incubaron en portaobjetos Lab-Tek de
4 pocillos (Nunc) en 1 ml de medio de cultivo con
extractos vegetales. Tras la incubación, las células se
enjuagaron con el medio K-SFM y se expusieron a
una solución de paraformaldehído (10 %, v/v)
durante 20 minutos, se enjuagaron tres veces en
solución salina tamponada con fosfato (PBS), se
expusieron a una solución de Triton X-100 (0,2 %,
v/v) (Sigma) durante 5 minutos y se enjuagaron tres
veces con PBS. Se añadió a cada pocillo un volumen
de 0,5 ml de PBS que contenía tetrametil-rodami-
na-isotiocianato-faloidina (TRITC-faloidina, 1 μg/ml)
(Sigma) y se incubó en la oscuridad a 37 °C/5 % de
CO2 durante 30 minutos.
La observación de las células se realizó con un
microscopio de fluorescencia (Olympus, BX51; Olym-
pus). El análisis cuantitativo de las imágenes fluores-
centes se realizó mediante un sistema de software de
análisis de imágenes.
Análisis estadístico
Los resultados se presentan como media ± DE de tres
experimentos. Los datos se analizaron mediante un
análisis de varianza de una vía con la prueba post hoc
de Dunnett. Las diferencias de p ≤ 0,01 se considera-
ron significativas.
Resultados
Análisis de la toxicidad (captación de RN) y la
actividad antiproliferativa (ensayo de MTT)
de los extractos
El análisis de viabilidad de 10.014 células corneales
humanas pRSV-T cultivadas a una densidad de 1 ×
105 células/ml se realizó mediante ensayos de capta-
ción de RN o de MTT tras 24 horas de incubación con
los extractos de aloe vera.
La prueba de RN no mostró ninguna toxicidad en los
extractos de etanol, acetato de etilo y heptano de aloe
vera. En todos los casos, la viabilidad de las células
fue superior al 90 %, incluso a la mayor concentra-
ción de extracto (125 μg/ml) (Figura 1A). Del mismo
modo, cuando se comprobó la actividad de la succi-
nato deshidrogenasa (ensayo de MTT), la aplicación
de los extractos vegetales no redujo la viabilidad y la
actividad proliferativa de las células corneales a un
nivel inferior del 85 % (Figura 1B).
Actividad de barrido de radicales libres (prue-
bas del DPPH)
La acción reductora de ERO de los extractos de aloe
vera se muestra en la Tabla 1. El estudio se realizó
sobre la base de la prueba de reducción de radicales
estables (DPPH-). El efecto de barrido de radicales
fue dependiente del extracto y de la concentración.
No se encontró actividad reductora de ERO mediante
el heptano y una acción traza por parte del etanol
(solo a una concentración alta de 125 μg/ml) de los
extractos de aloe vera. Solo el extracto de acetato de
etilo de esta planta expresó un efecto distinto de
barrido de radicales libres. Con la dosis máxima
utilizada (125 μg/ml), la reducción fue un 10,74 %
superior al valor de control. Este nivel de reducción
fue estadísticamente significativo. Fue el equivalente
a 3,87 μM de Trolox, una vitamina E sintética, cuya
actividad se utilizó como estándar de reducción de
ERO (Librowski & Moniczewski, 2010).
Liberación de NO
El nivel de NO de control fue de 0,973 μM. Se utiliza-
ron dos concentraciones de extractos de aloe vera: 8
y 20 μg/ml. La presencia de los extractos vegetales
disminuyó la producción de NO por parte de las
células corneales humanas en comparación con los
controles no tratados. Además, en el caso de los
extractos de etanol y acetato de etilo, la aplicación de
una concentración más baja de preparados (8 μg/ml)
redujo el nivel de NO más de lo que se observó tras el
uso de una concentración más alta de extractos (20
μg/ml). La reducción fue de más de la mitad (50,05
%) (IC50 = 7,99 μg/ml) en comparación con los de
control. En el caso del extracto de heptano, la reduc-
ción del NO fue comparable para ambas concentra-
ciones utilizadas y el nivel del radical fue en prome-
dio un 22 % menor que el valor de control (Figura 2).
Pruebas de ELISA
Niveles de citoquinas proinflamatorias (IL-1β,
IL-6 y TNF-α)
IL-1β
El nivel de control de IL-1β liberado por la línea
celular corneal humana 10.014 pRSV-T fue de 18,81
pg/ml. La adición de extractos de aloe vera (8 y 20
μg/ml) al medio de cultivo celular condujo a la dismi-
nución de la producción de citoquinas tras 24 h de
incubación (Figura 3A).
IL-6
Las células 10.014 pRSV-T de control no tratadas
liberaron la cantidad de 17,06 pg/ml de IL-6. De
forma similar a la IL-1β, los extractos vegetales
también disminuyeron la producción de IL-6 tras 24
h de incubación (Figura 3B).
TNF-α
Las células corneales no tratadas liberaron 17,46
pg/ml de TNF-α, que se aceptó como valor de
control. La producción de citoquinas disminuyó
después de añadir los extractos de aloe vera (8 y 20
μg/ml) al medio de cultivo y de incubar durante 24 h
(Figura 3C).
Nivel de citoquina antiinflamatoria IL-10
El nivel de control de IL-10 liberado por 10.014
células corneales humanas pRSV-T fue de 5,14
pg/ml. La incubación de las células durante 24 horas
con los preparados de aloe vera condujo a un aumen-
to de la cantidad de citoquina hasta el nivel de 6,28
pg/ml (1,13 pg/ ml por encima del control) cuando se
Biología Farmacéutica
 Tabla 1. Actividad de barrido de radicales libres del DPPH (%).
% de reducción en
Concentración del comparación con el de control Valor de reducción correspondiente a la
Extracto extracto (µg /mL) (0% de reducción) siguiente concentración de Trolox (µM)
Etanol 25 0 0
75 0 0
125 1.16 ± 0.45 0.366
Acetato de 25 0 0
etilo 75 4.85 ± 0.26 1.700
125 10.74 ± 0.26* 3.869*
Heptano 25 0 0
75 0 0
125 0 0
El porcentaje de reducción del radical DPPH por los extractos de aloe vera se compara con el de control
(0 % de reducción).
* Estadísticamente significativo a p ≤ 0,01 en comparación con el de control (0 % de reducción).

utilizaron 8 μg/ml de extractos de heptano y 20 μg/

ml de acetato de etilo. El etanol y las concentraciones
restantes de extracto de acetato de etilo y heptano
disminuyeron la producción de IL-10 por parte de las
células analizadas (Figura 3D).

Figura 2. Secreción de óxido nítrico (NO) en el cultivo de 10.014

pRSV-T células corneales normales humanas durante la
incubación de 24 horas con extractos de etanol, acetato de etilo
y heptano de aloe vera. Se utilizaron dos concentraciones de
extractos: 8 y 20 μg/ml. Se realizó un análisis mediante el
método de Griess. Las columnas y las barras muestran la media
± desviación estándar (n = 3). *p ≤ 0,01- un cultivo de células
corneales tratado con extractos vegetales comparado con un
control de cultivo no tratado.

Figura 1. El efecto del tratamiento de 24 horas de 10.014

pRSV-T con extractos de etanol, acetato de etilo y heptano de
aloe vera en el ensayo de Rojo Neutro (RN) (A) y en el ensayo
MTT (B). Los resultados se presentan como porcentaje de los
controles, fijados arbitrariamente al 100 %. La figura muestra
una media de tres experimentos independientes.

Organización de los filamentos de F-actina del

citoesqueleto
Los filamentos de F-actina se analizaron mediante el
método de tinción fluorescente con TRITC-faloidina
tras la incubación durante 24 horas de células 10.014
pRSV-T con 125 μg/ml de extractos de aloe vera.
Figura 3. Secreción de IL-1β (A), IL-6 (B), TNF-α (C) e IL-10 (D)
en cultivo de 10.014 pRSV-T células corneales normales huma-
nas durante la incubación de 24 horas con extractos de etanol,
acetato de etilo y heptano de aloe vera. Se utilizaron dos concen-
traciones de extractos: 8 y 20 μg/ml. Prueba ELISA. *p ≤ 0,01-
un cultivo de células corneales tratado con extractos vegetales
comparado con un cultivo de control no tratado.

Biología Farmacéutica
Discusión
En la actualidad, se considera que los medicamentos
herbarios poseen muchos compuestos activos que
demuestran beneficios medicinales y para la salud
(Paduch et al., 2007). Sin embargo, también hay
hierbas y componentes herbarios con una actividad
potencialmente peligrosa. Por lo tanto, debe llevarse a
cabo la estandarización de los medicamentos herba-
rios para reducir o eliminar eficazmente las reaccio-
nes nocivas y adversas.

Uno de los métodos para analizar la toxicidad de las

hierbas son las pruebas in vitro en cultivos celulares o
en células primarias aisladas de todo el organismo
(Piersma, 2004). Estas pruebas permiten responder a
la pregunta sobre la utilidad potencial de los extractos
vegetales como remedio o medicina complementaria
para el tratamiento de los pacientes. Figura 4. Organización del citoesqueleto e interacciones
directas recíprocas de las células corneales normales humanas
En el presente estudio, se probó la toxicidad y la 10.014 pRSV-T. La muestra de control (A), tras la incubación
actividad antiproliferativa de los extractos de aloe con extractos a una concentración de 125 μg/ ml: extracto de
etanol (B), extracto de acetato de etilo (C) y extracto de heptano
vera en células corneales humanas normales10.014 (D). Tinción fluorescente con TRITC-faloidina. Aumento: 400×.
pRSV-T. Además, el estudio abarca el barrido de ERO, Barra: 50 μm.
la liberación de NO y también la producción de
citoquinas pro y antiinflamatorias tras la incubación El epitelio corneal es la capa más externa de la super-
de las células corneales con extractos de etanol, aceta- ficie ocular y, por tanto, está especialmente expuesto a
to de etilo y heptano. diversos factores nocivos (Wylęgała et al., 2009).
Entre los agentes ambientales típicos que influyen en
Al utilizar concentraciones de extracto más elevadas la uniformidad del linaje corneal, hay también com-
(25-125 μg/ ml) en las pruebas de toxicidad y de ponentes vegetales que podrían utilizarse potencial-
barrido de ERO, quisimos demostrar que incluso a mente en las gotas oftálmicas. Para analizar la morfo-
concentraciones de extracto relativamente elevadas logía, funcionalidad y viabilidad de la capa corneal al
no ejercían efectos citotóxicos, sino que expresaban estrés químico, utilizamos la línea celular establecida
características de reducción de radicales. 10.014 pRSV-T para probar la actividad del extracto
de aloe vera.
Por lo tanto, el objetivo de esta parte del estudio era
mostrar la eficacia y seguridad de los extractos de aloe Esta evaluación se realizó para evaluar la utilidad
vera incluso a las altas concentraciones utilizadas. Por potencial de los componentes del aloe para ser aplica-
otra parte, solo se utilizaron concentraciones bajas de dos en gotas oftálmicas en el futuro. Nuestros experi-
extracto (8 y 20 μg/ ml) cuando se analizaron factores mentos revelaron que los extractos de aloe no son
específicos producidos y secretados por las células. tóxicos ni siquiera en concentraciones elevadas (ver la
Por lo tanto, cuando se analizaron cantidades ligeras y figura 1) y pueden utilizarse con seguridad en terapias
cambios delicados en la producción de factores espe- o profilaxis de trastornos oculares. El aloe vera contie-
cíficos, tuvimos que estar seguros de que en ninguna ne múltiples sustancias farmacológicamente activas
circunstancia influíamos en la cantidad de las células, que son capaces de modular el metabolismo celular,
su viabilidad o su metabolismo. activar algunas enzimas y expresar actividades
antibacterianas, antifúngicas y antiinflamatorias
Las bajas concentraciones de extracto permitieron (Williams et al., 1996).
entonces demostrar que cantidades pequeñas de
sustancias vegetales pueden regular significativamen-
te la producción de NO y mostrar una actividad inmu- En general, lo que se observó en la medicina popular
nomoduladora. y también en los estudios experimentales es que los
extractos de aloe vera no influyen en la viabilidad de
las células. Esta observación fue confirmada por
Green y sus colegas (1996) que analizaron la curación
de las lesiones epiteliales de la córnea en conejos.
Revelaron que no había toxicidad, sin enrojecimiento
ni quemosis, tras la aplicación del gel de aloe vera en
los ojos de los animales. Confirmamos estos resulta-
dos (ensayos de MTT y RN) demostrando que los
extractos de aloe vera no tienen ningún efecto citotó-
Biología Farmacéutica
xico ni influyen simultáneamente en el citoesqueleto
celular de las células corneales humanas cultivadas.
Además, la actividad terapéutica puede estar asocia-
da a la mezcla de sustancias procedentes de la extrac-
ción de acetato de etilo del aloe vera, que demostró
una acción de barrido de ERO dependiente de la
concentración. Se acepta que la actividad antioxidan-
te del aloe vera esté relacionada con la presencia de
compuestos fenólicos en sus extractos (Ozsoy et al.,
2009). Este efecto también se considera como la
actividad terapéutica más beneficiosa de esta planta.
Sin embargo, Lindsey et al. (2003) concluyeron en su
estudio que las prometedoras propiedades antioxi-
dantes del aloe vera están limitadas por la insuficien-
te prevención simultánea de la peroxidación lipídica.
Sin embargo, el efecto reductor de las ERO es muy
importante si se tiene en cuenta que los extractos de
aloe también reducen la producción de NO. Este
resultado es complementario y concuerda con Chen
et al. (2005), que demostraron la actividad inhibido-
ra de los polisacáridos de aloe vera sobre la libera-
ción de NO en queratinocitos humanos cultivados.
El NO no solo es una importante molécula de señali-
zación fisiológica, sino también un radical efector en
los procesos biológicos. Sin embargo, puede también
ejercer efectos patológicos dependiendo de su
concentración local y del tipo de tejido sobre el que
influye (Sarkar et al., 2005).
La reducción de la producción de NO en el cultivo de
células corneales en presencia de extractos de aloe
vera, tal y como se demostró en nuestro estudio (ver
la Figura 2), puede ser el resultado de la inhibición
de la NO sintasa constitutiva e inducible y de la posi-
ble modulación de la actividad de la ciclooxigenasa
(COX). Las COX son enzimas clave en la biosíntesis
de las prostaglandinas que están implicadas en los
procesos inflamatorios (Lindsey et al., 2002).
Por lo tanto, existe una retroalimentación que
consiste en una limitación de las condiciones infla-
matorias por parte de los extractos de aloe vera, a
través de la inhibición de la expresión de citoquinas
proinflamatorias, y la producción de prostaglandi-
nas, que, en consecuencia, podría estar relacionada
con la disminución del nivel de NO. Sin embargo,
esta tesis necesita más estudios.
La disminución del nivel de NO puede, en conse-
cuencia, conducir a la formación de intermediarios
tóxicos muy activos (RNOS). Estas son capaces de
nitrosilar determinados residuos de aminoácidos de
las proteínas, lo que puede alterar la estructura de
las mismas y, en consecuencia, provocar la muerte
celular (Kim et al., 2001). No obstante, un nivel
adecuado de NO permite mantener la homeostasis
de la superficie ocular y puede servir como factor de
prevención de la salud contra, por ejemplo, las infla-
maciones crónicas. Por lo tanto, teniendo en cuenta
el doble papel del NO en el cuidado de la salud o la
toxicidad en función de su concentración local, tiene
que tener cantidades adecuadamente emparejadas de
sustancias activas de aloe vera en, por ejemplo, gotas
oftálmicas para lograr un efecto curativo progresivo
durante las unidades sucesivas de la terapia. La admi-
nistración de sustancias derivadas de hierbas o
extractos vegetales en partes específicas del organis-
mo, como el globo ocular influye en la homeostasis
local, entre otras cosas, en la red de citoquinas (Chen
et al., 2010).
Los cambios en los niveles de citoquinas pro y antiin-
flamatorias son los más importantes. Los cambios en
los niveles de citoquinas pro y anti inflamatorias son
los más importantes. El primer grupo está formado
por la IL-1β, la IL-6 o el TNF-α, mientras que el
segundo está formado por la IL-10. En nuestro estu-
dio, demostramos que los extractos de aloe vera, en
general, disminuyeron el nivel de citoquinas proinfla-
matorias, mientras que la IL-10 antiinflamatoria
dependía de la concentración y del tipo de extracto
(ver Figura 3).
Se ha demostrado que el aloe vera contiene muchos
compuestos biológicamente activos que crean efectos
antiinflamatorios o inmunomoduladores. Los agen-
tes activos de la planta actúan solos o en conjunto y
consisten principalmente en glicoproteínas, antra-
quinonas, polisacáridos o especies de baja masa
molecular (Choi & Chung, 2003).
Los datos de la literatura indican que los efectos
antiinflamatorios o inmunomoduladores también
podrían estar relacionados con los esteroles del aloe
vera. Se ha demostrado que pueden inhibir la enzima
fosfolipasa A2, que es responsable de la liberación de
ácido araquidónico, sustrato de la producción de
prostaglandinas.
Por lo tanto, la acción antiinflamatoria del contenido
de los extractos de aloe vera puede estar relacionada
con la inhibición de la síntesis de prostaglandinas y
leucotrienos.
Además, el efecto antiinflamatorio del aloe vera
podría estar relacionado con la inhibición de la COX
y, en consecuencia, lo que se demostró en nuestro
estudio, una disminución del nivel de citoquinas
proinflamatorias (Vázquez et al., 1996). Además, esta
planta puede inhibir el proceso inflamatorio no solo
por la disminución del nivel de citoquinas, sino
también por la reducción de la adhesión de leucocitos
en el lugar de la herida o lesión (Duansak et al.,
2003).
Nuestros resultados también confirmaron la estrecha
relación entre los niveles de IL-1β y de NO. Se sabe
que la IL-1β es un importante mediador de los proce-
sos de secreción que actúa, al menos en parte, a
través de la generación de NO (Eutamene et al., 1995;
Izzo et al., 1999). Por lo tanto, como confirmamos en
nuestros experimentos, la disminución del nivel de
IL-1β tras la administración del extracto de aloe vera
Biología Farmacéutica
al cultivo de células corneales, también fue seguida
por la limitación del nivel de NO. En resumen, hemos
demostrado que el efecto inmunomodulador o reduc-
tor de la inflamación basado en la limitación de los
niveles de citoquinas proinflamatorias por parte de
los extractos de aloe vera también puede producirse
en el tejido ocular.
Conclusiones
Los extractos de etanol y acetato de etilo del aloe
vera pueden utilizarse en gotas oftálmicas. En un
rango limitado de concentraciones, no son tóxicos
para las células corneales, muestran actividad
inmunomoduladora y podrían tener un efecto
antiinflamatorio. Por lo tanto, el aloe vera
proporciona una base científica para el uso de
esta planta en el tratamiento de inflamaciones y
otras afecciones de las partes externas del ojo,
como la córnea.
Reconocimiento
Nos gustaría expresar nuestro agradecimiento al
profesor T. Krzaczek (Universidad Médica de Lublin)
por la identificación del aloe vera.
Declaración de interés
Los autores declaran no tener ningún conflicto de
intereses.
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