EXTRACCIN DEL CIDO OLEANLICO Y URSLICO

Objetivos de la prctica.
Aislar a partir de clavos, el triterpeno bioactivo cido Oleanlico.
Fundamento terico.
El cido oleanlico (cido 3-hidroxiolean-12-en-28-oic) es un cido triterpnico
pentacclico presente en un amplio nmero de plantas medicinales, en forma de cido
libre o bien como aglicona de saponinas triterpenoideas, llegndose a aislar de ms
de 120 especies vegetales, destacando su presencia en Olea europaea.
Desde los aos 60, existen trabajos que plantean las posibles propiedades
teraputicas beneficiosas de este cido. Son numerosas las publicaciones sobre los
efectos biolgicos y farmacolgicos de los cidos triterpnicos, en particular del cido
oleanlico. Varias revisiones cientficas recogen actividades farmacolgicas de ste,
entre las que destacan: actividad hepatoprotectora, antiinflamatoria, antitumoral,
antibacteriana
y
antifngica,
anti-VIH,
hipoglucemiante,
antiulcerosa
e
hipolipemiante.
La produccin actual de esta sustancia se basa en la extraccin con solventes
orgnicos desde plantas medicinales, y su valor en el mercado oscila entre 300 y 400
dlares por gramo, el cual es alto, como consecuencia de las bajas concentraciones en
las plantas de las que se extrae.
El inters farmacolgico y comercial por esta sustancia, ha promovido diversos
estudios en cultivos de cultivos de clulas en suspensin de diferentes plantas:
Scutellaria baicalensis, Perilla frutescens, Uncaria tomentosa, Tabernaemontana
catharinensis, Olea europaea.

Referencias
BANIK R.M., PANDEY D.K., 2008. Optimizing conditions for oleanolic acid extraction
from Lantana camara roots using response surface methodology. Industrial crops and
products. Vol. 27. Pp. 241-248.
FERIA R. Iris, LAZO Elizabeth, PONCE N. Teresa, CERDA G. Carlos M., RAMOS V.
Ana C. 2005, Induced accumulation of oleanolic acid and ursolic acid in cell
suspension cultures of Uncaria tomentosa. Biotechnology Letters. Vol. 27. Pp. 839843.
LIU J., 1995. Pharmacology of oleanolic
Ethnopharmacology, Vol. 49. Pp. 57-68.

I-1

acid

and

ursolic.

Journal

of

PEREIRA Paulo S., KISS T. Fbio, DE CASTRO F. Suzelei, DE SOUZA Camila M.,
Lourenco Miriam V., 2007. Enhanced triterpene production in Tabernaemontana
catharinensis cell suspensin cultures in response to biotic elicitors. Quim. Nova. Vol.
30. No. 8. Pp. 1849-1852.
SRIVASTAVA Santosh, KHAN Merajuddin, KHANUJA Suman., 2005. Process for
isolation of hepatoprotective agent oleanolic acid from Lantana camara. Patente WO
2005/095321 A1.
SAIMARU Hiroshi, ORIHARA Yutaka, TANSAKUL Pimpimon, KANG Young-Hwa,
SHIBUYA Masaaki, EBIZUKA Yukata, 2007. Production od triterpene acids by cell
suspension cultures of Olea europaea. Chem. Pharm. Bull. Vol. 55. No. 5. Pp. 784-788.
WANG J. M., XIA Z.H., CHU J.H., TAN R.X., 2004. Simultaneous production of
anthocyanin and triterpenoids in suspension cultures of Perilla frutescens. Enzyme
and Microbial Technology. Vol. 34. Pp. 651-656.
YOON Hee, KIM Hye, MA Choong- Je, HOON Huh, 2000. Induced accumulation of
triterpenoids in Scutellaria baicalensis suspension cultures using yeast elicitor.
Biotechnology letters. Vol. 22. Pp. 1071-1075.
Material y reactivos.
Materiales
Anillo metlico
Capilares
Matraz erlenmeyer de 125
mL
Matraz de extraccin de
250 mL
Matraz redondo de 500 mL
Papel de filtro
Parrilla de calentamiento
Perlas de ebullicin
Pinzas de 3 dedos con nuez
Probeta de 25 mL
Rotaevaporador
Vaso de precipitado de 100
mL
Vidrio de reloj
Reactivos
Etanol
H2S04 al 5%
Diclorometano
Sulfato
sdico
anhdro
Hexano
Acetato de etilo
Oleum
Hidrxido de sodio

1
2
3
1
1
1
1
3
2
1
1
1
1

50 mL
25 mL
100 mL
10 g
10 mL
10 mL
10 mL
10 g

I-2

Mtodo experimental.
10 gramos del material vegetal (clavos o cscara de manzana), son triturados y
extraidos mediante Soxhlet usando etanol como disolvente (50 mL). Despus del
agotamiento del material vegetal, se elimina el 90% del disolvente en el
rotaevaporador, y se aade H2S04 al 5% hasta pH cido. La fase orgnica se extrae
con diclorometano (3x20 mL) [en la fase orgnica se extrae el cido urslico, mientras
que los alcaloides se quedan en la fase acuosa]. La fase orgnica se seca sobre sulfato
sdico anhdro, se filtra y se lleva a sequedad.
La presencia de AO se verifica mediante anlisis en cromatografa en placa fina
(t.l.c.), usando como fase mvil la mezcla de eluyentes hexano:AcOEt (6:4). Cuando se
revela con leum, la mancha de AO aparece a mitad de placa de color rosa.
Para la purificacin cromatogrfica, se mont una columna usando como fase
estacionaria gel de slice (12 gramos de silica por gramo de muestra). Inicialmente se
emple como fase mvil la mezcla hexano:AcOEt (6:4), que despus se cambi a
hexano:AcOEt (8:2) que despus se cambi a hexano:AcOEt (6:4). Las fracciones, que
mediante anlisis en cromatografa en placa fina, mostraron poseer el AO como
componente principal, se unieron y se llevaron a sequedad.
El residuo se recristaliza en etanol. Slido de punto de fusin 303-305C.

I-3