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ARTÍCULO DE INVESTIGACIÓN
potencia antioxidante;
extraer utilizando diversos in vitro sistemas de ensayo, incluyendo la reducción de férrico poder antioxidante y 2,2 -azinobis
ensayos (3-etilbenzotiazolina-6-sulfonato), 1,1-diphenyl2-picrilhidrazil, peróxido de hidrógeno, óxido nítrico de
Peroxidación lipídica;
eliminación de radicales, y la actividad quelante de iones ferrosos, así como el efecto inhibitorio sobre la detección de
Nasturtium officinale;
ion ferroso / ascorbato la peroxidación de lípidos inducida, en homogeneizado de hígado de rata. Los resultados
eliminación de radicales;
revelaron que
reducción de la potencia
N. officinale extracto posee poder reductor potente en un férrico reducción de ensayo de poder antioxidante, la
capacidad de eliminación dependiente de la concentración en 2,2 -azinobis 3-etilbenzotiazolina-6-sulfonato,
1,1-difenil-2-picrilhidrazil, los radicales de óxido nítrico y peróxido de hidrógeno, así como la capacidad quelante
de los iones ferrosos. Además,
N. officinale extracto evita la formación de sustancias reactivas al ácido tiobarbitúrico en / ascorbato peroxidación lipídica
inducida por ion ferroso en homogeneizado de hígado de rata de una manera dependiente de la dosis. Además, este N.
officinale extracto tenía el fenólico y el contenido de flavonoides de 96,2 mg de equivalentes de ácido gálico / g de extracto
se secó y equivalentes de catequina 63,2 mg / g de extracto seco, respectivamente. Los resultados acumulados indican
claramente que N. officinale extracto posee propiedades antioxidantes potentes probablemente mediadas a través de la
captura directa de los radicales libres, poder reductor, y también a través de quelante de metal. Sobre la base de su
potencial antioxidante, N. officinale extraer podría encontrar aplicaciones en la prevención de enfermedades relacionadas
con radicales libres.
* Autor correspondiente. Instituto de Bioquímica y Biofísica de la Universidad de Teherán, PO Box 13145-1384, Teherán, Irán. E-mail: yazdan@ibb.ut.ac.ir
podría ser utilizada para reducir la extensión del daño oxidativo [5]. En utilizados fueron de grado analítico. se utilizó Glass agua destilada
los últimos años, una serie de plantas medicinales han sido doble-en todos los experimentos.
investigados por su actividad específica de extinción de ROS. Estos
antioxidantes naturales no sólo protegen los lípidos de los alimentos 2.2. El material vegetal y la preparación de extractos
de la oxidación, pero también pueden proporcionar beneficios para la crudos
salud asociados con la prevención de daños ROS [6]. Estos efectos
beneficiosos de las frutas y hortalizas se han atribuido, en parte, a partes aéreas de N. officinale se obtuvieron de los suburbios de
compuestos polifenólicos, especialmente los flavonoides, presentes Brojerd (Lorestan, Irán) durante la primavera
en estos alimentos [7]. Sobre la base de diversos estudios, estos 2006, identificado por el Dr. F. Attar (Departamento de Biología,
compuestos parecen actuar como antioxidantes, mediante la Facultad de Ciencias, Universidad de Teherán), y un espécimen de
inhibición de biomoléculas a partir de someterse a daño oxidativo a vales (No. 39055) depositados en el herbario central de la
través de reacciones mediadas por radicales libres. Un papel Universidad de Teherán. El material recogido se secó al aire,
importante en este proceso es interpretado por los vegetales mientras que está protegido de la luz solar directa, y se muele hasta
crucíferos populares (Brassicaceae), que contienen varios un polvo. El producto (500 g) se extrajo cuatro veces con etanol
compuestos bioactivos con otras propiedades promotoras de la salud acuoso (EtOH, dos veces en 80% y dos veces a 70%) a temperatura
consecuente antioxidante y [8]. Uno de estos vegetales es Nasturtium ambiente durante la noche, los extractos combinados y se
officinale R. Br. (Berro) que se utiliza como planta medicinal en Irán. concentraron a presión reducida en un evaporador rotatorio, y el
Además, las hojas de esta planta se utilizan tradicionalmente contra residuo se filtró, congelados a - 70ºC, y se liofilizó. El rendimiento
depurativo, diurético, expectorante, hipoglucémico, odontalgic, y medio del material resultante como un porcentaje de la planta seca
condiciones del estómago [9 - 11], y también se han reportado de partida fue aproximadamente 22%.
actividades antimitóticos y anticancerígenas de esta planta [12,13].
Hemos demostrado previamente que el extracto de hoja seca de
officinale N. ( NOE) ejerce un efecto antihyperlipidemic en ratas Ratas macho N-Mary, la ponderación 200 - 250 g se adquirieron de
alimentadas con una dieta alta en grasa [14]. Estudios independientes instituto Pasteur (Teherán, Irán), alojado en condiciones
también han confirmado la presencia de compuestos fenólicos convencionales y provisto de alimentos y agua ad libitum. En los
antioxidantes, sobre todo flavonoides y experimentos, las ratas se anestesiaron con éter de dietilo y luego el
β- caroteno, en NOE [15,16]. Para aclarar el mecanismo de acción abdomen de cada rata se abrió y el hígado eliminan rápidamente.
de esta planta medicinal, en particular con respecto a sus efectos Los órganos se enjuagaron inmediatamente con solución salina,
antihiperlipidémicos, se evaluaron los antioxidantes y gratuitas secaron sobre papel de filtro, se pesaron, cortado en trozos
capacidades de barrido de radicales del extracto y los resultados pequeños, y se homogeneizó a 10% w / v en tampón de fosfato
revelaron que NOE poseía alta antioxidante, eliminación de [(PB), 50 mM, pH 7,4] en un homogeneizador para dar un
radicales libres, y las actividades reductoras en el in vitro Los homogeneizado de hígado . Los homogeneizados se centrifugaron a
sistemas utilizados aquí. 5000 sol durante 15 minutos a 4ºC (Beckman refrigerada,
ultracentrífuga CA, EE.UU.). La concentración de proteínas de cada
sobrenadante se determinó por el método de Lowry et al, utilizando
bovina cristalina de albúmina de suero como estándar [17]. El grado
2. Materiales y métodos de peroxidación de lípidos se evaluó midiendo el producto de
sustancias reactivas al ácido tiobarbitúrico en el homogeneizado de
2.1. productos químicos hígado de rata usando un método modificado descrito anteriormente
[18]. Brevemente, la mezcla de reacción estaba compuesta de 0,5
Potasio cianuro férrico, EDTA, 2,2 -azinobis homogeneizado de tejido ml, 0,9 ml PB,
(3ethylbenzothiazoline-6-sulfonato) (ABTS +),
y-tetrametilcroman-2-carboxílico 6hydroxy-2,5,7,8 ácido (Trolox)
se obtuvieron de Sigma-Aldrich (St Louis, MO, EE.UU.).
2,2-difenil-1-picrilhidracilo (DPPH) se obtuvo de Fluka (Buchs, 0,25 ml FeSO 4 ( 0,01 mM), 0,25 ml de ácido ascórbico (0,1 mM), y
Suiza). 0,1 ml de diferentes concentraciones del extracto o la catequina
2,4,6-tripiridil-S-triazina se obtuvo de productos químicos BDH, estándar positivo. La mezcla se incubó a 37 ° C durante 30
Ltd. (UK). El ácido gálico, ácido ascórbico, y cloruro férrico se minutos y la reacción terminó por adición de hidroxitolueno
obtuvieron de Sigma-Aldrich. hidroxitolueno butilado, ácido butilado (2% w / v en 95% v / v de etanol acuoso) seguido por
tiobarbitúrico, ferrozina, y persulfato de potasio (peroxodisulfato adición de 1 ml de ácido tricloroacético (20% w / v) a cada
de potasio) se obtuvieron de Merck Co. (Whitehouse Station, NJ, mezcla. Después de centrifugación a 3000 g durante 15 minutos,
EE.UU.). Todos los otros productos químicos el sobrenadante se incubó
la eficacia antioxidante de Nasturtium officinale 285
con 1 ml de ácido tiobarbitúrico (0,67%) a 100ºC durante 15 La absorbancia de la mezcla anterior se midió a 734 nm después
minutos. La absorción de 532 nm del color desarrollado de la de 6 minutos. medidas de blanco apropiados se llevaron a cabo y
mezcla de reacción se midió mediante un espectrofotómetro y el los valores registrados. Trolox se ensayó también en las mismas
porcentaje de inhibición de la peroxidación de lípidos se calcula por condiciones que un compuesto antioxidante estándar. Las
comparación con los controles (no tratados con extracto). disminuciones en la absorción a 734 nm se utilizó para calcular los
valores de inhibición en comparación con el control.
UNA 0) × 100], donde A 0 era la absorbancia reacción de control y A 1 0,5 ml de reactivo de Griess (sulfanilamida al 1%, 2% H 3 correos 4,
la absorbancia con la norma o extracto. y se añadió 0,1% de N- (1-naftil) etilendiamina) y la absorbancia
546 nm del cromóforo resultante medido.
Todos los análisis se realizaron por triplicado y los datos reportados como 3.3. ensayo FRAP
medios ± DAKOTA DEL SUR. La concentración eficaz para el efecto del 50%
(CE 50) se calcularon a partir del análisis de regresión lineal. Tanto el extracto y Trolox tenían la capacidad de reducir Fe 3+ a Fe 2+ de una
manera dependiente de la concentración
UNA segundo
La inhibición de la formación de TBARS (%)
100
20 40 60
20 40 60 80
10 0 25 50 Concentración
100 (μg
200 500 10 0 25 50 Concentración
100 (μg
200 500
/ ml) / ml)
Figura 1 Efecto del crudo Nasturtium officinale se secó el extracto de hoja (NOE) en (A) la inhibición de la peroxidación de lípidos inducida por FeSO 4 en homogeneizados de
hígado y (B) la capacidad quelante para Fe 2+ iones. control negativo, sin extracto antioxidante o; Los valores se presentan como media ± DAKOTA DEL SUR, n = 3. TBARS =
sustancias reactivas al ácido tiobarbitúrico.
la eficacia antioxidante de Nasturtium officinale 287
CE 50
Actividad antioxidante
NOE Vitamina C catequina EDTA Trolox
CE 50 valores para NOE calculados a partir de los datos presentados en las Figuras 1, 3 y 4; los valores para los estándares (vitamina C, catequina, EDTA, y Trolox calculado a
partir de experimentos paralelos); Los valores presentados en μ g de ml de extracto o / estándar por volumen de reacción. TBARS = sustancias reactivas al ácido tiobarbitúrico;
DPPH = 2,2-difenil-1-picrilhidracilo; ABTS • + = 2,2 -azino-bis (ácido 3-ethylbenzthiazoline6-sulfónico) catión radical; NO = óxido nítrico.
0 ensayo de la H 2 O 2
capacidad secuestradora de NOE mostró que esto es dependiente de la
10 20 30 50 100
concentración del extracto, aumentando a medida que la concentración
Concentración ( μ g / ml) del extracto aumentó de 25 - 400 μ g / ml (Figura 4B). la CE 50 valores para
el extracto y la vitamina C se encontró que eran 312,4 y 106,2 μ g / ml,
Figura 2 valores FRAP ( μ M) para Nasturtium officinale
se secó el extracto de hoja y Trolox. Los valores se presentan como media ± DAKOTA DEL
respectivamente (Tabla 1).
SUR, n = 3; Trolox, oxidante conocido como control positivo. FRAP = férrico reducción de la
potencia antioxidante.
3.6. fenólico total y el contenido de flavonoides
(Figura 2). Los valores FRAP del extracto eran Los fenólicos y flavonoides contenido total del extracto crudo de N.
7.21 μ M, 13,3 μ M, 19,6 μ M, 32,9 μ M, y 55,1 μ M para las officinale se muestran en la Tabla 2. El rendimiento masa total del
concentraciones de 10 μ g / ml, 20 μ g / ml, 30 μ g / ml, 50 μ g / ml y extracto del material vegetal fue 22,3%. El extracto bruto de
100 μ g / ml contra los valores de Trolox de
19.8 - 91.9 μ METRO. N. officinale mostraron el fenólico y el contenido de flavonoides para ser
96,2 equivalentes de ácido gálico extracto seco y 63,2 equivalentes de
3.4. DPPH y ABTS radicales actividad de barrido catequina mg / g de extracto seco, respectivamente.
UNA segundo
Extracto
de Trolox
actividad captadora de DPPH (%)
20 40 60 80 20 40 60 80
10 0 25 50 Concentración
100 (μg
200 400 10 0 20 30 Concentración
50 (μg
100 200
/ ml) / ml)
Figura 3 ( A) 2,2-difenil-1-picrilhidracilo (DPPH) la actividad de eliminación de radicales y B) la inhibición de la 2,2 ( -azino-bis (3-etilbenzotiazolina-6-sulfónico)
(ABTS) catión radical por crudo Nasturtium officinale extracto de hoja seca y compuestos estándar. control negativo, sin antioxidante o extracto; Los valores se
presentan como media ± DAKOTA DEL SUR, n = 3.
UNA segundo
100
Extracto de La vitamina C
catequina Extracto
H 2 O 2 actividad de eliminación (%)
80
NO actividad de eliminación (%)
40
20 40 60 80 20 60
Figura 4 ( A) radical óxido nítrico y (B) H 2 O 2 actividad de barrido del crudo Nasturtium officinale extracto de hoja seca y compuestos estándar. Los valores se presentan
como media ± DAKOTA DEL SUR, n = 3.
capacidad de aceptar electrones, que se pueden combinar de forma puede tener la propiedad para contrarrestar el efecto de la formación
competitiva con los radicales libres para disminuir la peroxidación de NO y, a su vez, puede ser de considerable interés en la prevención
lipídica inducida por los radicales libres. Para probar esta situación, el de los efectos de la generación excesiva de NO en los seres humanos.
papel de NOE se investigó más en términos de su efecto sobre Además, dicha actividad de barrido también puede ayudar a detener la
quelante de metales y otras especies de radicales libres. capacidad cadena de reacciones iniciadas por el exceso de NO. En este estudio,
quelante de metales es importante ya que reduce la concentración del se observó NOE tener una actividad NO barrido moderado, una
metal de transición catalizador en la peroxidación de lípidos a través de capacidad que podría ser debido a su fenólico / contenido de
la reacción de Fenton. En este estudio, el quelante de Fe 2+ iones de flavonoides (Tabla 2). La medición de H 2 O 2 actividad de barrido es un
NOE se estimó utilizando el método de Hsu et al [19]. Sobre la base de método útil para determinar la capacidad de los antioxidantes para
este método, ferrozina pueden formar cuantitativamente complejos con disminuir concentraciones de prooxidantes, tales como H 2 O 2
Fe 2+ y, en presencia de otros agentes quelantes, la formación del
complejo se interrumpe. La Fe observado 2 + - capacidad quelante de
NOE sugirió que constituyente activo (s) en el extracto eran capaces [30]. Aunque H 2 O 2 sí no es muy reactivo, que, junto con el anión
de formar complejos estables con este ion de metal de transición radical superóxido, puede dañar muchos componentes celulares.
(Figura 1B). Como los compuestos antioxidantes presentes en el extracto eran
buenos donadores de electrones, como se muestra aquí en varios in
vitro sistemas de ensayo, que pueden haber acelerado la conversión
de H 2 O 2 a H 2 O.
Ensayo de la capacidad para captar el radical DPPH estable es un
método ampliamente utilizado para evaluar actividades antioxidantes en En conclusión, los resultados de este estudio indican claramente que
un tiempo relativamente corto, en comparación con otros métodos, NOE tiene una potente actividad antioxidante frente a diversos sistemas
como DPPH es un electrón impar estable que contiene radical libre que oxidativos in vitro. Las diversas propiedades antioxidantes de NOE se
es útil para detectar la actividad de eliminación de radicales. El efecto pueden atribuir a la eficacia de sus componentes como eliminadores de
de los antioxidantes en DPPH de eliminación de radicales se pensaba radicales libres, la capacidad reductora, y la capacidad quelante de
que era un resultado de su hidrógeno donar capacidad [29]. capacidad metales, así como la inhibición de la peroxidación lipídica. La propiedad
NOE para depurar estos radicales libres indicó que el extracto podría captador de radicales libres puede ser uno de los mecanismos por los que
haber contenido compuestos fenólicos que transformar los radicales esta planta es útil como un producto alimenticio, así como una medicina
libres a productos más estables. Además, la capacidad antioxidante del tradicional. Se necesitan estudios adicionales para caracterizar los
extracto, en el barrido de color azul-verde ABTS • +, se midió con relación compuestos bioactivos específicos responsables de las actividades
a la capacidad de eliminación de radicales de Trolox. radicales ABTS observadas. Así N. officinale puede ser visto y utilizado como una fuente
son más reactivos y fácil de usar, tienen una alta sensibilidad, y permitir accesible de antioxidantes naturales y un posible complemento
el análisis rápidos de la actividad antioxidante de un gran número de alimenticio.
muestras. A continuación, el extracto de ABTS • + actividad de barrido
mostró un papel directo de sus compuestos fenólicos en radical libre de
captación.
Expresiones de gratitud
En todavía otro enfoque, el poder antioxidante de NOE se evaluó Los autores agradecen el apoyo financiero de esta investigación realizada por
por el método FRAP. La reducción de potencial se asocia generalmente el Consejo de Investigación de la Universidad de Teherán.
con la presencia de agentes reductores, tales como sustancias
antioxidantes que causan la reducción de la Fe 3 + / complejo ferricianuro
a la forma ferrosa. Similar a su actividad antioxidante, del extracto de
reducir el potencial aumentó de una manera dependiente de la dosis y, referencias
basándose en estos resultados, se puede concluir que los compuestos
polifenólicos del extracto se donadores de electrones capaces de 1. Un Ardestani, Yazdanparast R. antioxidante y el potencial de captación de
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