Cromatografía en papel: separación de cationes y colorantes

OBJETIVO

Familiarizarse con las técnicas cromatográficas como método de separación (purificación) e

identificación de sustancias.

DISCUSIÓN

La cromatografía (del griego chroma, color, y graphein, escribir) es una técnica utilizada a
menudo por los químicos para separar los componentes de una mezcla. En 1906, el botánico
ruso Mikhail Tsvett separó los pigmentos de color presentes en las hojas al permitir que una
solución de estos pigmentos fluyera por una columna llena de un material insoluble como
almidón, alúmina (Al2O3) o sílice (SiO2). Debido a que aparecían diferentes bandas de color a
lo largo de la columna, llamó al procedimiento cromatografía. El color no es una propiedad
necesaria para lograr la separación de compuestos mediante este procedimiento. Los
compuestos incoloros pueden hacerse visibles permitiéndoles reaccionar con otros reactivos, o
pueden detectarse por medios físicos. En consecuencia, por su sencillez y eficiencia, esta
técnica tiene una amplia aplicabilidad para separar e identificar compuestos como fármacos y
productos naturales.

La base de la cromatografía es la partición (es decir, la separación que surge de las diferencias
de solubilidad) de los compuestos entre una fase estacionaria y una fase móvil. Las fases
estacionarias como la alúmina (Al2O3), la sílice (SiO2) y el papel (celulosa) tienen áreas de
superficie enormes. Las moléculas o iones de las sustancias a separar se adsorben
continuamente y luego se liberan (desorben) en el solvente que fluye sobre la superficie de la
fase estacionaria. Esto provoca una separación de los componentes, es decir, viajarán con
diferentes velocidades en el solvente en movimiento porque generalmente hay diferentes
atracciones entre estos componentes y la fase estacionaria.

En la cromatografía en papel, se coloca una pequeña mancha de la mezcla que se va a separar

en un extremo de una tira de papel y se permite que el solvente suba por el papel, a través de
la mancha, por acción capilar. El solvente y varios componentes de la mezcla viajan cada uno a
diferentes velocidades a lo largo del papel. En este experimento, Fe3+, Cu2+ y NF+ se
separarán con un solvente que consiste en una mezcla de acetona, agua y ácido clorhídrico. En
la figura 10.1 se muestra un diagrama de una parte de una tira de cromatograma típica.

La identidad de los componentes de una mezcla se puede deducir comparando un

cromatograma del desconocido con cromatogramas de mezclas de componentes que se
sospecha que están presentes en el desconocido. Una ayuda adicional en la identificación de
un compuesto es su valor Rf, que se define como la relación entre la distancia recorrida por un
compuesto y la distancia recorrida por el solvente. Por ejemplo, para Cu2+ (ver Figura 10.1),

dCu
R f (Cu)=
ds

El valor Rf de un compuesto es una característica del compuesto, del soporte y del solvente
utilizado y sirve para identificar los constituyentes de una mezcla. Se puede hacer una
estimación de la cantidad relativa de cada uno de los constituyentes en una mezcla a partir de
las intensidades y tamaños relativos de las diversas bandas en un cromatograma.
Los tres iones estudiados en este experimento se distinguirán de la siguiente manera: el Fe3+
en agua imparte un color marrón rojizo u óxido y, por lo tanto, producirá una banda de color
óxido en el papel. Aunque Cu2+ es azul, el color es débil y no se detecta fácilmente,
especialmente si el cobre está presente en pequeñas cantidades. En solución acuosa, sin
embargo, Cu2+ reacciona con NH3 (del hidróxido de amonio) para formar un ion complejo,
[Cu(NH3\]2+, que es de color azul intenso y por lo tanto fácil de observar. Finalmente, NF+
reacciona con un reactivo orgánico, dimetilglioxima, para producir un color rojo fresa Las
siguientes reacciones ocurrirán durante el proceso de revelado en el papel:

PROCEDIMIENTO

Hay dos formas sencillas de realizar este experimento: ya sea por cromatografía circular
horizontal o por cromatografía ascendente usando stnps de papel. La mitad de la clase debe
realizar este experimento usando una técnica y la otra mitad debe usar la otra técnica. Las dos
técnicas pueden entonces compararse en términos de tiempo requerido, separación y facilidad
de identificación.

Haga seis pipetas capilares (2 pulgadas de largo) sacando un tubo de vidrio de 6 mm. Su
instructor le demostrará cómo se hace esto, o puede obtener los tubos capilares de su
instructor.

Obtener un desconocido; analizará esto al mismo tiempo que realiza el experimento sobre las
soluciones conocidas. Su desconocido puede contener uno, dos o tres de los iones que se
están estudiando. Registre los colores de las soluciones conocidas en su hoja de informe (1).

B. Técnica de tira ascendente

Obtener un trozo de tira de papel de cromatografía de unos 50 cm de largo. Corta esto en tiras
de 15 cm y marca cada tira con un punto de lápiz. Etiquete como se muestra en la Figura 10.4.
Ejecutará tres cromatogramas simultáneamente con esta técnica: el conocido, el desconocido
y el rastro de Cu2+. Coloque el solvente revelador a una profundidad de 10-12 mm en el fondo
de un vaso de precipitados de 600 mL. Ubique las tiras como se describe arriba para los
círculos: una tira con los tres conocidos, una tira con la solución desconocida y una tira con la
solución que contiene trazas de Cu2+. Fije los extremos etiquetados de las tiras a un listón de 6
pulgadas. varilla de vidrio doblando los extremos sobre la varilla y sujetando el papel con clips
(ver Figura 10.5). Coloque la varilla con las tres tiras unidas en la parte superior del vaso de
precipitados. Asegúrese de que los puntos de las tiras estén completamente secos antes de
colocar las tiras en el vaso de precipitados. Asegúrate de que las tiras no se toquen ni entre sí
ni con las paredes del vaso de precipitados y que el fondo de cada tira descanse en la solución.
Cubra el vaso de precipitados cuidadosamente con un vidrio de reloj. No toque el vaso de
precipitados mientras se desarrollan los cromatogramas. Cuando el frente del solvente casi
haya llegado a la unión de la parte doblada del papel, retire con cuidado el vidrio de reloj y la
varilla de vidrio con las tiras. Inmediatamente marque los frentes de solvente con un lápiz.
Permita que las tiras se sequen ventilando el aire con ellas y proceda como se indica a
continuación con las soluciones de revelado.

¿Cuál de los iones conocidos detecta sin recurrir al uso de ningún otro reactivo (o revelado)
(2)? ¿Hay alguna diferencia entre el frente del anillo de este ion y el frente del solvente (3)?
Marque el frente del anillo de este ion.
Desarrollo de reacciones. EN LA CAMPANA, vierta alrededor de 5 ml de hidróxido de amonio
15 M en un plato limpio y poco profundo y coloque el papel de filtro que contiene los
conocidos encima del plato. No permita que el papel se sumerja en la solución. ¿Qué color se
desarrolla (4)? ¿Qué ion indica esto (5)? Marque el frente del anillo.

Para detectar el tercer ion, sumerja un nuevo trozo de papel de filtro en una solución al 1 por
ciento de dimetilglioxima; luego, usando la nueva pieza como pincel, pinte el papel de filtro de
prueba. Como procedimiento alternativo, puede rociar el papel con un aerosol que contenga
dimetilglioxima. ¿Qué color se desarrolla (6)? ¿Qué ion indica esto (7)? Marque el frente del
anillo.

Mida la distancia a cada uno de los frentes de los anillos en milímetros (8). Calcule los valores
de R1 para los tres iones conocidos (9) usando la Ecuación [1].

Repita la secuencia anterior de desarrollo de reacciones con papel que contenga su incógnita.
¿Qué iones están presentes en tu incógnita (10)? Registre las distancias en milímetros a los
frentes de los anillos (11) y calcule los valores de R1 (12).

Las cantidades relativas de los componentes de una mezcla se pueden determinar utilizando
los métodos empleados en este experimento. Prepare una mezcla de estos iones de la
siguiente manera: mezcle 5 ml de la solución de Fe3+ y 5 ml de la solución de Ni2+ y luego
agregue 2 o 3 gotas de la solución de Cu2+ como contaminante traza. Aplique 1 gota de esta
mezcla a un trozo de papel de filtro preparado. Ejecute y desarrolle el cromatograma. Registre
sus observaciones (13). Compare sus resultados con los de alguien que realizó el experimento
usando la otra técnica (14).

Tintes. Puede creer que el colorante alimentario consta de una sustancia o que la tinta negra
de los rotuladores es una sola sustancia. Localice fuertemente un trozo de papel de filtro con
un rotulador negro. Oscurezca bastante la mancha para asegurarse de que se ha transferido
suficiente tinta al papel. Obtener un cromatograma, usando como solvente una solución
preparada diluyendo 10 mL de alcohol isopropílico con 5 mL de agua.

Adjunte todos los cromatogramas secos y desarrollados a su hoja de informe.