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PRACTICA. - 2

Toma de muestra.

Objetivo al terminar la práctica, el alumno será capaz de:

1. Justificar la indicación de los métodos de obtención de muestras

2. Obtener correctamente muestras capilares y venosas de calidad analítica

MATERIAL

Tubos 13 x 75 color lilas

Jeringas de 5 ml. 10 ml

holder

Ajugas diverso calibres

Torundas

Alcohol al 70%

Material de RPBI

Procedimientos

1. Colocar el brazo del paciente, inclinándolo hacia abajo, desde la altura del hombro
2. Colocar el torniquete con el lazo hacia arriba para evitar la contaminación de la zona de
punción.

3. No aplicar el procedimiento de golpear sobre la vena con dos dedos al seleccionar la vena.
Este tipo de procedimiento provoca hemólisis capilar y, por tanto, altera el resultado de algunos
analitos.

4. Si se usa el torniquete para la selección preliminar de la vena, aplicarlo durante un breve

momento, pidiendo al paciente que cierre la mano. Localizar la vena y aflojar el torniquete
enseguida. Esperar 2 minutos para utilizarlo nuevamente.

5. El torniquete no deberá ser utilizado en algunas pruebas como lactato o calcio, para evitar
variaciones en el resultado.

6. Aplicar el torniquete de 7,5 a 10 cm por encima de la zona de la punción para evitar la

contaminación de la zona.

7. No utilizar el torniquete de forma continuada durante más de 1 minuto.

8. Al aplicar el torniquete, pedir al paciente que cierre la mano para hacer visible la vena.

9. No apretar el torniquete con intensidad, puesto que el flujo arterial no debe ser interrumpido. El
pulso debe permanecer perceptible.

10. Cambiar el torniquete siempre que haya sospecha de contaminación.

11. Se debe cambiar de guantes antes de la realización de la venopunción.

12. Los guantes deben ser colocados con cuidado para que no se rasguen. Deben quedar bien
adheridos a la piel para que la persona que extrae la sangre no pierda sensibilidad en el

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momento de la punción

13. Se recomienda utilizar una gasa humedecida con solución de alcohol isopropílico o etílico 70%,
comercialmente preparado

14. Limpiar la zona con un movimiento circular desde el centro hacia fuera

15. Dejar secar la zona durante 30 segundos para prevenir la hemólisis de la muestra y reducir la
sensación de ardor en la venopunción.

16. No soplar, no abanicar ni colocar nada en la zona.

17. No tocar la zona después de la antisepsia.

18. Si la venopunción fuese difícil de realizar y fuera necesario palpar la vena de nuevo para llevar
a cabo la extracción, se debe limpiar la zona escogida nuevamente.

Practica-. 4
RECUENTO DE RETICULOCITOS Y PLAQUETAS
OBJETIVOS
Lograr un correcto recuento de reticulocitos en frotis sanguíneo.
El alumno realizara la forma correcta del recuento de reticulocistos en sangre total.
El alumno realizara la forma correcta de identificar las plaquetas en un frote
sanguíneo.

PRINCIPO DE PROCEDIMIENTO

Reticulocito: este es un eritrocito joven que todavía contiene un fino retículo basófilo que se
demuestra con tinciones supra vitales como el azul de cresilo brillante.

EQUIPOS
✓ Microscopio.
✓ Baño María Termorregulador.
✓ Contador hematológico.

MATERIALES

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✓ Tubos de hemólisis de 25 x 75 mm.

REACTIVOS

✓ Nuevo azul de metileno (1 g/ 100ml solución fisiológica).

✓ También puede usarse azul cresil brillante o el azul B.

MUESTRA

✓ Sangre con EDTA.

PROCEDIMIENTO

✓ Mezclar cantidades iguales de sangre y del colorante azul de metileno nuevo (dos a tres
gotas, o 50 µL de cada uno) e incubar a 37 centígrados por 20 minutos.
✓ Preparar dos extendidos mediante dos portaobjetos.
✓ En una zona en la que las células estén agrupadas, pero sin tocarse, contar 1.000
eritrocitos con el objetivo de inmersión en aceite. Los reticulocitos se incluyen en el
recuento total de eritrocitos (esto es, un reticulocito se cuenta como un eritrocito o como un
reticulocito).
✓ Para garantizar la exactitud, otro técnico debe hacer un recuento en el otro extendido; los
valores deben coincidir en un rango del 20%

RECUENTO DE RETICULOCITOS Y PLAQUETAS

CALCULO DE RESULTADOS

✓ Por ejemplo, si se contaron 15 reticulocitos,

✓ Reticulocitos (%) = 15/1000 x 100 = 1.5 %.

✓ El número de reticulocitos contados puede multiplicarse por 0,1 (100/1000) para obtener el
resultado

RANGO DE REFERENCIA

✓ Valores de referencia para recuento de reticulocitos para hombres y mujeres:

✓ Neonatos de término y primeras 24 Hrs de vida 2 - 6 %.
✓ Adultos 0.2 - 2 %

INFORME

✓ El recuento de reticulocitos se informa en %.

Practica 5

DETERMINACIÓN DEL HEMATÓCRITO”

Objetivo:
Aprender a realizar la prueba del hematocrito utilizando el macro y micrométodo, conocer su
importancia en el diagnóstico de enfermedades y la forma adecuada de su procedimiento.

INTRODUCION

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El hematócrito o volumen globular porcentual mide el porcentaje del volumen total de sangre
ocupado por glóbulos rojos. Su determinación se basa en la separación de los eritrocitos y el plasma
mediante una centrifugación capaz de “empacar” a los hematíes en el menor volumen posible; éste
será llevado a 100% con el total de sangre, por lo que el resultado se expresará como un porcentaje. El
volumen del plasma que queda atrapado entre las células debe ser el menor posible, para evitar
mediciones erróneas. Es obvio que el anticoagulante utilizado para realizar esta determinación es
capaz de mantener inalterado el volumen eritrocitario.
MATERIAL:
✓ Biológico: Sangre obtenida con EDTA
✓ Mechero Bunsen
✓ Gradilla
✓ Regla de plástico
✓ Tubos capilares sin heparina
✓ Barra de plastilina

TÉCNICA PARA EL MICROMÉTODO:

1 .Mezclar la sangre por inversión, por lo menos durante 5 minutos. No agitarla.
2. Llenar las dos terceras partes de un tubo capilar por el lado no marcado.
3. Sellar el extremo opuesto (marcado con una banda azul) con la flama del mechero. Esto se hace
girando el tubo capilar para lograr el sellado uniforme y el fondo quede redondeado y no en punta. Una
alternativa más práctica para el sellado es obturar el extremo distal con plastilina
4. Centrifugar en la microcentrífuga a 5000 r.p.m. durante 5-8 minutos.
5. Se lee, usando una regla o lector para microhematócrito, las alturas del volumen de eritrocitos y del
volumen total de la muestra. Calcular el microhematócrito de la siguiente manera:

Altura de eritrocitos (mm)

Hematócrito = ____________________ X 100
Altura del volumen total (mm)

VALORES DE REFERENCIAS
EDAD SEXO INTERVALOS
Recién nacidos F/M 44-62 %
1 mes a 2 años F/M 44-62%
3 a 10 años F/M 37-45%

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11 a 60 años FEMENINO 36-48%
11 a 60 años MASCULINO 42-54%
Más de 60 años F/M 37-45%

Practica-. 6
Determinación de hemoglobina

Objetivo: el alumno realizara la de terminación de hemoglobina por el método de espectrofotometría y

determinación capilar en sangre total.

La hemoglobina una proteína conjugada que sirve para el transporte del oxigeno y dióxido de carbono
en sangre.
La hemoglobina es una proteína que contiene hierro y que le otorga el color rojo a la sangre. Se
encuentra en los glóbulos rojos y es la encargada del transporte de oxígeno por la sangre desde los
pulmones a los tejidos.
La hemoglobina también transporta el dióxido de carbono, que es el producto de desecho del proceso
de producción de energía, lo lleva a los pulmones desde donde es exhalado al aire.
El análisis de la hemoglobina se realiza normalmente en un estudio completo de hematimetría, con el
recuento de glóbulos rojos o hematíes.

El análisis del hematocrito se realiza normalmente en un estudio completo de hematimetría, con el

recuento de glóbulos rojos o hematíes.
Reactivos:
Material y Equipo:
· EDTA
· Un colorímetro fotoeléctrico o un espectrofotómetro.
· Reactivo Drabkin
· Una pipeta de vidrio graduada de 5 mL
· Ferrocianuro de potasio
· Pipeta semiautomática
· Cianuro de potasio
· Tubos de ensayo.
· Bicarbonato de potasio
· Gradilla
· Solución estándar de cianometahemoglobina
· Gasas

Reactivos biológicos:

Sangre venosa con EDTA.

PRACTICA.-7 EL RECUENTO DE ERITROCITOS

OBJETIVO: El alumno aprenderá a realizar un recuento de Eritrocitos por milímetro cúbico de

sangre, interpretar el resultado, así como adiestrarse en el manejo de la cámara de Neubauer y la
pipeta de Thoma

INTRODUCCIÓN:
EL RECUENTO DE ERITROCITOS es un examen de sangre que determina el número de
glóbulos rojos (GR) que tiene una persona. La cantidad de oxígeno recibida por los tejidos corporales
depende de cuántos glóbulos rojos tenga la persona y de qué tan bien éstos estén funcionando.
El recuento de eritrocitos, leucocitos y plaquetas son expresados en concentración (células por unidad
de volumen de sangre); en este caso que es el método manual es de mm³
MATERIAL:
• Pipeta de Thoma

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• Hemacitómetro (cámara de Neubauer)
• Boquilla
• Microscopio
• Contador celular
• Tubos capilares
• Micro centrífuga
• Plastilina selladora

PROCEDIMIENTO:
1. Obtener sangre total siguiendo el protocolo ya conocido
2. Con la boquilla y la pipeta de Thoma aspirar sangre hasta la marca 0.5 (SIN BURBUJAS)
3. Aspirar diluyente (Hayem o Dacie) hasta la marca 101 de la pipeta
4. Agitar la pipeta por 3 min.
5. Desechar las 5 o 6 primeras gotas de la pipeta de Thoma
6. Colocar el cubreobjetos sobre la cámara de Neubauer y llenarla, tratando que fluya libremente
por difusión el líquido evitando llenar en exceso o formación de burbujas
7. Dejar en reposo 2 o 3 minutos el Hemacitómetro con el fin de que los eritrocitos sedimenten 8.
Localizar la cuadricula de la cámara de Neubauer con el objetivo seco débil (10X); enseguida
enfocar con seco fuerte (40X)
8. El recuento se realizara en los cuadros más pequeños de la cámara, contando los hematíes
localizados en los 4 cuadros de los extremos y en el del centro, haciendo un total de 5 cuadros.
• Realizar los cálculos para determinar la cantidad de eritrocitos resultantes
• Nota:
Se puede realizar con la pipeta automática, se toma 20 µL (0,02mL) de sangre total con
anticoagulante, o sangre capilar y se deposita en un tubo de 12 x 75 que contenga 4 mL de
solución de Hayem (aquí se tiene una dilución de 1:200). Se deja reposar aproximadamente 5
minutos y se procede a cargar la cámara con la misma pipeta usando un nuevo tipo.

PARTES DE LA PIPETA DE THOMA:

ILUSTRACION PARA EL LLENADO DE LA CAMARA DE NEUBAUER

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CONTEO DE GLOBULOS ROJOS

De los 25 cuadrados en que se encuentra subdividido, se cuentan los cuatro angulares y el central, con
un recuento total representativo de 1/5 de milímetro cuadrado.

Sobre la base de una dilución de 200, de un recuento de 1/5 mm2 y una profundidad de 0.1 mm, el
cálculo se efectúa como sigue:

Eritrocitos contabilizados X 5 X 200 X 10 = NUMERO DE ERITROCITOS POR mm3, o bien Eritrocitos

contabilizados X 10,000 = NUMERO DE ERITROCITOS/ mm

Cuadrantes dentro de la cámara de neubauer donde se realizara el conteo celular, contaremos cada
uno de los glóbulos rojos que encontremos en los cuadrantes que están marcados con la letra “R” y en
el orden como se indica en las flechas

VALORES DE REFERENCIA
(Millones de células/mm3)

Hombres:………………………………..4 500 000-5 500 000

Mujeres:…………………………...…….4 000 000-5 000 000
Niños (4 años):……….........................4 200 000-5 200 000
Lactantes (1-6 meses):....…………….3 800 000-5 200 000
Recién nacidos:………………………..5 000 000-6 000 000

PRACTICA. - 9 Y 10 RECUENTO DE INDICES GLOBULARES

Los índices eritrocitarios también se denominan como índices hematimétricos o índices

corpusculares.
Son una serie de parámetros que expresan diferentes características de los hematíes.
Los tradicionales se calculan a partir de los valores obtenidos, previamente, del número de
hematíes (en millones por mm3), del hematócrito (en %) y de la concentración
de hemoglobina en la sangre (en g/dl).
Los autoanalizadores hematológicos son capaces de proporcionar los índices

Valores bajos de glóbulos rojos, hematocrito o hemoglobina pueden ser indicativos de

anemia. (Lo que induce un descenso en la capacidad sanguínea de transporte de oxígeno).
Hay muchas causas que pueden generar una anemia: hemorragia, enfermedad de la función
de la médula ósea, deficiencia de hierro, deficiencia de vitamina B12, deficiencia de ácido
fólico, etc.) y muchas de estas se caracterizan por cambios en el volumen corpuscular de los
glóbulos rojos y/o descensos en el contenido de hemoglobina celular. Por tanto es de gran
utilidad en el diagnóstico de estas anemias el recuento de glóbulos rojos y la determinación

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del hematocrito y la hemoglobina, para a partir de ellos conocer el volumen corpuscular
medio (VCM) y la concentración de hemoglobina corpuscular media (CHCM).

Volumen corpuscular medio (VCM)

Es el valor medio del volumen de los hematíes. Se calcula a partir del hematócrito (HCT) y del
recuento del número de hematíes (RBC). Se utiliza la siguiente fórmula para su cálculo:

HCT
VCM = -------- x 10
RBC

Hemoglobina corpuscular media (HCM):

Es el valor medio del contenido en hemoglobina de los hematíes.
Se calcula a partir de la concentración de hemoglobina (Hb) y del número de hematíes.
Se utiliza la siguiente fórmula para su cálculo:
Hb
HCM = --------- x 10
RBC

Concentración hemoglobínica corpuscular media (CHCM)

Es el valor de la cantidad de hemoglobina (en g) contenida en 1 dl de hematíes. Se calcula a
partir de la concentración de hemoglobina y del hematócrito.
Para su cálculo se emplea la siguiente fórmula:
Hb
CHCM= ---------- x 100
HCT

Volumen corpuscular medio (VCM)

Su valor normal está comprendido entre 80 y 100 µ3 (1 µ3 = 1 femtolitro = 10-15litros).

Si es menor de 80 fl, se dice que hay una microcitosis, y si es mayor de 100 fl, se habla de
macrocitosis.
La microcitosis se da en la ferropenia y en la talasemia, y la macrocitosis en lascarencias de
B12 o ácido fólico, en las hepatopatías crónicas y en la reticulocitosis.

Hemoglobina corpuscular media (HCM):

Su valor normal está comprendido entre 27 y 31 picogramos (1 pg = 10 -12g).

Si es menor de 27 pg, se dice que hay una hipocromía, y si es mayor de 31 pg, se habla
de hipercromía relativa.
La hipocromía suele asociarse a la microcitosis y la hipercromía relativa a la macrocitosis.

Concentración hemoglobínica corpuscular media (CHCM)

Su valor normal está comprendido entre 32 y 36 g/dl. Si es mayor de 36 g/dl se

Habla de hipercromía absoluta

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