UNIVERSIDAD DE ANTIOQUIA FACULTAD DE MEDICINA DEPARTAMENTO DE FISIOLOGíA Y BIOQUíMICA

MANUAL DE LABORATORIO HEMOGRAMA

INTRODUCCION

la cual necesita extraerse del organismo y en ocasiones separarse en sus diferentes componentes: prasma, suero y células, para ser analizados en
búsqueda de alteraciones en dichos componentes.

HEMATOLOGIA: Es el estudio de los tejidos hematopoyéticos y de la sangre,

VELOCIDAD DE SEDTMENTACTóN qLOBULAR (VSG) ERTTROSEDTMENTACTóN (ESD)
OBJETIVO Determinar

ó

eritrocitos

ó

complemento diagnóstico en enfermedades hematológicas y no hematológicas.

en unidades de longitud y tiempo la propiedad que tienen los glóbulos rojos para formar pilas de monedas. sirve como

FUNDAMENTO La VSG se realiza por el método de Westergreen, considerado como el método de referencia internacional. La sangre antióoagulada con EDTA se coloca en una pipeta de vidrio en forma vertical y se dela en reposo durante una hora. Los eritrocitos tienden a caer al fondo dd la columna y las proteÍnas plasmáticas (fibrinógeno, gammaglobulinas y otras) hacen resistencia a la caída. El valor de la VSG corresponde al punto donáe las células se separan del plasma. En los individuos sanos la VSG ocurre lentamente y en pr.otero. patológicos ocurre más rápidamente. En algunos casos es proporcional a la gravedad de la enfermedad. GONSULTE: como estará la vsG en un individuo con anemia?

MATERIALES sangre con EDTA. (consulte qué es el EDTA y cuál es su mecanismo de acción) Pipeta de Westergreen. Gradilla para sedimentación (Westergreen). Reloj o timer. La pipeta es un tubo recto de 300 mm de longitud y 2.5 mm de diámetro y está graduada de 0-200 mm. Se coloca en forma vertical en la gradilla de su mismo nombre.

' . . ''

FACTORES QUE ¡NTERVIENEN EN LA VSG En general la sedimentación está afectada por propiedades de los eritrocitos, del plasma y por factores de tipo técnico. Entre ellos se encuentran: . Tamaño y forma de los eritrocitos. . Aglutinación de los eritrocitos. . Composición del plasma. . Viscosidadsanguínea. '. Calibre y longitud del tubo. Cantidad y calidad del anticoagulante. . Efecto de la temperatura y tiempo.

. ' . '

METODOLOGiA Mezclar suavemente la muestra por inversión del tubo.

utilizando el micropipetiador, aspirar la sangre llenar la pipeta de Westergreen hasta la marca cero (0). Llevar inmediatamente a la gradilla y fijar la pipeta evitando que se derrame la sangre. Poner a correr el cronómetro durante t hora y leer exactamente cuando se cumpla este tiempo.

y

IMPORTANGIA CLÍNICA: La VSG se utiliza como prueba de rutina en el diagnóstico inicial y seguimiento de mÚltiples enfermedades, es importante en la detección de entiáadJs ocultas especialmente de origen neoplásico, en el seguimiento de enfermedades como la fiebre reumática, tuberculosis e infarto al miocardio y para establecer diagnósticos diferenciales. Por corresponder a un reactante de fase aguda se convierte en un marcador inespecífico no asociado a ninguna enfermédad en concreto, pero su elevación implica la existencia de un proceso inflamatorio, infeccioso o neoplásico. cifras mayores de 100mm/h se han asociado con enfermedades malignas (ca colón, Linfoma, ca de mama, entre otros).

MED¡GIÓN DEL HEMATOCRITO

OBJETIVO Expresar en porcentaje (%) volumen de sangre total.

el número de células rojas empacadas en

un

MÉToDo El hematocrito corresponde al volumen ocupado por los glóbulos rojos en relaciÓn con el volumen total de sangre. Puede obtenerse por centrifugación (micrométodo o microhematocrito) o por métodos electrónicos. por micrométodo, se determina aplicando una fuerza centrífuga de 3.000 r.p.m. durante 3 minutos a una muestra de sangre total que está contenida en un
capilar especialmente diseñado para esta prueba. MATERIALES Sangre anticoagulada con EDTA. Capilar. Plastilina. Centrífuga. Tabla de lectura de capilares de microhematocrito.

. . . '. ' ' , . ' ,

METODOLOGíA Mezcle cuidadosamente la sangre anticoagulada por un minuto para obtener una buena homogenización. Llene el capilar con sangre aproximadamente % partes. Selle el extremo inferior con plastilina. Llevar a la centrífuga durante 3 minutos a 3000 r.p.m. Después de centrifugar, retire el capilar proceda la lectura del hematocrito en Ia tabla correspondiente. En, el capilar se observan las células rojas empacadas, una , capa blanquecina que corresponde a los glóbulos blancos y plaquetas (que sólo

y

a

alcanzan

un valor de

0.5 1 mm en condiciones

normales)

y

el

'

sobrenadante correspondiente al plasma (en él pueden observarse cambios en el color, normalmente = amarillo claro, lctérico = amarillo fuerte, hemolizado = rojizo, ó lipémico = lechoso). El volumen de células se lee desde cero (0) hasta donde termina la capa de glóbulos rojos y empieza la capa de blancos, la cual no se incluye en la lectura.

GONSULTE: Como estará el HTO en un individuo con hemorragia?

MEDIGIÓN DE LA HEMOGLOBINA OBJETIVO cuantificar la cantidad de hemoglobina presente en los glóbulos rojos.

sea por métodos manuales o automatizados.

MÉToDo Método de la cianometahemoglobina: Al medir la hemoglobina se determina la suma de todas las formas de hemoglobina presentes en el eritrocito (oxihemoglobina, carboxihemoglobina, metahemoglobina y otras), Iisando los glóbulos rojos para obtener un compuesto estable conocido como cianometahemoglobina, que puede ser medido en un espectrofotómetro, ya

FUNDAMENTO La mezcla de reactivo de Drabkin (clANURo) con la sangre, transforma la hemoglobina en cianometahemoglobina. La intensidad Oéf color de esta reacción se mide en un fotocolorímetro o espectrofotómetro.

Pasos de la reacción: 1. Hemoglobina + ferrocianuro potásico = metahemoglobina. 2. Metahemoglobina + cianuro potásico = cianometañemoglobina.
MATERIALES Sangre venosa anticoagulada con EDTA o sangre obtenida por punción capilar. Tubos de ensayo. Pipeta de Sahli (20 landas = 0.02 ml) o pipeta automática.

' , . . ', ,

Tapones de caucho o papel parafinado. Fotocolorímetro debidamente catibrado. Cubetas para el Fotocolorímetro. Reactivo de Drabkin.

rA§ El reactivo de Drabkin es tóxico, cont¡ene cianuro.
i[p-üs6ric¡a{[ it,,Xo*tiÁ+jI r:.*

Evite el contacto con ojos, piel, mucosas.

INSTRUCCIONES DE PROCEDIMIENTO Deposite 5 ml del reactivo de Drabkin en eltubo de ensayo. Mida exactamente 20uL (0.02 mr) de sangre en la pipeta de sahli. Limpie los excedentes de sangre por fuerá de la pipeta. Lleve la pipeta hasta el fondo del tubo y deposite la sangre expulsando y aspirando varias veces para lavar internamente las pareáes Tape eltubo y mezcle suavemente por ínversión. Deje el tubo en reposo durantg 10 minutos para que se produzca la hemólisis total de las células rojas y se complete la reacción. Deposite la solución en la cubeta del Fotocolorímetro. Lea la solución obtenida, usando como blanco el reactivo de Drabkin.

' ' . ' . ' , '

r La concentración de hemoglobina se
MÉToDoS ELEGTRÓNIcoS

absorbancia por una constante que resulta de la calibración del método. Ejemplo: Absorbancia de la muestra x24.g= hemoglobina en g/dl

calcula multiplicando

la

En todos los analizadores semiautomatizados o automatizados, la hemoglobina determina con misma fundamentación método manual (cianometahemoglobina), utilizando un hemoglobinómetro incorporado al instrumento.

se

la

del

La OMS estableció como límites inferiores de normalidad valores: En et hombre 13 gr/dL y en mujeres 12 gr/dL. por debajo de estos valores se considera anemia.
GONSULTE: cuanto es el mínimo de Hb que indique transfusión? CONSTANTES GORPUSCULARES Ó ÍI,¡OICCS DE WINTROBE

corpuscular medio (vcM), hemoglobina corpuscular media (HGM) y concentración de la hemoglobina corpuscular media (CHCM). Estos :tres promedios o constantes corpusculares de Wintrobe se constituyen en pilares para la clasificación MORFOLóGICA de las anemias.

hemoglobina, el hematocrito y el recuento de eritrocitos por mm3'Determinan el támaño y el contenido de hemoglobina de los eritrocitos bajo los conceptos del volumen

son el resultado matemático de la relación entre la

1. v.c.M = volumen corpuscular medio. También llamado promedio de
Volumen Corpuscular (PVG)

Se refiere al tamaño de los eritrocitos, se expresa en fentolitros (fl-)t y se obtiene al relacionar el volumen de células rojas empacadas (Hicl) y el
recuento de glóbulos rojos, con la siguiente fórmula: VCM ó PVC

=

Hro

(%)

-x
Rto de G.R./ millón

10

Valor de Referencia 80-10ofl

Una de las desventajas en el método clásico o manual es la variabilidad y el error en el conteo de los glóbulos rojos. Pero el VCM obtenido por métoáos automatizados es mucho más confiable. En el neonato el VCM varía de la siguiente forma: En el recién nacido 106 fL; a la semana de nacimiento 101 fL, y durante la tercera y cuarta semana después del nacimiento alcanza los varores normales del adulto.

2. HcM = Hemoglobina corpuscular

media. También llamada promedio de Hemoglobina Gorpuscular (pllC)

Representa la cantidad de hemoglobina presente en cada eritrocito, expresada en picogramos (pg) como unidad de peso. Relaciona la

concentraciÓn de Hb y el recuento eritrocitario por milímetro cúbico, a través de la siguiente fórmula:

HCMóPHC=

Hb

----X10

Valor Referencia
28-32p9

Rto G.R. en millones

3. cHcM = concentración de hemoglobina corpuscular media. También llamada Promedio de la concentración de Hb Gorpuscular (pcHG)
Relaciona el peso de la hemoglobina en un volumen total de eritrocitos (HTO). Nos da una visión global de los niveres de hemoglobina y se expresa en porcentaje (%). Se obtiene de la siguiente fórmula:

cHcM ó pcHc

= ::l::1":]:1f]::l- x 100 varor Rererencia
Hematocrito (%)
32-36%

Las constantes corpusculares se utilizan para determinar el tipo morfológico de las anemias, de acuerdo al diámetro del glóbulo rojo y su contenioo oe hemoglobina. Es importante interpretar estos promedios de acuerdo con la eval,uación morfológica de los glóbulos rojos, que se realiza por microscopía en un extendido de sangre periférica.

CLASIFICACIÓN DE LA ANEMIA Normocítica Normocrómica Macrocítica N ormocrómica Microcítica H ipocrómica

VCM. HCM.CHCM
>105fl - >32p9 <75'fl - <27p9 80-100f1

- 28-32p9- 32-36%
32-36Yo <32o/o

La anemia microcítica hipocrómica típicamente se asocia con deficiencias de y talasemias. La anemia macrocítica normocrómica se asocia en muchos casos con anemias megaloblásticas por deficiencia de vitamina 812 y/o ácido fólico. La anemia normocítica normocrómica puede relacionarse con hemorragia aguda, anemias hemolíticas, hemoglobinopatías, insuficiencia renal crónica.

hierro

RETICULOCITOS

Son .eritrocitos jÓvenes que se diferencian de los glóbulos rojos maduros puesto que conservan en su citoplasma remanentés de RNA ribosomal, mitocondrias, aparato de golgi, los cuales pueden ser identificados mediante colorantes vitales (azul de cresilo brillante), haciendo que dicho RNA se precipite en forma de gránulos.
VALORES NORMALES Valores relatívos: .Adulto: 0.5 - 2.5 o/o . Recién nacidos: 2.6 - 6.s% (en dos semanas alcanza el valor de adulto).

Valor absoluto. 22,5

*

147,5 x 10e/L

INTERPRETACIÓN El conteo de reticulocitos es importante porque refleja la cantidad de células rojas viables que se producen en médula ósea (M.o). una disminución en el nÚmero de reticulocitos se asocia con anemia aplástica y con disminución en la producción de células rojas en M.O. Los reticulocitos se encuentran aumentados en anemias hemolíticas, anemias por deficiencias de hierro que reciben tratamiento, talasemias, anemias sideroblásticas y pérdida de sangre aguda o crónica.

La producciÓn de reticulocitos se puede estimar basados fórmula: índice de Producción de Reiiculocitos (lpR)
%reticulocitos x HTO (paciente)
IPR

en la siguiente

Hematocrito normal (45%) x días de maduración (2)

El valor obtenido es evidencia de la respuesta medular a las necesidades del individuo, cuanto más severa es la anemia mas inmaduro el reticulocito y por ende la respuesta medular debe ser mayor. Los valores del lpR permiten estimar los niveles de respuesta de la medula ósea. si el valor es < 2 se considera que es una medula hipoproliferativa y si es > 2 es hiperproliferativa.

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