Documentos de Académico
Documentos de Profesional
Documentos de Cultura
Re-10-Lab-190 Bioquimica III (Med) v1
Re-10-Lab-190 Bioquimica III (Med) v1
Práctica No. 1
METABOLISMO DE PROTEINAS
RECOGIDA DE MUESTRA SANGUÍNEA
La sangre
La sangre es el tejido más fácilmente biodializable que puede alterarse ante
circunstancias patológicas y fisiológicas que modifican tanto los elementos celulares que
la integran como las sustancias presentes en el plasma.
GUIAS DE PRÁCTICA BASICAS CIENCIAS DE LA SALUD
Código de registro: RE-10-LAB-190 Versión 1.0
UNIVERSIDAD DEL VALLE
LABORATORIO DE BIOQUIMICA III
En el adulto el volumen total de sangre comprende el 8 % de la masa corporal (rango, 7
y 9 %, ó aprox. 70 a 80 ml/kg de peso), es decir 4 a 5 litros en la mujer no embarazada y
5 a 6 litros en el varón. El pH de la sangre es de 7.40 y su densidad es de 1.055 g/cm3
La sangre tiene las siguientes funciones:
Transporte de gases: Oxígeno desde los pulmones hacia los tejidos y dióxido de
carbono desde los tejidos hacia los pulmones
Transporte de nutrientes desde el tracto digestivo hacia el hígado y otros tejidos, e
intercambio de nutrientes entre diversos tejidos.
Transporte de señales hormonales desde las glándulas endocrinas hacia sus órganos
blanco
Transporte de sustancias de desecho hacia los órganos de eliminación (riñón,
hígado)
Transporte de calor y regulación de la temperatura
Metabolismo de hormonas y diversas sustancias biológicas
Regulación del equilibrio ácido básico
Regulación del equilibrio hidrosalino
Defensa contra microorganismos
El análisis de sangre es una herramienta de gran utilidad para el diagnóstico clínico
porque la sangre está compuesta por diferentes clases de células y por la parte líquida,
llamada plasma; el plasma contiene varias substancias que están disueltas en el líquido.
La sangre fuera del organismo se coagula porque sus células y proteínas se hacen
sólidas, quedando una parte líquida que se denomina suero que carece de células y de
factores de la coagulación incluyendo la proteína fibrinógeno, pues ésta ha sido
transformada en fibrina insoluble en el proceso de la coagulación.
La porción celular de la sangre consta principalmente de glóbulos rojos, glóbulos blancos
y plaquetas.
El suero puede ser analizado en pruebas bioquímicas y serológicas en cambio la sangre
total obtenida con un anticoagulante sirve para realizar el hemograma y mediante el
análisis de la coagulación se mide la capacidad de la sangre para llevar a cabo la
coagulación.
Composición de la sangre
Plasma
El plasma sanguíneo es la porción líquida de la sangre de color amarillento en la que
están inmersos los elementos formes.
Es una solución acuosa de un 91% y el 8% contiene proteínas, aminoácidos, glúcidos,
lípidos, sales, hormonas, enzimas, anticuerpos, urea, gases en disolución y sustancias
inorgánicas (Na+, K+, CaCl2, C03, H2C03).
El plasma se obtiene cuando, inmediatamente después de extraer la sangre, se le agrega
anticoagulantes como EDTA (Etilendiamino tetra acético) o heparina y se centrifuga.
2 PLAN 2017
GUIAS DE PRÁCTICA BASICAS CIENCIAS DE LA SALUD
Código de registro: RE-10-LAB-190 Versión 1.0
UNIVERSIDAD DEL VALLE
LABORATORIO DE BIOQUIMICA III
Son destruidos y extraídos de la sangre por el bazo, el hígado y la médula, donde
la hemoglobina se desintegra, pero el Fe es reutilizado para formar nueva
hemoglobina
LEUCOCITOS
Forman parte del sistema inmunológico, son encargados de destruir los agentes
infecciosos. Según su citoplasma y su núcleo se dividen en:
Los granulocitos que tienen un núcleo redondeado, numerosos gránulos en su
citoplasma y se forman en las células madres de la médula ósea, los granulocitos
pueden ser: Neutrófilos, que fagocitan y destruyen bacterias, los eosinófilos, que
se activan en presencia de ciertas infecciones y alergias, los basófilos, que
segregan sustancias como la heparina, que es anticoagulante e histamina que se
produce en la inflamación.
Los agranulocitos que no tiene gránulos en el citoplasma y se forman en la
médula ósea y en el timo y pueden ser: Linfocitos o monocitos
PLAQUETAS
Son cuerpos pequeños, ovoideos, sin núcleo, con un diámetro menor que el de
los eritrocitos.
Los trombocitos o plaquetas que participan en la hemostasia (prevención y
detención de las hemorragias) porque se adhieren a la superficie interna de la
pared de los vasos sanguíneos en el lugar de la lesión y ocluyen el defecto de la
pared vascular
2. COMPETENCIA(S).-
3 PLAN 2017
GUIAS DE PRÁCTICA BASICAS CIENCIAS DE LA SALUD
Código de registro: RE-10-LAB-190 Versión 1.0
UNIVERSIDAD DEL VALLE
LABORATORIO DE BIOQUIMICA III
Micro pipetas 3 unidades 9 unidades—doc.
Tubos de hemólisis 30 unidades 90 unidades-doc.
Puntillas 15 unidades 225 unidades
Jabón antiséptico 1 unidad 3 unidades-doc.
Cola de Zorro 6 unidades 18 unidades-doc.
Papel absorbente 1 rollo 3 rollos-doc.
Plastilina 1 unidad 3 unidades-doc.
Lancetas 20 unidades 300 unidades
-doc. Material requerido para 3 docentes.
4. TÉCNICA O PROCEDIMIENTO.-
2. OBTENCIÓN DE SANGRE
4 PLAN 2017
GUIAS DE PRÁCTICA BASICAS CIENCIAS DE LA SALUD
Código de registro: RE-10-LAB-190 Versión 1.0
UNIVERSIDAD DEL VALLE
LABORATORIO DE BIOQUIMICA III
Realizar hemostasia por compresión
POR PUNCIÓN VENOSA
SITIO DE PUNCIÓN: Vena cefálica o mediana cubital, femoral, venas del dorso
de la mano o del dorso del pie
El personal deberá usar guantes de látex para realizar operaciones de recolección
de sangre y para toda manipulación de sangre, suero, plasma y otros
especímenes.
La toma de muestra se efectúa preferiblemente de una vena anterior del brazo:
en la mayoría, se escoge la vena cefálica o la vena cubital mediana.
Solicitar al paciente que empuñe la mano para facilitar la aparición de la vena.
Ligar unos 7 cm arriba de la fosa ante cubital (pliegue del codo)
Pedir al paciente que cierre el puño firmemente varias veces; esto favorece que
las venas que normalmente tienen forma elíptica, se vuelvan más turgentes y
redondeadas
Localizar la vena palpando y visualizando cual es la más apta
Limpiar el sitio de la punción con torunda de algodón impregnada con alcohol
70% u otro antiséptico cutáneo, con movimiento circular desde adentro hacia fuera
Con el dedo índice o el pulgar de la otra mano fijar la vena en un lugar próximo a
la punción para evitar que esta se mueva
Introducir la aguja con el bisel hacia arriba de 1 a 2 cm hasta ver que fluya la
sangre, formando un ángulo de 15º con la piel.
Después de haber llevado a cabo la venopunción, aflojar el torniquete y extraer la
aguja
Sostener con firmeza una torunda de algodón seco sobre el sitio de extracción
durante algunos minutos
Poner sobre este sitio una tira de cinta adhesiva
Separar la aguja de la jeringa de acuerdo a normas de bioseguridad
La sangre que se encuentra en la jeringa (muestra), colocar en los respectivos
tubos de previamente identificados, los cuales pueden o no tener anticoagulante
según el estudio a realizar (Verter la sangre por las paredes del tubo con suavidad
evitando que los glóbulos rojos sufran hemólisis)
Los tubos pueden tener o no anticoagulante de acuerdo al tipo de prueba realizar
HEMÓLISIS
Una de las causas más importante para que una muestra de sangre se considere no
idónea está representada por la hemólisis.
La hemólisis es la ruptura del glóbulo rojo y el pasaje al plasma o suero de
hemoglobina (coloración de la muestra) y de todas las sustancias contenidas (potasio
y enzimas).
Las causas más frecuentes de hemólisis son:
Aguja de calibre pequeño.
Presencia de alcohol sobre la piel.
Excesiva aspiración (toma de muestra con jeringa).
Excesiva presión en el pasaje de la sangre con la jeringa al tubo de ensayo.
Mezcla muy violenta de la toma de muestra.
Toma de muestra muy dificultosa y prolongada.
5 PLAN 2017
GUIAS DE PRÁCTICA BASICAS CIENCIAS DE LA SALUD
Código de registro: RE-10-LAB-190 Versión 1.0
UNIVERSIDAD DEL VALLE
LABORATORIO DE BIOQUIMICA III
3. SEPARACIÓN DE SUERO O PLASMA
Recoger una muestra de sangre venosa en un tubo de separación o un tubo con
tapón rojo de 5 ml
Permitir que la sangre se coagule en el recipiente original tapado hasta que tenga
lugar la coagulación
Centrifugar la sangre coagulada durante 10 a 20 minutos a 2.500-3.600 rpm
Transferir el suero mediante el empleo de micro pipetas a los tubos de eppendorf
previamente identificados con los datos del paciente
Las muestras de suero pueden conservarse a 2-8°C durante un máximo de una
semana. Para conservarlas durante períodos más prolongados, congele las
muestras a -20°C
Proceso de separación de suero o plasma
100 minutos.
No requiere.
3. CUESTIONARIO.-
6 PLAN 2017
GUIAS DE PRÁCTICA BASICAS CIENCIAS DE LA SALUD
Código de registro: RE-10-LAB-190 Versión 1.0
UNIVERSIDAD DEL VALLE
LABORATORIO DE BIOQUIMICA III
Práctica No. 2
METABOLISMO DE PROTEÍNAS:
DETERMINACIÓN DE UREA SÉRICA
UREA
La urea es la forma no tóxica del amoníaco que se genera en el organismo a partir de la
degradación de proteínas, que provienen tanto de la dieta como del recambio fisiológico.
Debido a su pequeño tamaño, presenta una reabsorción y secreción variable en el túbulo
renal acompañando al agua. La retención de urea en sangre refleja el mal funcionamiento
renal globalmente, aunque se ve afectado por la dieta rica en proteínas, por el
funcionamiento hepático y por estados catabólicos e hipovolémicos. Además, en el
túbulo, la urea acompaña al agua, de modo que, si la diuresis esta elevada, la excreción
de agua es mayor y por tanto se eliminará urea. Por el contrario, si el sujeto presenta una
diuresis baja (deshidratación, hemorragia, insuficiencia cardiaca, insuficiencia renal)
aumentará la reabsorción y la concentración de urea en sangre.
La urea se forma en el hígado como producto final del metabolismo de las proteínas.
Durante la digestión, la proteína se descompone en aminoácidos los cuales contienen
nitrógeno que se separa en NH4+ (ión amonio) y el resto de la molécula se utiliza para
7 PLAN 2017
GUIAS DE PRÁCTICA BASICAS CIENCIAS DE LA SALUD
Código de registro: RE-10-LAB-190 Versión 1.0
UNIVERSIDAD DEL VALLE
LABORATORIO DE BIOQUIMICA III
producir energía u otra sustancia que necesite la célula. El NH 4+ se combina con otras
moléculas pequeñas para producir urea, la que luego se secreta en la sangre y se excreta
en la orina por medio de los riñones.
La elevación de urea y de otros productos nitrogenados se denomina azoemia.
El ciclo de la urea se relaciona con el ciclo de Krebs porque el fumarato ingresa al ciclo
de Krebs y se convierte en malato que puede formar glucosa mediante la
gluconeogénesis o puede convertirse en oxalacetato y seguir el ciclo de Krebs para formar
glucosa.
La elevación de la concentración sérica de urea se interpreta generalmente como
una posible disfunción renal. La determinación de urea y creatinina en suero son
dos de los estudios más solicitados para evaluar la capacidad renal de excretar
desechos metabólicos. Sin embargo no debe dejarse de lado el hecho de que los
valores séricos de urea se encuentran íntimamente relacionados con la dieta y el
metabolismo proteico, por lo que cualquier alteración en estas variables se
traducirá en un cambio de la concentración de urea en el suero.
2. COMPETENCIA(S).-
8 PLAN 2017
GUIAS DE PRÁCTICA BASICAS CIENCIAS DE LA SALUD
Código de registro: RE-10-LAB-190 Versión 1.0
UNIVERSIDAD DEL VALLE
LABORATORIO DE BIOQUIMICA III
9 PLAN 2017
GUIAS DE PRÁCTICA BASICAS CIENCIAS DE LA SALUD
Código de registro: RE-10-LAB-190 Versión 1.0
UNIVERSIDAD DEL VALLE
LABORATORIO DE BIOQUIMICA III
Suero 20ul
Ureasa 1gota 1 gota 1 gota
Incubar a 37ºC 5 minutos
Reactivo 1 1ml 1ml 1ml
Reactivo2 1ml 1ml 1ml
Incubar a 37ºC 5 minutos
Agua destilada 10ml 10ml 10ml
En esta pr ueba la ur eas a desc om pone es pecíficament e la ur ea pr oduci endo C O2 y
amoníaco, este segundo reacciona con fenol el hipoclorito en medio alcalino produciendo
azul de indofenol que se determina colorimétricamente a 540 nm.
Técnica Winner
200 minutos.
10 PLAN 2017
GUIAS DE PRÁCTICA BASICAS CIENCIAS DE LA SALUD
Código de registro: RE-10-LAB-190 Versión 1.0
UNIVERSIDAD DEL VALLE
LABORATORIO DE BIOQUIMICA III
VALORES DE REFERENCIA
UREA: 20 – 40 mg por dl BUN 9- 17 mg por dL
(El valor de BUN: Valor urea mg dividido entre 2.14)
Los valores superiores al nivel normal Los valores inferiores al nivel
HIPERAZOTEMIA normal HIPOAZOTEMIA
Catabolismo excesivo de proteína (inanición) Desnutrición
Diabetes mellitus no insulinodependiente Dieta baja en proteína
(DMNID) Embarazo
Enfermedad quística medular Fallo hepático
Enfermedad renal Sobrehidratación
o Glomerulonefritis- Pielonefritis o Ingesta elevada
o Necrosis tubular aguda o Administración
Epilepsia endovenosa abundante
Hipertensión maligna de líquidos
Hipovolemia
o Quemaduras- Deshidratación
Infarto al miocardio
Infección urinaria complicada
o Pielonefritis
Ingestión excesiva de proteínas
Insuficiencia cardíaca congestiva
Nefropatía diabética
Obstrucción del tracto urinario
o Tumor -Cálculos
o Hipertrofia prostática
Sangrado gastrointestinal
Shock
Síndrome hemolítico urémico
Uremia aguda: glomérulo nefritis aguda,
nefropatía anurica, necrosis necrotizante
Uremia crónica: glomérulo nefritis crónica,
tuberculosis renal, riñón poliquistico,
pielonefritis
Ayuno
Hemorragias
7. CUESTIONARIO.-
a. A que se llama azoemia.
b. Que es BUN y cuál es su importancia en el diagnóstico clínico.
c. Resuelva casos clínicos planteados por el docente.
11 PLAN 2017
GUIAS DE PRÁCTICA BASICAS CIENCIAS DE LA SALUD
Código de registro: RE-10-LAB-190 Versión 1.0
UNIVERSIDAD DEL VALLE
LABORATORIO DE BIOQUIMICA III
Práctica No. 3
METABOLISMO DE PROTEÍNAS:
DETERMINACIÓN DE CREATININA SÉRICA
Un adulto que tenga 70 kg de peso corporal posee cerca de 120 g de creatina. La creatina
es utilizada como forma de almacenamiento del fosfato de alta energía. El fosfato del ATP
es transferido a la creatina, generando fosfato de creatina, a través de la acción de la
creatin fosfocinasa o creatin cinasa. La reacción es reversible cuando la demanda
energética es alta (Ej. durante el esfuerzo muscular) la creatinfosfato dona su fosfato al
ADP para producir ATP.
La creatina y la creatinfosfato se encuentran en músculo, cerebro y sangre. La creatinina
es formada en músculo a partir de la creatinfosfato por una deshidratación no enzimática
y perdida del fosfato. La cantidad de creatinina producida se relaciona con la masa
muscular y se mantiene constante día a día. La creatinina es excretada por los riñones y
el nivel de excreción (porcentaje de aclaramiento de creatinina) es una medida
Esta prueba mide la cantidad de creatinina presente en la sangre. La creatinina es un
producto catabólico de la creatina utilizando la concentración del musculo esquelético. La
producción diaria de creatina y por tanto de creatinina, depende de la masa muscular,
12 PLAN 2017
GUIAS DE PRÁCTICA BASICAS CIENCIAS DE LA SALUD
Código de registro: RE-10-LAB-190 Versión 1.0
UNIVERSIDAD DEL VALLE
LABORATORIO DE BIOQUIMICA III
que apenas fluctúa. La creatinina y el nitrógeno ureico sanguíneo, solo se eliminan por el
riñón, de forma que su eliminación es directamente proporcional a la función excretora
renal. Si esta función es normal, el nivel sérico de creatinina debe permanecer constante
y normal. Solo en los trastornos renales, como glomérulo nefritis, pielonefritis, necrosis
tubular aguda, obstrucción urinaria, se observa la elevación anormal creatinina.
2. COMPETENCIA (S).-
13 PLAN 2017
GUIAS DE PRÁCTICA BASICAS CIENCIAS DE LA SALUD
Código de registro: RE-10-LAB-190 Versión 1.0
UNIVERSIDAD DEL VALLE
LABORATORIO DE BIOQUIMICA III
Muestra: Suero de un paciente que no debe haber consumido alimentos durante un
período de 8 horas antes de la determinación, previa suspensión de medicamentos que
pueden elevar la creatinina como ser: aminoglucósidos (gentamicina), cimetidina,
antineoplásicos de metales pesados, cefalosporinas.
Estándar Desconocido
Reactivo de trabajo 1.2 ml 1.2 ml
Estandar 0.2 ml -------
Muestra 0.2ml
Mezclar inmediatamente, iniciando al mismo tiempo el cronometro y proseguir la incubación.
A los 30 segundos exactos medir la absorbancia (S1 y D1) y continuar la incubación. Medir
nuevamente la absorbancia (S2 y D2) a los 5 minutos( 4 minutos 30 segundos después de
la primera lectura)
La creatinina reacciona con el picrato alcalino produciendo un cromógeno rojo
que se mide a 500nm.
Técnica Winner
5. TIEMPO DE DURACIÓN DE LA PRÁCTICA.-
100 minutos.
Absorbancia D2 – Absorbancia D1
[Creatinina mg/dl ]= ---------------------------------------- X Concentración Standard
Absorbancia S1 – Absorbancia S2
14 PLAN 2017
GUIAS DE PRÁCTICA BASICAS CIENCIAS DE LA SALUD
Código de registro: RE-10-LAB-190 Versión 1.0
UNIVERSIDAD DEL VALLE
LABORATORIO DE BIOQUIMICA III
CREATININA
VALORES DE REFERENCIA
Mujeres: 0.5 – 1.1 mg/dl
Hombres: 0.6- 1.2 mg/dl
Niveles superiores al normal Niveles inferiores al normal
Dieta rica en proteínas Dieta pobre en proteínas
Enfermedades renales (glomerulonefritis, Fallo hepático
pielonefritis) Embarazo
Necrosis tubular aguda Disminución de la masa muscular
Insuficiencia cardiaca congestiva Malnutrición
Hipovolemia- deshidratación Distrofia muscular avanzada
Inanición- Obstrucción vías urinarias Miastenia gravis
Preeclampsia-eclampsia
Rabdomiolisis
Síndrome hepatorrenal
Polimiositis
Enfermedades musculares
Acromegalia y gigantismo
Diabetes mellitus no insulino dependiente
Nefritis
ACLARAMIENTO DE LA CREATININA
VALORES DE REFERENCIA
Mujeres: 87 -107 ml/min
Hombres: 107- 139 ml/ min
Niveles superiores al normal Niveles inferiores al normal
Ejercicio Insuficiencia renal
Embarazo Glomerulonefritis
Síndrome de gasto cardiaco Necrosis tubular aguda
Insuficiencia cardiaca congestiva
Deshidratación
7. CUESTIONARIO.-
a. Cuáles son los aminoácidos que participan en la formación de creatinina
b. Que otros exámenes de laboratorio solicitaría para realizar una adecuada
evaluación de la función renal.
c. Resuelva casos clínicos planteados por el docente
15 PLAN 2017
GUIAS DE PRÁCTICA BASICAS CIENCIAS DE LA SALUD
Código de registro: RE-10-LAB-190 Versión 1.0
UNIVERSIDAD DEL VALLE
LABORATORIO DE BIOQUIMICA III
Práctica No. 4
METABOLISMO DE PROTEÍNAS:
EXAMEN GENERAL DE ORINA
16 PLAN 2017
GUIAS DE PRÁCTICA BASICAS CIENCIAS DE LA SALUD
Código de registro: RE-10-LAB-190 Versión 1.0
UNIVERSIDAD DEL VALLE
LABORATORIO DE BIOQUIMICA III
glucosa aparecen en la orina antes de que el paciente sea consciente de que puede
presentar algún problema de salud. Se utiliza para detectar infecciones del tracto urinario
(ITU) y otros trastornos del tracto urinario. En pacientes con enfermedades agudas o
crónicas para evaluar estado actual de la enfermedad así como también su evolución y
respuesta al tratamiento. Suele ser un examen de rutina al ingresar a un hospital, como
parte del examen de salud general, como control de embarazo y como análisis
prequirúrgicos.
2. COMPETENCIA (S).-
a. Recolección de orina
La muestra de orina para un uroanálisis puede recogerse en cualquier momento del día.
La mejor muestra es la primera de la mañana porque es la más concentrada y es la que
17 PLAN 2017
GUIAS DE PRÁCTICA BASICAS CIENCIAS DE LA SALUD
Código de registro: RE-10-LAB-190 Versión 1.0
UNIVERSIDAD DEL VALLE
LABORATORIO DE BIOQUIMICA III
con más probabilidades detectará anomalías. Debido a la posibilidad de contaminar la
orina con bacterias y células del tejido cutáneo circundante es importante limpiar la región
genital. Las mujeres deberían asearse de adelante hacia atrás, abriendo los labios
vaginales, los hombres deberían limpiarse la punta del pene. Al empezar a orinar, debe
dejarse caer un poco de orina al sanitario y entonces proceder a recoger la orina. El frasco
o envase para recolectar la orina debe estar limpio, no es necesario que sea estéril. Para
evitar contaminaciones en caso de que las mujeres se encuentren en el periodo menstrual
se puede recomendar el uso de un tampón.
En casos muy especiales se puede obtener orina a través de una sonda uretral o una
punción suprapúbica. La sonda se indica para recoger muestras de orina para cultivos
evitando contaminación, para medir orina en tiempo horario, en tratamiento de retención
urinaria, etc. Y la punción está indicada cuando la vía trasuretral esta obstruida y no es
posible llegar a la vejiga ni siquiera con una sonda trasuretral, por ejemplo en pacientes
con daños uretrales iatrogénicos, lesiones en cuello de vejiga, estenosis uretrales, fimosis
obstructiva, cuerpo extraño uretra y traumatismos uretrales. Las muestras de orina deben
analizarse lo más rápido posible y si esto no es posible, debe guardarse en refrigeración
hasta el momento de su procesamiento, no más de 24 h. Cuando se deja algún tiempo,
se inicia la descomposición por la presencia de bacterias, se desdobla la urea, se produce
amoniaco y se incrementa el pH que desintegra los cilindros y si existe glucosuria esta
desaparece por usársela glucosa como fuente de energía.
b. Examen físico
Para el examen químico de la orina se usan tiras reactivas que determinan cualitativa y
semi cuantitativamente: Leucocitos, nitritos, proteínas, glucosa, cuerpos cetónicos,
urobilinógeno, bilirrubina y sangre en orina
El sedimento urinario permite reconocer numerosas estructuras con una forma muy
diversa. Para ello es necesario centrifugar 10ml de orina durante unos 7 minutos a una
velocidad de 2000rpm. El sobrenadante se descarta y se agita el sedimento aplicando
una gota de este sobre un portaobjetos, extendiéndolo homogéneamente con un
cubreobjetos. Examinar la muestra inicialmente con un amento de 40X.
200 minutos.
18 PLAN 2017
GUIAS DE PRÁCTICA BASICAS CIENCIAS DE LA SALUD
Código de registro: RE-10-LAB-190 Versión 1.0
UNIVERSIDAD DEL VALLE
LABORATORIO DE BIOQUIMICA III
b. Tomando en cuenta los siguientes cuadros, a que como interpretaría sus
resultados.
19 PLAN 2017
GUIAS DE PRÁCTICA BASICAS CIENCIAS DE LA SALUD
Código de registro: RE-10-LAB-190 Versión 1.0
UNIVERSIDAD DEL VALLE
LABORATORIO DE BIOQUIMICA III
20 PLAN 2017
GUIAS DE PRÁCTICA BASICAS CIENCIAS DE LA SALUD
Código de registro: RE-10-LAB-190 Versión 1.0
UNIVERSIDAD DEL VALLE
LABORATORIO DE BIOQUIMICA III
ELEMENTOS FORMES INTERPRETACIÓN
aspecto dismórfico. Los acantocitos, es decir renales hereditarias, enfermedades
los hematíes en forma de anillo y infecciosas, esfuerzo físico
evaginaciones son característicos de la considerable (correr en el maratón),
enfermedad glomerular. insuficiencia cardiaca, hematuria
benigna familiar. Coagulopatias.
LEUCOCITOS
Pueden detectarse 2-5 leucocitos por campo Pielonefritis, infecciones de vías
de 40x en condiciones normales. Son células urinarias, enfermedades inflamatorias,
de tamaño mayor a los hematíes y menor a glomerulonefritis.
las células epiteliales, con presencia de
núcleo segmentado y granulaciones. En las
mujeres puede haber un poco más hasta 10x
campo, estos pueden ser de origen vaginal,
sobre todo si se acompañan de una gran
cantidad de células epiteliales, por lo que el
estudio de la orina de chorro medio puede ser
de gran valor en este caso. Si además de
leucocituria se identificaran cilindros
leucocitarios procedentes de los túbulos, el
origen seria renal y un diagnostico presuntivo
pielonefritis.
CELULAS EPITELIALES
Epitelio plano: Procede de los genitales Contaminación de genitales externos
externos o de la porción inferior dela uretra. femeninos.
Se trata de grandes células de aspecto
irregular con un núcleo pequeño y redondo.
Epitelio de transición: Tiene su origen desde Inflamación de la vía urinaria
la pelvis renal, uréter y vejiga hasta la uretra. descendente.
Su presencia acompañada de leucocituria
puede indicar una inflamación de la vía
urinaria descendente.
Epitelio tubular o renal: Son células algo Enfermedades víricas, nefropatía
mayores que los leucocitos y presentan toxica, pielonefritis, glomerulonefritis
granulaciones.
CILINDROS
Hialinos: Enfermedades renales agudas y
Están compuestos por una proteína de alto crónicas, insuficiencia renal, esfuerzo
peso molecular que se produce y elimina en físico, diuréticos potentes, síndrome
cantidades muy pequeñas en condiciones febril, albuminuria ortostática.
normales. Estos cilindros son homogéneo
incoloros y poco refringentes, pueden
aparecer en personas sanas o tras la
administración de diuréticos. Pero aumentan
en síndrome nefrótico.
21 PLAN 2017
GUIAS DE PRÁCTICA BASICAS CIENCIAS DE LA SALUD
Código de registro: RE-10-LAB-190 Versión 1.0
UNIVERSIDAD DEL VALLE
LABORATORIO DE BIOQUIMICA III
ELEMENTOS FORMES INTERPRETACIÓN
Eritrocitarios: Glomerulonefritis, afecciones renales,
Se componen de eritrocitos hinchados que se esfuerzo físico.
adhieren a una sustancia fundamental Lupus eritematoso
hialina. Indican casi siempre hematuria renal. Infarto renal
Leucocitarios: Pielonefritis aguda y crónica,
Se producen cuando ocurre una exudación glomerulonefritis, nefritis intersticial.
intensa de leucocitos y al mismo tiempo se
eliminar proteínas por el túbulo. Su presencia
tiene fundamental importancia ya que
demuestra inflamación de origen renal.
CRISTALES
Son precipitaciones de diversos compuestos
químicos como uratos, calcio, fosfato, cistina.
Depende de la sustancia que se encuentra
siendo eliminada en grandes cantidades.
CRISTALES EN ORINAS ÁCIDAS
CRISTALES DE ÁCIDO ÚRICO
Tienen forma de diamante o de roseta.
CRISTALES DE OXALATO DE CALCIO
Éstos son incoloros, de forma octaédrica o de
"sobre
URATO AMORFO
En una forma no cristalina, amorfa. Estos No tienen significado clínico
uratos amorfos tienen aspecto granular y
color amarillo-rojo.
URATOS DE SODIO
Son sustancias amorfas o como cristales en
forma de agujas o prismas delgados,
incoloros.
CRISTALES DE CISTINA Aparecen en pacientes con cistinuria
Forma cuadros hexagonales congénita y pueden formar cálculos.
CRISTALES EN ORINAS ÁLCALINAS
FOSFATO TRIPLE
Los cristales de fosfato (fosfato amónico-
magnésico) son prismas incoloros de tres a
seis caras
FOSFATO AMORFO
Son sustancias amorfas.
CARBONATO DE CALCIO
Son pequeños e incoloros, aparecen con No tienen significado clínico
forma esférica o en masas granulares de
gran tamaño.
FOSFATO DE CALCIO
22 PLAN 2017
GUIAS DE PRÁCTICA BASICAS CIENCIAS DE LA SALUD
Código de registro: RE-10-LAB-190 Versión 1.0
UNIVERSIDAD DEL VALLE
LABORATORIO DE BIOQUIMICA III
ELEMENTOS FORMES INTERPRETACIÓN
Son prismas largos, delgados e incoloros con
un extremo puntiagudo, ordenados formando
rosetas, estrellas o en forma de agujas.
7. CUESTIONARIO.-
a. En qué casos está indicada la solicitud de un examen parcial de orina, por
qué
b. Que elementos formes se pueden observar en el sedimento urinario.
c. Cuál es la importancia clínica de la presencia de cilindros en la orina.
d. Que indicaciones da al paciente para la recolección de la muestra de orina.
e. Resuelva casos clínicos planteados por el docente.
23 PLAN 2017
GUIAS DE PRÁCTICA BASICAS CIENCIAS DE LA SALUD
Código de registro: RE-10-LAB-190 Versión 1.0
UNIVERSIDAD DEL VALLE
LABORATORIO DE BIOQUIMICA III
Práctica No. 5
METABOLISMO DE PROTEÍNAS:
DETERMINACIÓN DE TRANSAMINASAS SÉRICAS
Reacciones de transaminación
La transaminación es un proceso reversible que permite la redistribución del grupo α
amino de los aminoácidos pero los aminoácidos lisina, treonina, prolina e
hidroxiprolina no sufren transaminación
El proceso ocurre por las enzimas, denominadas aminotransferasas o transaminasas,
que necesitan una coenzima que es el piridoxal fosfato.
Los aminoácidos ceden el grupo α amino al alfa cetoglutarato y se convierten en
cetoácidos; a su vez, el alfa cetoglutarato se convierte en glutamato.
En el hígado se encuentran los niveles más altos de ALT, mientras que la AST se
encuentra presente en el corazón, músculo esquelético e hígado en cantidades similares.
La actividad en el suero de tanto la AST como la ALT aumenta rápidamente durante el
comienzo de la ictericia viral y permanece elevada por 1 a 2 semanas. En las hepatitis
tóxicas y crónicas se elevan la ALT y la AST.
La necrosis hepática aguda se acompaña por incrementos significativos en las
actividades tanto la ALT y la AST. En la cirrosis del hígado las actividades de las
24 PLAN 2017
GUIAS DE PRÁCTICA BASICAS CIENCIAS DE LA SALUD
Código de registro: RE-10-LAB-190 Versión 1.0
UNIVERSIDAD DEL VALLE
LABORATORIO DE BIOQUIMICA III
transaminasas séricas generalmente no se elevan por encima de 300 U/L, sin importar la
causa de la enfermedad cirrótica.
Las actividades séricas de la ALT y la AST se elevan en el infarto del miocardio, infarto
renal, distrofia muscular progresiva y otro gran número de enfermedades que solamente
afectan al hígado de una manera secundaria, como la enfermedad de Gaucher, la
enfermedad de Niemann-Pick, la mononucleosis infecciosa, la leucemia mielocítica, la
cetoacidosis diabética y el hipertiroidismo
2. COMPETENCIA (S).-
25 PLAN 2017
GUIAS DE PRÁCTICA BASICAS CIENCIAS DE LA SALUD
Código de registro: RE-10-LAB-190 Versión 1.0
UNIVERSIDAD DEL VALLE
LABORATORIO DE BIOQUIMICA III
100 minutos.
26 PLAN 2017
GUIAS DE PRÁCTICA BASICAS CIENCIAS DE LA SALUD
Código de registro: RE-10-LAB-190 Versión 1.0
UNIVERSIDAD DEL VALLE
LABORATORIO DE BIOQUIMICA III
Congestión – insuficiencia cardiaca, Congestión – insuficiencia cardiaca,
cirrosis, obstrucción biliar, cáncer cirrosis, obstrucción biliar, cáncer
metastático, isquemia hepática metastático, isquemia hepática
Eclampsia Pre eclampsia grave
Enfermedades músculo esqueléticas Enfermedades músculo esqueléticas
Traumatismos Traumatismos
Mioglobinurias Mioglobinurias
Infarto agudo de miocardio Obesidad
Otras Leucemia linfoblástica aguda
Pancreatitis aguda
Infarto pulmonar o infarto cerebral Niveles de GPT inferiores al normal
Quemaduras Infecciones urinarias
Agotamiento por calor Neoplasias
intoxicación por plomo Estados de déficit de piridoxal fosfato
Anemia hemolítica
Niveles de GOT inferiores al normal
Azoemia
Estados de déficit de piridoxal
fosfato
Cetoacidosis diabética
Embarazo
Enfermedades renales
7. CUESTIONARIO.-
27 PLAN 2017
GUIAS DE PRÁCTICA BASICAS CIENCIAS DE LA SALUD
Código de registro: RE-10-LAB-190 Versión 1.0
UNIVERSIDAD DEL VALLE
LABORATORIO DE BIOQUIMICA III
Práctica No. 6
METABOLISMO DE PROTEÍNAS:
DETERMINACIÓN DE BILIRRUBINA DIRECTA Y TOTAL EN SUERO
Los glóbulos rojos tienen una vida media de 120 días ya que las células senescentes son
reconocidas por cambios en la membrana; son fagocitadas y eliminadas por las células
del sistema reticuloendotelial, principalmente en el hígado y en el bazo. La hidrólisis de
los eritrocitos seniles producen la formación de un 80% de bilirrubina; el resto de
bilirrubina proviene de las proteínas hémicas como ser: mioglobina, catalasa, peroxidasa
y citocromos.
La bilirrubina aparece en el plasma como consecuencia de la destrucción de los glóbulos
rojos en el sistema retículo endotelial. La hemoglobina, una vez liberada en el interior del
eritrocito, se combina con las haptoglobinas, proteínas plasmáticas específicas para su
transporte. En una primera etapa y tras su liberación de la haptoglobina, se forma, por
acción de una oxigenasa, un grupo formilo, con lo que se rompe el anillo tetrapirrólico del
hem, formándose el compuesto denominado biliverdina, que en una etapa posterior y por
acción de una reductasa se transforma en bilirrubina. La bilirrubina es lipofílica por lo tanto
es transportada a través del plasma unida a la albúmina y es conjugada a nivel hepático
con el ácido UDP- glucurónico por la enzima UDP- glucuronil transferasa aumentando así
su solubilidad; después pasa al intestino donde es desconjugada por la flora bacteriana
y forma urobilinógenos que puede ser: el estercobilinógeno que se oxida y se convierte
en estercobilina que es eliminada por las heces y en urobilinógeno que se reabsorbe al
plasma, donde una fracción vuelve al hígado y recircula en la bilis y la otra se excreta en
orina en forma de urobilinas.
Desde un punto de vista analítico y clínico, interesa conocer los niveles de bilirrubina total
y diferenciar cuantitativamente la "bilirrubina libre" o prehepática que aumenta
principalmente en procesos de tipo hemolítico, de la "bilirrubina conjugada" o hepática
que está incrementada en la disfunción hepática y más concretamente en fallos de los
mecanismos de su eliminación, a través del sistema biliar, cuyo primer paso es
introducirse del hepatocito a los canalículos biliares.
28 PLAN 2017
GUIAS DE PRÁCTICA BASICAS CIENCIAS DE LA SALUD
Código de registro: RE-10-LAB-190 Versión 1.0
UNIVERSIDAD DEL VALLE
LABORATORIO DE BIOQUIMICA III
Metabolismo de la bilirrubina
TIPOS DE BILIRRUBINA
Características principales Bilirrubina no conjugada Bilirrubina
conjugada
Solubilidad No polar (alcohol) Polar (alcohol y agua)
Reacción con el diazoreactivo Precisa un acelerador Directa
Presencia en orina en pacientes No (está unida a la albúmina) Si
ictéricos
Afinidad por el tejido cerebral Alta Baja
Presencia en ictericias Si No
hemolíticas
Presencia en ictericia Si Si
obstructiva y hepatocelular
29 PLAN 2017
GUIAS DE PRÁCTICA BASICAS CIENCIAS DE LA SALUD
Código de registro: RE-10-LAB-190 Versión 1.0
UNIVERSIDAD DEL VALLE
LABORATORIO DE BIOQUIMICA III
2. COMPETENCIA(S).-
30 PLAN 2017
GUIAS DE PRÁCTICA BASICAS CIENCIAS DE LA SALUD
Código de registro: RE-10-LAB-190 Versión 1.0
UNIVERSIDAD DEL VALLE
LABORATORIO DE BIOQUIMICA III
100 minutos.
[Bilirrubina total] mg/l= (Absorbancia del Total- Absorbancia del blanco) * factor
[Bilirrubina directa] mg/l= (Absorbancia de la bilirrubina directa- Absorbancia del blanco) * factor
VALORES DE REFERENCIA
Bilirrubina total
Adultos: 0-1 mg/dl Adultos:
Bilirrubina directa : 0 - 0,2 mg/dl
Recién nacidos: Bilirrubina indirecta: 0-0,8 mg/dl
Hasta las 24 horas: 6 mg/dl
Hasta las 48 hrs:7,5 mg/dl
Del 3er al 5to día:12mg/dl
31 PLAN 2017
GUIAS DE PRÁCTICA BASICAS CIENCIAS DE LA SALUD
Código de registro: RE-10-LAB-190 Versión 1.0
UNIVERSIDAD DEL VALLE
LABORATORIO DE BIOQUIMICA III
Niveles de bilirrubina indirecta superiores al normal
Sobreproducción por trastornos hematológicos
Hemólisis o eritropoyesis ineficaz
Anemia hemolítica, eritroblastosis fetal
Reabsorción de grandes hematomas y transfusiones masivas
Captación defectuosa
Síndrome de Gilbert
Conjugación disminuida
Ictericias del recién nacido
o Cligler-Najjar I o Cligler-Najjar II
Ictericias familiares no hemolíticas
o Síndrome de Gilbert
Niveles de bilirrubina directa superiores al normal
Trastornos hereditarios de la excreción de bilirrubina
Síndrome de Dubin-Johnson
Síndrome de Rotor
Colestasis intrahepática
Sin obstrucción mecánica
o Hepatopatías agudas o crónicas
Enfermedades virales o autoinmunes
Isquemia, tóxicas por fármacos
Hereditarias- enfermedad de Wilson
Lesión de conductos biliares intrahepáticos, colestasis
Con obstrucción mecánica
o Infecciones
o Neoplasias hepáticas, cirrosis biliar
Colestasis extrahepática
Enfermedad litiásica
Lesiones quirúrgicas del árbol biliar, neoplasia de conductos biliares
Carcinoma de páncreas, pancreatitis
7. CUESTIONARIO.-
32 PLAN 2017
GUIAS DE PRÁCTICA BASICAS CIENCIAS DE LA SALUD
Código de registro: RE-10-LAB-190 Versión 1.0
UNIVERSIDAD DEL VALLE
LABORATORIO DE BIOQUIMICA III
Práctica No. 7
METABOLISMO DE PROTEÍNAS:
DETERMINACIÓN DE FOSFATASA ALCALINA
2. COMPETENCIA(S).-
33 PLAN 2017
GUIAS DE PRÁCTICA BASICAS CIENCIAS DE LA SALUD
Código de registro: RE-10-LAB-190 Versión 1.0
UNIVERSIDAD DEL VALLE
LABORATORIO DE BIOQUIMICA III
Pipetas de 5 ml 3 unidades 9 unidades –doc.
Pipetas de 10 ml 3 unidades 9 unidades –doc.
Pro pipetas 3 unidades 9 unidades –doc.
Cola de zorro 5 unidades 15 unidades –doc.
Puntillas 12 unidades 180 unidades
Jabón antiséptico- 1 unidad 3 unidades –doc.
detergente
-doc. Material requerido para 3 docentes
200 minutos.
34 PLAN 2017
GUIAS DE PRÁCTICA BASICAS CIENCIAS DE LA SALUD
Código de registro: RE-10-LAB-190 Versión 1.0
UNIVERSIDAD DEL VALLE
LABORATORIO DE BIOQUIMICA III
7. CUESTIONARIO.-
35 PLAN 2017
GUIAS DE PRÁCTICA BASICAS CIENCIAS DE LA SALUD
Código de registro: RE-10-LAB-190 Versión 1.0
UNIVERSIDAD DEL VALLE
LABORATORIO DE BIOQUIMICA III
Práctica No. 8
LÍPIDOS:
DETERMINACIÓN DE TRIGLICÉRIDOS EN SANGRE
36 PLAN 2017
GUIAS DE PRÁCTICA BASICAS CIENCIAS DE LA SALUD
Código de registro: RE-10-LAB-190 Versión 1.0
UNIVERSIDAD DEL VALLE
LABORATORIO DE BIOQUIMICA III
2. COMPETENCIA (S).-
37 PLAN 2017
GUIAS DE PRÁCTICA BASICAS CIENCIAS DE LA SALUD
Código de registro: RE-10-LAB-190 Versión 1.0
UNIVERSIDAD DEL VALLE
LABORATORIO DE BIOQUIMICA III
Blanco Estándar Desconocido
Estandar 20ul 20ul -----
Suero -------- ------ 20ul-----
Lipasa 2 gotas 2 gotas
Incubar 10 minutos en baño maría a 37 grados
Oxidante 0,5 ml 0,5 ml 0,5 ml
Incubar 10 minutos en baño maría a 37
grados
Reactivo de color 3ml 3ml 3ml
Incubar 20 minutos a37ºC y una vez desarrollado el color leer en el
espectrofotómetro a 530 nm llevando el aparato a cero con agua destilada
Técnica Winner
TRIACILGLICEROLES
VALORES DE REFERENCIA: 0 - 150 mg/dl:
Moderadamente elevado de 150 – 199 mg/dl
Elevado de 200 – 499 mg/dl
Muy elevado mayor a 500 mg/dl
Niveles superiores al normal Niveles inferiores al normal
Alcoholismo- Cirrosis Desnutrición
Diabetes Mellitus mal controlada Dieta pobre en grasas
Dieta alta en carbohidratos Hipertiroidismo
Dieta baja en proteínas Síndrome de mala absorción.
Dislipidemias
Gota- Embarazo- glucocorticodes
Hiperlipoproteinemia familiar ( rara)
Hipotiroidismo
Obesidad- Pancreatitis
Sindrome de quilomicronemia
Sìndrome nefrótico
38 PLAN 2017
GUIAS DE PRÁCTICA BASICAS CIENCIAS DE LA SALUD
Código de registro: RE-10-LAB-190 Versión 1.0
UNIVERSIDAD DEL VALLE
LABORATORIO DE BIOQUIMICA III
7. CUESTIONARIO.-
39 PLAN 2017
GUIAS DE PRÁCTICA BASICAS CIENCIAS DE LA SALUD
Código de registro: RE-10-LAB-190 Versión 1.0
UNIVERSIDAD DEL VALLE
LABORATORIO DE BIOQUIMICA III
Práctica No. 9
LÍPIDOS:
DETERMINACIÓN DE COLESTEROL SÉRICO
40 PLAN 2017
GUIAS DE PRÁCTICA BASICAS CIENCIAS DE LA SALUD
Código de registro: RE-10-LAB-190 Versión 1.0
UNIVERSIDAD DEL VALLE
LABORATORIO DE BIOQUIMICA III
Excreción del colesterol
Los tejidos humanos no pueden degradar el núcleo esteroidal, por lo tanto parte del
colesterol se excreta en forma de esterol; en cambio el colesterol liberado de los
tejidos extrahepáticos es transportado mediante lipoproteínas al hígado y segregado
a la bilis que a nivel del intestino en parte es reabsorvido y el resto es eliminado por
las heces en forma de esteroles neutros como ser el coprostanol y la colestanona.
El colesterol de la dieta regula en parte la síntesis del colesterol en el hígado.
Colesterol endógeno
El hombre sintetiza 1 g de colesterol al día a nivel del intestino, gónadas, glándulas
suprarenales, piel, músculo, tejido adiposo y principalmente en el tejido hepático; la
síntesis del colesterol un valor máximo a las 6 horas después de anochecer y pasa por
un valor mínimo a las 6 horas después de la reexposición a la luz en función al ritmo
circadiano. Su concentración se ve alterada por: Edad, factores genéticos, sexo, dieta,
actividad física y hormonas.
Cuando este delicado proceso metabólico sufre alteraciones que rompe el equilibrio
adecuado, puede producirse una concentración excesiva de colesterol en la sangre,
conocida como hipercolesterolemia, misma que está directamente relacionada con
ateroesclerosis y desarrollo de cardiopatía isquémica. En la actualidad una cifra
aislada de colesterol total no es de utilidad diagnóstica sino se debe determinar
también sus fracciones es decir, el colesterol unido a lipoproteínas de baja densidad
(LDL) y de alta densidad (HDL).lo que se puede valorar perfectamente en un lipidograma
o perfil lipídico.
41 PLAN 2017
GUIAS DE PRÁCTICA BASICAS CIENCIAS DE LA SALUD
Código de registro: RE-10-LAB-190 Versión 1.0
UNIVERSIDAD DEL VALLE
LABORATORIO DE BIOQUIMICA III
Los valores ideales son diferentes para personas sin arteriopatía coronaria u otros
factores de riesgo que para aquellas con arteriopatía coronaria, diabetes o hipertensión
arterial conocidas.
2. COMPETENCIA (S).-
42 PLAN 2017
GUIAS DE PRÁCTICA BASICAS CIENCIAS DE LA SALUD
Código de registro: RE-10-LAB-190 Versión 1.0
UNIVERSIDAD DEL VALLE
LABORATORIO DE BIOQUIMICA III
Marcar tres tubos de ensayo y proceder según el siguiente esquema
para la determinación de colesterol
Blanco Standard Desconocido
Reactivo 2 ml 2 ml 2 ml
Suero ***** ***** 20 ul
Standard ***** 20 ul *****
Incubar a temperatura ambiente 15 minutos una vez desarrollado el color
leer en el espectrofotómetro a 505 nm las respectivas absorbancias
Técnica Winner
100 minutos.
COLESTEROL TOTAL
VALORES DE REFERENCIA
Colesterol total Colesterol LDL
Aceptable 150 a 170 mg Menos de 110 mg
Límite 170 a 199 mg 110 a 129 mg
Alto 200 mg o más 130 mg o más
Niveles superiores al normal Niveles inferiores al normal
Betabloqueantes Abetalipoproteinemia
Cirrosis Desnutrición
Colestasis Dieta pobre en grasas
Déficit de lipoproteínlipasa Enfermedades mieloproliferativas
Diabetes Mellitus mal controlada Hipertiroidismo
Dieta rica en grasas saturadas Insuficiencia corticosuprarrenal
Disbetalipoproteinemia Insuficiencia hepática
Dislipidemias Síndrome de mala absorción.
Esteroides anabolizantes Tratamientohipocolesterolemiante
Hepatitis
43 PLAN 2017
GUIAS DE PRÁCTICA BASICAS CIENCIAS DE LA SALUD
Código de registro: RE-10-LAB-190 Versión 1.0
UNIVERSIDAD DEL VALLE
LABORATORIO DE BIOQUIMICA III
Hipercolesterolemia familiar
Hiperlipemiafamilar combinada
Hipotiroidismo- Obesidad
Progestágenos
Síndrome nefrótico
7. CUESTIONARIO.-
a. ¿Cuál es el riesgo cardíaco en relación al colesterol y sus fracciones?
b. ¿Qué otras pruebas se utilizan para relacionar niveles elevados de colesterol,
porque
c. ¿Qué medicamentos reducen niveles de colesterol?
d. ¿Qué tratamiento recomendaría en un paciente con hipercolesterolemia?
e. ¿Cuál es la clasificación de Fredickson para hiperlipoproteinemias?
f. ¿Cuáles son las apolipoproteínas y cual su utilidad diagnóstica?
g. Resuelve casos clínicos planteados por el docente.
44 PLAN 2017
GUIAS DE PRÁCTICA BASICAS CIENCIAS DE LA SALUD
Código de registro: RE-10-LAB-190 Versión 1.0
UNIVERSIDAD DEL VALLE
LABORATORIO DE BIOQUIMICA III
Práctica No. 10
LÍPIDOS:
DETERMINACIÓN DE LIPOPROTEÍNAS SÉRICAS
Las lipoproteínas son proteínas sanguíneas que tienen la función de transportar lípidos
como el colesterol, triglicéridos y otras grasas, son partículas que contienen un núcleo
hidrófobo resistente al agua que puede tener triglicéridos, ésteres de colesterol y
aminoácidos hidrofóbicos, rodeado por un recubrimiento hidrófilo de colesterol,
fosfolípidos, aminoácidos hidrofílicos y proteínas (Llamadas apolipoproteínas o
apoproteínas). Las lipoproteínas plasmáticas tienden a aumentar como resultado de: una
sobreproducción, reducida utilización, hidrólisis o deficientes catabolismo de las
mismas,también pueden verse alteradas por: variación fisiológica: como la edad y peso
(La edad tiende a elevar o disminuir los valores de fosfolípidos y colesterol. El peso tiende
a elevar los valores de fosfolípidos y colesterol) y variación patológica:
(dislipoproteinemia)
Lipoproteínas VLDL-LDL
El exceso de lípidos y de carbohidratos en la dieta promueve a nivel hepático la formación
de triglicéridos que son empacados en las VLDL que después son liberados a la
circulación sanguínea
Por lo tanto los triglicéridos de las lipoproteínas VLDL pueden ser sintetizadas a partir de
los ácidos grasos plasmáticos disociados de la albúmina que provienen de la dieta, del
tejido adiposo o de la lipogénesis (Síntesis de novo)
Lipoproteínas HDL
Las lipoproteínas plasmáticas son partículas esféricas que contienen cantidades variables
de colesterol, triglicéridos, fosfolípidos y proteínas. Estas partículas solubilizan y
transportan el colesterol en el torrente sanguíneo. La proporción relativa de proteína y
lípido determina la densidad de estas lipoproteínas, encontrando de muy baja densidad
(VLDL), de baja densidad (LDL) que en encarga de llevar colesterol a los tejidos para su
almacenamiento además de asociarse a un mayor riesgo de desarrollar ateroesclerosis
así como cardiopatía isquémica. Las lipoproteínas de alta densidad (HDL) que se
45 PLAN 2017
GUIAS DE PRÁCTICA BASICAS CIENCIAS DE LA SALUD
Código de registro: RE-10-LAB-190 Versión 1.0
UNIVERSIDAD DEL VALLE
LABORATORIO DE BIOQUIMICA III
encargan de la captación y transporte de colesterol desde los tejidos periféricos al hígado
proceso conocido como transporte reverso del colesterol que se asocia a disminución del
riesgo de desarrollar ateroesclerosis.
Participan en el catabolismo de las lipoproteínas ricas en triglicéridos y ésteres de
colesterol a las lipoproteínas VLDL y a los quilomicrones. Trasladan el colesterol de los
tejidos extrahepáticos al hígado mediante el transporte inverso de colesterol.
Las lipoproteínas HDL proporcionan colesterol a las glándulas productoras de hormonas
esteroidales.
El receptor HDL participa en la movilización del colesterol intracelular hacia las
membranas plasmáticas para ser eliminado o hidrolizado por las células
Son sintetizadas a nivel del retículo endoplasmático liso de las células del higado y del
intestino delgado.
2. COMPETENCIA (S).-
46 PLAN 2017
GUIAS DE PRÁCTICA BASICAS CIENCIAS DE LA SALUD
Código de registro: RE-10-LAB-190 Versión 1.0
UNIVERSIDAD DEL VALLE
LABORATORIO DE BIOQUIMICA III
4. TÉCNICA O PROCEDIMIENTO. (La técnica puede variar de acuerdo al Kit de
HDL colesterol disponible para la práctica)
200 minutos.
47 PLAN 2017
GUIAS DE PRÁCTICA BASICAS CIENCIAS DE LA SALUD
Código de registro: RE-10-LAB-190 Versión 1.0
UNIVERSIDAD DEL VALLE
LABORATORIO DE BIOQUIMICA III
HDL
VALORES DE REFERENCIA: Superior a 40-60 mg/dL
Menor a 35mg /dl alto riesgo
Niveles superiores al normal Niveles inferiores al normal
7. CUESTIONARIO.-
a. Principales funciones de las lipoproteínas plasmáticas.
b. Describa las medidas para incrementar los valores de HDL.
c. Resuelva casos clínicos planteados por el docente.
48 PLAN 2017
GUIAS DE PRÁCTICA BASICAS CIENCIAS DE LA SALUD
Código de registro: RE-10-LAB-190 Versión 1.0
UNIVERSIDAD DEL VALLE
LABORATORIO DE BIOQUIMICA III
Práctica No. 11
49 PLAN 2017
GUIAS DE PRÁCTICA BASICAS CIENCIAS DE LA SALUD
Código de registro: RE-10-LAB-190 Versión 1.0
UNIVERSIDAD DEL VALLE
LABORATORIO DE BIOQUIMICA III
Por lo tanto, aquellos procesos que causan la disminución del filtrado glomerular
(Contracción de volumen, insuficiencia cardiaca con disminución del gasto,
glomerulopatías, arteriopatía con descenso del flujo renal) o que interfieren con la
secreción tubular de ácido úrico (Fármacos, nefropatías tubulointersticiales),
favorecen la aparición de hiperuricemia y gota. La excreción entérica de ácido
úrico aumenta en pacientes en los que la alteración de la función renal limita la
excreción renal de ácido úrico.
2. COMPETENCIA (S).-
Al finalizar la práctica el estudiante:
– Interpreta los valores de ácido úrico. Que se presentan en los pacientes y asume
procedimientos de resolución de casos clínicos
– Relaciona los niveles de ácido úrico con el diagnostico de patologías agudas,
crónicas o graves, así como en el diagnóstico diferencial, que se presentan en el
campo de trabajo del profesional.
50 PLAN 2017
GUIAS DE PRÁCTICA BASICAS CIENCIAS DE LA SALUD
Código de registro: RE-10-LAB-190 Versión 1.0
UNIVERSIDAD DEL VALLE
LABORATORIO DE BIOQUIMICA III
4. TÉCNICA.- (La técnica puede variar de acuerdo al Kit de ácido úrico disponible
para la práctica)
51 PLAN 2017
GUIAS DE PRÁCTICA BASICAS CIENCIAS DE LA SALUD
Código de registro: RE-10-LAB-190 Versión 1.0
UNIVERSIDAD DEL VALLE
LABORATORIO DE BIOQUIMICA III
Blanco Standard Desconocido
Reactivo 2.5 ml 2.5 ml 2.5 ml
Suero ***** ***** 50 ul
Standard ***** 50 ul *****
Incubar a baño María a37ºC, 15 minutos una vez desarrollado el color leer en el
espectrofotómetro a 505 nm las respectivas absorbancias. El ácido úrico del suero
por acción de la uricasa se transforma en alantoína y peróxido de hidrógeno, en una
segunda reacción este con el reactivo de trabajo forma una quinona rosa.
Técnica Winner
100 minutos.
ACIDO ÚRICO
VALORES DE REFERENCIA: Hombres: 2,5 – 6,0 mg/dl
Mujeres: 2, 0 – 5,0mg/dl
Niveles superiores al normal Niveles inferiores al normal
Hiperuricemia primaria: Carcinomas pulmonares
Gota Deficiencia de xantina oxidasa
Idiopática Enfermedad de Wilson
Hiperactividad de la PRPP sintasa Gestación
Deficiencia de la HGFT Hemodilución
Glucogenosis(I;III;V;VII) Ictericia obstructiva
Hiperuricemia secundaria: Insuficiencia hepática
Alcohol Insuficiencia renal aguda
Anemia hemolítica o Anemia perniciosa Síndrome de Fanconi
Aumento del catabolismo (ejercicio)
Consumo excesivo de purinas (carnes, vísceras)
Diabetes Mellitus
52 PLAN 2017
GUIAS DE PRÁCTICA BASICAS CIENCIAS DE LA SALUD
Código de registro: RE-10-LAB-190 Versión 1.0
UNIVERSIDAD DEL VALLE
LABORATORIO DE BIOQUIMICA III
ACIDO ÚRICO
VALORES DE REFERENCIA: Hombres: 2,5 – 6,0 mg/dl
Mujeres: 2, 0 – 5,0mg/dl
Diuréticos
Enfermedad renal
Hipoparatiroidismo
Leucemias (Leucemia mieloide crónica)
Linfomas
Mieloma múltiple
Mononucleosis infecciosa
Muerte celular por cáncer-quimioterapia
Neumonía
Obesidad
Policitemias
Psoriasis
Quemaduras, traumatismos
7. CUESTIONARIO.-
a. Qué es la gota
b. Cómo se bajan los niveles de ácido úrico
c. Resuelva casos clínicos planteados por el docente
53 PLAN 2017
GUIAS DE PRÁCTICA BASICAS CIENCIAS DE LA SALUD
Código de registro: RE-10-LAB-190 Versión 1.0
UNIVERSIDAD DEL VALLE
LABORATORIO DE BIOQUIMICA III
Práctica No. 12
ÁCIDOS NUCLÉICOS:
TÉCNICAS DE BIOLOGÍA MOLECULAR SEMINARIO
Extracción del ADN (visualizarlo para ver su estado, cortarlo y pegarlo, es decir
ingeniería genética).
PCR o reacción en cadena de polimerasa: Es un método enzimático de
amplificación de secuencias específicas de ADN, concebido por Kary Mullis y sus
colaboradores a principios de los años 80. Este método permite la síntesis in vitro
de un fragmento de ADN de forma tal que, en cada ciclo del proceso, se duplica
el número de moléculas.El poder de la amplificación con PCR es tan alto que los
más pequeños contaminantes pueden dar resultados falsos positivos, por lo que
el material y las soluciones a emplear deben ser escrupulosamente controlados.
Las aplicaciones de la PCR son múltiples y parecen estar sólo limitadas por la
imaginación de los científicos. Entre ellas tenemos: la amplificación de fragmentos
de genes como rápida alternativa de la clonación, la modificación de fragmentos
de ADN, la detección sensible de microorganismos seguido de una segura
genotipificación, si se desea, el análisis de muestras arqueológicas y estudios
antropológicos, la detección de mutaciones importantes en enfermedades
hereditarias, transformación maligna o tipificación de tejidos para trasplantes, el
54 PLAN 2017
GUIAS DE PRÁCTICA BASICAS CIENCIAS DE LA SALUD
Código de registro: RE-10-LAB-190 Versión 1.0
UNIVERSIDAD DEL VALLE
LABORATORIO DE BIOQUIMICA III
análisis de marcadores genéticos para aplicaciones forenses, pruebas de
paternidad y para el mapeo de rasgos hereditarios, el estudio de expresión de
genes, entre otras.
Enzimas de restricción: Cortan una determinada región del DNA, se utilizan para
analizar mutaciones, hacer mapas de restricción, pruebas de paternidad y
clonación.
Hibridación: La hibridación de ácidos nucleicos es un proceso por el cual se
combinan dos cadenas de ácidos nucleicos antiparalelas y con secuencia de
bases complementarias, en una única molécula de doble cadena, que toma la
estructura de doble hélice, donde las bases nitrogenadas quedan ocultas en el
interior. Esto hace que si irradiamos la muestra con la longitud de onda a la que
absorben estas bases (260 nm), la absorción de energía será mucho menor si la
cadena es doble que si se trata de la cadena sencilla, ya que en esta última los
dobles enlaces de las bases nitrogenadas, que son las que captan la energía,
están totalmente expuestos a la fuente emisora de energía.
Los nucleótidos se unirán con sus complementarios bajo condiciones normales:
A=T; A=U; C≡G; G≡C; T=A ó U=A
El proceso de hibridación se puede revertir simplemente calentando la solución
que contiene a la molécula. El porcentaje de GC dentro de la cadena condiciona
la temperatura de alineamiento y de desnaturalización ya que G se une a C
mediante tres puentes de hidrógeno y A se une a U o T mediante dos puentes de
hidrógeno; por tanto, y dado que se requiere más energía para romper tres enlaces
que para romper dos, dicha energía se traduce en una mayor temperatura.
El %GC no es igual para todas las especies, es más, el %GC es distinto incluso
entre el ADN nuclear y el ADN mitocondrial, lo que nos da bastante juego en los
protocolos de extracción de ADN, según el tipo que vamos a estudiar y esto es
importante, entre otros motivos porque existen enfermedades genéticas debidas
a mutaciones en el ADN mitocondrial. En biología molecular experimentalmente
se llevan a cabo dos tipos diferentes de hibridación: Tipo Southem para uniones
ADN-ADN y tipo northem, para uniones ADN-ARN.
Procedimiento experimental
La hélice de doble cadena (ADN) es separada mediante un proceso físico (calor)
o químico (con una base fuerte, como la sosa caustica), esto rompe los enlaces
por puente de hidrogeno que mantienen unidas las dos hebras del ADN.
a. Las dos hebras complementarias se separan, el ADN se desnaturaliza.
b. Una muestra de cadenas simples (o desnaturalizadas) se mezcla con otra
muestra de cadenas simples.
c. La muestra combinada se enfría lentamente, las moléculas sencillas se van
emparejando por las zonas complementarias (más estables
termodinámicamente) y se va formando una nueva molécula hibridada
55 PLAN 2017
GUIAS DE PRÁCTICA BASICAS CIENCIAS DE LA SALUD
Código de registro: RE-10-LAB-190 Versión 1.0
UNIVERSIDAD DEL VALLE
LABORATORIO DE BIOQUIMICA III
2. COMPETENCIA(S).-
4. TÉCNICA O PROCEDIMIENTO.-
300 minutos.
No requiere.
7. CUESTIONARIO.-
56 PLAN 2017
GUIAS DE PRÁCTICA BASICAS CIENCIAS DE LA SALUD
Código de registro: RE-10-LAB-190 Versión 1.0
UNIVERSIDAD DEL VALLE
LABORATORIO DE BIOQUIMICA III
57 PLAN 2017