qwertyuiopasdfghjklzxcvbnmqwertyui opasdfghjklzxcvbnmqwertyuiopasdfgh jklzxcvbnmqwertyuiopasdfghjklzxcvb Laboratorio de Bioquímica nmqwertyuiopasdfghjklzxcvbnmqwer Toma y Muestra de Sangre Facultad de Medicina tyuiopasdfghjklzxcvbnmqwertyuiopas

Universidad Nacional de Colombia Coagulación y Permeabilidad dfghjklzxcvbnmqwertyuiopasdfghjklzx cvbnmqwertyuiopasdfghjklzxcvbnmq wertyuiopasdfghjklzxcvbnmqwertyuio pasdfghjklzxcvbnmqwertyuiopasdfghj klzxcvbnmqwertyuiopasdfghjklzxcvbn mqwertyuiopasdfghjklzxcvbnmqwerty uiopasdfghjklzxcvbnmqwertyuiopasdf ghjklzxcvbnmqwertyuiopasdfghjklzxc vbnmqwertyuiopasdfghjklzxcvbnmrty uiopasdfghjklzxcvbnmqwertyuiopasdf ghjklzxcvbnmqwertyuiopasdfghjklzxc
07/03/2011 Juan David Domínguez; Ana María González; Óscar Gómez; Carlos

pipetas. es importante clarificar algunos conceptos teóricos para su posterior comparación con los resultados obtenidos en el laboratorio. leucocitos) y plaquetas suspendidos en un componente líquido (su matriz extracelular). tubos de centrífuga sin y con anticoagulantes.1 El tejido sanguíneo: La sangre es un tejido conjuntivo especializado compuesto por elementos formes . en búsqueda de la observación de los procesos de coagulación y permeabilidad de la sangre. eritrocitos).INFORME DE LABORATORIO UNIVERSIDAD NACIONAL DE COLOMBIA FACULTAD DE MEDICINA DEPARTAMENTO DE BIOQUIMICA PRACTICA 1 TOMA Y MUESTRA DE SANGRE: PERMEABILIDAD Y COAGULACIÓN 1) RESUMEN: Juan David Domínguez S.5%)). el procedimiento que se siguió y por último.y el plasma sobrenadante (55%) que consiste en una mezcla de materiales simples y compuestos. para su posterior comparación con los datos teóricos establecidos en libros. Se describen los resultados de la realización de dos experimentos. glóbulos blancos (WBC. Ana María González V. sobre los procesos y las reacciones que se llevan a cabo durante la coagulación y la permeabilidad de la sangre.que consiste en eritrocitos (su volumen oficial se llama hematocrito) . a menos de que se ponga en el tubo un anticoagulante como la heparina.5%. anotando los resultados obtenidos en el experimento.. Con base en tomas de muestras de sangre. 2) INTRODUCCIÓN: 2. 1 Marco Teórico: La experimentación del presente laboratorio. La sangre es de color rojo brillante a oscuro.1.glóbulos rojos (RBC. se esperaron los procesos de coagulación y permeabilidad. conforma el 7% del peso corporal (es decir de 5 a 6 litros). agua destilada y 4 reactivos (NaCl. aplicadores. Los conceptos claves para el entendimiento del laboratorio son los siguientes: 2. Óscar Gómez Carlos apellido El siguiente informe de laboratorio contiene la descripción de un experimento de toma de sangre realizado. Cuando la muestra se centrifuga. se asientan los elementos formes en el fondo del tubo como un precipitado rojo (44%). Sin embargo. los análisis y conclusiones. Se exponen las observaciones. ésta se coagula. Ferricianuro de Potasio 2. con la ayuda de instrumentación de laboratorio (jeringas. CaCl2.cubierto por una capa transparente delgada leucocítica (1%) que consiste en leucocitos y plaquetas . que se conoce como plasma. Cuando se extrae sangre del cuerpo y se coloca en un tubo de ensayo. está basada en datos teóricos ya especificados en los libros. Hidrosulfito de sodio 2. tanto orgánicos como inorgánicos disueltos en agua. 2 .

El número de eritrocitos vacila entre los 4. acelerador de globulina) . plaquetas. con glicoporinas trans membrana y un complejo proteico de espectrina del citoesqueleto. o heparina impedirán la transformación de fibrinógeno en fibrina y la muestra no se coagulará. cuya función dentro del torrente sanguíneo es transportar el oxígeno y el CO2 a los tejidos del cuerpo y desde ellos. parte de los componentes orgánicos e inorgánicos dejan el plasma para integrarse al coágulo.000 9. Durante la coagulación. ya que este se transforma en fibrina (proteína insoluble). ELEMENTOS FORMES: Eritrocitos: También llamados glóbulos rojos o hematíes. y en el hematocrito el porcentaje de eritrocitos es de 45 50% del total de células de la sangre. Las proteínas constituyen el 9% y las sales inorgánicas. fibrinógeno. Las proteínas del plasma son: -Albúmina -Globulinas ( . nutrientes y gases el 1%.Lipoproteínas del plasma (Quilomicrones.000 por mm3. pero lo usan como medio para transportarse de una región del cuerpo a otra. Por lo general protegen el cuerpo 3 . . El número de leucocitos es mucho menor que el de los glóbulos rojos. citrato. Prototrombina. Lipoproteína de muy baja densidad (VLDL) y Lipoproteína de baja densidad (LDL) El plasma se caracteriza por la presencia de fibrinógeno (proteína soluble). siendo mayor el número en los hombres.000. pues en el adulto solo hay 6500 a 10.Proteínas del complemento C1 a C9 . compuestos orgánicos y electrolitos. miden 7 micras de diámetro y contienen una membrana compleja.Plasma y suero: Es un líquido amarillento en el cual están suspendidos células. que representa alrededor del 90% de su volumen.000. compuestos nitrogenados. La fibrina puede ser destruida por una proteína llamada plasmina. Los eritrocitos están llenos de hemoglobina. Leucocitos: Los leucocitos son glóbulos blancos que se clasifican en dos categorías principales: granulocitos y agranulocitos. El principal componente del plasma es agua. No funcionan dentro del torrente sanguíneo. La relación hemoglobina/hematocrito es de 1:3 respectivamente.Proteínas de coagulación (ej.000 glóbulos blancos por mm3 de sangre. ) . Agregar anticoagulantes como oxalato. que forma las fibras que constituyen el coágulo. iones. son las células más pequeñas y numerosas de la sangre. que se diferencia del plasma es de color pajizo y se denomina suero. mientras que el suero se caracteriza por la ausencia de fibrinógeno. El líquido restante. EDTA.

4) sistemas enzimáticos que sintetizan prostaglandinas (que causan reacciones vasculares). 2) retículo endoplásmico y aparato de Golgi que sintetizan enzimas y almacenan calcio. migrando (diapédesis) por las células endoteliales. transportándose por el torrente sanguíneo. cuya función es la mediación de reacciones inflamatorias. pues fagocitan y destruyen bacterias mediante el contenido de sus gránulos. Su número va entre 150. Su porcentaje es de 3 a 8% de los leucocitos y su número es de 200 a 800 por mm3. No puede reproducirse. Su porcentaje en el total de leucocitos es menos del 1%.000 400. y su vida es de 8 a 12 días. Granulocitos: Tienen gránulos específicos.500 7. Agranulocitos: que carecen de gránulos específicos. Su función no es formar el coágulo. cuya función es la reacción inmunitaria de mediación celular (Células T) y la reacción inmunitaria de mediación humoral (Células B). miosina y tromboasterina. derivadas de los megacariocitos. Su porcentaje va entre 20 25% de los leucocitos y su número de 1. Linfocitos. Su porcentaje varía entre 2 4% del total de leucocitos. y llegando al tejido conjuntivo para ejercer su función. Monocitos.000 por mm3. cuya función es la fagocitosis del complejo antígeno anticuerpo y la destrucción de parásitos. con una zona hialunómera y una granulómera. tapando la lesión rápido antes de que se forme el coágulo. y su número vacila entre 50 y 100 por mm3. En su citoplasma hay factores activos del tipo: 1) moléculas de proteína actina.500. Basófilos. pero forman la fase hemostática primaria.500 a 2. Eosinófilos. para que diferentes células crezcan ayuden a reparar las paredes dañadas. cuya función es antimicrobiana. 3)mitocondrias y sistemas enzimáticos que forman ATP y ADP. es decir 150 400 en número por mm3. Su núcleo es segmentado en lóbulos. Neutrófilos. Su porcentaje es de 60 75% del total de leucocitos.000 por mm3. Su función es limitar una hemorragia al adherirse al recubrimiento endotelial del vaso sanguíneo en caso de una lesión. forman también el trombo plaquetario y la agregación plaquetaria. cuya función es diferenciarse en macrófago y fagocitar y presentar antígenos. En su membrana celular hay glucoproteínas que hace que se adhieran a las zonas dañadas de la pared vascular.de sustancias extrañas. Su número va entre 3. Plaquetas: O trombocitos. son células anucleadas pequeñas. 5) factor estabilizador de fibrina (coagulación) y 6) un factor de crecimiento. mas no al endotelio. que activan varias fases del proceso de coagulación. que ayudan a contraer las plaquetas. de 1 a 3 micras. También hay fosfolípidos en la membrana. 4 .

700 y en concentración de 15mg/dl en el plasma. que atrapan en su red plaquetas. células sanguíneas y plasma para formar el coágulo. se llega por los siguientes mecanismos: 1) espasmo vascular (es decir que la pared de músculo liso del vaso se contrae para reducir el flujo de sangre).700. Las que estimulan la coagulación se llaman procoagulantes y las que la inhiben anticoagulantes. de peso molecular 68. o 1 o 2 minutos si el trauma fue menor. formando tejido conjuntivo. 2) la formación de un tapón de plaquetas.1. 5 . Es el tercer mecanismo de la hemostasia (prevención de la pérdida de sangre. cuando hay ruptura de un vaso. toda la brecha o el extremo roto se rellenan con un coágulo. el coágulo empieza a aparecer en 15 o 20 segundos si el trauma fue grave. La protrombina se forma continuamente en el hígado. a la que. 2) el activador de la protrombina cataliza la conversión de protrombina en trombina en presencia de Ca2+ iónico. Entre 20 60 minutos después. alfa2-globulina. La teoría básica dice que en la sangre hay más de 50 sustancias que causan o afectan la coagulación. con la ayuda de la vitamina K. El mecanismo general de taponamiento tiene 3 etapas esenciales: 1) cascada compleja de reacciones químicas que afecta a más de una docena de factores de coagulación sanguínea. pero en el caso de la ruptura de un vaso.2. se activan los procoagulantes y anulan los anticoagulantes para que aparezca el coágulo. 3) la formación de un coágulo sanguíneo como resultado de la coagulación. el coágulo se retrae. Se forma un complejo de sustancias activadas llamadas en grupo activador de la protrombina. Es una proteína inestable.2 Hemostasia y coagulación sanguínea: Se le llama coagulación a la formación de una aglomeración sólida. Recién hecha la lesión. 3 -6 minutos después de la lesión. llamada coágulo a partir de un fluido orgánico. que puede desdoblarse en compuestos más pequeños. cerrando el vaso todavía más. Una vez formado el coágulo puede suceder que: 1) lo invadan los fibroblastos. con peso molecular de 33. La protrombina es una proteína del plasma. 4) proliferación final de tejido fibroso en el coágulo sanguíneo para cerrar el agujero en el vaso de manera permanente). 2) que el coágulo se disuelva. Esto continua hasta la organización completa del coágulo en tejido fibroso en 1 a 2 semanas. uno de los cuales es la trombina. En el torrente sanguíneo hay más anticoagulantes. 3) la trombina actúa para polimerizar el fibrinógeno en fibras de fibrina (ver más arriba la composición del plasma y del suero) en 10 15 segundos.

unidas a varias fibras de fibrina. que actúa eliminando cuatro péptidos de peso molecular bajo de la molécula de fibrinógeno formando una molécula de monómero de fibrina. Recién polimerizados. se conduce a la formación del activador de la protrombina. impidiendo las pérdidas de sangre. por sus elementos contráctiles (ver composición de las plaquetas arriba) hacen que el coágulo se retraiga. El suero no puede coagular. La trombina es una enzima proteica. de tal manera que exprime la mayor parte de su líquido en 20 60 minutos. El factor estabilizador de la fibrina. El propio coágulo libera sustancias (retroalimentación positiva) para promover más coagulación hasta que deje de perderse sangre.000) que está en el plasma a concentración de 100 700 mg/dl. haciendo el coágulo débil.El fibrinógeno es una proteína de peso molecular alto (340. Se forma en el hígado y debido a su gran tamaño. El coágulo empieza a contraerse. Es fundamental en el proceso de coagulación. los monómeros se unen mediante enlaces de hidrógeno débiles y las fibras no se entrecruzan entre sí. el coágulo sanguíneo se compone de una red de fibras de fibrina en todas las direcciones que atrapan células sanguíneas. Las plaquetas. y es por ello que difiere del plasma. no se filtra normalmente de los vasos a los líquidos intersticiales. refuerza mucho el coágulo creando enlaces covalentes entre los monómeros de fibrina. para formar las fibras de fibrina grandes que constituyen el retículo del coágulo sanguíneo. acompañada de los iones de calcio. adhiriéndose a la superficie dañada. El líquido exprimido se llama suero. se activa por sí mismo o con ayuda de la trombina. La contracción hace que los bordes del vaso dañado vuelvan a juntarse. liberado por las plaquetas. que luego convierte la 6 . que se polimeriza con otras moléculas de monómero de fibrina. y no tiene fibrinógeno ni factores de coagulación. Por tanto. Cuando hay daño en un vaso. plasma y plaquetas. y haciendo entrecruzar las fibras. La contracción la activa y la acelera la trombina.

mientras que la vía intrínseca es más lenta. que para evitar la coagulación in vitro. 7 . y su forma activa va acompañada de la letra a . se necesitan los iones de calcio para la promoción o aceleración de todas las reacciones de la coagulación. Durante la vía extrínseca. la mayoría formas inactivas de enzimas proteolíticas. Estos factores se designan en números romanos. ejercen la función principal. se puede llegar a la coagulación en 15 segundos. 2) mediante la vía intrínseca que empieza en la propia sangre. los factores de la coagulación. es decir que en un caso grave. reduciendo la concentración de iones de calcio. mediante la des ionización. que comienza con el traumatismo de la pared vascular y de los tejidos circundantes. Tanto en la vía extrínseca como en la intrínseca. Reacciones que ocurren durante la coagulación: En la página x se muestran las gráficas de los procesos que ocurren durante la coagulación de la sangre. tardando de 1 a 6 minutos. Si no hay iones de calcio no hay coagulación. Este activador puede formarse de dos maneras: 1) mediante la vía extrínseca. ocurren las siguientes reacciones: 1) Se libera la tromboplastina tisular (o factor tisular) 2) Factor X + Complejo lipoprotéico del factor tisular + Factor VIIa + Ca2+ Factor Xa 3) Factor Xa + Fosfolípidos del factor tisular + Fosfolípidos liberados por plaquetas ´Factor V Activador de la protrombina 4) Activador de la protrombina + Ca2+ + Protrombina Trombina 5) Trombina + fibrinógeno Monómeros de fibrina 6) Monómeros de fibrina + Ca2+ Fibras de fibrina 7) Trombina + Factor estabilizador de fibrina Factor estabilizador de fibrina activado 8) Fibras de fibrina + Factor estabilizador de fibrina activado fibras de fibrina entrecruzadas = COÁGULO Durante la vía intrínseca. ocurren las siguientes reacciones: 1) 2) 3) 4) 5) 6) 7) 8) 9) 10) 11) Trauma en la sangre + Factor XII Factor XIIa Trauma en la sangre liberación de fosfolípidos plaquetarios (Factor plaquetario 3) Factor XIIa + Factor XI + cininógeno de AMP + precalicreína Factor XIa Factor XIa + Factor IX Factor IXa Factor IXa + Factor VIII + Fosfolípidos plaquetarios + Factor plaquetario 3 + Factor X Factor Xa Factor Xa + Factor V + Fosfolípidos del tejido o plaqueta Activador de la protrombina Activador de la protrombina + Ca2+ + Protrombina Trombina Trombina + fibrinógeno Monómeros de fibrina Monómeros de fibrina + Ca2+ Fibras de fibrina Trombina + Factor estabilizador de fibrina Factor estabilizador de fibrina activado Fibras de fibrina + Factor estabilizador de fibrina activado fibras de fibrina entrecruzadas = COÁGULO Una diferencia importante entre la vía extrínseca e intrínseca es que la primera puede ser de naturaleza explosiva. para que se den las reacciones de coagulación. Es por esto. En ambas vías.protrombina en trombina. haciéndolo reaccionar con sustancias como ión citrato u oxalato.

6 Conocer procedimientos llevados a cabo en el laboratorio. Luego. se añade oxalato de inmediato a la sangre extraída al paciente hasta que no quede protrombina que pueda convertirse en trombina.2. el manejo de las unidades utilizadas para la cuantificación y los aspectos importantes de bioseguridad y prevención de accidentes) 2.2.2 2. Preguntas de discusión: ¿Qué efecto tiene el oxalato de potasio sobre el plasma sanguíneo? ¿Para qué se diluye el plasma en solución salina? ¿Qué efecto tiene el CaCl2 en la coagulación? ¿Qué efecto tiene el NaCl en la coagulación? 8 .8 Con base en el conocimiento de los procesos y reacciones que ocurren normalmente. se mezclan con un exceso de iones de calcio y de factor tisular con la sangre oxalatada. cuando se hace la llamada tiempo de protrombina .2. En dicho procedimiento. poder determinar una anormalidad en dichos procesos y reacciones.2. 2.2 Aprendizaje de los procedimientos del laboratorio de bioquímica (entre ellos el manejo adecuado del material. anulando el efecto del oxalato. plasma y la sangre desfibrinada 2.7 Observación en vivo de las reacciones que suceden en la coagulación y permeabilidad de la sangre. 2.5 Poder establecer la diferencia entre suero.1 Objetivos Correcto aprendizaje de la obtención de una muestra de sangre venosa 2.3 Conocimiento de los procesos y reacciones que se llevan a cabo normalmente en la coagulación y permeabilidad de la sangre 2.4 Conocimiento de la composición de la sangre y de las características principales de los elementos que la conforman.2. útiles para el diagnóstico médico para tratamientos preventivos y curativos. El tiempo para la coagulación se conoce como tiempo de protrombina. mediante la realización in vitro de estos procesos.En el laboratorio se hacen pruebas de coagulación. y dura aproximadamente 12 segundos. 2.2. 2.2.2. El factor tisular activa la reacción protrombina trombina por medio de la vía intrínseca.

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