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2/11/2020 La actividad de las células cerebelosas de Purkinje modula el comportamiento agresivo | eLife
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Neurociencia
La actividad de las células cerebelosas de

Purkinje modula el comportamiento
agresivo
Skyler L Jackman , Christopher H. Chen , Heather L Offermann , Iain R Drew ,

Bailey M Harrison , Anna M Bowman , Katelyn M Flick , Isabella Flaquer , Wade 
G Regehr
Breve informe ∙ 28 abr 2020
Citado 3 Vistas 2,214 Anotaciones 0
DOI: 10.7554 / eLife.53229
Artículo
Figuras y datos
Lado a lado
Resumen
Introducción
Resultados
Discusión
materiales y métodos
Referencias
https://elifesciences.org/articles/53229 1/50
Carta de decisión
Respuesta del autor
Información del artículo y del autor
Métrica
Resumen
Aunque el cerebelo se asocia tradicionalmente con el equilibrio y la función
motora, también desempeña funciones más amplias en los comportamientos
afectivos y cognitivos. La evidencia sugiere que el vermis cerebeloso puede
regular el comportamiento agresivo, aunque los circuitos cerebelosos y los

patrones de actividad que influyen en la agresión siguen sin estar claros.
Usamos métodos optogenéticos para modular bidireccionalmente la actividad
de las células de Purkinje del cerebelo delineadas espacialmente para evaluar
el impacto sobre la agresión en ratones. El aumento de la actividad de las
células de Purkinje en el vermis redujo significativamente la frecuencia de los
ataques en un ensayo de intruso residente. La reducción de la agresión no fue
consecuencia de una función motora deteriorada, porque la estimulación
optogenética no alteró el rendimiento motor. En experimentos
complementarios, La inhibición optogenética de las células de Purkinje en el
vermis aumentó la frecuencia de los ataques. Estos resultados sugieren que la
actividad de las células de Purkinje en el vermis cerebeloso regula la agresión
y respaldan aún más la importancia del cerebelo en la conducción de
conductas afectivas que podrían contribuir a los trastornos neurológicos.
"
Introducción
Los déficits motores profundos, como la ataxia y la pérdida del control

oculomotor, son las manifestaciones más evidentes del daño cerebeloso. Esto
ha contribuido a la opinión popular de que el cerebelo está involucrado
principalmente en la función motora, pero esto está lejos de ser una visión
completa de las funciones conductuales del cerebelo. Los estudios de
resonancia magnética funcional sugieren que algunas regiones de la corteza
cerebelosa están dedicadas a la función motora, pero otras regiones están

involucradas en la memoria de trabajo, el lenguaje, la emoción, la función
ejecutiva y muchas otras funciones no motoras ( Stoodley y Schmahmann,
2009 ; Van Overwalle et al., 2014). ). El cerebelo también está implicado en el
trastorno del espectro autista ( Wang et al., 2014 ), la ansiedad ( Moreno-Rius,
2018 ), el trastorno por déficit de atención (Berquin et al., 1998 ), esquizofrenia
( Andreasen y Pierson, 2008 ) y otros trastornos neurológicos no motores (
Phillips et al., 2015 ).
La región del vermis posterior de la corteza cerebelosa es particularmente

intrigante con respecto a la participación en conductas no motoras. El daño al
vermis cerebeloso en adultos puede conducir a déficits en la función
ejecutiva, cognición espacial, procesamiento lingüístico, regulación afectiva,
irritabilidad, ira, agresión y llanto o risa patológicos ( Schmahmann y
Sherman, 1998 ; Levisohn et al., 2000).). También hay una amplia evidencia 
que sugiere que el vermis influye en la agresión. En estudios seminales que
mapean la organización somatotópica de la corteza cerebelosa, el fisiólogo
italiano Guisseppe Pagano descubrió que la inyección de curare en el vermis
hacía que el animal 'se pusiera repentinamente furioso y se lanzara hacia los
presentes, tratando de morderlos' o 'saltar al suelo'. el aire, luchando por
morder quién sabe cuántos fantasmas de su psique agitada ”( Pagano, 1904 ).
Estudios posteriores sobre lesiones demostraron que la resección del vermis
tenía una influencia opuesta en el comportamiento y producía un efecto
calmante ( Sprague y Chambers, 1959 ; Peters y Monjan, 1971 ; Berman et al.,
1974). Se ha demostrado que la estimulación eléctrica de los núcleos
cerebelosos profundos impulsa comportamientos agresivos como la ira
fingida ( Zanchetti y Zoccolini, 1954 ) y el ataque ( Reis et al., 1973 ). En
estudios clínicos en humanos, la estimulación de la superficie del vermis
mejoró el control emocional y redujo los arrebatos agresivos ( Heath, 1977 ) y
redujo los sentimientos de ira ( Cooper et al., 1976 ).
Estos estudios implicaron al vermis en la regulación de la agresión, pero han

sido difíciles de interpretar. Las células de Purkinje (PC), las únicas células de
salida de la corteza cerebelosa, se activan de forma continua hasta 100 Hz e
inhiben las neuronas en los núcleos cerebelosos profundos (DCN) que a su vez
influyen en otras regiones del cerebro. Las observaciones de que la
estimulación eléctrica del vermis redujo la agresión ( Heath, 1977 ), mientras
que la estimulación de la DCN aumentó la agresión ( Reis et al., 1973 ), son
consistentes con la actividad de la PC que inhibe las células en la DCN (
Telgkamp y Raman, 2002 ; Alviña et al., 2008). Esto lleva a la interpretación de
que la actividad de PC elevada y la actividad de DCN disminuida suprimen la
agresión y, a la inversa, la actividad de DCN elevada (y por implicación la
actividad de PC disminuida) suprime la agresión. Sin embargo, es difícil

conciliar los estudios de estimulación con el efecto de domesticación
observado en los estudios de lesiones ( Sprague y Chambers, 1959 ). Las
lesiones del vermis disminuirán la inhibición de la DCN por parte de la PC y,
por lo tanto, se esperaría que promuevan la agresión al elevar el disparo
dentro de la DCN. En cambio, reprimen la agresión.
Numerosos factores dificultan la interpretación de los experimentos de

estimulación eléctrica y lesión, y podrían contribuir a la aparente
discrepancia entre estos dos enfoques. La estimulación eléctrica de la corteza
cerebelosa activa todo tipo de neuronas en las proximidades del electrodo,
incluidas las PC. Las interneuronas de la capa molecular también se activarán
e inhiben la activación de la PC ( Heiney et al., 2014 ). La estimulación también
activa de forma antidrómica las fibras musgosas, las fibras trepadoras y las
entradas moduladoras de otras regiones ( Llinás y Sasaki, 1989 ; Baker y 
Edgley, 2006), lo que podría contribuir a las consecuencias conductuales de la
estimulación. Además, la estimulación eléctrica de los PC puede sincronizar la
actividad, lo que, paradójicamente, podría aumentar los picos en el DCN (
Person y Raman, 2012a ; Person y Raman, 2012b ). Por estas razones, no está
claro cómo la estimulación eléctrica de la corteza vermal influye en los
circuitos cerebelosos. Para los estudios de lesiones del vermis cerebeloso, no
está claro cómo se alteró la activación de las neuronas DCN posteriores.
Aunque se esperaría que la pérdida de inhibición aumentara la activación de
DCN, se ha demostrado que la ablación genética de PC disminuye
paradójicamente la activación en DCN ( Bäurle et al., 1997), lo que sugiere que
los mecanismos compensatorios regulan las propiedades de las neuronas DCN
en ausencia de entrada de PC. Además, los estudios anteriores no
cuantificaron la magnitud y el curso temporal de los efectos conductuales
provocados por las intervenciones cerebelosas.
Para determinar el papel del cerebelo en la regulación de la agresión,

utilizamos técnicas optogenéticas para controlar selectivamente la actividad
de la PC en ratones. Usamos el ensayo de intruso residente, una medida de
agresión territorial natural en roedores, para proporcionar una medida de la
extensión y el curso temporal de un comportamiento agresivo ( Koolhaas et
al., 2013 ). La manipulación del disparo de PC en el vermis, pero no en otra
región cerebelosa, permitió un control rápido y bidireccional de la agresión.
Este estudio proporciona evidencia de que en el vermis cerebeloso el disparo
de PC elevado suprime la agresión, mientras que la supresión de disparo de
PC promueve el comportamiento agresivo.
Resultados
Para modular selectivamente la actividad de las PC en el vermis cerebeloso,

utilizamos ratones PCP2-cre ( Zhang et al., 2004 ) para restringir la expresión
de las opsinas microbianas ChR2 (canalrodopsina-2, [ Boyden et al., 2005 ]) y
NpHR3 .0 (halorhodopsin, [ Zhang et al., 2007 ]) a PC. Los registros
electrofisiológicos in vitro ( Figura 1a ) confirmaron que la estimulación de
ChR2 podría impulsar aumentos graduales en el disparo de PC que
aumentaron con la intensidad de la luz ( Figura 1b ), como se informó
anteriormente ( Guo et al., 2016 ). De manera similar, la estimulación con
halodopsina disminuyó las tasas de disparo de PC de una manera dependiente
de la intensidad de la luz ( Figura 1c). Para manipular la actividad de la PC in
vivo, se implantaron crónicamente fibras ópticas en ratones machos PCP2-cre

:: ChR2 o PCP2-cre :: NpHR adultos (> P42) sobre la superficie del vermis
cerebeloso. Las fibras se colocaron en la línea media sobre el lóbulo VII (
Figura 1 - Figura 1 ), una región que se sugiere que desempeña un papel en el
procesamiento emocional ( Stoodley y Schmahmann, 2009 ). Las grabaciones
posteriores in vivo a través de una craneotomía adyacente en animales
anestesiados confirmaron la capacidad de la luz de la fibra óptica implantada
para aumentar o disminuir de manera confiable la tasa de disparo de los PC
putativos que expresan ChR2 o halodopsina, respectivamente ( Figura 1d-f). Al
igual que con la estimulación eléctrica, la estimulación optogenética tiene el
potencial de inducir pausas en el disparo de la PC. Si las pausas se producen
de forma sincrónica entre múltiples PC que proporcionan inhibición a una
neurona DCN, podría promover el disparo en la DCN ( Person y Raman, 2012a
). Examinamos el momento del disparo de PC evocado ópticamente y
encontramos que había respuestas temporales complejas en diferentes PC,
aunque no hubo una pausa en el disparo promedio de PC ( Figura 1 - Figura 2
). Pasamos a registrar las respuestas de las neuronas en los núcleos
cerebelosos profundos (DCN) a las manipulaciones optogenéticas de disparo
de PC en animales despiertos ( Figura 1g ). El aumento de la activación de PC
con ChR2 disminuyó la activación de las neuronas DCN ( Figura 1h ,Figura 1
— suplemento de la figura 2 ), mientras que la disminución de la descarga de
PC con halodopsina aumentó la activación de neuronas en la DCN ( Figura 1i ).
Las magnitudes de los cambios en la activación de las neuronas DCN fueron
relativamente modestas. Esto puede reflejar en parte el aumento de las tasas
de activación de las neuronas en animales despiertos. Además, fue un desafío
registrar las neuronas DCN que eran objetivos de la población de PC que
estaba influenciada por la luz y otras neuronas en la DCN pueden estar más
fuertemente dirigidas y sufrir cambios de actividad más grandes que los
informados aquí. Por esta razón, los efectos sobre el disparo de DCN deben
considerarse límites inferiores.
Figura 1 con 2 suplementos
Control optogenético de la actividad de las células de Purkinje.

( a ) Esquema de grabación para grabación in vitro y estimulación optogenética. ( b )
Tasas de disparo provocadas por la estimulación de ChR2 a diferentes intensidades
(destellos de 0,5 ms, 50 Hz, n = 6). ( c ) Inhibición de…ver más »
Figura 1: datos de origen 1

Datos de modulación de disparo optogenético.
https://cdn.elifesciences.org/articles/53229/elife-53229-fig1-data1-v2.xlsx
Descargar elife-53229-fig1-data1-v2.xlsx
Después de esperar al menos 1 semana para la recuperación de las cirugías de

implantación de fibras, los animales se colocaron en un campo abierto y se
estimularon con intensidades de luz crecientes para determinar si la
manipulación de la actividad de la PC producía déficits motores evidentes o
consecuencias conductuales. En ratones que expresan ChR2, la estimulación
vermal fuerte con las intensidades de luz más altas (~ 110 mW / mm 2 en la
cara del implante de fibra óptica) a menudo resultó en efectos motores claros,
lo que hizo que los ratones se quedaran inmóviles o exhibieran actividad
distónica y similar a convulsiones . Este comportamiento se asemejaba a
descripciones anteriores de actividad similar a una convulsión impulsada por
una fuerte estimulación eléctrica de la corteza vermal ( Clark, 1937 ;
Chambers, 1947). Por lo tanto, para todos los ensayos posteriores adaptamos
la intensidad de la luz suministrada a cada animal a la intensidad máxima en
la que los animales permanecían móviles en el campo abierto y no mostraban
signos de deterioro motor (intensidad media 90 ± 3,9 mW / mm 2 ). Por el 
contrario, los animales que expresan clorhodopsina no exhibieron efectos de
comportamiento obvios en respuesta a la estimulación a la máxima
intensidad de luz suministrada por la fuente de luz LED de fibra acoplada (61
mW / mm 2 ). Este valor se utilizó para todos los ensayos posteriores.
Debido a que el cerebelo desempeña funciones bien establecidas en el control

motor y el equilibrio, y se ha demostrado que la manipulación optogenética
de las PC en el lóbulo simplex perturba los movimientos de las extremidades
anteriores ( Lee et al., 2015 ), primero probamos si la manipulación de la PC
vermal causaba efectos más sutiles deficiencias motoras que las descritas
anteriormente, que podrían interferir con la expresión de otras conductas.
Para evaluar la coordinación, los animales se probaron en ensayos de varilla
giratoria acelerada durante dos ensayos consecutivos durante los cuales
recibieron estimulación óptica o no recibieron estimulación. Ni la excitación
con ChR2 ( Figura 2a ) ni la inhibición con halodopsina ( Figura 2b) afectó el
rendimiento de la varilla giratoria. A continuación, evaluamos la locomoción
durante ensayos de campo abierto. Los animales recibieron bloques alternos
de 3 min de excitación optogenética ( Figura 2c ). El seguimiento de animales
automatizado ( Figura 2d ) reveló que la activación optogenética de las PC no
tuvo ningún efecto sobre la distancia recorrida, ni el tiempo que los animales
pasaron en el centro de la arena, una medida de ansiedad ( Figura 2e ). Para
evaluar el efecto de la estimulación sobre la locomoción con una mayor
resolución temporal, promediamos la velocidad del animal en todos los
bloques de estimulación dentro del ensayo, centrados en el inicio de la
estimulación, y encontramos que la estimulación no indujo ningún cambio
transitorio en la locomoción ( Figura 2 — figura suplemento 1). Del mismo
modo, la inhibición optogenético no afectó la locomoción o los animales
tiempo pasado en el centro de la arena ( figura 2f-g y la figura 2-figura

suplemento 1 ). Juntos, estos datos sugieren que manipular el disparo de PC
vermal no afecta fuertemente la coordinación, la locomoción o la ansiedad,
aunque la estimulación optogenética de PC a intensidades de luz fuertes
(mayores que las utilizadas para ensayos de comportamiento) condujo
consistentemente un deterioro motor profundo como se describió
anteriormente para la estimulación eléctrica vermal ( Cámaras, 1947 ).
Figura 2 con 1 suplemento
La manipulación de la actividad de las células de Purkinje vermales no afecta la

coordinación, la locomoción o la ansiedad.
( a ) Tiempo de caída para ensayos de varilla giratoria durante la excitación mediada
por ChR2. Los ratones se probaron en dos ensayos consecutivos y se asignaron al
azar para recibir estimulación durante el primer o segundo ensayo. ...ver más »

Datos de campo abierto (ChR2).
Descarga elife-53229-fig2-data1-v2.xlsx

Datos de campo abierto (Halo).

Datos de la varilla giratoria para la Figura 2A .
Para evaluar el impacto de la actividad cerebelosa en los comportamientos

agresivos y sociales, realizamos ensayos de intruso residente mientras se

manipulaba optogenéticamente la actividad de PC en el animal residente
(agresor) ( Figura 3a ). Aunque los ratones residentes muestran
comportamientos agresivos de manera confiable en los ensayos de intrusos
residentes, los ataques ocurren a una tasa relativamente infrecuente de <1
ataque por minuto ( Leypold et al., 2002 ; Yang et al., 2013 ; Lewis et al., 2015).
Con el fin de aumentar la agresión inicial, los ratones implantados con fibras
se alojaron con hembras, lo que les dio la oportunidad de aparearse, y
posteriormente se alojaron individualmente durante al menos 1 semana antes
de los ensayos. Los intrusos BALB / c machos adultos se introdujeron en la
jaula del residente durante 10 min. La estimulación optogenética se
administró a los residentes en bloques alternos de 1 minuto. Se registró el
inicio y la duración de múltiples conductas, incluida la agresión (ataques,
traqueteo de la cola, persecución y amenaza lateral), encuentros sociales
(contacto cara a cara y olfateo ano-genital), así como el auto-arreglo por parte
del residente ( Figura 3b ).
Figura 3 con 3 suplementos
Control bidireccional de la agresión mediante modulación optogenética de la

actividad de las células vermales de Purkinje.
( a ) Esquema para ensayos de intrusos residentes con estimulación optogenética. ( b )
Puntuación representativa de comportamientos sociales y agresivos. ( c ) Número
promedio de ataques y encuentros sociales durante ...ver más »

Datos del intruso residente Halo Vermis.

Intruso residente No hay datos de Opsin Vermis.
La activación optogenética de las PC vermales disminuyó significativamente

el número de ataques (p = 0,003, prueba t de Student emparejada de dos colas
) ( Figura 3c , consulte la Figura 3; el suplemento 1 de la figura para obtener
estadísticas detalladas). La estimulación no afectó la frecuencia de las
interacciones sociales (p = 0,7), ni la tasa de cascabeleo, persecución o
amenaza lateral, aunque sí incrementó la tasa de auto-aseo por parte del
residente ( Figura 3 — figura suplementaria 2). Una ventaja del enfoque
optogenético que hemos utilizado es que nos permite determinar con
precisión el curso temporal del efecto de la estimulación sobre el

comportamiento agresivo con mayor resolución temporal. Agrupamos los
ataques en incrementos de 10 sy promediamos entre bloques alternos al
inicio de la estimulación. Aunque los ataques son poco frecuentes y
estocásticos, este análisis reveló que la activación óptica de los PC reducía
inmediatamente la frecuencia de ataque, y cuando se detuvo la iluminación,
la frecuencia de ataque aumentó gradualmente en el minuto siguiente (
Figura 3d ). La estimulación redujo la frecuencia de los ataques en un 56% en
los 10 s inmediatamente posteriores al inicio de la estimulación ( Figura 3d).
Para poner esto en contexto, la ablación genética de neuronas en el
hipotálamo ventromedial, una región del cerebro conocida coloquialmente
como el 'área de ataque' debido a su importancia en la regulación de la
agresión, disminuye la frecuencia de ataque en un poco más del 50% ( Yang et
al. , 2013 ).
Para probar si la disminución de los ataques podría resultar de una influencia

distractora de la luz que escapa de la fibra óptica implantada, realizamos
ensayos de intrusos residentes con una cohorte separada de ratones de tipo
salvaje que no expresaban opsinas, y descubrimos que la estimulación óptica
no tuvo ningún efecto en ninguno de los ataques. o interacciones sociales (
Figura 3 - Figura 3 ). Para probar si el efecto sobre la agresión era específico
para estimular la actividad en el vermis posterior, repetimos los experimentos
en animales que expresaban ChR2 pero implantamos la fibra óptica sobre una
región fuera del vermis. Se ha demostrado que las manipulaciones
optogenéticas de la actividad de las células de Purkinje en muchas regiones
impulsan los movimientos motores en ratones ( Witter et al., 2013 ; Heiney et
al., 2014 ;Proville y col., 2014 ; Lee et al., 2015 ), lo que podría afectar
indirectamente la expresión de agresión y otras conductas. Para evitar la
confusión de los efectos motores, los implantes se colocaron sobre Crus II, una
región que no se ha implicado en la regulación de la agresión, pero donde la
manipulación de la actividad neuronal no impulsa fenotipos motores
evidentes en roedores ( Yamaguchi y Sakurai, 2016 ). En estos ratones, la
estimulación del disparo de PC no tuvo ningún efecto sobre la frecuencia de
los ataques ( Figura 3 - Figura 3 ). Juntos, estos resultados sugieren que el
aumento de la activación de PC en el vermis cerebeloso da como resultado
una disminución rápida y significativa de la agresión.
Si elevar el disparo de PC en el vermis disminuye la agresión, ¿la supresión de

disparos de PC aumenta la agresión? No es posible abordar esta cuestión con
estimulación eléctrica, pero es posible mediante optogenética. La inhibición
de las PC con clorhodopsina ( Figura 3e ) tuvo efectos opuestos sobre la
agresión, aumentando significativamente el número de ataques (p = 0.01) y
disminuyendo las interacciones sociales (p = 0.03) ( Figura 3f ). El promedio de 
la frecuencia de ataque a lo largo de múltiples épocas de estimulación mostró
que la frecuencia de ataque casi se duplicó en los 10 segundos posteriores al
inicio de la inhibición de PC impulsada por la clorhodopsina ( Figura 3g ).
Estos resultados indican que la actividad de los PC en el vermis cerebeloso
ejerce una influencia bidireccional sobre el comportamiento agresivo.
Discusión
Aquí demostramos que la actividad de las células de Purkinje en el vermis

posterior impulsa cambios rápidos y bidireccionales en el comportamiento
agresivo. Varios aspectos de nuestro estudio aportan importantes avances
sobre estudios previos que implicaban al cerebelo en la regulación de la
agresión. Primero, demostramos que la actividad cerebelosa regula la
agresión de los roedores en un ensayo establecido que es susceptible de
cuantificación. Este enfoque abre la puerta a estudios cuantitativos en un
modelo animal manipulable genéticamente y promete ser beneficioso para
futuros estudios de control cerebeloso de la agresión. En segundo lugar, dado
el papel del cerebelo en el control motor, era importante determinar si los
efectos sobre la agresión eran una consecuencia secundaria de la función
motora deteriorada. Evaluamos esto usando ensayos de campo abierto y
rotorod, y encontró que la misma estimulación que alteró la agresión no
afectó el rendimiento motor. Los estudios anteriores no realizaron una
evaluación tan cuantitativa del rendimiento motor. En tercer lugar, la
estimulación que usamos para suprimir la conducta fue más selectiva de lo
que podría lograrse con la estimulación eléctrica empleada en estudios

anteriores, que además de estimular directamente a los CP, puede activar
fibras moduladoras, fibras musgosas, fibras trepadoras y neuronas
inhibidoras en el cerebelo. corteza. En consecuencia, en nuestros
experimentos de ChR2, podemos atribuir la disminución de la agresión a un
aumento en la actividad de la PC. En cuarto lugar, demostramos que en
nuestros experimentos los aumentos en el disparo de PC disminuyeron el
disparo en el DCN y la disminución de disparo de PC hizo lo contrario. En
quinto lugar, encontramos que la supresión de la actividad de la PC aumenta
la agresión.Zanchetti y Zoccolini, 1954 ; Reis et al., 1973 ), pero difiere de la
observación de que las lesiones cerebelosas suprimen la agresión. Los
estudios en otras regiones del cerebro han descrito diferencias de
comportamiento similares entre los efectos de la actividad de manipulación
aguda y las lesiones ( Hong et al., 2018 ). Es probable que las lesiones dentro
del vermis estén acompañadas de mecanismos compensatorios dentro de la 
DCN ( Bäurle et al., 1997 ). Finalmente, al regular optogenéticamente el
disparo de PC, proporcionamos evidencia de que el cerebelo puede regular la
agresión de forma rápida y bidireccional.
El presente estudio plantea una serie de cuestiones importantes sobre la

forma en que el cerebelo controla el comportamiento. ¿Qué región específica
de la corteza cerebelosa está involucrada? Encontramos que manipular la
actividad de las células de Purkinje en el vermis posterior es suficiente para
modular significativamente la agresión. Esto es consistente con los estudios
clínicos que implican al lóbulo VII del vermis en el procesamiento afectivo (
Stoodley y Schmahmann, 2009 ). Sin embargo, es difícil determinar la región
precisa del cerebelo que fue influenciada por nuestra estimulación
optogenética. La luz que emana de la cara de las fibras implantadas se
dispersa y se dispersa en cientos de micrones ( Aravanis et al., 2007 ; Li et al.,
2019). En consecuencia, es probable que además del lóbulo VII, los lóbulos VIb
y VIII recibieran una iluminación significativa, y que la actividad de la PC en
estas regiones también se moduló probablemente hasta cierto punto. Los
estudios más detallados que manipulan la actividad en otras áreas del vermis
de la línea media podrían agregar claridad a las regiones específicas de la
corteza cerebelosa que regulan la agresión. También es posible que una
regulación más específica de la actividad de PC en la región que controla la
agresión (por ejemplo, sin afectar el disparo de PC en regiones vecinas que
alteran otros comportamientos) conducirá a efectos mayores sobre la
agresión. Esto podría lograrse mediante la realización de experimentos
similares a los descritos aquí, pero utilizando la expresión viral de ChR2 o
halorhodopsin para restringir la manipulación optogenética a regiones
específicas de la corteza cerebelosa. Además, ¿Cuál es la naturaleza de los
insumos que controlan esta región? Las diferentes regiones de la corteza

cerebelosa típicamente combinan entradas de fibra musgosa de diversas
fuentes, y será interesante determinar cómo se combinan estas entradas
dentro del cerebelo para controlar la agresión. Finalmente, ¿cuál es la vía de
salida y los objetivos posteriores que en última instancia están regulados por
la actividad en esta región de la corteza cerebelosa? Los estudios anatómicos
han descrito conexiones entre el cerebelo y las regiones implicadas en la
agresión, incluido el hipotálamo ( ¿Cuál es la vía de salida y los objetivos
aguas abajo que en última instancia están regulados por la actividad en esta
región de la corteza cerebelosa? Los estudios anatómicos han descrito
conexiones entre el cerebelo y las regiones implicadas en la agresión, incluido
el hipotálamo ( ¿Cuál es la vía de salida y los objetivos aguas abajo que en
última instancia están regulados por la actividad en esta región de la corteza
cerebelosa? Los estudios anatómicos han descrito conexiones entre el
cerebelo y las regiones implicadas en la agresión, incluido el hipotálamo 
(Haines et al., 1997 ) y corteza prefrontal ( Kelly y Strick, 2003 ; Suzuki et al.,
2012 ). Los registros electrofisiológicos han encontrado que la estimulación
cerebelosa evoca respuestas en esas regiones, junto con estructuras límbicas
como el hipotálamo, la amígdala y el hipocampo ( Anand et al., 1959 ; Snider y
Maiti, 1976 ). Sin embargo, aunque la organización somatotópica del cerebelo
está bien caracterizada en las regiones que influyen en la función motora, las
vías de salida de áreas como el vermis posterior aún no se han definido
claramente.
Es interesante especular sobre la naturaleza del papel del cerebelo en el

control del comportamiento agresivo. El cerebelo se ha expandido en tamaño
en relación con la corteza cerebral a lo largo de la evolución humana (
Weaver, 2005), contiene más de la mitad de las neuronas del cerebro y posee
innumerables conexiones con otras regiones del cerebro. No es de extrañar
que su influencia se extienda más allá del ámbito motor. Los experimentos
sobre el control motor sugieren que el cerebelo combina entradas para
generar predicciones. Es natural pensar que esta estrategia computacional
podría ser utilizada por el vermis posterior del cerebelo para aprender a
responder a las señales y, en última instancia, decidir cuándo la agresión es la
respuesta correcta. Quizás incluso las disfunciones sutiles o la plasticidad mal
dirigida dentro de esta región pueden conducir a un comportamiento
agresivo inapropiado. Por ejemplo, el daño cerebeloso a menudo ocurre en
pacientes con PTSD ( Rabellino et al., 2018). A medida que las técnicas de
estimulación no invasiva como la estimulación magnética transcraneal del
cerebelo surgen como opciones de tratamiento clínico ( Demirtas-Tatlidede et
al., 2010 ), es cada vez más importante comprender qué áreas del cerebelo
controlan las conductas no motoras ( Kelly y Strick, 2003 ). El trabajo futuro
podría arrojar luz sobre las proyecciones anatómicas y el impacto fisiológico

de las regiones no motoras del cerebelo.
materiales y métodos
Animales
Todos los experimentos se realizaron de acuerdo con las directrices y
protocolos federales aprobados por el Comité Permanente de Animales del
Área Médica de Harvard. Se utilizaron ratones machos de las siguientes cepas:
Los ratones residentes eran de tipo salvaje (WT) C57BL / 6N (Charles River
Laboratories) o ratones Pcp2-cre (Jackson Laboratory, número de reserva 
010536) cruzados con ChR2-EYFP (Ai32, Jackson Laboratory, 024109) o ratones
eNpHR3.0-EYFP (Halo) (Ai39 Jackson Laboratory, 014539). Los ratones intrusos
fueron BALB / c (Charles River Laboratories).
Fisiología in vitro
Solicita un protocolo detallado
Se prepararon rodajas de cerebelo sagital de ratones adultos (P30-P100) y se

realizaron grabaciones como se describió anteriormente ( Jackman et al., 2014
). En resumen, los animales se anestesiaron con isoflurano y se sacrificaron
por decapitación. Los cerebros se extrajeron en una solución de corte
enfriada con hielo que contenía (en mm): 82,7 NaCl, 65 sacarosa, 23,8 NaHCO 3
, 23,7 glucosa, 6,8 MgCl 2 , 2,4 KCl, 1,4 NaH 2 PO 4 y 0,5 CaCl 2 . Se prepararon
cortes sagitales del vermis cerebeloso (250 µm de grosor) en una solución de
corte helada utilizando un vibrótomo Leica VT1200s. Las rodajas se
transfirieron durante 30 minutos a LCR artificial oxigenado (ACSF) a 32 ° C
que contenía lo siguiente (en mm): 125 NaCl, 26 NaHCO 3, 25 glucosa, 2,5 KCl, 2
CaCl2, 1,25 NaH 2 PO 4 y 1 MgCl 2 , se ajustaron a 315 mOsm y se dejaron
equilibrar a temperatura ambiente durante> 30 min antes del registro. Se
utilizaron PCP2-Cre :: ChR2-EYFP para todas las grabaciones de ChR2. Se
realizaron registros de halodopsina en ratones PCP2-Cre donde la expresión
de opsina fue impulsada por inyecciones cerebelosas estereotáxicas (como se
describió anteriormente [ Jackman et al., 2014 ]) de AAV9.EF1a.DIO.eNpHR3.0-
eYFP.WPRE.hGH (Addgene26966) . Aunque estos ratones no se utilizaron para
experimentos de comportamiento, se observó una sensibilidad óptica similar
en las grabaciones realizadas para un estudio separado con ratones PCP2-Cre

:: Ai39 ( Guo et al., 2016 ).
Los datos se adquirieron utilizando un amplificador Multiclamp 700B

(Molecular Devices) digitalizado a 10 kHz con un ITC-18 (Instrutech) y filtrado
de paso bajo a 4 kHz. La adquisición y el análisis se realizaron con software
personalizado escrito en IgorPro (proporcionado generosamente por Matthew
Xu-Friedman, SUNY Buffalo). Pinza de corriente de célula completa o
grabaciones en la célula se obtuvieron usando pipetas de parche de
borosilicato (2-4 MΩ), la solución interna contenía lo siguiente (en mm): 150 K-
gluconato, 3 KCl, 10 HEPES, 0.5 EGTA, 3 MgATP , 0,5 GTP, cinco fosfocreatina-
tris2 y cinco fosfocreatina-Na2, con el pH ajustado a 7,2 con NaOH. La
estimulación óptica se administró a través de la vía de excitación de un
microscopio vertical BX51WI (Olympus) mediante un láser azul de 473 nm
con control analógico DPSS de 50 mW (MBL-III-473-50 mW, Optoengine) o un 
LED ámbar de 590 nm (160 mW, ThorLabs).
Implantación crónica de fibras y estimulación in vivo

Los implantes de fibra óptica se ensamblaron como se describió

anteriormente ( Sparta et al., 2012). En resumen, se aseguró una fibra óptica
multimodo (Thorlabs, NA 0,39, núcleo de 200 μm) en casquillos de cerámica
(Thorlabs, 1,25 mm OD) con epoxi. Las fibras se cortaron para sobresalir 0,2
mm por debajo de la férula y se pulió el extremo del conector. Solo se
utilizaron fibras con> 70% de transmisividad. Para determinar la intensidad
de la luz que sale de las fibras, se midió la salida de las fibras con un medidor
de potencia (Ophir; Vega). Se utilizó un fotodiodo para medir la intensidad
relativa durante los destellos cortos controlados por el disparador analógico
del láser, y este valor se utilizó para calcular la potencia de salida durante los
destellos cortos. La intensidad de la luz suministrada in vivo se calculó
dividiendo la salida de luz total (4,1 mW para el láser de 473 nm, 2,3 mW para
el LED de 590 nm) por el área de superficie de la fibra óptica. Para evitar la
desensibilización de ChR2 y la conducción de los PC hacia el bloqueo inducido
por la despolarización, estimulamos a los animales que expresaban ChR2
mediante trenes flash de pulsos de 1 a 2 ms. Las fibras ópticas se implantaron
como se describió anteriormente (Sparta et al., 2012). En resumen, los ratones
adultos (P40-P80) fueron anestesiados con ketamina / xilazina (100/10 mg / kg)
suplementada con isoflurano (1% -4%). Se realizó una incisión para exponer
el cráneo y el tejido conectivo y la musculatura por encima del cerebelo se
despegaron suavemente. Las coordenadas estereotáxicas utilizadas para
apuntar implantes al vermis posterior y Crus II se determinaron inicialmente

realizando craneotomías de prueba e inyectando pequeños volúmenes de
colorante fluorescente o vectores de expresión viral. Se sacrificaron los
animales y se utilizó una microcopia de fluorescencia post hoc para
determinar la ubicación de las craneotomías en relación con la superficie del
cerebelo. Para los implantes vermales, el sitio de la craneotomía se determinó
usando una pipeta fina unida a un dispositivo estereotáxico (Kopf). Después
de localizar el bregma, la pipeta se movió caudal al cerebelo, bajó 2. 0 mm con
relación al bregma, luego avanzó rostralmente hasta tocar la superficie del
cráneo expuesto. El sitio de las craneotomías Crus II se determinó de manera
similar, pero 1,5 mm ventral y 2,5 mm lateral del bregma. Se realizó una
craneotomía en este sitio y se colocaron los implantes en su lugar. Los
implantes se fijaron al cráneo con Metabond (Parkell) y se suturó la herida. La
buprenorfina (0,05 mg / kg) se administró posoperatoriamente por vía
subcutánea cada 12 horas durante 48 horas. Al concluir los ensayos de 
comportamiento, algunos animales residentes se anestesiaron con ketamina y
se perfundieron transcardialmente con paraformaldehído (PFA) al 4% en PBS.
Se extrajo el cerebro, se fijó posteriormente durante 24 horas y se prepararon
los cortes cerebelosos sagitales utilizando un vibrótomo. Se obtuvieron
imágenes de la fluorescencia de YFP en ratones Ai32 y Ai39 usando un
microscopio de disección Olympus MVX10 Macro (para tejido fijo intacto) o
Zeiss Axio Imager (para cortes de cerebro). Las imágenes se mejoraron en
contraste en Fiji para su visualización. En algunos casos, la histología podría
usarse para determinar la ubicación del implante sobre la corteza cerebelosa.
Fisiología in vivo
Los ratones de los experimentos de comportamiento fueron fuertemente

anestesiados con isoflurano (2%). La anestesia se mantuvo durante todos los
procedimientos siguientes. Se realizó una craneotomía inmediatamente
lateral a la fibra óptica implantada para insertar un electrodo para registros
extracelulares. Se cementó una placa de cabeza (Metabond) anterior a la fibra
óptica y se fijó la cabeza del ratón para las grabaciones. Se sacaron electrodos
de vidrio de borosilicato (Sutter), se rellenaron con ACSF y se insertaron en un
ángulo de entre 20 y 45 grados para registrar la actividad de una sola unidad
debajo de la fibra óptica. La mayoría de las neuronas se registraron entre 1 y
2 mm de este punto de entrada. Las señales se adquirieron a 20 kHz entre 0,2
y 7,5 kHz (Intan Technologies). Las células de Purkinje se identificaron por la
presencia de picos complejos, aumento característico del ruido cuando el
electrodo entró en la capa de células de Purkinje. y / o capacidad de respuesta
a la luz. Las unidades individuales se clasificaron sin conexión en Offline

Sorter (Plexon) y se analizaron en Matlab (Mathworks).
Las grabaciones del DCN se realizaron en ratones PCP2-Cre :: ChR2-EYFP y

PCP2-Cre :: Halo-EYFP despiertos y con sujeción en la cabeza. Brevemente, se
anestesió a los ratones con isoflurano (2%) y se cementó una placa de cabeza
(Metabond) en la cara anterior del cráneo. Se realizó una craneotomía (-6 mm
posterior al bregma, 0,75-1,2 mm lateral desde la línea media) para la
colocación del electrodo de registro en la DCN medial o interpuesta. Para los
ratones PCP2-Cre :: ChR2-EYFP, se realizó una craneotomía grande sobre el
vermis para facilitar la activación de las células de Purkinje. Para ratones
PCP2-Cre :: Halo-EYFP, la región sobre el vermis se adelgazó manualmente
hasta que se hizo visiblemente transparente bajo un alcance de disección. La
estimulación óptica se administró a través de una fibra óptica colocada sobre
el vermis. La luz se enfocó a un tamaño de punto de aproximadamente 2 mm 
de diámetro. Los parámetros de estimulación fueron idénticos a los utilizados
en los experimentos anestesiados anteriores, aunque en lugar de LED, estos
experimentos utilizaron un láser azul de 473 nm (MBL-III-473-50 mW,
Optoengine) para la activación de ChR2, o un láser rojo de 647 nm ( MRL-III-
635–500 mW, Optomotor) para la activación de Halo. Las grabaciones se
realizaron utilizando una sonda de silicio (serie E, Cambridge Neurotech), de
ratones despiertos sujetos a la cabeza sobre una cinta de correr cilíndrica. Las
DCN se identificaron por la profundidad de grabación, la ausencia de
actividad de las células de Purkinje y, en un subconjunto de experimentos, la
sonda de silicio se recubrió con DiI (Thermo Fisher Scientific) para confirmar
que los sitios de grabación estaban dentro de la DCN. Los datos se adquirieron
y procesaron de manera idéntica a los experimentos anestesiados.
Optoengine) para la activación de ChR2, o un láser rojo de 647 nm (MRL-III-
635–500 mW, Optoengine) para la activación de Halo. Las grabaciones se
y procesaron de manera idéntica a los experimentos anestesiados.
Optoengine) para la activación de ChR2, o un láser rojo de 647 nm (MRL-III-
635–500 mW, Optoengine) para la activación de Halo. Las grabaciones se
y procesaron de manera idéntica a los experimentos anestesiados. ausencia
de actividad de las células de Purkinje, y en un subconjunto de experimentos,
la sonda de silicio se revistió con DiI (Thermo Fisher Scientific) para
confirmar que los sitios de registro estaban dentro de la DCN. Los datos se
adquirieron y procesaron de manera idéntica a los experimentos
anestesiados. ausencia de actividad de las células de Purkinje, y en un
subconjunto de experimentos, la sonda de silicio se revistió con DiI (Thermo
Fisher Scientific) para confirmar que los sitios de registro estaban dentro de la
DCN. Los datos se adquirieron y procesaron de manera idéntica a los
experimentos anestesiados.
Comportamiento

Los ratones utilizados en experimentos de comportamiento se alojaron en un

ciclo de luz-oscuridad inverso de 12 horas (encendido de 7 PM a 7 AM). La
línea de tiempo para los experimentos fue la siguiente: Se permitió que los
ratones residentes (agresores) se recuperaran de las cirugías de implantes
durante al menos 7 días. Luego se emparejaron con una hembra adulta C57BL
/ 6N durante 7 a 12 días. La hembra fue retirada y el ratón residente
permaneció en aislamiento social durante al menos 7 días. No se realizaron
cambios de jaula durante el aislamiento social para mejorar la agresión de
dominio territorial posterior. Los residentes primero fueron evaluados para
detectar signos de disfunción motora inducida por estimulación, luego
analizados en campo abierto, rotarod y finalmente agresión (residente-
intruso) en el transcurso de varias semanas. Antes de los experimentos de
comportamiento, los animales se colocaron en una habitación oscura y se
dejaron habituar durante al menos 1 hora.
Para los experimentos que involucran estimulación optogenética, la fuente de

luz se conectó a un cable de fibra óptica a través de un conmutador giratorio
(FRJ_1 × 1_FC-FC, Doric Lenses) para permitir la libertad de movimiento. El
cable de fibra óptica se unió al implante con un manguito de férula (Thorlabs)
y se dejó que los ratones se aclimataran al cable adjunto durante 30 min.
Todos los ensayos se realizaron bajo una iluminación roja tenue. La
coordinación sensoriomotora se evaluó con un aparato de varilla giratoria
automatizado (UgoBasile). Los ratones se colocaron en una varilla giratoria
con una rotación constante de 4 RPM y se dejaron aclimatar durante 1 min,
después de lo cual la varilla se aceleró a 60 RPM a una velocidad de 20 RPM /
min. El tiempo de caída se calculó desde el comienzo de la aceleración. Todos

los ratones se ejecutaron en dos ensayos consecutivos con 4 minutos de
descanso entre ensayos, y los animales se asignaron al azar para recibir
estimulación óptica durante la primera o la segunda prueba. La estimulación
óptica comenzó 10 s antes del inicio de la aceleración y continuó hasta que el
animal cayó. Los ensayos de campo abierto se realizaron en un recipiente
cuadrado de plástico blanco opaco (46 × 46 cm), y las regiones centrales se
definieron como un cuadrado de un tercio de la dimensión del área. El
seguimiento automatizado se realizó en Matlab utilizando idTracker2.1.
Para los ensayos de residentes-intrusos, los residentes se conectaron a la fibra

óptica y se les permitió aclimatarse en su cambio de hogar durante 30
minutos. Se introdujo un intruso BALB / c (aproximadamente de la misma
edad) en la jaula de la casa, y las interacciones se filmaron y puntuaron
manualmente. Los ensayos se detuvieron en el caso de que un animal 
resultara herido por un ataque o si el residente atacaba continuamente
durante más de 60 s. Los residentes se ejecutaron en hasta cinco ensayos de
intruso residente con al menos 2 días entre ensayos, con un intruso novedoso
utilizado para cada ensayo. Los residentes fueron retirados del estudio si no
atacaban o si el intruso atacaba ( Leshner y Nock, 1976). Para establecer un
nivel de agresión de referencia, se omitieron del análisis los ensayos con
menos de tres ataques o más de 20 ataques. Se estimuló un subconjunto de
animales que expresaban clorhodopsina (4/15) en intervalos de 5 minutos en
lugar de los intervalos estándar de 1 minuto. Los ensayos de intrusos
residentes se puntuaron manualmente por un experimentador ciego al
genotipo del ratón y las longitudes de onda de estimulación, y se anotaron
utilizando el software de código abierto BORIS ( Friard y Gamba, 2016 ). Se
puntuaron los siguientes comportamientos; auto-acicalamiento por parte del
residente, interacciones sociales (incluido el contacto cara a cara,
acicalamiento mutuo y olfateo ano-genital), sonajeros de cola, amenaza
lateral, persecución del intruso por parte del residente y ataques de mordidas
( Koolhaas et al. , 2013 ).
El análisis de datos se realizó con Igor Pro (Wavemetrics). Todos los resultados
se expresan como media ± error estándar de la media. Se probó la normalidad
de los datos de cada comportamiento para cada condición experimental
(prueba de Shapiro-Wilk). Para comparar las diferencias de luz encendida /
apagada dentro de los grupos, los datos que no cumplieron con el criterio de
normalidad se analizaron mediante el rango con signo de Wilcoxon no
paramétrico, mientras que los datos distribuidos normalmente se analizaron
mediante la prueba t de Student emparejada de dos colas . De manera similar,
las comparaciones entre grupos se probaron mediante la prueba t de Student
de dos colas no emparejada o la prueba no paramétrica de Wilcoxon-Mann-

Whitney. El criterio de significación estadística se estableció en p <0,05.
Referencias
1 Cuestionando el papel del disparo de rebote en el cerebelo

K Alviña, JT Walter, A Kohn, G Ellis-Davies, K Khodakhah (2008)
Nature Neuroscience 11 : 1256-1258.
https://doi.org/10.1038/nn.2195
PubMed | Google Académico
2 Proyecciones cerebelosas al sistema límbico

BK Anand, CL Malhotra, B Singh, S Dua (1959)

Revista de neurofisiología 22 : 451–457.
https://doi.org/10.1152/jn.1959.22.4.451
3 El papel del cerebelo en la esquizofrenia

NC Andreasen, R Pierson (2008)
Psiquiatría biológica 64 : 81–88.
https://doi.org/10.1016/j.biopsych.2008.01.003
4 Una interfaz neuronal óptica: control in vivo de la corteza motora de

los roedores con tecnología de fibra óptica y optogenética integrada
AM Aravanis, LP Wang, F Zhang, LA Meltzer, MZ Mogri, MB Schneider, K Deisseroth
(2007)
Revista de ingeniería neuronal 4 : S143 – S156.
https://doi.org/10.1088/1741-2560/4/3/S02
5 Tiempo de conducción olivocerebeloso no uniforme en el vermis del

cerebelo de rata
Señor panadero, SA Edgley (2006)
The Journal of Physiology 570 : 501–506.
https://doi.org/10.1113/jphysiol.2005.099176
6 Diversos efectos de la pérdida de células de Purkinje en neuronas de

núcleos vestibulares y cerebelosos profundos en ratones mutantes
con degeneración de células de Purkinje: un posible mecanismo

compensatorio
J Bäurle, C Helmchen, U Grüsser-Cornehls (1997)
The Journal of Comparative Neurology 384 : 580–596.
https://doi.org/10.1002/(SICI)1096-9861(19970811)384:4<580::AID-CNE7>3.0.CO;2-Z
7 El cerebelo, la epilepsia y el comportamiento

Un berman, D Berman, J Prescott (1974)
277-284, El efecto de las lesiones cerebelosas en el comportamiento emocional en
el mono rhesus, El cerebelo, epilepsia y comportamiento, Springer, 10.1007 / 978-
1-4613-4508-4.
Google Académico
8 Cerebelo en el trastorno por déficit de atención con hiperactividad: un

estudio de resonancia magnética morfométrica 
PC Berquin, JN Giedd, LK Jacobsen, Hamburguesa SD, AL Krain, JL Rapoport, FX
Castellanos (1998)
Neurology 50 : 1087–1093.
https://doi.org/10.1212/WNL.50.4.1087
9 Escala de tiempo de milisegundos, control óptico genéticamente

dirigido de la actividad neuronal
ES Boyden, F Zhang, E Bamberg, G Nagel, K Deisseroth (2005)
https://doi.org/10.1038/nn1525
Google Académico
10 Estimulación eléctrica del interior del cerebelo en el gato.

Cámaras WW (1947)
American Journal of Anatomy 80 : 55–93.
https://doi.org/10.1002/aja.1000800105
11 Un efecto posterior prolongado de la estimulación eléctrica de la

corteza cerebelosa en gatos no anestesiados
SL Clark (1937)
Science 86 : 377–379.
https://doi.org/10.1126/science.86.2234.377
12 Estimulación cerebelosa crónica en estudios clínicos y anatómicos de

la epilepsia
Es Cooper, Estoy en, M Riklan, JM Waltz, TP Poon (1976)
Archives of Neurology 33 : 559–570.

https://doi.org/10.1001/archneur.1976.00500080037006
13 Estudio de seguridad y prueba de principio de la estimulación del

estallido theta vermal cerebeloso en la esquizofrenia refractaria
A Demirtas-Tatlidede, C Freitas, JR Cromer, L Safar, D Ongur, Piedra WS, LJ Seidman,
JD Schmahmann, Un Pascual-Leone (2010)
Investigación sobre la esquizofrenia 124 : 91–100.
https://doi.org/10.1016/j.schres.2010.08.015
14 BORIS: un software de registro de eventos de código abierto versátil y

gratuito para codificación de video / audio y observaciones en vivo
Oh fraile, M Gamba (2016)
Métodos en ecología y evolución 7 : 1325-1330. 
https://doi.org/10.1111/2041-210X.12584
Google Académico
15 Las células de Purkinje inhiben directamente las células granulares en

regiones especializadas de la corteza cerebelosa.
C Guo, L Witter, S Rudolph, HL Elliott, KA Ennis, WG Regehr (2016)
Neuron 91 : 1330-1341.
https://doi.org/10.1016/j.neuron.2016.08.011
dieciséis
El eje cerebeloso-hipotalámico: circuitos básicos y observaciones
clínicas
DE Haines, E Dietrichs, GA Mihailoff, EF McDonald (1997)
Revista Internacional de Neurobiología 41 : 83–107.
https://doi.org/10.1016/s0074-7742(08)60348-7
17 Modulación de la emoción con un marcapasos cerebral. tratamiento

para enfermedades psiquiátricas intratables
RG Heath (1977)
The Journal of Nervous and Mental Disease 165 : 300–317.
https://doi.org/10.1097/00005053-197711000-00002
18 Control preciso de la cinemática del movimiento por inhibición

optogenética de la actividad de las células de Purkinje
SA Heiney, J Kim, GJ Augustine, JF Medina (2014)
Journal of Neuroscience 34 : 2321–2330.
https://doi.org/10.1523/JNEUROSCI.4547-13.2014
19 Sensación, movimiento y aprendizaje en ausencia de corteza cilíndrica

YK Hong, CO Lacefield, CC Rodgers, RM Bruno (2018)
Nature 561 : 542–546.
https://doi.org/10.1038/s41586-018-0527-y
20 Lograr el control óptico de alta frecuencia de la transmisión sináptica

SL Jackman, BM Beneduce, IR Drew, WG Regehr (2014)
21 Asas cerebelosas con corteza motora y corteza prefrontal de un

primate no humano 
RM Kelly, PL Strick (2003)
The Journal of Neuroscience 23 : 8432–8444.
https://doi.org/10.1523/JNEUROSCI.23-23-08432.2003
22 El paradigma residente-intruso: una prueba estandarizada de

agresión, violencia y estrés social
JM Koolhaas, CM Coppens, SF de Boer, B Buwalda, P Meerlo, PJ Timmermans (2013)
Revista de experimentos visualizados e4367.
https://doi.org/10.3791/4367
23 Mecanismos de circuito que subyacen a la formación de la memoria

motora en el cerebelo
KH Lee, PJ Mathews, AM Reeves, KY Choe, SA Jami, RE Serrano, TS Otis (2015)
Neuron 86 : 529-540.
24 Los efectos de la experiencia en la respuesta agonística: una

interpretación de la teoría de la expectativa
AI Leshner, BL Nock (1976)
Biología del comportamiento 17 : 561–566.
https://doi.org/10.1016/S0091-6773(76)91009-9
25 Consecuencias neuropsicológicas de la resección del tumor

cerebeloso en niños: síndrome cognitivo afectivo cerebeloso en una
población pediátrica
L Levisohn, Un Cronin-Golomb, JD Schmahmann (2000)
Cerebro: una revista de neurología 123 (Pt 5 : 1041-1050.
https://doi.org/10.1093/brain/123.5.1041
26 Modulación del comportamiento agresivo en ratones por subtipos de

receptores nicotínicos
Como Lewis, YS Mineur, PH Smith, ELM Cahuzac, Señor Picciotto (2015)
Farmacología bioquímica 97 : 488–497.
https://doi.org/10.1016/j.bcp.2015.07.019
27 Comportamientos sexuales y sociales alterados en ratones mutantes

trp2
BG Leypold, CR Yu, T Leinders-Zufall, MM Kim, F Zufall, R Axel (2002) 
PNAS 99 : 6376–6381.
https://doi.org/10.1073/pnas.082127599
Google Académico
28 Restricciones espacio-temporales sobre la inactivación optogenética

en circuitos corticales
N Li, S Chen, ZV Guo, H Chen, Y Huo, HK Inagaki, G Chen, C Davis, D Hansel, C Guo,
K Svoboda (2019)
eLife 8 : e48622.
https://doi.org/10.7554/eLife.48622
29 La organización funcional del sistema olivo-cerebeloso examinado por

múltiples registros de células de Purkinje
R Llinás, K Sasaki (1989)
European Journal of Neuroscience 1 : 587–602.
https://doi.org/10.1111/j.1460-9568.1989.tb00365.x
30 El cerebelo en los trastornos relacionados con el miedo y la ansiedad

J Moreno-Rius (2018)
Progreso en Neuro-Psicofarmacología y Psiquiatría Biológica 85 : 23–32.
https://doi.org/10.1016/j.pnpbp.2018.04.002
31 Saggio di localizzazione cerebellare

G Pagano (1904)
Rivista Di Patologia Nervosa a Mental 9 : 209–228.
Google Académico
32 La sincronía de las neuronas de Purkinje provoca picos bloqueados en

el tiempo en los núcleos cerebelosos
Persona AL, MI Raman (2012a)
Nature 481 : 502–505.
https://doi.org/10.1038/nature10732
Google Académico
33 Sincronía y codificación neural en circuitos cerebelosos

Persona AL, MI Raman (2012b)
Fronteras en circuitos neuronales 6 : 97.
https://doi.org/10.3389/fncir.2012.00097
34 Comportamiento tras lesiones cerebelosas en gatos y monos

M Peters, AA Monjan (1971)

Physiology & Behavior 6 : 205-206.
https://doi.org/10.1016/0031-9384(71)90091-6
35 El cerebelo y los trastornos psiquiátricos

JR Phillips, DH Hewedi, AM Eissa, AA Moustafa (2015)
Frontiers in Public Health 3 : 66.
https://doi.org/10.3389/fpubh.2015.00066
36 Implicación del cerebelo en los circuitos sensoriomotores corticales

para el control de los movimientos voluntarios
RD Proville, M Spolidoro, N Guyon, GP Dugué, F Selimi, P Isope, D Popa, C Léna
(2014)
https://doi.org/10.1038/nn.3773
37 El cerebelo después de un trauma: conectividad funcional en estado

de reposo del cerebelo en el trastorno por estrés postraumático y su
subtipo disociativo
D Rabellino, M Densmore, J Théberge, MC McKinnon, RA Lanius (2018)
Mapeo del cerebro humano 39 : 3354–3374.
https://doi.org/10.1002/hbm.24081
38 Ataque depredador, acicalamiento y conductas consumatorias

provocadas por la estimulación eléctrica de los núcleos cerebelosos
del gato
DJ Reis, N Doba, MA Nathan (1973)
Science 182 : 845–847.
https://doi.org/10.1126/science.182.4114.845
39 El síndrome cognitivo afectivo cerebeloso

JD Schmahmann, JC Sherman (1998)
Cerebro 121 (Pt 4 : 561–579.
https://doi.org/10.1093/brain/121.4.561
40 Contribuciones cerebelosas al circuito de papez

RS Snider, Un maiti (1976)
Revista de investigación en neurociencia 2 : 133-146.
https://doi.org/10.1002/jnr.490020204 
41 Construcción de fibras ópticas implantables para manipulación

optogenética a largo plazo de circuitos neuronales.
DR Esparta, AM Stamatakis, JL Phillips, N Hovelsø, R van Zessen, GD Stuber (2012)
Protocolos de la naturaleza 7 : 12-23.
https://doi.org/10.1038/nprot.2011.413
Google Académico
42 Un análisis de la función cerebelosa en el gato, revelada por su

destrucción parcial y completa, y su interacción con la corteza
cerebral.
JM Sprague, Cámaras W (1959)
Archives italiennes de biologie 97 : 68–88.
Google Académico
43 Topografía funcional en el cerebelo humano: un metaanálisis de

estudios de neuroimagen
CJ Stoodley, JD Schmahmann (2009)
NeuroImage 44 : 489–501.
https://doi.org/10.1016/j.neuroimage.2008.08.039
44 Organización de proyecciones cerebrales para identificar zonas

cerebelosas en el cerebelo posterior de la rata
L Suzuki, P Coulon, EH Sabel-Goedknegt, TJ Ruigrok (2012)
45 Depresión de la transmisión sináptica inhibidora entre las células de

Purkinje y las neuronas de los núcleos cerebelosos
P Telgkamp, MI Raman (2002)
The Journal of Neuroscience 22 : 8447–8457.
https://doi.org/10.1523/JNEUROSCI.22-19-08447.2002
46 La cognición social y el cerebelo: un metanálisis de más de 350

estudios de resonancia magnética funcional
F Van Overwalle, K Baetens, P Mariën, M Vandekerckhove (2014)
NeuroImage 86 : 554–572.
https://doi.org/10.1016/j.neuroimage.2013.09.033
47 El cerebelo, los períodos sensibles y el autismo 

SS Wang, AD Kloth, Un badura (2014)
Neuron 83 : 518-532.
48 Evolución recíproca del cerebelo y la neocorteza en humanos fósiles

AH Weaver (2005)
PNAS 102 : 3576–3580.
https://doi.org/10.1073/pnas.0500692102
49 Fuerza y sincronización de las respuestas motoras mediadas por el

disparo de rebote en los núcleos cerebelosos después de la activación
de las células de Purkinje.
L Witter, CB Canto, TM Hoogland, JR de Gruijl, CI De Zeeuw (2013)
Fronteras en circuitos neuronales 7 : 133.
https://doi.org/10.3389/fncir.2013.00133
50 La inactivación de la corteza II de la corteza cerebelosa altera el

procesamiento temporal de la sincronización absoluta pero no la
relativa en los movimientos voluntarios
K Yamaguchi, Y Sakurai (2016)
Frontiers en Sistemas de Neurociencia 10 : 16.
https://doi.org/10.3389/fnsys.2016.00016
51 Las neuronas sexualmente dimórficas del hipotálamo ventromedial

gobiernan el apareamiento en ambos sexos y la agresión en los
machos.
CF Yang, MC Chiang, DC gris, M Prabhakaran, M Alvarado, SA Juntti, EK Unger, JA
Wells, NM Shah (2013)
Cell 153 : 896–909.
https://doi.org/10.1016/j.cell.2013.04.017
52 Estallidos hipotalámicos autónomos provocados por estimulación

cerebelosa
A Zanchetti, A Zoccolini (1954)
Revista de neurofisiología 17 : 475–483.
https://doi.org/10.1152/jn.1954.17.5.475


53 Expresión altamente restringida de Cre recombinasa en células de
Purkinje del cerebelo
XM Zhang, AH-L Ng, JA Tanner, WT Wu, NG Copeland, NA Jenkins, JD Huang (2004)
Génesis 40 : 45–51.
https://doi.org/10.1002/gene.20062
Google Académico
54 Interrogación óptica multimodal rápida de circuitos neuronales

F Zhang, LP Wang, M Brauner, JF Liewald, K Kay, N Watzke, Madera PG, E Bamberg,
G Nagel, Una gottschalk, K Deisseroth (2007)
Nature 446 : 633–639.
https://doi.org/10.1038/nature05744
Carta de decisión
Vatsala Thirumalai
Editor de revisión; Centro Nacional de Ciencias Biológicas, India
Richard B. Ivry
Editor en jefe; Universidad de California, Berkeley, Estados Unidos
En aras de la transparencia, eLife publica las solicitudes de revisión más

importantes y las respuestas de los autores que las acompañan.
Resumen de aceptación:
Aunque se sabe que el cerebelo media la coordinación motora y el equilibrio,

también es un centro de funciones no motoras. Usando el poder de la
optogenética para manipular específicamente la actividad bidireccionalmente
en las neuronas cerebelosas de Purkinje, este estudio establece una conexión
entre el cerebelo y la agresión. Estos resultados tan interesantes ahora
allanan el camino para futuros estudios sobre cómo las neuronas de Purkinje
regulan la agresión.
Carta de decisión después de la revisión por pares: 
Gracias por enviar su artículo "La actividad de las células cerebelosas de

Purkinje modula el comportamiento agresivo" para que eLife lo considere . Su
artículo ha sido revisado por tres revisores, uno de los cuales es miembro de
nuestra Junta de Editores Revisores, y la evaluación ha sido supervisada por
Richard Ivry como Editor Principal. Los revisores han optado por permanecer
en el anonimato.
Los revisores han discutido las revisiones entre sí y el editor de revisión ha

redactado esta decisión para ayudarlo a preparar una presentación revisada.
Jackman y col. muestran que la estimulación optogenética de las neuronas de

Purkinje en el vermis posterior reduce el comportamiento agresivo mientras
que la supresión optogenética lo aumenta. Si bien se sabe que el cerebelo es
importante para las funciones no motoras, incluida la agresión, el uso de
manipulaciones optogenéticas reversibles de los autores hace que sus
resultados sean convincentes.
Sin embargo, hay varias preocupaciones que fueron planteadas por los
revisores y se enumeran a continuación.
Revisiones esenciales:
1) Una preocupación central es que los resultados de los autores son

contrarios a décadas de estudios que muestran que las lesiones cerebelosas
"domestican" a los animales. Algunos de estos estudios son citados por los
autores. Por lo tanto, es bastante sorprendente que los autores no comenten
sobre la disparidad entre sus resultados y los de muchos investigadores

anteriores.
2) Los efectos optogenéticos sobre la activación de las células de Purkinje

pueden no ser tan sencillos como sugieren los autores, como se describe en la
Introducción de Streng y Krook-Magnuson (2020, J. Physiol.). Quizás esta
disparidad pueda explicarse por diferencias en la aplicación de la técnica
optogenética entre estudios. Sin embargo, la disparidad entre los resultados
actuales y los de los estudios de lesiones hace que uno se pregunte.
3) Sección de resultados:
"Las fibras se colocaron en la línea media sobre el lóbulo VII (Figura 1).…"
Los autores indican que están iluminando el lóbulo vermal VII, sin embargo, 
no proporcionan ninguna evidencia concreta de que este sea el caso. Los
autores deben mostrar una histología específica que indique la ubicación de
la fibra óptica. Tampoco indican si su iluminación (y sus efectos) se limitaron
al lóbulo VII o involucraron también a otros lóbulos cerebelosos cercanos. Los
autores deben analizar y describir el alcance real de la activación e
inactivación de las células P que causaron. Los autores seleccionaron el lóbulo
vermal VII basándose en revisiones de la literatura sobre neuroimágenes
humanas. Otros han encontrado que los efectos cerebelosos sobre la
regulación de la emoción se localizan en lóbulos vermales ligeramente más
anteriores. Los autores lograron efectos, pero no está claro que los autores
estuvieran iluminando el lóbulo vermal correcto u óptimo. Relacionado con
esto,
4) Habría sido reconfortante para los autores demostrar que la manipulación

optogenética podría afectar el comportamiento motor en otros sitios del
cerebelo. Luego, los autores podrían haber utilizado los mismos parámetros
de estimulación optogenética que fueron efectivos para las conductas motoras
para probar los efectos sobre la conducta no motora en el lóbulo vermal VII.
5) La ausencia de un cambio en la "ansiedad" es algo preocupante dada la

extensa literatura sobre el papel del vermis cerebeloso en el
condicionamiento del miedo (por ejemplo, Sacchetti et al.).
[Nota de la redacción: se sugirieron nuevas revisiones antes de la aceptación,

como se describe a continuación].
Gracias por enviar su artículo "La actividad de las células cerebelosas de

Purkinje modula el comportamiento agresivo" para que eLife lo considere . Su
artículo ha sido revisado por dos revisores, uno de los cuales es miembro de
nuestra Junta de Editores Revisores, y la evaluación ha sido supervisada por
Richard Ivry como Editor Principal. Los revisores han optado por permanecer
en el anonimato.
Aunque consideramos que el trabajo es potencialmente emocionante y

estamos de acuerdo en que la revisión es una mejora significativa con
respecto a la presentación original, estamos decepcionados de que la versión
revisada no haya respondido satisfactoriamente a todas las preocupaciones
planteadas por los revisores. Estas son preocupaciones importantes con
respecto a la especificidad de las manipulaciones y la interpretación de los
resultados. Se enumeran nuevamente a continuación. Esperamos que pueda
resolver estos problemas en la próxima versión del manuscrito. 
1) De la carta de decisión anterior:
"Los autores indican que están iluminando el lóbulo vermal VII, sin embargo,
la fibra óptica".
Este punto no se abordó en la revisión ni en la respuesta. La ausencia de estos

datos genera una confusión considerable. Por ejemplo, la Figura 2B muestra la
designación de los lóbulos vermales por parte de los autores. La figura 1A
ilustra la ubicación de una sonda optogenética y un electrodo de registro. Una
comparación de la Figura 2B con la Figura 1A sugiere que la sonda y los
registros se realizaron en el lóbulo VIa, no en el VII. Por lo tanto, los autores
dejan al lector con considerable incertidumbre y confusión con respecto al
sitio de sus efectos.
2) Los autores podrían haber realizado el experimento de control de usar

activación / inactivación optogenética del territorio motor clásico del vermis.
Esto les habría permitido determinar los umbrales y parámetros de activación
e inactivación adecuados para producir efectos motores. Este enfoque les
habría permitido hacer declaraciones claras sobre la activación / inactivación
optogenética en relación con los síntomas motores clásicos de las lesiones /
estimulación de la corteza cerebelosa. Entonces, los autores podrían haber
utilizado los mismos parámetros para estimular el vermis posterior. La
ausencia de este "control motor" sigue siendo una deficiencia significativa del
presente estudio.
3) Estudios clásicos versus optogenética: los autores han explorado la

literatura clásica de una manera impresionante. Sin embargo, los efectos de la
estimulación optogenética pueden no ser menos complejos de interpretar que
las lesiones de la corteza cerebelosa. Por ejemplo, aunque los autores
muestran una reducción en las tasas de activación de DCN después de la
activación de la PC y afirman que las PC no están sincronizadas, no se
muestran datos que respalden esta afirmación y no se descarta un papel para
la sincronía.
A la luz de los puntos 2 y 3 anteriores, los autores deben atenuar sus

afirmaciones, como el Resumen de que "Estos resultados establecen que la
..." (énfasis agregado). Lo más apropiado sería reemplazar "establece",
dondequiera que aparezca, por "apoya".

https://doi.org/10.7554/eLife.53229.sa1
Respuesta del autor
Revisiones esenciales:
1) Una preocupación central es que los resultados de los autores son

contrarios a décadas de estudios que muestran que las lesiones cerebelosas
"domestican" a los animales. Algunos de estos estudios son citados por los
autores. Por lo tanto, es bastante sorprendente que los autores no comenten
sobre la disparidad entre sus resultados y los de muchos investigadores
anteriores.
El revisor plantea un punto interesante sobre las discrepancias en los estudios

cerebelosos de agresión. Estas discrepancias son anteriores a nuestros propios
estudios. En experimentos realizados en humanos, monos y gatos, la
estimulación del vermis y las lesiones del vermis reducen la agresión. Como
las células de Purkinje del vermis inhiben las células de los núcleos
cerebelosos profundos, se esperaría que la estimulación y la ablación de las
células de Purkinje tuvieran efectos opuestos. Pero como señalamos, existen
limitaciones para ambos enfoques. En particular, la hipótesis de que las
lesiones de la corteza aumentarían la actividad en la DCN no está respaldada
por pruebas experimentales. Estudios anteriores han demostrado que los
modelos de ratón con una degeneración casi total de las PC producen cambios
compensatorios en las neuronas DCN que, paradójicamente, conducen a una
disminuciónTasas de disparo de DCN. Ahora hacemos referencia a uno de
esos estudios (Baurle et al., 1997). Ahora hemos ampliado la Introducción para
señalar más claramente la discrepancia en el signo del efecto del vermis
cerebeloso sobre la agresión en la literatura anterior. También hemos
incluido una discusión sobre el enfoque que hemos adoptado y cómo la
manipulación bidireccional específica de la actividad del PC nos permite tener
confianza sobre los efectos de la actividad del PC sobre la agresión.
2) Los efectos optogenéticos sobre la activación de las células de Purkinje

pueden no ser tan sencillos como sugieren los autores, como se describe en la
Introducción de Streng y Krook-Magnuson (2020, J. Physiol.). Quizás esta
disparidad pueda explicarse por diferencias en la aplicación de la técnica
optogenética entre estudios. Sin embargo, la disparidad entre los resultados 
actuales y los de los estudios de lesiones hace que uno se pregunte.
Como se indicó en respuesta al punto 1, nuestros resultados concuerdan con

experimentos de estimulación previos y difieren de los estudios de lesiones, y
lo hemos discutido en el texto. El revisor está preocupado por el uso de
optogenética y sugiere que tal vez podríamos estar obteniendo un artefacto
debido a complicaciones en el uso de optogenética. El artículo citado por
Streng y Krook-Magnuson (2020) no evalúa la activación optogenética de las
células de Purkinje, sino que resume la literatura para motivar su enfoque de
influir directamente en los núcleos profundos. Con base en nuestra lectura de
la literatura en la que los PC se manipulan con optogenética, y nuestras
propias medidas de las respuestas de los PC a las manipulaciones
optogenéticas, no compartimos las preocupaciones del revisor. Otro tema
importante es el problema de las pausas que promueven el encendido de la
PC. Estamos muy familiarizados con este problema y tenemos un artículo en
revisión que trata sobre las pausas en el encendido de la PC y la excitabilidad
de DCN. Según Person y Raman, (2011), la activación sincrónica de las PC
podría promover el disparo en la DCN. Sin embargo, basándonos en nuestras
grabaciones de disparos de PC evocados por la luz y la sincronía requerida
para promover el disparo, llegamos a la conclusión de que el enfoque
optogenético que hemos utilizado no conduce a un disparo de PC sincrónico
que sea lo suficientemente preciso para promover pausas y aumentos en el
disparo de DCN.
Lo más importante es que también evaluamos el efecto de las manipulaciones

optogenéticas sobre la activación de las neuronas DCN. Estos nuevos
experimentos se realizaron en animales despiertos. Descubrimos que el
aumento de la activación de PC con ChR2 disminuyó la activación de las

neuronas DCN, y la disminución de la activación de la PC con halodopsina
aumentó la activación de las neuronas en la DCN. Hemos agregado 3 paneles a
la Figura 1 que describen estos nuevos experimentos.
3) Sección de resultados:
"Las fibras se colocaron en la línea media sobre el lóbulo VII (Figura 1).…"
Los autores indican que están iluminando el lóbulo vermal VII, sin embargo,
la fibra óptica. Tampoco indican si su iluminación (y sus efectos) se limitaron
al lóbulo VII o involucraron también a otros lóbulos cerebelosos cercanos. Los
autores deben analizar y describir el alcance real de la activación e 
inactivación de las células P que causaron. Los autores seleccionaron el lóbulo
vermal VII basándose en revisiones de la literatura sobre neuroimágenes
humanas. Otros han encontrado que los efectos cerebelosos sobre la
regulación de la emoción se localizan en lóbulos vermales ligeramente más
anteriores. Los autores lograron efectos, pero no está claro que los autores
estuvieran iluminando el lóbulo vermal correcto u óptimo. Relacionado con
esto,
El revisor señala correctamente que el enfoque que hemos adoptado tiene

limitaciones con respecto a la localización precisa de la región del vermis
posterior que controla la agresión. En el manuscrito original evitamos hacer
afirmaciones sobre la región precisa involucrada en la regulación de la
agresión. Ahora somos más explícitos y señalamos otros enfoques que se
adaptarían mejor a la cuestión de la localización.
4) Habría sido reconfortante para los autores demostrar que la manipulación

optogenética podría afectar el comportamiento motor en otros sitios del
cerebelo. Luego, los autores podrían haber utilizado los mismos parámetros
de estimulación optogenética que fueron efectivos para las conductas motoras
para probar los efectos sobre la conducta no motora en el lóbulo vermal VII.
Debido a la extensa literatura que describe las funciones motoras del cerebelo
y la perturbación optogenética de los movimientos (Witter et al., 2013; Lee et
al., 2015), no intentamos replicar experimentos previos. Estamos de acuerdo
en que, en aras de la minuciosidad, los experimentos que propone el revisor
habrían proporcionado un contexto adicional a nuestro estudio. Sin embargo,
observamos efectos motores durante la estimulación fuerte del vermis
(similares a los descritos por varios estudios anteriores). Hemos agregado

descripciones adicionales de estos efectos motores y nuestros esfuerzos para
evitarlos durante los ensayos de comportamiento. Para nuestros
experimentos de control, optamos por no manipular una región con
influencia conocida sobre la coordinación motora de los roedores, porque
habría presentado una confusión en nuestros ensayos de agresión. Por esta
razón elegimos estimular Crus II,
5) La ausencia de un cambio en la "ansiedad" es algo preocupante dada la

extensa literatura sobre el papel del vermis cerebeloso en el
condicionamiento del miedo (por ejemplo, Sacchetti et al.).
Sospechamos que la estimulación del vermis cerebeloso podría conducir a

una disminución de las medidas de ansiedad en campo abierto, porque los
pacientes humanos que recibieron estimulación vermal crónica informaron 
niveles disminuidos de ansiedad. Sin embargo, no vimos ningún efecto sobre
la ansiedad medida por campo abierto. No vemos esto como preocupante:
varios estudios anteriores que informaron un papel del vermis en el
condicionamiento del miedo y la consolidación de los recuerdos emocionales
también realizaron ensayos de campo abierto y no informaron ningún efecto
sobre la locomoción o la ansiedad en campo abierto (Sacchetti et al. ., 2002;
Sacchetti et al., 2004; Koutsikou et al., 2015)
[Nota de la redacción: se sugirieron nuevas revisiones antes de la aceptación,

como se describe a continuación].
Aunque consideramos que el trabajo es potencialmente emocionante y

estamos de acuerdo en que la revisión es una mejora significativa con
respecto a la presentación original, estamos decepcionados de que la versión
revisada no haya respondido satisfactoriamente a todas las preocupaciones
planteadas por los revisores. Estas son preocupaciones importantes con
respecto a la especificidad de las manipulaciones y la interpretación de los
resultados. Se enumeran nuevamente a continuación. Esperamos que pueda
resolver estos problemas en la próxima versión del manuscrito.
Hicimos todo lo posible para responder a la revisión inicial y nos complace

haber podido abordar con éxito la mayoría de las preocupaciones iniciales.
Nos decepcionó que no pudiéramos abordar tres problemas, pero esperamos
haberlos abordado con éxito ahora.
1) De la carta de decisión anterior:
"Los autores indican que están iluminando el lóbulo vermal VII, sin embargo,
la fibra óptica".
Este punto no se abordó en la revisión ni en la respuesta. La ausencia de estos

datos genera una confusión considerable. Por ejemplo, la Figura 2B muestra la
designación de los lóbulos vermales por parte de los autores. La figura 1A
ilustra la ubicación de una sonda optogenética y un electrodo de registro. Una
comparación de la Figura 2B con la Figura 1A sugiere que la sonda y los
registros se realizaron en el lóbulo VIa, no en el VII. Por lo tanto, los autores
dejan al lector con considerable incertidumbre y confusión con respecto al
sitio de sus efectos.
Lamentamos no haber abordado este problema de manera satisfactoria en 

nuestra respuesta inicial y ahora cubrimos este tema de manera extensa.
Primero, cambiamos el esquema de la Figura 1A, lo que implicaba
incorrectamente que nuestras grabaciones in vitro se dirigían al lóbulo VIb. El
esquema ahora muestra claramente grabaciones del lóbulo VII en un corte de
cerebro que se ve desde arriba. En segundo lugar, en la sección Materiales y
métodos, ahora describimos la estrategia de orientación inicial que usamos
para determinar las coordenadas de nuestros implantes. En resumen,
realizamos una serie de inyecciones preliminares de colorante / virus para
determinar la ubicación adecuada de las craneotomías sobre el lóbulo VII. En
la imagen que se presenta aquí, proporcionamos a los revisores un ejemplo de
expresión de la clorhodopsina-YFP en el lóbulo VII (con algo de expresión en
el lóbulo VIb) después de la inyección de un AAV dependiente de cre en
ratones PCP2-cre (Imagen de respuesta del autor 1A ). Además, con frecuencia
sacrificamos animales después de las pruebas de comportamiento y
obtuvimos imágenes de fluorescencia de cerebros completos de ratones. En
algunos casos, fue posible inferir la ubicación del implante debido a sutiles
imperfecciones en la superficie cortical. Se proporciona un ejemplo en la
imagen de respuesta del autor 1B .
Imagen de respuesta del autor 1
Previamente tuvimos cuidado de señalar que nuestro enfoque no se podía

utilizar para determinar la ubicación precisa del vermis cerebeloso que
regulaba la agresión. Hemos ampliado esta discusión sobre las salvedades que
no nos permiten atribuir definitivamente nuestro efecto conductual al lóbulo
VII. En nuestros animales, ChR2 / halorhodopsin se expresan en todas las
áreas de la corteza cerebelosa, y el lóbulo VII tiene sólo ~ 500 µm de ancho.
Por tanto, es posible que los implantes colocados sobre el lóbulo VII también
estimulen el lóbulo VIb y el lóbulo VIII.
2) Los autores podrían haber realizado el experimento de control de usar

activación / inactivación optogenética del territorio motor clásico del vermis.
Esto les habría permitido determinar los umbrales y parámetros de activación
e inactivación adecuados para producir efectos motores. Este enfoque les
habría permitido hacer declaraciones claras sobre la activación / inactivación
optogenética en relación con los síntomas motores clásicos de las lesiones /
estimulación de la corteza cerebelosa. Entonces, los autores podrían haber
utilizado los mismos parámetros para estimular el vermis posterior. La

ausencia de este "control motor" sigue siendo una deficiencia significativa del
presente estudio.
Como se indica en el manuscrito inicial y en nuestra respuesta inicial,

encontramos que la estimulación comparable de otra región cerebelosa no
motora no alteró la agresión. Creemos que este es un experimento de control
apropiado que no se ve confundido por efectos motores. El revisor sugirió la
estrategia alternativa, que consistía en estimular una región motora. Creemos
que dicha estrategia es similar a la que hemos proporcionado, con la ventaja
de que un efecto motor establece que la región ha sido estimulada, pero con la
desventaja de que es muy probable que el efecto motor confunda los
resultados de nuestros ensayos conductuales. Nuestras grabaciones in vivo
proporcionan evidencia de que nuestra estimulación optogenética modula la
actividad de las PC debajo de nuestras fibras implantadas. Además, Se ha 
demostrado que la estimulación optogenética de las células de Purkinje en
otras regiones cerebelosas impulsa los efectos motores repetidamente por
otros grupos (Heiney et al., 2014; Lee et al., 2015; Proville et al., 2014; Witter et
al., 2013; Ten Brinke et al., 2017). Por lo tanto, por las razones expuestas en
nuestra respuesta anterior, no consideramos que esta cuestión sea una
deficiencia significativa del documento. Hemos proporcionado aclaraciones
adicionales en la sección de Resultados.
También cabe señalar que llevaría meses realizar estos experimentos de

control adicionales. Existe la complicación adicional de que nuestro
laboratorio estará cerrado durante al menos las próximas 6-8 semanas y, con
toda probabilidad, mucho más. Nuestras colonias de ratones se han reducido
a niveles muy bajos y tomaría un tiempo considerable después de que el
laboratorio vuelva a abrir para tener los ratones disponibles para
experimentos adicionales. En el mejor de los casos, nos llevaría más de 6
meses realizar los experimentos solicitados y, con toda probabilidad, mucho
más.
Por lo tanto, esperamos que los revisores y editores reconsideren el requisito

de estimulación de una región motora de la corteza cerebelosa como
experimento de control.
3) Estudios clásicos versus optogenética: los autores han explorado la

literatura clásica de una manera impresionante. Sin embargo, los efectos de la
estimulación optogenética pueden no ser menos complejos de interpretar que
las lesiones de la corteza cerebelosa. Por ejemplo, aunque los autores
muestran una reducción en las tasas de activación de DCN después de la
activación de la PC y afirman que las PC no están sincronizadas, no se

muestran datos que respalden esta afirmación y no se descarta un papel para
la sincronía.
En la revisión inicial hubo preocupación por las posibles complicaciones de la

estimulación optogenética. Teníamos la impresión de que el revisor estaba
preocupado por la sincronización de PC según los estudios y Person y Raman,
quienes encontraron que la activación sincrónica de PC puede elevar
paradójicamente la frecuencia de activación de las neuronas DCN. En
consecuencia, no estaba claro si nuestra activación de PC optogenética
conduciría a un disparo lo suficientemente sincrónico como para aumentar el
disparo de DCN, o si el aumento general de la inhibición suprimiría el disparo
de DCN.
Nuestras grabaciones in vivo de la DCN muestran que la estimulación 

optogenética de las PC produjo una disminución neta en la actividad de la
DCN (Figura 1H). Sin embargo, ahora analizamos nuestras grabaciones en
escalas de tiempo de milisegundos para determinar (1) si breves destellos de
luz presentados a 20 Hz sincronizan la actividad de la PC, (2) si hay una pausa
en el encendido de la PC después de cada destello de luz, y (3) si la PC la
sincronía impulsa el disparo de rebote sincrónico en las células DCN. Nuestro
nuevo análisis, presentado en la Figura 1, el suplemento de la figura 2,
muestra que aunque breves destellos de luz pueden evocar respuestas
temporales complejas en los PC, no hay una pausa discernible en el disparo de
PC promedio, y el efecto neto es la supresión de la actividad de DCN. Esto nos
indica que la estimulación optogenética de las PC no elevó la activación de las
neuronas DCN al promover la actividad sincrónica. Adicionalmente,
descubrimos que la halorhodopsina se puede usar para suprimir de manera
confiable el disparo de PC, lo que a su vez aumenta el disparo en el DCN
(Figura 1F, I). Por estas razones, creemos que podríamos usar ChR2 para
estimular de manera efectiva las PC y suprimir la activación de DCN, y usar
halorhodopsina para suprimir la activación de PC y elevar la activación de
DCN. Creemos que nuestras grabaciones justifican estas conclusiones.
A la luz de los puntos 2 y 3 anteriores, los autores deben atenuar sus

afirmaciones, como el Resumen de que "Estos resultados establecen que la
..." (énfasis agregado). Lo más apropiado sería reemplazar "establece",
dondequiera que aparezca, por "apoya".
Hemos realizado este cambio.
https://doi.org/10.7554/eLife.53229.sa2
Información del artículo y del autor
Detalles del autor
Skyler L Jackman
Departamento de Neurobiología, Escuela de Medicina de Harvard, Boston,
Estados Unidos
Instituto Vollum, Universidad de Ciencias y Salud de Oregon, Portland,
Estados Unidos 
Contribución: Conceptualización, Supervisión, Investigación, Metodología,

Redacción - borrador original
Conflicto de intereses: Sin intereses en competencia declarados
0000-0002-6500-3937
Christopher H. Chen
Estados Unidos
Contribución: Investigación, escritura - borrador original
Heather L Offermann
Estados Unidos
Contribución: Investigación
Iain R Drew
Estados Unidos
Bailey M Harrison
Estados Unidos
Contribución: Investigación 
Anna M Bowman
Instituto Vollum, Universidad de Ciencias y Salud de Oregon, Portland,
Estados Unidos
Katelyn M Película
Estados Unidos
Isabel Flaquer
Estados Unidos
Wade G Regehr
Estados Unidos
Contribución: Conceptualización, Recursos, Supervisión, Adquisición de

fondos, Redacción - borrador original
Por correspondencia: wade_regehr@hms.harvard.edu
Conflicto de intereses: Sin intereses en competencia declarados 
0000-0002-3485-8094
Fondos
Oficina del Director de los NIH (R35NS097284)

Wade G Regehr
El Fondo de Investigación de Khodadah

Wade G Regehr
Oficina del Director de los NIH (F32NS101889)

Christopher H. Chen
Nancy Lurie Marks Family Foundation (beca posdoctoral)

Skyler L Jackman
Los patrocinadores no tuvieron ningún papel en el diseño del estudio, la

recopilación e interpretación de datos o la decisión de enviar el trabajo para
su publicación.
Agradecimientos
Este trabajo fue apoyado por el Fondo de Investigación GVR Khodadad para el
Estudio del Egoísmo Excesivo (Patológico) y la Conducta Agresiva. En especial,
queremos agradecer a Ghahreman Khodadad tanto por su apoyo financiero
como por sus estimulantes debates. También agradecemos a Jasmine Vazquez
por las ilustraciones y a Michelle Ocana y al Centro de Imágenes de
Neurobiología por su ayuda con la microscopía. Esta instalación es apoyada
en parte por el Neural Imaging Center como parte de una subvención del
NINDS P30 Core Center (NS072030). Este trabajo fue apoyado por una beca
postdoctoral de Nancy Lurie Marks a SLJ, una beca postdoctoral de NIH
F32NS101889 a CHC, y una subvención de NIH NINDS R35NS097284 a WGR.
Ética
Experimentación con animales: Todos los experimentos se realizaron de
acuerdo con las pautas y protocolos federales (# 1493) aprobados por el 
Comité Permanente de Animales del Área Médica de Harvard.
Editor en jefe
Richard B. Ivry, Universidad de California, Berkeley, Estados Unidos
Editor de revisión
Vatsala Thirumalai, Centro Nacional de Ciencias Biológicas, India
Historial de publicaciones
Recibido: 31 de octubre de 2019
Aceptado: 20 de abril de 2020
Manuscrito aceptado publicado: 28 de abril de 2020 (versión 1)
Versión del registro publicada: 6 de mayo de 2020 (versión 2)
Derechos de autor
© 2020, Jackman et al.
Este artículo se distribuye bajo los términos de la licencia de atribución

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nuclear y la función de desarrollar
circuitos motores oculares.
Athene Knüfer y col.
Artículo de investigación ∙ actualizado30 de oct de 2020
Neurociencia
Un elemento de respuesta BMP regulador

cis de baja afinidad restringe la activación
del gen diana a subconjuntos de
neuronas de Drosophila

Anthony JE Berndt y col.
Artículo de investigación ∙ 30 de oct de 2020
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2/11/2020 La actividad de las células cerebelosas de Purkinje modula el comportamiento agresivo | eLife

ACERCA DE COMUNIDAD INICIAR SESIÓN / REGISTRARSE

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La actividad de las células cerebelosas de

Skyler L Jackman , Christopher H. Chen , Heather L Offermann , Iain R Drew ,

Breve informe ∙ 28 abr 2020

Citado 3 Vistas 2,214 Anotaciones 0

DOI: 10.7554 / eLife.53229

Respuesta del autor

Información del artículo y del autor

Los déficits motores profundos, como la ataxia y la pérdida del control

cerebelosa están dedicadas a la función motora, pero otras regiones están

La región del vermis posterior de la corteza cerebelosa es particularmente

Estos estudios implicaron al vermis en la regulación de la agresión, pero han

actividad de PC disminuida) suprime la agresión. Sin embargo, es difícil

Numerosos factores dificultan la interpretación de los experimentos de

Para determinar el papel del cerebelo en la regulación de la agresión,

Para modular selectivamente la actividad de las PC en el vermis cerebeloso,

Figura 1 con 2 suplementos

Control optogenético de la actividad de las células de Purkinje.

Figura 1: datos de origen 1

Después de esperar al menos 1 semana para la recuperación de las cirugías de

Debido a que el cerebelo desempeña funciones bien establecidas en el control

tiempo pasado en el centro de la arena ( figura 2f-g y la figura 2-figura

Figura 2 con 1 suplemento

La manipulación de la actividad de las células de Purkinje vermales no afecta la

Figura 2: datos de origen 1

Figura 2: datos de origen 2

Figura 2: datos de origen 3

Para evaluar el impacto de la actividad cerebelosa en los comportamientos

Figura 3 con 3 suplementos

Control bidireccional de la agresión mediante modulación optogenética de la

Figura 3: datos de origen 1

Figura 3: datos de origen 2

La activación optogenética de las PC vermales disminuyó significativamente

Para probar si la disminución de los ataques podría resultar de una influencia

Si elevar el disparo de PC en el vermis disminuye la agresión, ¿la supresión de

Aquí demostramos que la actividad de las células de Purkinje en el vermis

que podría lograrse con la estimulación eléctrica empleada en estudios

El presente estudio plantea una serie de cuestiones importantes sobre la

insumos que controlan esta región? Las diferentes regiones de la corteza

Es interesante especular sobre la naturaleza del papel del cerebelo en el

podría arrojar luz sobre las proyecciones anatómicas y el impacto fisiológico

Se prepararon rodajas de cerebelo sagital de ratones adultos (P30-P100) y se

en las grabaciones realizadas para un estudio separado con ratones PCP2-Cre

Los datos se adquirieron utilizando un amplificador Multiclamp 700B

Implantación crónica de fibras y estimulación in vivo

Los implantes de fibra óptica se ensamblaron como se describió

apuntar implantes al vermis posterior y Crus II se determinaron inicialmente

Los ratones de los experimentos de comportamiento fueron fuertemente

a la luz. Las unidades individuales se clasificaron sin conexión en Offline

Las grabaciones del DCN se realizaron en ratones PCP2-Cre :: ChR2-EYFP y

Los ratones utilizados en experimentos de comportamiento se alojaron en un

Para los experimentos que involucran estimulación optogenética, la fuente de

min. El tiempo de caída se calculó desde el comienzo de la aceleración. Todos

Para los ensayos de residentes-intrusos, los residentes se conectaron a la fibra

de dos colas no emparejada o la prueba no paramétrica de Wilcoxon-Mann-

1 Cuestionando el papel del disparo de rebote en el cerebelo

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2 Proyecciones cerebelosas al sistema límbico

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3 El papel del cerebelo en la esquizofrenia

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