QUÍMICA ANALÍTICA EXPERIMENTAL II (1607)

MÉTODOS DE SEPARACIÓN

Alumno: Valdez Calderón Fernando, Grupo 19.

PROBLEMA 1.
Se realizó el análisis cuantitativo de los siguientes ésteres metílicos E16, E18, E18:1 en una muestra
de grasa. Para ello se preparó una solución estándar y los esteres se extrajeron de la muestra de
la siguiente manera:

Disolución Patrón: Se pesaron 2 mg de E16, 1.03 mg de E18 y 3.06 de E18:1 y se disolvieron en 10

ml de hexano.

EI: Se pesaron 5 mg de E15 y se disolvieron en 10 ml de hexano.

Disolución Estándar: Se tomó 1 ml de la disolución patrón más 1 ml de EI y se llevó a un

volumen final de 5 ml. De esta solución se inyectó 1 μl en el cromatógrafo. Obteniendo los
siguientes resultados:

Ésteres Áreas
metílicos

E15 860927

E16 1621271

E18 983778

E18:1 2632936

Preparación de la muestra:
Se pesaron 1.5 mg de grasa, se le adicionaron 2 ml de KOH/CH3OH, HCl hasta un pH=2.0
posteriormente se adicionaron BF3/CH3OH para obtener los ésteres metílicos, se agregó agua y
hexano para extraer y finalmente se adiciona 1 ml de EI, y se lleva a un volumen final de 5 ml. De
esta disolución se inyectó 1 μl en el cromatógrafo.

Resultados:
Ésteres Áreas
metílicos

E15 294926

E16 237024

E18 30876

E18:1 290701

1
¿Cuál es el contenido de cada uno de los esteres metílicos en mg/g de grasa?

RESOLUCIÓN. Aplicando el método de Factor de respuesta relativo

● Cálculo de la concentración de los ésteres en la disolución patrón

2 𝑚𝑔 𝐸16
10 𝑚𝐿 ℎ𝑒𝑥𝑎𝑛𝑜
= 0. 2 𝑚𝑔/𝑚𝐿

1.03 𝑚𝑔 𝐸18
10 𝑚𝐿 ℎ𝑒𝑥𝑎𝑛𝑜
= 0. 103 𝑚𝑔/𝑚𝐿

3.06 𝑚𝑔 𝐸18:1
10 𝑚𝐿 ℎ𝑒𝑥𝑎𝑛𝑜
= 0. 306 𝑚𝑔/𝑚𝐿

● Cálculo de la concentración del estándar interno (E15)

5 𝑚𝑔 𝐸15
10 𝑚𝐿 ℎ𝑒𝑥𝑎𝑛𝑜
= 0. 5 𝑚𝑔/𝑚𝐿

● Cálculo de las concentraciones de los ésteres y el estándar interno en la disolución

estándar (final)

1 mL de la disolución patrón + 1 mL de EI se llevaron a un volumen final de 5 mL

𝐶1𝑉1 = 𝐶2𝑉2

𝐶1𝑉1
𝐶2 = 𝑉2

(0.2 𝑚𝑔/𝑚𝐿)(1 𝑚𝐿)

[𝐸16] = (5 𝑚𝐿)
= 0. 04 𝑚𝑔/𝑚𝐿

(0.103 𝑚𝑔/𝑚𝐿)(1 𝑚𝐿)

[𝐸18] = (5 𝑚𝐿)
= 0. 0206 𝑚𝑔/𝑚𝐿

(0.306 𝑚𝑔/𝑚𝐿)(1 𝑚𝐿)

[𝐸1:18] = (5 𝑚𝐿)
= 0. 0612 𝑚𝑔/𝑚𝐿

(0.5 𝑚𝑔/𝑚𝐿)(1 𝑚𝐿)

[𝐸𝐼] = (5 𝑚𝐿)
= 0. 1 𝑚𝑔/𝑚𝐿

● Cálculo de la concentración de estándar interno en la muestra preparada (1.5 mg de

grasa + 1 mL de estándar interno se llevaron a un volumen final de 5 mL)

(0.5 𝑚𝑔/𝑚𝐿)(1 𝑚𝐿)

[𝐸𝐼] = (5 𝑚𝐿)
= 0. 1 𝑚𝑔/𝑚𝐿

2
● Cálculo de los Frr para los ésteres en la disolución estándar

𝐴𝑎𝑛𝑎𝑙𝑖𝑡𝑜 𝐶𝑎𝑛𝑎𝑙𝑖𝑡𝑜 𝐴𝑎𝑛𝑎𝑙𝑖𝑡𝑜 × 𝐶𝐸𝐼

𝐴𝐸𝐼
= 𝐹𝑟𝑟 𝐶𝐸𝐼
Despejando Frr: 𝐹𝑟𝑟 = 𝐴𝐸𝐼 × 𝐶𝑎𝑛𝑎𝑙𝑖𝑡𝑜

- Para E16
1621271 0.04 𝑚𝑔/𝑚𝐿
860927
= 𝐹𝑟𝑟 × 0.1 𝑚𝑔/𝑚𝐿

(1621271)(0.1)
𝐹𝑟𝑟 = (860927)(0.04)
= 4. 708

- Para E18
983778 0.0206 𝑚𝑔/𝑚𝐿
860927
= 𝐹𝑟𝑟 × 0.1 𝑚𝑔/𝑚𝐿

(983778)(0.1)
𝐹𝑟𝑟 = (860927)(0.0206)
= 5. 547

- Para E18:1
2632936 0.0612 𝑚𝑔/𝑚𝐿
860927
= 𝐹𝑟𝑟 × 0.1 𝑚𝑔/𝑚𝐿

(2632936)(0.1)
𝐹𝑟𝑟 = (860927)(0.0612)
= 4. 997

● Cálculo de las concentraciones de los ésteres en la muestra utilizando los Frr calculados

𝐴𝑎𝑛𝑎𝑙𝑖𝑡𝑜 𝐶𝑎𝑛𝑎𝑙𝑖𝑡𝑜 𝐴𝑎𝑛𝑎𝑙𝑖𝑡𝑜 × 𝐶𝐸𝑖

𝐴𝐸𝐼
= 𝐹𝑟𝑟 𝐶𝐸𝐼
Despejando Canalito: 𝐶𝑎𝑛𝑎𝑙𝑖𝑡𝑜 = 𝐴𝐸𝐼 × 𝐹𝑟𝑟

- Para E16
237024 𝐶𝑎𝑛𝑎𝑙𝑖𝑡𝑜
294926
= 4. 708 × 0.1 𝑚𝑔/𝑚𝐿

(237024)(0.1)
𝐶𝑎𝑛𝑎𝑙𝑖𝑡𝑜 = (294926)(4.708)
= 0. 017 𝑚𝑔/𝑚𝐿
- Para E18
30876 𝐶𝑎𝑛𝑎𝑙𝑖𝑡𝑜
294926
= 5. 547 × 0.1 𝑚𝑔/𝑚𝐿

(30876)(0.1)
𝐶𝑎𝑛𝑎𝑙𝑖𝑡𝑜 = (294926)(5.547)
= 0. 00189 𝑚𝑔/𝑚𝐿
- Para E18:1
290701 𝐶𝑎𝑛𝑎𝑙𝑖𝑡𝑜
294926
= 4. 997 × 0.1 𝑚𝑔/𝑚𝐿

(290701)(0.1)
𝐶𝑎𝑛𝑎𝑙𝑖𝑡𝑜 = (294926)(4.997)
= 0. 020 𝑚𝑔/𝑚𝐿

3
 ● Cálculo de la concentración real de los ésteres en la muestra

1.5 mg de grasa = 0.0015 g de grasa

Volumen final 5 mL

- Para E16
0.017 𝑚𝑔 5 𝑚𝐿 1
1 𝑚𝐿
× 1
× 0.0015 𝑔
= 56. 67 𝑚𝑔/𝑔 𝑑𝑒 𝑔𝑟𝑎𝑠𝑎
- Para E18
0.00189 𝑚𝑔 5 𝑚𝐿 1
1 𝑚𝐿
× 1
× 0.0015 𝑔
= 6. 3 𝑚𝑔/𝑔 𝑑𝑒 𝑔𝑟𝑎𝑠𝑎
- Para E18:1
0.020 𝑚𝑔 5 𝑚𝐿 1
1 𝑚𝐿
× 1
× 0.0015 𝑔
= 66. 67 𝑚𝑔/𝑔 𝑑𝑒 𝑔𝑟𝑎𝑠𝑎

¿Cuál es el contenido de cada uno de los esteres metílicos en mg/g de grasa?

[𝐸16] = 56. 67 𝑚𝑔/𝑔 𝑑𝑒 𝑔𝑟𝑎𝑠𝑎

[𝐸18] = 6. 3 𝑚𝑔/𝑔 𝑑𝑒 𝑔𝑟𝑎𝑠𝑎

[𝐸18:1] = 66. 67 𝑚𝑔/𝑔 𝑑𝑒 𝑔𝑟𝑎𝑠𝑎

PROBLEMA 2.
El naproxeno es un medicamento que se utiliza por su actividad analgésica y antiinflamatoria. Se
desea cuantificarlo por cromatografía de líquidos utilizando una fase estacionaria C18 y como
fase móvil una mezcla de 50% metanol /agua 50:50%v/v. El tiempo de retención del naproxeno
es de 7 minutos.
Cada TABLETA contiene 250 mg de naproxeno

Para realizar la curva patrón se realizan los siguientes pasos:

Se pesaron 20 mg del estándar de naproxeno y se disolvieron en 20 mL de agua, posteriormente
de esta disolución se tomaron alícuotas que se muestran en la tabla y se obtuvieron los
siguientes resultados y la siguiente curva de calibración:

Estándar Alícuota Aforo Cfinal Área

mL mL (mg/mL) promedio

1 1 10 0.1 1030

2 3 0.3 2050

3 5 0.5 3010

4 7 0.7 4080

4
 5 9 0.9 5009

La muestra se preparó disolviendo una tableta en un matraz Phillips con 20 mL de agua y

después de 20 minutos se filtró en un matraz de 50mL, se llevó al aforo con agua destilada y de
este matraz se tomó 1mL y se llevó al aforo a 10 mL (de esta solución se realizaron 5
inyecciones). El área promedio de la muestra después de las inyecciones fue 3017. (Para este
análisis es necesario considerar la ordenada).

RESOLUCIÓN. Método curva de calibración por estándar externo

● Cálculo de la concentración de la disolución estándar de naproxeno

20 𝑚𝑔 𝑑𝑒 𝑒𝑠𝑡á𝑛𝑑𝑎𝑟 𝑑𝑒 𝑛𝑎𝑝𝑟𝑜𝑥𝑒𝑛𝑜
20 𝑚𝐿 𝑎𝑔𝑢𝑎
= 1 𝑚𝑔/𝑚𝐿

● Para realizar la curva de calibración se representaron los datos área promedio vs

concentración final y por regresión lineal se obtuvo la pendiente

𝑦 = 4994𝑥 + 538. 8
2
𝑅 = 0. 9996

𝐴 = 𝐹𝑟 · 𝐶

3017 = 4994 · 𝐶 + 538. 8

3017 − 538. 8 = 4994 · 𝐶

5
 3017−538.8
Despejando la concentración: 𝐶 = 4994

𝐶 = 0. 496 𝑚𝑔/𝑚𝐿

0.496 𝑚𝑔 10 𝑚𝐿 50 𝑚𝐿
𝑚𝐿
× 1 𝑚𝐿
× 1
= 248 𝑚𝑔 𝑑𝑒 𝑛𝑎𝑝𝑟𝑜𝑥𝑒𝑛𝑜 / 𝑡𝑎𝑏𝑙𝑒𝑡𝑎

a) ¿Cuál es el contenido en mg/ tableta de naproxeno?

248 𝑚𝑔 𝑑𝑒 𝑛𝑎𝑝𝑟𝑜𝑥𝑒𝑛𝑜 / 𝑡𝑎𝑏𝑙𝑒𝑡𝑎

b) Para poder salir a la venta, el naproxeno debe de contener del 90 al 110% del contenido
indicado en el marbete. ¿Esta muestra cumple con lo requerido?

El marbete indica que cada tableta contiene 250 mg de naproxeno

250 − 100%
248 − 𝑥

𝑥 = 99. 2%

La muestra contiene el 99.2% de la indicado en el marbete, por lo tanto cumple con lo requerido
para poder salir a la venta.

PROBLEMA 3.
La dehidrocapsaicina (DHC) es uno de los compuestos que proporcionan el picor o sensación de
pungencia a los chiles. Se desea determinar la cantidad de este compuesto en una muestra de
chile chipotle para saber la cantidad de condimento que debe agregarse a un lote de frituras. El
análisis se realizó por cromatografía de gases utilizando el método de calibración relativa. Para
el análisis se prepararon las siguientes disoluciones:

- Disolución estándar:
Se utilizó una disolución de dehidrocapsaicina a una concentración de 107 ppm.

- Disolución de estándar interno:

Se preparo una disolución de p-cimeno con una concentración de 101.8 ppm.

- Preparación de la curva de calibración:

De ambas disoluciones se tomaron diferentes alícuotas para preparar la curva de
calibración relativa como se muestra a continuación:

No. de Disolución Estándar Volumen

matraz estándar DHC Interno de aforo
µL µL mL

1 5 5 5

6
 2 15 5 5

3 30 5 5

4 50 5 5

5 65 5 5

Análisis de muestra
Se pesaron 20 mg de chile chipotle y se adicionaron 5 µL de estándar interno, se llevó al aforo de
5 mL, se montó el sistema de extracción y la muestra se extrajo durante 40 min. Del extracto
obtenido se inyectó 1 µL en el cromatógrafo de gases, el análisis se realizó por triplicado.

Resultados experimentales:
Curva de calibración relativa:
No. de Área de Área de p-cimeno
matraz dehidrocapsaicina

1 1542882 24761401

2 4379824 22545237

3 8148379 25836588

4 13514644 25996470

5 18676382 27321796

Muestra de chile chipotle:

Muestra Área promedio Área promedio p-cimeno
Dehidrocapsaicina

Chile chipotle 9038104 25951231

a) Calcular la concentración de dehidrocapsaicina y p-cimeno en cada matraz de la curva de

calibración.

Cálculo ejemplo para el matraz 1:

5µ𝐿 𝑑𝑒 𝐷𝐻𝐶 = 0. 005 𝑚𝐿 𝑑𝑒 𝐷𝐻𝐶

5µ𝐿 𝑑𝑒 𝐸𝐼 = 0. 005 𝑚𝐿 𝑑𝑒 𝐸𝐼
𝑉𝑜𝑙𝑢𝑚𝑒𝑛 𝑑𝑒 𝑎𝑓𝑜𝑟𝑜 = 5 𝑚𝐿

𝐶1𝑉1 = 𝐶2𝑉2
𝐶1𝑉1
𝐶2 = 𝑉2

7
 (107 𝑝𝑝𝑚)(0.005 𝑚𝐿)
[𝐷𝐻𝐶] = (5 𝑚𝐿)
= 0. 107 𝑝𝑝𝑚 𝑑𝑒 𝐷𝐻𝐶

(101.8 𝑝𝑝𝑚)(0.005 𝑚𝐿)

[𝐸𝐼] = (5 𝑚𝐿)
= 0. 1018 𝑝𝑝𝑚 𝑑𝑒 𝐸𝐼

De la misma forma se calcularon las concentraciones de DHC y el EI (p-cimeno) para cada

matraz obteniendo los siguientes resultados:

No. de Disolución Estándar Volumen Conc. de Conc. de

matraz estándar DHC Interno de aforo dehidrocapsaicina p-cimeno ppm
µL µL mL ppm

1 5 5 5 0.107 0.1018

2 15 5 5 0.321 0.1018

3 30 5 5 0.642 0.1018

4 50 5 5 1.07 0.1018

5 65 5 5 1.391 0.1018

b) Realizar la regresión lineal de los resultados de la gráfica de la curva de calibración

relativa.

Cálculo de la concentración del EI en la muestra:

La muestra se preparó con 20 mg de chile + 5 µL de EI

5µ𝐿 𝑑𝑒 𝐸𝐼 = 0. 005 𝑚𝐿 𝑑𝑒 𝐸𝐼

(101.8 𝑝𝑝𝑚)(0.005 𝑚𝐿)

[𝐸𝐼] = (5 𝑚𝐿)
= 0. 1018 𝑝𝑝𝑚 𝑑𝑒 𝐸𝐼

Para realizar la curva de calibración primero se calcularon las relaciones de concentraciones y

áreas y posteriormente se graficaron los resultados

● Cálculo ejemplo para el matraz 1:

𝐶𝑎𝑛𝑎𝑙𝑖𝑡𝑜 0.107
𝐶𝐸𝐼
= 0.1018
= 1. 051
𝐴𝑎𝑛𝑎𝑙𝑖𝑡𝑜 1542882
𝐴𝐸𝐼
= 24761401
= 0. 062

8
 CONCENTRACIONES ÁREAS

Conc. de Conc. de [DHC]/[EI] Área de Área de ADHC/AEI

dehidrocapsaicina p-cimeno ppm dehidrocapsaicina p-cimeno
ppm

0.107 0.1018 1.051 1542882 24761401 0.062

0.321 0.1018 3.153 4379824 22545237 0.194

0.642 0.1018 6.306 8148379 25836588 0.315

1.07 0.1018 10.511 13514644 25996470 0.520

1.391 0.1018 13.664 18676382 27321796 0.684

De la regresión lineal se obtienen los siguientes datos:

𝑦 = 𝑚𝑥 + 𝑏
𝑦 = 0. 048𝑥 + 0. 022
2
𝑅 = 0. 9972

Donde la pendiente de la recta es igual al Frr:

𝐹𝑟𝑟 = 0. 048

c) Determina la cantidad de dehidrocapsaicina en la muestra analizada y expresa el

resultado en g/g de chile chipotle.

9
 𝐴𝑎𝑛𝑎𝑙𝑖𝑡𝑜 𝐶𝑎𝑛𝑎𝑙𝑖𝑡𝑜
𝐴𝐸𝐼
= 𝐹𝑟𝑟 · 𝐶𝐸𝐼
+𝑏

𝐴𝑎𝑛𝑎𝑙𝑖𝑡𝑜
𝐴𝐸𝐼
−𝑏
𝐶𝑎𝑛𝑎𝑙𝑖𝑡𝑜 = 𝐶𝐸𝐼 · ( 𝐹𝑟𝑟
)

Área promedio Dehidrocapsaicina = 9038104

Área promedio p-cimeno = 25951231

9038104 𝐶𝑎𝑛𝑎𝑙𝑖𝑡𝑜
25951231
= 0. 048 · 0.1018 𝑝𝑝𝑚
+ 0. 022

9038104
25951231
−0.022
𝐶𝑎𝑛𝑎𝑙𝑖𝑡𝑜 = 0. 1018 · ( 0.048
) = 0. 692 𝑝𝑝𝑚

Se pesaron 20 mg de chile chipotle = 0.02 g de chile chipotle

Volumen final = 5 mL

0.692 µ𝑔 5 𝑚𝐿 1
𝑚𝐿
× 1
× 0.02 𝑔
= 173 µ𝑔/𝑔

La cantidad de dehidrocapsaicina en la muestra analizada es 173 µg / g de chile chipotle

PROBLEMA 4.
Se requiere cuantificar dos drogas cardíacas, Pindolol (A) y Oxprenolol (B). Tomando
en cuenta la siguiente información.

Compuesto Concentración mg/mL Área

A 0.202 18625

B 0.420 34644

Se realizó el procedimiento de extracción de los compuestos en la muestra: se utilizó un

cartucho de 3 mL/60 mg. Se acondicionó con 1 ml de metanol/ 1 ml de agua, se cargó con 1 ml
de sangre humana entera y se lavó el cartucho con 1 ml de MeOH al 5 % en agua. Se eluyó con 1
ml de MeOH tres veces. Se evaporó y se reconstituyó a un volumen final de 1 ml con metanol, se
filtró con una membrana de 0.45 mm, la disolución obtenida se inyectó por triplicado y se
obtuvieron las siguientes áreas promedio para cada compuesto:

A= 17,150 y B= 35,056
¿Cuál es la concentración de cada droga (mg/mL) en la muestra?

10
RESOLUCIÓN. Método de factor de respuesta

● Cálculo del Fr para A y B

𝐴𝐴 = 𝐹𝑟𝐴 · 𝐶𝐴

18625 = 𝐹𝑟𝐴 · 0. 202

Despejando FrA:

18625
𝐹𝑟𝐴 = 0.202
= 92202. 9703

𝐴𝐵 = 𝐹𝑟𝐵 · 𝐶𝐵

34644 = 𝐹𝑟𝐵 · 0. 420

Despejando FrB:

34644
𝐹𝑟𝐵 = 0.420
= 82485. 7143

● Cálculo de las concentraciones de A y B en la muestra analizada utilizando los Fr

respectivos

Muestra: 1 mL de sangre humana entera que después del tratamiento mencionado

anteriormente se se reconstituyó a un volumen final de 1 mL con metanol

Áreas promedio de cada compuesto en la muestra: A= 17,150 y B= 35,056

- Para A:
𝐴𝐴 = 𝐹𝑟𝐴 · 𝐶𝐴
Despejando CA:

𝐴𝐴
𝐶𝐴 = 𝐹𝑟𝐴

17150
𝐶𝐴 = 92202.9703
= 0. 186 𝑚𝑔/𝑚𝐿

1 𝑚𝐿
0. 186 𝑚𝑔/𝑚𝐿 × 1 𝑚𝐿
= 0. 186 𝑚𝑔/𝑚𝐿

- Para B:
𝐴𝐵 = 𝐹𝑟𝐵 · 𝐶𝐵
Despejando CB:
𝐴𝐵
𝐶𝐵 = 𝐹𝑟𝐵

11
 35056
𝐶𝐵 = 82485.7143
= 0. 425 𝑚𝑔/𝑚𝐿

1 𝑚𝐿
0. 425 𝑚𝑔/𝑚𝐿 × 1 𝑚𝐿
= 0. 425 𝑚𝑔/𝑚𝐿

¿Cuál es la concentración de cada droga (mg/mL) en la muestra?

[Pindolol] = 0.186 mg/mL

[Oxprenolol] = 0.425 mg/mL

12