TRABAJO PRCTICO N6

2017
MECANISMOS GENTICOS BSICOS (PARTE II)

OBJETIVOS
- Que el alumno comprenda cmo la informacin gentica almacenada en el ADN
se puede expresar mediante dos mecanismos genticos bsicos: SNTESIS DE
ARN (TRANSCRIPCIN) Y SNTESIS PROTEICA (TRADUCCIN).
- Que el alumno concluya que los cinco mecanismos genticos bsicos (los tres
abordados en el TP N6 y los dos que estudiaremos en ste) no se dan
aisladamente uno del otro sino que forman parte de un sistema altamente
integrado.

UNIDAD DE CONOCIMIENTO

CONOCIMIENTOS PREVIOS REQUERIDOS: Para abordar el presente Trabajo

Prctico debern repasarse los contenidos del Trabajo Prctico referido a
Macromolculas.

TEMARIO
DECODIFICACION DEL ADN
(1) Concepto general de expresin gnica.
(2)Transcripcin: mecanismos y enzimas intervinientes. Seales de reconocimiento
de la ARN polimerasa: promotores y secuencias consenso. Diferencias bsicas del
proceso en organismos procariontes y eucariontes. Inhibidores de la transcripcin.
(3) Procesamiento de los precursores de los ARN mensajeros: Modificaciones
covalentes de los extremos: transcripto primario. Maduracin por corte y empalme:
espliceosoma. Importancia biolgica del corte y empalme alternativo: ejemplos.
(4) Cdigo gentico: caractersticas.
(5) Traduccin del ARN mensajero: funcin de los ARNt y los ribosomas.
Interaccin codn-anticodn. Hiptesis del Balanceo. Etapas de la biosntesis
proteica (activacin de los aminocidos, iniciacin, elongacin y terminacin):
requerimientos energticos, enzimas, factores y cofactores involucrados en cada
una de ellas.
Modificaciones postraduccionales de las cadenas polipeptdicas.
Diferencias fundamentales en el proceso de traduccin en procariontes y
eucariontes. Traduccin en ribosomas libres o ligados al retculo endoplasmtico
en eucariotas. Inhibidores de la sntesis proteica: antibiticos y citostticos.

VOCABULARIO ESPECFICO DEL TEMA

promotor - cdigo gentico - codn - anticodn - antibitico - gen - locus - loci -
alelo

BIBLIOGRAFIA
Alberts, B. y otros. Biologa molecular de la clula. Editorial Omega. Barcelona,
2004.
De Robertis, E.; Hib, J. y Ponzio, R. Fundamentos de Biologa celular y
molecular. Editorial El Ateneo. 2004.
Herrera, E. Elementos de Bioqumica. Editorial Interamericana. 1993
Lehninger, A. Bioqumica. Editorial.Omega.2004

Wayne M. Becker, Lewis J. Kleinsmith, Jeff Hardin, Pearson Addison Wesley. El

mundo de la clula. 6ta edicin

UNIDAD DE ACCIN

En su casa: el alumno deber investigar usando como base el temario propuesto y

contestar el cuestionario gua de estudio a los efectos de autoevaluarse. Podr
adems ejercitarse luego de la clase resolviendo los problemas adicionales.

En clase: resolver y discutir, con ayuda del docente, los problemas de aplicacin
para confirmar que los conceptos tericos estudiados en su casa han sido
integralmente comprendidos.

CUESTIONARIO GUA DE ESTUDIO

1. a) Qu se entiende por expresin gnica?

b) Explique el flujo de la informacin gentica en eucariontes y procariontes.
c) En qu tipos de virus el flujo de informacin es diferente al descripto en el
inciso anterior?
d) Describa el proceso de transcripcin inversa.

2. Las enzimas responsables de la sntesis de los ARN son ARN polimerasas-ADN

dependientes:
a) Cules son sus sustratos?
b) Escriba la reaccin general catalizada por esta enzima.
c) Cules son las diferencias ms importantes entre ADN y ARN polimerasa?
Qu consecuencias tienen?
d) A qu se denomina promotores y secuencias consenso?

3. Respecto a la transcripcin en procariotas:

a) Mencione las etapas en las que se puede dividir.
b) Indique la estructura de la ARN polimerasa y la caracterstica de los promotores.
Funcin de la subunidad .
c) Cmo se produce la unin de la ARN polimerasa al promotor?
d) Qu eventos marcan el final del proceso de iniciacin?
e) A qu se denomina terminadores -independientes y -dependientes?
f) Mencione algunos de los agentes qumicos conocidos por inhibir la transcripcin.

4. Establezca las diferencias bsicas entre procariotas y eucariotas en cuanto a:

a) ARN polimerasas.
b) Promotores (secuencias consenso).
c) Presencia en los cromosomas de agrupaciones de genes que se transcriben
como un nico ARNm.
d) Acoplamiento de los procesos de transcripcin y traduccin.
e) Procesamientos postranscripcionales de los ARN.

5. Los precursores de los ARN mensajeros sufren una serie de modificaciones

antes de ser exportados al citosol, al respecto indique:
a) Cules son las modificaciones que dan por resultado el transcripto primario,
cmo se producen y en qu orden ocurren? Todas ellas son post-
transcripcionales? Justifique.
b) Qu funciones cumplen la caperuza y la cadena poliA?
c) Cmo se denomina el proceso a travs del cual se eliminan los intrones?
Explquelo brevemente.
d) A qu se denomina ARN heterogneo nuclear (ARN hn)?
e) En qu consiste el proceso de maduracin alternativa del ARN? Qu ventaja
presenta, para algunos virus, la posibilidad de que este proceso se lleve a cabo?
f) Por qu se dice que en eucariotas superiores la maduracin del ARN es un
proceso muy flexible? Qu relacin tiene este hecho con la evolucin de estos
organismos?

6. El cdigo gentico es la clave a travs de la cual podemos pasar de un alfabeto

de 4 bases a otro de 20 aminocidos. Al respecto indique:
a) A qu se denomina codn? Cuntos codones distintos existen? Por qu?
b) Caractersticas del cdigo gentico.
c) Funcin del ARNt en la traduccin de la secuencia de nucletidos del ARNm en
la secuencia de aminocidos de una cadena polipeptdica. A qu se denomina
anticodn? Explique brevemente la Teora o Hiptesis del Balanceo.

7. Respecto a la sntesis proteica:

a) Mencione las etapas en las que este proceso se lleva a cabo.
b) Escriba la reaccin correspondiente a la activacin de los aminocidos
indicando claramente a qu extremo del ARNt se une el aminocido y el nombre
de la enzima que cataliza este proceso. Se trata de una nica enzima?
c) Describa detalladamente los eventos que ocurren durante las etapas de
iniciacin, elongacin y terminacin de la traduccin en procariotas. Indique
claramente el gasto energtico parcial y global de estos procesos.
d) Confeccione un listado en el cual se enumeren las principales diferencias en
este proceso entre procariotas y eucariotas.

8. En eucariotas, si bien la sntesis de protenas comienza en ribosomas libres en

el citoplasma (a excepcin de algunas protenas sintetizadas en ribosomas de la
matriz mitocondrial) ocasionalmente puede terminar en ribosomas ligados al
retculo endoplasmtico:
a) De qu depender que esto ocurra o no?
b) Explique el mecanismo que permite el anclaje del ribosoma al lado
citoplasmtico del retculo endoplasmtico. Mientras esto ocurre, el ribosoma
seguir siendo traduccionalmente activo?

9. Respecto de los inhibidores de la sntesis proteica:

a) Mencione algunos de ellos indicando si son capaces de inhibir la traduccin en
procariontes, eucariontes o en ambos.
b) Indique cules de los compuestos descriptos en a) podrn ser utilizados como
antibiticos y cules como citostticos.
 EJERCICIOS DE APLICACIN

1. Complete el siguiente esquema y luego responda:

a) Estos eventos estn ocurriendo en un procariota o en eucariota? Mencione

claramente los indicios que le permiten inferirlo.
b) Qu son las secuencias consenso? Dnde se encuentran? Cmo se
denominan las ms frecuentemente encontradas en este tipo de organismos?
c) Cmo reconoce la enzima al promotor y qu ocurre con la enzima cuando
empieza la transcripcin?
d) El ARN mensajero formado: Cuntos AUG y cuantos codones de finalizacin
tendr como mnimo? Cmo se llama a este tipo de ARN mensajeros?

2. La rifampicina inhibe a la subunidad de la ARN polimerasa dependiente de

ADN de las micobacterias y otros microorganismos. Si bien dicha droga acta
sobre las mitocondrias de los mamferos, slo lo hace en concentraciones
elevadas.
a) Cul es el efecto que produce la droga en micobacterias?
b) En el tratamiento de la tuberculosis se la utiliza asociada a otras drogas, ya que
su administracin solitaria permite que aparezcan microorganismos resistentes. En
este caso, cul cree que ser la causa de dicha resistencia?

3. a) Complete el siguiente esquema usando las palabras: corte y empalme

(splicing), traduccin, protena, transcripcin, casquete 5 (cap 5), transcripto
primario, ARNm, poliA.
b) Cundo se adicionan y qu funcin cumplen la caperuza y la cola poliA?
c) Describa brevemente cmo se lleva a cabo el proceso de splicing.
e) El proceso representado ocurre en forma general en eucariotas, en procariotas
o en ambos?
f) Es posible a partir de un mismo transcripto de ARN generar distintos ARN
maduros que codifiquen para diferentes protenas? Qu ventajas presenta esta
situacin? Ejemplifique el proceso utilizando el esquema anterior.

4. a) Qu entiende por cdigo gentico? Cules son las leyes del mismo?
b) Qu ventaja proporciona a la clula que el cdigo gentico sea degenerado?
c) Observe el cdigo gentico: analice la correspondencia codn - aminocido.
Qu caracterstica observa en muchos de los codones que codifican para un
mismo aminocido?
d) Qu relacin tiene lo descrito en c) con la existencia de 61 codones
codificantes y slo 40 o 50 (segn el tipo de organismo) ARNt distintos?
5. Consideremos a la sntesis proteica dividida en 4 etapas: activacin de los
aminocidos, iniciacin, elongacin y terminacin. La activacin de los
aminocidos es un proceso que tiene lugar en dos etapas (1 y 2):
a) Complete el esquema con los siguientes trminos (algunos de ellos pueden ser
utilizados ms de una vez): Pirofosfato, Fosfato inorgnico, Aminocido, Aminoacil-
ARNt sintetasa, Aminoacil-AMP, Aminoacil-ARNt, ARNt, AMP, ATP. Escriba las
etapas 1 y 2 en forma de ecuaciones.

.
b) Cuntas enzimas capaces de catalizar esta reaccin existen en la clula? Por
qu?
c) Cul es el costo energtico en enlaces de alta energa de este proceso?
6. Complete los grficos de iniciacin, elongacin y terminacin de la traduccin en
procariotas que le presentamos a continuacin ubicando los siguientes trminos
(cada trmino puede ser utilizado ms de una vez en cada grfico):

GRFICO 1 (iniciacin): ARNm; Codn de iniciacin; Complejo de Iniciacin 30S;

fMet-ARNt; GDP; GTP; Pi; Factores de Iniciacin IF1 e IF3; Factores de Iniciacin
IF1+ IF2 e IF3; Factor de Iniciacin IF2; Secuencia Shine-Dalgarno; Sitio A; Sitio E;
Sitio P; Subunidad 30S; Subunidad 50S.
Cuntos enlaces de alta energa son necesarios para llevar a cabo la iniciacin
de la traduccin?
GRFICO 2 (elongacin): AA-ARNt; Accin peptidil transferasa; ARNm; ARNt;
Codn 1; Codn 2; GDP; GTP; Pi; Sitio A; Sitio E; Sitio P; Translocacin
Cuntos enlaces de alta energa son necesarios para llevar a cabo un paso de
elongacin de la traduccin?
GRFICO 3 (terminacin): ARNm; ARNt; Codn de stop; Factores de
terminacin; GDP; GTP; Pi; Pptido; Sitio A; Sitio E; Sitio P; Subunidad 30S;
Subunidad 50S.
Cuntos enlaces de alta energa son necesarios para llevar a cabo la terminacin
de la traduccin?

7. Confeccione un cuadro comparativo del proceso de traduccin en procariotas y

eucariotas en el cual se destaquen las principales diferencias entre ellos.

8. Determine el costo energtico, en trmino de grupos fosfato de alta energa

consumidos, que se requieren para la biosntesis de una cadena polipeptdica de 5
residuos de aminocidos.
9. La siguiente secuencia polinucleotdica es un fragmento correspondiente al
extremo 3 del ARNm que codifica para una protena globular (E) con actividad
cataltica y alostrica:

5GCAGCAUUAAUAUUCGAAGACGCAGCAUUAGUAAGAAAAUAAUGACAAAAAA-3

301 339

aminocidos anticodn del ARNt aminocidos anticodn del ARNt

que lo transporta* que lo transporta
valina (Val) UAC leucina (Leu) UAA
aspartato (Asp) GUC glutamato (Glu) UUC
alanina (Ala) UGC isoleucina (Ile) UAU
arginina (Arg) UCU lisina (Lys) UUU
glicina (Gly) UCC histidina (His) AUG
fenilalanina (Phe) GAA codones de stop UAA, UGA, UAG
*recuerde que toda secuencia de nucletidos se escribe en direccin 5 3

a) Cul ser la secuencia de aminocidos correspondiente a este extremo de la

protena?
b) Teniendo en cuenta que slo se han numerado las bases codificantes del
ARNm, cuntos aminocidos posee esta protena?
c) Qu aminocidos constituyen los extremos amino y carboxilo terminal?
d) Recordando que se trata de una protena globular, cmo se plegar esta
porcin de la cadena polipeptdica?
e) Esta protena cataliza la primera reaccin de la siguiente va y est sometida a
un control feed-back negativo por la sustancia w - que es el producto final de este
camino metablico.

x+

E1

E2

E3

w-
Sabiendo que hay restos de aminocidos de esta porcin de la protena que estn
involucrados en el sitio activo y otros que pertenecen al centro alostrico (o
regulador), cules cree Ud. que sern stos en cada caso, teniendo en cuenta la
estructura de las sustancias que se unen a cada uno de los sitios?
f) Coloque al principio de cada una de las alteraciones en el ARNm enumeradas en
la columna 1 (que surgen como consecuencia de las mutaciones del ADN), las
letras de la columna 2 que corresponden a los efectos probables que tendrn estas
mutaciones.

columna 1
1-reemplazo de U(307) por A
2-reemplazo de U(308) por A
3-reemplazo de A(317) por G
4-reemplazo de C(326) por A
5-reemplazo de A(337) por G
6-insercin de dos A entre
bases 304 y305
columna 2
a- mutacin silenciosa
b- corrimiento del marco de lectura
c- protena ms corta y no funcional
d- disminuye la afinidad de la protena por su sustrato (x +)
e- incremento del Km enzimtico.
f- disminuye la afinidad de la protena por el ligando
responsable del feed-back (w-)
g- la va disminuye la velocidad de generacin de
productos
h- generacin descontrolada de productos de la va
i- cambio conformacional severo e inactivacin funcional.

EJERCITACIN ADICIONAL

1. La hebra molde de una molcula de ADN doble hlice contiene la secuencia:

5- C T T A A C A C C C C T G A C T T C G C G C C G T C G - 3
a) Cul es la secuencia de bases del ARNm que puede ser transcripto a partir de
esta hebra?
b) Qu secuencia de aminocidos podra ser codificada por la secuencia de
bases del ARNm del inciso a) empezando desde el extremo 5?
c) Suponga que la otra hebra (no molde) de esta muestra de ADN es transcripta y
traducida. Sera la secuencia de aminocidos igual que la encontrada en b)?
Explique el significado biolgico de su respuesta.

2. a) Sabiendo que las tetraciclinas se unen al sitio A de subunidades ribosomales

30S, podra usar este compuesto para controlar una infeccin urinaria por E. coli?
b) La cicloheximida, en cambio, bloquea la peptidil transferasa de ribosomas 80S
Podra este frmaco emplearse para tratar dicha infeccin bacteriana? Justifique
su respuesta.
c) Qu ocurrir cuando se adicionen cada uno de estos compuestos a un cultivo
de clulas de un hepatoma humano?

3. A partir de las siguientes secuencias de ADN codificante, determine las

secuencias correspondientes de ARNm y las secuencias de aminocidos producto
de la traduccin de las mismas:

I. GTGCTCTTGCAAGACA
II. AGTATTGTTGCAGGATT
III. TAGTTCTTTTACAGGAC

4. Cul de los siguientes acontecimientos se produce cuando la maquinaria

traductora eucarionte encuentra el codn UAA?
a. El complejo de preiniciacin fijado detiene el recorrido y ubica el Met-tRNA en
este sitio.
b. Los factores de terminacin reconocen este codn y termina la traduccin.
c. Este codn es reconocido por el correspondiente anticodn de una molcula de
tRNA vaca, que no est unida a ningn aminocido.
d. Este codn no es reconocido por ningn factor y finalmente hace que la
maquinaria se detenga.

5. Una hebra codificante compuesta por C y U alternados, cuyo primer nucletido

es C, podra dar como resultado la formacin de:

a. un polipptido que contenga alternativamente residuos de Leu y Ser.

b. un polipptido que contenga alternativamente residuos de Leu o Ser.
c. un polipptido que contenga slo residuos de Leu.
d. un polipptido que contenga slo residuos de Ser.

6. Cules son las molculas de ARN involucradas en la sntesis de protenas?

Qu funcin cumple cada una de ellas?

7. Su paciente presenta una infeccin pulmonar severa provocada por

Pseudomonas aeruginosa. Tratara esta infeccin con gentamicina, sabiendo que
este antibitico se une a la subunidad ribosmica 30S, inhibiendo as la sntesis
proteica? O considera ms adecuado el tratamiento con cicloheximida? Alguno
de estos antibiticos provocar efectos adversos sobre el paciente? Justifique su
respuesta.