FACULTAD DE CIENCIAS BIOLÓGICAS

ESCUELA PROFESIONAL DE CIENCIAS BIOLÓGICAS

Y
FACULTAD DE INGENIERÍA INDUSTRIAL

SEMESTRE 2022-I
ÁREA DE INGENIERÍA

CURSO DE BIOLOGÍA

SECCIÓN 5

Ficha de Seminario N° 7
GENOMA – EXTRACCIÓN Y UTILIDAD

NUMERO DE GRUPO:3

Nombre y apellidos de integrantes:

• Diego Jesús Silva Eduardo

• Marcelo Grover Obregón López
• Carlos Giuseppe Estrada Hernández
• Tamara Paola Serra Rojas
• Maryori Emily Rojas Pumaylle
• Álvaro Franco Navarro Clemente
• Matías Nicolas Hamann Amado
• Carlos Aldair Ramos Chávez
• Daniela Mirella Rosas Alcalá

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Seminario – Biología.
LECTURA: Revisión de métodos de extracción de ADN a partir de restos óseos en el
laboratorio forense

A. RESUMEN LECTURA INTRODUCCIÓN (escribir un resumen diferente al

del paper): (4 puntos)

En la actualidad la genética forense cumple un relevante papel en la identificación

humana. Ya que se producen circunstancias donde aparecen restos humanos que deben
ser identificados. Es decir, darles una identidad a dichos restos humanos.

Este proceso de identificación es variable en cuanto a su complejidad. Es por ello que

requiere de equipos multidisciplinares. Cuando el cadáver está bien conservado existe
mayores facilidades y herramientas para resolver este problema, el mencionado proceso
de identificación. Sin embargo, en diferentes casos que se debe complementar o confirmar
mediante el estudio comparativo del perfil del ADN.

Las condiciones tafonómicas pueden suponer un obstáculo en la obtención del ADN. En

esos casos los equipos se ven obligados a usar estrategias especiales y diferentes en los
laboratorios forenses.

En la lectura, se ve la importancia del uso de restos óseos en la extracción de ADN.

Asimismo, se comenta las dificultades que se tiene en la preservación de la muestra
obtenida del ADN. También, nos detalla las complicaciones metodológicas que existen.

B. ANALISIS (10 puntos)

● Analice las diferentes técnicas de extracción de ADN

- Protocolo «Fenol:cloroformo»: Este protocolo es una adaptación del
procedimiento estándar de extracción de ADN por fenol:cloroformo
- Protocolo “Silica-sal”: Este protocolo se fundamenta en la adición al polvo de
hueso/diente de una solución de extracción.
- Protocolo «Desmineralización-silica» (International Commission on Missing
Persons): Este protocolo podría ser considerado como una variación del anterior,
pues se basa también en la retención en silica (comercial), aunque no incluye la
sal GuSCN.
- Protocolo «Fishing»: Este método de extracción está basado en la hibridación y
separación magnética que proporciona ADN puro sin ningún inhibidor detectable
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Seminario – Biología.
 ● Factores que facilitan y dificultan la extracción de ADN

- La temperatura: Es el factor que más condiciona la preservación del material

genético. Las bajas temperaturas durante el período de deposición de un resto,
favorecen su conservación óptima, debido a que, a bajas temperaturas, se produce
una ralentización de las reacciones químicas responsables de la degradación
orgánica. En el lado opuesto, la presencia de elevadas temperaturas puede
favorecer la deshidratación parcial del ADN, deteniendo los procesos de
hidrólisis.

- La humedad: Este ejerce un efecto adverso sobre la preservación del material

genético. Debido a la porosidad propia del hueso y a la acción disolvente de la
humedad, se favorece la penetración de las sustancias orgánicas del sedimento en
el interior del resto. Esto hace que sea mayor la posibilidad de que el extracto de
ADN presente moléculas inhibidoras, además de favorecer la degradación
hidrolítica y oxidativa.

- Ph neutro o ligeramente alcalino: El enterramiento favorece la preservación del

ADN. Sin embargo, Herrmann y Newesely, demostraron que, si el pH disminuía,
este provocaba la degradación de la hidroxiapatita de los huesos o dientes.

- Los compuestos del suelo. Se ha apuntado la posibilidad de que ciertos

compuestos minerales del suelo, como la montmorilonita, la kaolinita, el
feldespato o el cuarzo, podrían asociarse al ADN protegiéndolo frente a la acción
endonucleásica. También se ha documentado la posibilidad de que la unión del
ADN con los ácidos húmicos del suelo causaría el mismo efecto protector.

Sin embargo, otros componentes propios del suelo pueden ejercer el efecto contrario,
como se detallará a continuación.
Se podrían resumir fundamentalmente en 4: escasez, fragmentación de las cadenas,
modificaciones moleculares y la presencia de inhibidores de la PCR en los extractos.

- Escasez y fragmentación de las cadenas de ADN: son manifestaciones de un

mismo fenómeno, la degradación posmortem del material genético. Así, la

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 longitud de los fragmentos amplificables depende de las condiciones de
preservación de los restos óseos.

- Las modificaciones moleculares del ADN, consecuencia también de dicha

degradación posmortem, provocan sobre el ADN lesiones que bloquearán la
polimerasa, como las modificaciones oxidativas de las bases nitrogenadas y los
residuos de azúcar32, o la creación de puentes cruzados (cross-links) entre las
propias cadenas de ADN o entre el ADN y las proteínas del medio (reacción de
Maillard)

- La presencia de inhibidores de la PCR en los extractos está íntimamente

relacionada con el resto de características. La naturaleza y mecanismos de acción
de muchos de dichos inhibidores resultan todavía hoy desconocidos, y lo que
queda claro es que el protocolo de extracción convencional de ADN (método de
extracción «orgánica»), no consigue eliminar gran parte de las moléculas
inhibidoras, pues aparecen en los extractos finales.

● Identifique las aplicaciones de las técnicas de extracción de ADN.

- Protocolo «Fenol:cloroformo»
Esta técnica es una adaptación del procedimiento estándar de extracción en el cual las
muestras son digeridas con proteinasa K y un detergente como Triton X-100 o SDS,
que rompe las membranas celulares. El digerido es mezclado con una solución de
fenol: cloroformo: alcohol isoamílico, paso que es repetido hasta eliminar la
coloración. Dependiendo del protocolo aplicado, para eliminar las trazas de fenol, se
puede anadir ˜ una solución de cloroformo:alcohol isoamílico. A partir de este punto,
el protocolo estándar incluía una fase de precipitación con acetato amónico y etanol
absoluto frío, pero los últimos protocolos desarrollados introducen la concentración
en pequenos ˜ volúmenes usando sistemas de filtración por centrifugación

- Protocolo «Silica-sal»
Esta en base a la adición al polvo de hueso/diente de una solución de extraccion,
consistente en EDTA y proteinasa K, y su incubación toda la noche. Al sobrenadante
obtenido se le añade una solución de unión (binding buffer) de base de tiocianato de
guanidinio (GuSCN) concentrado y cloruro o acetato sódico (NaCl/Ac), y la

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 suspensión de silica, todo lo cual se incuba en oscuridad. Para muestras que no
contienen inhibidores de la PCR, se pueden usar otras sales diferentes al GuSCN,
como por ejemplo el cloruro sódico. Estas sales no caotrópicas son mucho más baratas
y actúan igual de bien o incluso mejor en términos de recuperación de ADN. Sin
embargo, tienden a copurificar inhibidores de la PCR.

- Protocolo «Desmineralización-silica»
Presenta 2 claves fundamentales: la digestión completa, aumentando la proporción de
tampón de digestión y polvo de hueso; y la eliminación de inhibidores, mediante la
purificación con resina. Una vez pretratada la muestra, el método consiste en una
digestión inicial de toda la matriz ósea, lo que supone una desmineralización total de
la misma.

- Protocolo «Fishing»
Está basado en la hibridación y separación magnética que proporciona ADN puro sin
ningún inhibidor detectable. Previo al propio proceso de «captura de ADN», la
muestra (polvo de hueso/diente) es sometida inicialmente a una extracción con
eltampón estándar ampliamente descrito (EDTA, SDS y proteinasa K). El
sobrenadante obtenido se somete de forma repetitiva a una solución de unión y lavado
(binding/washing buffer) y posterior filtrado, manteniéndolo finalmente en dicha
solución.

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 ● Analice las ventajas y desventajas de las diferentes técnicas

● Identifique por lo menos dos usos de la extracción de ADN

• El PreoFiler Forensic DNA Extraction Kit, es un sistema con una química

que permite una unión específica del ADN a partículas magnéticas y la
posterior elución del mismo altamente eficiente, con la capacidad de
eliminar inhibidores y adaptarlo a sistemas automáticos.

• El DNeasy Tissue Kit tiene un protocolo ajustado a muestras de hueso. De

este surgió la aplicación directa al campo forense, QlAamp, asimismo con
su protocolo específico para huesos y dientes. Este kit también posee una
adaptación para su automatización con su propio sistema.

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C. CONCLUSIONES. ¿Cuáles son las perspectivas de uso del genoma? (4 puntos)

Los avances metodológicos de la genética molecular aplicados a la Medicina, han

permitido avanzar, en forma insospechada hace unos 20 años, en la capacidad diagnóstica
clínica, prenatal y detección de portadores asintomáticos para un número creciente de
enfermedades.

La capacidad terapéutica farmacológica o con terapia génica, a pesar de enormes

esfuerzos y avances prometedores, no ha resultado en aplicaciones clínicas efectivas hasta
el momento. Esto último inhibe, sobre todo por razones éticas, la aplicación
indiscriminada de pruebas diagnósticas en etapas pre sintomáticas.

D. REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS (2 puntos)

https://campusindustrial.unmsm.edu.pe/moodle/pluginfile.php/110212/mod_resour
ce/content/1/Revisi%C3%B3n%20de%20m%C3%A9todos%20de%20extracci%
C3%B3n%20de%20ADN%20a%20partir%20de%20restos%20%C3%B3seos%2
0en%20el%20laboratorio%20forense.pdf

https://conogasi.org/articulos/extraccion-de-adn-
2/#:~:text=La%20extracci%C3%B3n%20consiste%20en%20separar,%2C%20c%C3%A1ncer%2C
%20infecciones%2C%20etc

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