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FECHA
PROCEDIMIENTO
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DETERMINACIÓN DEL PUNTO DE EMISIÓN:
CRIOSCOPIA EN LECHES
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PROCEDIMIENTO DETERMINACIÓN DEL PUNTO DE CRIOSCOPIA EN

LECHES

ELABORÓ APROBÓ REVISÓ APROBÓ

PROFESIONALES SECRETARIO SALUD GERENTE DE REPRESENTANTE DE
DESARROLLO DIRECCIÓN
ORGANIZACIONAL

EDGAR CALDERON MIGUEL GIOVANNI RÓMULO MUÑOZ ANGELA MILENA

VEGA BELTRÁN KNORR ECHEVERRY LOZANO CAICEDO
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1. OBJETIVO

Determinar el Punto de crioscopia en leches UHT y crudas mediante el uso de Crioscopio.

2. ALCANCE

El método aplica para muestras de leches higienizadas y crudas de bovino. Se excluyen las
leches deslactosadas.

3. DEFINICIONES

Descenso Crioscópico: Es la disminución de la temperatura del punto de congelación que

experimenta una disolución respecto a la del disolvente puro.

Todas las disoluciones en las que, al enfriarse, el disolvente solidifica, tienen una temperatura
de congelación inferior al disolvente puro. La magnitud del descenso crioscópico, ∆Tc, viene
dada por la diferencia de temperaturas de congelación (o de fusión) del disolvente puro y de
la disolución, Tf* y Tf, respectivamente:

Principio Determinación Punto de Congelación: El punto de congelación es la

temperatura en la cual la fase sólida y la fase liquida de una sustancia o mezcla de sustancias
están presentes simultáneamente en el equilibrio.

El método adecuado para la determinación del punto de congelación se ha probado con el

congelamiento de la muestra y posterior agitación para la liberación de calor y aumento de
la temperatura hasta encontrar el punto de congelación, el cual se determina cuando el valor
de la temperatura no se incrementa en más de 0,5 m°C durante 20 segundos.

4. RESPONSABLES

Es responsabilidad de los profesionales del Laboratorio de salud Pública grupo salud

ambiental, cumplir con los lineamientos establecidos en este documento, sin hacer ningún
cambio que no esté debidamente documentado y autorizado.

5. GENERALIDADES

Todo disolvente tiene un punto (temperatura) de congelación y de ebullición, sin embargo, la

adición de un soluto provoca que estos puntos se desplacen en la escala de temperatura.
La constante crioscópica es una constante que define la temperatura de congelación de un
disolvente dado.
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Tanto la concentración molal del soluto adicionado como la constante crioscópica de cada
disolvente definen qué tanto disminuye el punto de congelación de dicho disolvente.
Este fenómeno, la disminución de la temperatura de congelación se conoce como descenso
crioscópico y es una propiedad coligativa, es decir, es una de las propiedades que tienen los
disolventes por la adición de un soluto y que dependen exclusivamente de su concentración
molal, no de su naturaleza química.
Otra propiedad coligativa es el aumento de la temperatura de ebullición y esa depende de
la constante ebulloscópica.
El punto de solidificación de un líquido puro (no mezclado) es en esencia el mismo que el
punto de fusión de la misma sustancia en su estado sólido, y se puede definir como la
temperatura a la que el estado sólido y el estado líquido de una sustancia se encuentran en
equilibrio. El punto de solidificación de una disolución es más bajo que el punto de
solidificación del disolvente puro antes de la introducción del soluto (sustancia disuelta). La
cantidad a la que desciende el punto de solidificación depende de la concentración molecular
del soluto y de que la disolución sea un electrólito. Las disoluciones no electrolíticas tienen
puntos de solidificación más altos, en una concentración dada de soluto, que los electrólitos.
La masa molecular de una sustancia desconocida o no identificada puede determinarse
midiendo la cantidad que desciende el punto de solidificación de un disolvente, cuando se
disuelve en él una cantidad conocida de la sustancia no identificada. Este proceso que
determina las masas moleculares se denomina crioscopía.
La determinación del punto de crioscopia es un parámetro importante para la medición de
adulterantes en leches, principalmente cuando se altera la leche mediante la adición de
agua. Teniendo en cuenta que se requiere utilizar métodos oficiales para su determinación y
facilitar la toma de medidas sanitarias en los casos que los valores del punto de crioscopia
estén por fuera de los rangos admisibles según el decreto 616 de 2006.

6. REFERENCIAS

Método AOAC de análisis AOAC 16. Dairy Products. Cryoscopic Method (16). Official Final

7. DESARROLLO

7.1 Materiales y equipos

 Probeta en marca de 2 mililitros
 Frasco lavador.

Equipos

 Crioscopio Cryostar Automático equipado con un Automuestreador de 12 muestras para

medición automática.
 Impresora Térmica conectada directamente al Crioscopio.

7.2 Reactivos
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 Estándar Calibrado A de 0,0000 °C

 Estándar Calibrado B de -0,557 °C
 Liquido de Baño Refrigerante.

7.3 Patrones y/o materiales de referencia

Material de referencia leche pasteurizada Punto crioscópico STANDARON o equivalente

7.4 Condiciones ambientales

El análisis no exige condiciones ambientales específicas.

7.5 Preparación y/o acondicionamiento de la muestra

Si la muestra es fresca y no hay separación visible de la crema, mezclar trasvasándola

totalmente de un recipiente a otro, tres veces como mínimo, evitando la formación de
espuma. Cuando la muestra contenga grumos de grasa, calentar a no más de 38 C, antes
de homogenizar.

7.6 Descripción del procedimiento

- Controles y/o curvas de calibración

- Calibración: Calibre el instrumento de la siguiente manera:

 Encienda el instrumento y espere mínimo 15 minutos.
 Asegúrese que se han colocado los valores de calibración correctos (estándar de
calibración A y B) Desde luego los valores de calibración pueden ser cambiados de acuerdo
a las necesidades del usuario.
 4 vasos o probetas son necesarios para la calibración de A y B respectivamente Lleve
los vasos en el rack de muestras del automuestreador.
 Asegúrese que entre los cuatro vasos de A y B haya un espacio que los separe en el
automuestreador.
 Pipetee 2,2 mls de estándar Aen cada uno de los 4 vasos y luego 2,2 mls de estándar B
en los siguientes 4 vasos.
 Se recomienda que para asegurar que los vasos estén limpios,se juaguen inicialmente
con la misma solución estándar.
 Preparando el Carrusel para la calibración:
 Espacios del 1 al 4 son disponibles para el estándar A. Espacio 5 se deja vacio. Espacio
del 6 al 9 son espacios disponibles para el estándar de calibrado B.
 El equipo puede ser calibrado con cualquiera de las siguientes soluciones: Solución
de calibrado A (0,000°C y -0,408 °C) solución B (-0,557°C y -0,600 °C). El valor de A
puede ser cambiado desde la configuración del equipo. Usando el teclado (esquina roja) es
movido a la posición “A” 0,000°C.
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Después se presiona el botón “Enter” .Los dígitos pueden ser cambiados con las flechas de
arriba o abajo según aumente o disminuya valor. Presione Enter para confirmar y guardar el
nuevo valor.

Todos los demás parámetros pueden ser cambiados de la misma manera. Ajuste el valor
deseado para el estándar de calibración B de la misma manera que para el estandar A.

- Inserte el carrusel dentro del Aparato:

Use la tecla de “Calibración” y actívela presionando “Enter”.

Inicie la calibración presionando “Enter” otra vez.

- Pre calibración:

La pre calibración es necesaria en casos particulares por ejemplo cuando se cambie el

termistor. Sin la pre calibración no sería posible realizar con frecuencia la calibración. Solo
se necesita un vaso o probeta con estandas “A” para realizar la Pre calibración. La pre
calibración se inicia después que el vaso es llevado en la apertura del baño de enfriamiento.

El acondicionamento y manejo del equipo se registra en el formato de la hoja de vida (F-SA-

18).

- Análisis de la muestra:
Medición:

 Inserte las muestras a ser medidas dentro de las probetas de 2 mililitros. La cantidad de
muestra debe ser entre 2,0 y 2,5 mL, preferiblemente 2,2 mL. La muestra es llevada a alguna
posición del automuestreador en el carrusel. Ahora las muestras están listas para ser
analizadas.
 Seleccione la función “START MEASUREMENT” usando el teclado.
 Presione “ENTER” y el instrumento iniciará la medición.
 El display cambia, la curva de la congelación es graficada, el valor de la temperatura en
°C está en el eje vertical, el tiempo en segundos es desplegado en el eje horizontal. La
medición puede pararse presionando el botón “Enter” nuevamente.
 Para obtener la medición precisa es necesario calibrar el instrumento. Esto es debido a
las condiciones ambientales como la presión del aire.

Nota:

 Lea cada muestra por duplicado.

 Siga las instrucciones que aparecen en el “Manual de Operator Instruccións”.
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7.7 Aseguramiento de la calidad

 Realizar la lectura de la muestras por duplicado y aplicar la ecuación de Hortwitz según

formato F-SA-181.
 Registrar en el formato F-SA-34 “Control Interno de Equipos” las actividades realizadas
en el uso del Crioscopio.

Control de Calidad Interno

 Verifique la vigencia de los estándares.
 Registre en el formato F-SA_34 el control de Uso del Crioscopio.
 Registre en el formato F-SA-181. Control de estándares solución A y B
 Realizar carta de control de la solución estándar para yodo y aplicar las reglas de
Westgard según lo establecido en el instructivo P-SA-72 “Procedimiento Aseguramiento de
Calidad de Atención al Ambiente”. Registrar en el formato F-SA-221 de carta de control de
ensayos fisicoquímicos.

Control de Calidad Externo

El LSP del Meta participará en las evaluaciones realizadas por el INVIMA. Cuando no sea
posible, se buscará participar en evaluaciones de desempeño con otras organizaciones
particulares. Los resultados se registraran en el formato F-SA-109.

7.8 Criterios de aceptación o rechazo

CRITERIO RANGO DE ACCION

ACEPTACION
Duplicado
Ecuación De Horwitz Repetir Análisis

Calibración, Realizar las acciones

Mantenimiento de equipos
verificación y correctivas de calibración y
mantenimiento vigente mantenimiento
Cartas de Control soluciones Aplicar criterios de la regla de
Reglas de Westgard
de calibración A y B Westgard

7.9 Cálculos y/o expresión de resultados

Los resultados se determinan directamente desde el Crioscopio y se expresan en °C, aunque

el Crioscopio puede reportarlos directamente el Indice Crioscopio °H.

7.10 Informe de resultados

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Los resultados de índice crioscópico se registran en el formato “Resultados Fisicoquímicos

de Leches F-SA-178”.

8. REGISTROS

Como Tiempo de
Registro Responsable Donde conservarlo Disposición Final
conservarlo conservación

Director Técnico
/Profesional de Carpeta de Según tabla de Según tabla de
F-SA-18 Hoja de Medio físico y/o
Laboratorio documentos de retención retención
Vida de Equipos electrónico
calidad documental documental

Director Técnico
/Profesional de Carpeta de Según tabla de Según tabla de
F-SA-34 Control Medio físico y/o
Laboratorio documentos de retención retención
Interno de Equipos electrónico
calidad documental documental

Director Técnico
F-SA-109 Análisis
/Profesional de Carpeta de Según tabla de Según tabla de
de Resultados Medio físico y/o
Laboratorio documentos de retención retención
Control de Calidad electrónico
calidad documental documental
Externo

Director Técnico
F-SA-178
/Profesional de Carpeta de Según tabla de Según tabla de
Resultados Medio físico y/o
Laboratorio documentos de retención retención
Fisicoquímicos de electrónico
calidad documental documental
Leches

Director Técnico
/Profesional de Carpeta de Según tabla de Según tabla de
F-SA-221 Formato Medio físico y/o
Laboratorio documentos de retención retención
Carta de Control electrónico
calidad documental documental

Director Técnico
F-SA-181 Formato
/Profesional de Carpeta de Según tabla de Según tabla de
Control Interno Medio físico y/o
Laboratorio documentos de retención retención
Repetibilidad de los electrónico
calidad documental documental
Resultados

9. ANEXOS
Valores de referencia para leches
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Leche Entera

Ultrapaste
Leche Cruda Pasteurizada urizada UAT(UHT) Esterilizada

-0.540 a - -0.530 a -
Índice °C(g/ml) -0.530 -0.550 -0.53 a-0.51 0.510 -0.54 a-0.51 0.510

-0.56 a- -0.550 a -
Crioscopio °H -0.550 a-0.530 -0.550 a- 0.530 0.53 -0.56 a -0.53 0.530

Leche Semidescremada

Ultrapaste
Leche Cruda Pasteurizada urizada UAT(UHT) Esterlizada

-0.540 a - -0.54 a- -0.530 a -

Indice °C(g/ml) -0.530 -0.550 -0.53 a-0.51 0.510 0.51 0.510

-0.56 a- -0.56 a - -0.550 a -

Crioscopio °H -0.550 a-0.530 -0.550 a- 0.530 0.53 0.53 0.530

Leche Descremada

-0.540 a - -0.530 a -
Indice °C(g/ml) -0.530 -0.550 -0.53 a-0.51 0.510 -0.54 a-0.51 0.510

-0.550 a -
Crioscopio °H -0.550 a-0.530 -0.550 a- 0.530 -0.56 a-0.53 -0.56 a -0.53 0.530

Interferencias

Para las muestras de leches no se tiene asociado alguna interferencia, no obstante es

necesario mantener los vasos o probetas limpias y secas para evitar una contaminación
cruzada. Se recomienda lavar el vaso con la muestra de análisis antes de la lectura.
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10. HISTORIAL

VERSIÓN VIGENCIA IDENTIFICACIÓN DE LOS

CAMBIOS

01 10/03/2016 Versión inicial

Inclusión formato F-SA-221

02 05/10/2021
Carta de Control

Nota: Verificar la vigencia del documento en el listado maestro de documentos.