Fisiología General

Universidad Autónoma de Chile

Primer semestre 2022

Guía. Potencial Electroquímico

Nombres integrantes:

Fecha:

Instrucciones.

Todos los integrantes del grupo deben resolver cada pregunta antes de pasar a la siguiente, no se reparta
el trabajo. Necesita revisar que sucede en cada pregunta para poder comprender el proceso descrito en
este taller.

El taller deberá ser resuelto durante la clase, se debe entregar un informe, pero no será evaluado, sin
embargo, en el siguiente taller se realizará un control de entrada con la discusión de este taller. Ponga
atención y participe activamente en él.

Basado en guía Dr. Guillermo Álvarez de Toledo Naranjo

Introducción.

El programa que ocuparemos fue desarrollado por Dr Alvarez de Toledo, está a disposición en:
http://www.secf.es/index.php/es/docencia/simulacionesordenador.

“Está hecho para aquel estudiante que quiera seguir las mismas pautas de aprendizaje que siguieron dos
“monstruos” de la Fisiología como Alan Hodgkin y Andrew Huxley.

Estas pautas o actitudes se pueden resumir con las “TRES P” de la investigación científica: Resolución de
Problemas, Paciencia y Persistencia. ¡No existe otro secreto para el éxito!”[1]

Este programa es un simulador del potencial de acción, primero Acostúmbrese como funciona, consulte a su
profesor/a si es necesario

El programa permite modificar las concentraciones intra y extracelular de los iones, aplicar drogas y modificar
la temperatura.

Para la ejecución de las actividades, se trabajará con un archivo Excel facilitado por su profesor.

[1]
Introducción programa POTAC.

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Los ejercicios a continuación buscan:

I. Revisar conceptos de potencial de membrana y potencial de acción en una célula excitable

1. Revise que las concentraciones iniciales de sodio extracelular/intracelular sean de 440/50 mM y de

potasio extracelular/intracelular sean 9,5/440 mM (ver condiciones basales del programa- para ello
mire el cuadro control a la derecha coloreado en rojo).

Fije las coordenadas: Estimulo 1; amplitud 30 A y duración 0.1 ms. Realice la estimulación y grabe el barrido.

Estimule nuevamente aumentando la duración a 0.2 ms.

Discuta las diferencias entre los potenciales de acción (curvas) generados, tenga presente
a. El segundo estímulo, ¿aparece antes/después de primero? (vea eje x de tiempo). Explique por
qué ocurre el cambio.
b. Compare la amplitud (altura- vea eje y) de los dos estímulos. ¿Es mayor/igual/menor en el
segundo potencial de acción que en el primero? Justifique su observación.
c. Indique en el primer potencial generado, ¿cuál es el potencial de membrana de la célula?
¿Cambia o no en el segundo potencial? ¿discuta por qué?

2. Vuelva a cero (cliquee botón CE)

Fije las coordenadas: Estimulo 1; amplitud 30 A y duración 0.2 ms. Revise que las concentraciones iniciales
de sodio extracelular/intracelular sean de 440/50 mM y de potasio extracelular/intracelular sean 9,5/440 mM
(ver condiciones basales del programa- para ello mire el cuadro control a la derecha coloreado en rojo). Realice
la estimulación y grabe el barrido.

Estimule nuevamente, pero cambie la concentración extracelular de sodio en las siguientes concentraciones:
400 mM, 300 mM, 200 mM y 100 mM (cada vez antes de volver a estimular guarde el barrido)

a. ¿El nuevo potencial de acción aparece antes/después del estímulo previo? (vea eje x de
tiempo). Explique por qué.
b. Compare la amplitud (altura- vea eje y) de los estímulos. ¿Es mayor/igual/menor en cada
potencial de acción generado, respecto al primero? ¿Qué está sucediendo en cada caso?
c. Observe el potencial de acción generado con 100 mM de sodio extracelular y discuta qué
estaría ocurriendo con la apertura de los primeros canales de sodio.
d. Discuta qué sucede con el tiempo de duración de cada potencial de acción generado. ¿Alguno
dura más/menos que otro o todos duran lo mismo? Explique este fenómeno.

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Los ejercicios a continuación buscan:

II. Revisar como los canales iónicos participan en el desarrollo de un potencial de acción

3. Vuelva a cero (cliquee botón CE)

Restablezca las condiciones de sodio que antes modificó; revise que las concentraciones iniciales de sodio
extracelular sean de 440 mM. Ahora fije las coordenadas: Estimulo 1; amplitud 30 A y duración 0.2 ms.
Realice la estimulación y grabe el barrido.

Aplique el bloqueador de canales de voltaje de Na+ tetrodotoxina (TTX) en concentraciones de 1 nM, 2 nM,
3 nM y 4 nM (cuadro control color verde). Realice la estimulación y grabe barrido en cada ocasión.

a. ¿Se observa la generación de potencial de acción, hay alguna diferencia con las concentraciones de
bloqueador utilizado?
b. ¿Qué etapa del potencial de acción se ve afectado? (considere el potencial de reposo, la
despolarización o la repolarización). Explique
c. A que concentración de TTX de las utilizadas en el ejercicio, usted puede decir que no hay más
canales de sodio disponibles ¿por qué?
d. Busque en internet qué es TTX, dónde la podemos encontrar y cuál es su efecto.

Antes de ir al siguiente ejercicio vuelva a dejar en 0 nM la concentración de TTX

4. Vuelva a cero (cliquee botón CE).

Fije las coordenadas: Estimulo 1; amplitud 30 A y duración 0.2 ms. Revise que las concentraciones iniciales
de sodio extracelular/intracelular sean de 440/50 mM y de potasio extracelular/intracelular sean 9,5/440 mM.
Realice la estimulación y grabe el barrido.

Aplique el bloqueador de canales de voltaje de K+ tetraetilaminio (TEA) en concentraciones de 10 mM, 20

mM, 30 mM y 40 mM y 50 mM (cuadro control color verde). Realice la estimulación y grabe barrido en cada
ocasión.

a. ¿Se observan diferencias en el proceso de despolarización en cada una de las condiciones

aplicadas? Discuta al respecto.
b. ¿Se observan diferencias en el proceso de repolarización en cada una de las condiciones aplicadas?
Discuta al respecto.
c. ¿A qué concentración de TEA no se observa hiperpolarización en el PA? Explique por qué ocurriría
ese fenómeno.
d. ¿Por qué a pesar de aumentar la concentración de TEA no se inhibe totalmente la salida de K+ de
la célula?
e. Busque en internet que es TEA, dónde la podemos encontrar y cuál es su efecto.

Antes de ir al siguiente ejercicio vuelva a dejar en 0 mM la concentración de TEA

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Los ejercicios a continuación buscan:

III. Revisar conceptos de Periodo refractarios

5. Vuelva a cero (cliquee botón CE).

Fije las coordenadas: Estimulo 1; amplitud 30 A y duración 0.2 ms. Revise que las concentraciones iniciales
de sodio extracelular/intracelular sean de 440/50 mM y de potasio extracelular/intracelular sean 9,5/440 mM.
Realice la estimulación y grabe el barrido. Tenga presente que un cuadro azul en eje x del gráfico representa
el estímulo.

Luego en Estimulo 2, mantenga la amplitud a 30 A y duración 0.2 ms (igual que el primer estímulo) y fije
sucesivamente periodos de retraso de 4, 6 y 12 ms (botón retraso entre estímulo). Realice la estimulación
entre cada periodo de retraso y grabe el barrido.
Fíjese en un nuevo cuadro azul (representa el segundo estimulo)
a. ¿Se observa un nuevo potencial de acción? ¿Por qué cree qué está ocurriendo lo observado?

6. Vuelva a cero (cliquee botón CE)

Fije las coordenadas: Estimulo 1; amplitud 30 A y duración 0.2 ms. Revise que las concentraciones iniciales
de sodio extracelular/intracelular sean de 440/50 mM y de potasio extracelular/intracelular sean 9,5/440 mM.

Luego en Estimulo 2, mantenga la duración en 0.2 ms, pero cambie la amplitud a 300 A y fije sucesivamente
periodos de retraso de 4, 6 y 12 ms (botón retraso entre estímulo). Realice la estimulación entre cada periodo
de retraso y grabe el barrido.

a. ¿Se genera un nuevo PA, cuando cambio el segundo estímulo a 300 A? ¿siempre ocurrió? ¿porque
se observa este fenómeno?

b. En base a este último ejercicio y al anterior, ¿en qué momento nos encontramos en el periodo
refractario absoluto y en el periodo refractario relativo? Justifique su respuesta.

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Actividad opcional
1. Las concentraciones intra y extracelulares iniciales de una solución donde se encuentra el axón de
calamar son las siguientes:

TABLA 1.

Na+ K+ Cl-

Concentración 440 10 440

extracelular (mM)
Concentración 50 440 14
intracelular (mM)

Potencial de 54.3 -95 -86.0

Equilibrio (mV)

Discuta:

a. ¿Por qué los valores del potencial de equilibrio son distintos en cada caso??
b. ¿Qué es el potencial de equilibrio de un ion?
c. Investigue, el potencial de equilibrio de un ion ¿es el mismo de la membrana de la célula que
ha sido estimulada?

Nota: Los(as) invitamos a modificar las condiciones como estimen conveniente; en especial, a
utilizar distintas concentraciones de bloqueadores de canales de Na+ y K+ y/o cambiar la
temperatura.
Reflexione que sucede con el potencial de acción en cada una de estas condiciones