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I. Aspectos organizacionales:
Facultad Facultad de Ciencias e Ingeniería
Departamento Biología
Carrera Biología
IV. Nivel:
● primer semestre
V. Competencias:
V.1. Capacidad para desarrollar habilidades técnicas en procedimientos básicos
de laboratorio.
V.2. Capacidad de identificar cualitativamente los componentes orgánicos en el
protoplasma celular.
V.3. Capacidad de síntesis en el reporte de laboratorio.
VI. Acciones:
Estimado estudiante con la realización de la presente BOA se pretende brindarle las
herramientas necesarias para el desarrollo de técnicas, normas en procedimientos básicos en
los laboratorios. A llevarse a cabo en la semana 4.
1. Entrar al laboratorio en forma ordenada, dejar las carteras, libros y otros objetos
personales en el lugar que se les indique para tal fin.
2. El acceso al laboratorio de prácticas sólo se permite a los alumnos que estén
realizando las prácticas. No se admiten visitas por razones de seguridad.
3. Cualquier estudiante que sufra de alguna deficiencia en sus defensas debe
comunicarlo previamente a los docentes.
4. Se usarán en todo momento las batas o gabacha de laboratorio las cuales deben estar
cerradas adecuadamente durante todo el procedimiento.
5. Limpiar y desinfectar las superficies de trabajo, antes de comenzar y al finalizar la
sesión práctica. (para esta actividad cada grupo debe contar con papel toalla, alcohol
al 70%).
El microscopio es uno de los instrumentos más utilizados por los microbiólogos. Este permite observar,
medir y cuantificar organismos muy pequeños. Existen varios tipos de microscopios entre los cuales se
encuentran el microscopio óptico, microscopio de barrido, el microscopio de contraste de fase, el
microscopio electrónico, los cuales poseen diferentes poderes de aumento y resolución. Los rangos
aproximados de magnificación se encuentran entre 4x y 40x, 100x – 25x, 400x-1500x, 10000x-160000x
(este último del microscopio electrónico), donde X hace referencia al tamaño real del objeto a observar.
El poder de amplificación se refiere al número de veces que se aumenta la imagen del objeto observado.
El poder de resolución es la capacidad de distinguir dos objetos que se encuentran muy cercanos entre sí.
Este depende de la longitud de onda de la luz empleada y de una propiedad del lente objetivo que se
conoce como apertura numérica (AN). Por ejemplo, el poder de resolución igual a 0,5 x es igual a la
longitud de onda/AN. Un poder de resolución de 0,45 µm, por ejemplo, significa que la mínima distancia
que debe existir entre dos objetos para que puedan distinguirse uno del otro es de 0,45 µm. Como la
longitud de onda de la luz empleada se fija dentro de límites estrechos, el poder de resolución solo puede
aumentarse mejorando la AN y esta es la medida del ángulo del máximo cono de luz que puede penetrar
en el lente del objetivo.
Los tres objetivos de menor aumento: 4x, 10x y 40x se denominan objetivos secos, porque entre ellos y el
objeto por observar solo hay una capa de aire. La AN de estos objetivos es menor o igual a 1, O. En
cambio, el objetivo de mayor aumento (100 x), objetivo de inmersión, está diseñado para usarse inmerso
dentro de un aceite que posee un índice de refracción mayor que el del aire (aceite de inmersión), y puede
tener una apertura numérica superior a 1 ,2 con un poder de resolución bastante mayor.
Puede decirse que, usando el objetivo de inmersión, con un buen ajuste de la luz, el poder de resolución
obtenido es aproximadamente 0,2 µm. Esto permitirá reconocer bacilos cortos (cocobacilos), como los de
Escherichia coli, y esferas grandes como los cocos de Staphylococcus aureus. Existen algunos bacilos
cortos, pequeños como las células de Acinetobacter spp., que tienen un poder de resolución menor, por lo
que con un microscopio de luz no podríamos precisar si se trata de un bacilo o un coco.
El objetivo produce una imagen del objeto que a su vez es amplificada por el ocular. El ocular es la lente
por la cual se observa el objeto. El poder de amplificación total del microscopio está dado por la
combinación del ocular y el objetivo que se esté usando. Por ejemplo, un objetivo 40x junto con un
ocular 10x producen una imagen del objeto ampliada 400 veces. Las bacterias pueden observarse con el
objetivo de 40x, pero su identificación solo se logra utilizando el objetivo de inmersión.
Sistema de iluminación
La luz que entra al condensador es regulada por medio del diafragma. Si el diafragma está totalmente
abierto, una parte de la luz que llega al objetivo se pierde por los lados de este, produciendo brillos que
reducen la claridad de la imagen. El diafragma debe ajustarse de tal manera que la luz que llegue al
objeto sea suficiente para su observación, sin que se produzca brillo. Cada objeto tiene su propio grado de
contraste por lo que requiere un ajuste diferente de luz.
Sistema mecánico
El sistema de soporte del microscopio consta de una base y un brazo. En la parte inferior del brazo,
existen dos tornillos que sirven para enfocar la imagen: el tornillo macrométrico produce
desplazamientos grandes del sistema de objetivos con lo que se puede conseguir una primera imagen del
objeto; el tornillo micrométrico produce desplazamientos pequeños, con lo que se logra precisar el
enfoque.
La platina es una placa sobre la cual se coloca el objeto por observar. Encima de esta platina, hay un
sistema de carro con unas pinzas que aseguran la lámina que se está observando. Este sistema de carro
permite desplazar la lámina de izquierda a derecha o de adelante hacia atrás y se maneja por medio de
tornillos que se encuentran ubicados debajo de la platina.
Cerca de los tornillos macrométrico y micrométrico se encuentra el tornillo de ajuste del condensador,
que permite su desplazamiento hacia arriba y hacia abajo. Sobre la base del microscopio hay un botón
que permite regular la intensidad de luz que proviene de la lámpara.
Otros tipos de microscopios de luz
Además del microscopio de luz de campo claro que acabamos de describir, existen otros tipos de
microscopios.
Recomendaciones Generales:
Antes de la realización de este laboratorio el estudiante deberá leer con anticipación los documentos
complementarios además de haber leído integralmente la presente BOA.
Para permitir el acceso de estudiantes al laboratorio este debe de cumplir con las normas de bioseguridad y
portar el presente protocolo.
Mangos de Piñuela morada Hoja de bisturí N°22 para mango N°4 (una por
Bisturí subgrupo)
Bandejas
Microscopios
IX.2. Procedimientos
IX.2.1. Identifique de las partes del microscopio (acápite VIII.3.1).
IX.2.2. En este ejercicio se aprenderá a usar correctamente el microscopio compuesto y a obtener
la imagen más clara y detallada que el instrumento puede brindar.
IX.2.2.1.Enchufe el microscopio, encienda el iluminador y ajuste la intensidad de luz a un nivel cómodo.
IX.2.3. Ajuste la distancia interpupilar para adaptar la distancia entre los lentes oculares a la distancia
entre sus ojos. La distancia interpupilar varía para cada persona y por lo tanto debe ajustarse cada
vez que se use el microscopio.
IX.2.4. Preparaciones de muestras con cebolla:
IX.2.4.1.Con la pinza o en su defecto la uña, desprenda la tenue capa delgada y transparente adherida a la
cara interna (cóncava) de la cebolla.
IX.2.4.2.Deposítela en el portaobjeto, extiéndala evitando que se formen arrugas, adiciónele una gota de
agua, coloque el cubreobjeto procurando que no se formen burbujas.
IX.2.4.3.Coloque la muestra en la platina con el lente objetivo de 4x, en posición vertical. Abra la pinza
de la platina mecánica, monte la muestra en el centro sin tocar el lente objetivo con la muestra y
cierre la pinza suavemente.
IX.3. Resultados
IX.3.1. Identificación de los componentes mecánicos y ópticos de un microscopio de campo
claro o de luz
IX.4. Conclusión:
X. RESULTADOS ESPERADOS
XI. EVALUACIÓN
Conceptual
Participación