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UCAYALI
FACULTAD DE MEDICINA HUMANA
ESCUELA DE MEDICINA HUMANA
CÁTEDRA DE BIOQUÍMICA
GUÍA DE PRÁCTICAS DE LABORATORIO DE BIOQUÍMICA
CICLO:
AÑO 2024
PUCALLPA- PERU
INTRODUCCION
Con el presente documento se pretende ofrecer una guía de prácticas de laboratorio que
cubran y complementen la parte teórica del Curso Bioquímica de la Facultad de Medicina de la
Universidad Nacional de Ucayali.
En este curso el alumno basándose en la curiosidad innata del ser humano, adentrará en el
conocimiento profundo de la Bioquímica, a fin de obtener la base necesaria que le permita
enfrentar los cursos posteriores que se desarrollarán en los siguientes años de su carrera. El
objeto de esta guía es encaminar al alumno, bajo la dirección del Docente, por el mundo
bioquímico desde lo más simple a lo complejo; la guía consta de una parte introductoria, con
indicaciones generales a tomar en cuenta en todas las prácticas, y las indicaciones
específicas por tema a desarrollar.
El laboratorio debe ser un lugar seguro para trabajar donde no se deben permitir
descuidos e indisciplina. Para ello se tendrán siempre presente los posibles riesgos
asociados al trabajo con materiales peligrosos. Nunca hay excusa para los accidentes en
un laboratorio bien equipado en el cual trabaja personal bien informado. A continuación,
se exponen una serie de normas que deben conocerse y seguirse en el laboratorio.
1. PROCEDIMIENTO
7. Una vez que comienza la práctica no se podrá salir del laboratorio, sin
causa justificada, salvo excepciones y previa autorización de las
personas responsables.
8. Los estudiantes deben revisar los antecedentes conceptuales y la guía
de práctica correspondiente a la sesión previa al inicio de la misma.
9. Cada grupo de práctica (conformado por estudiantes) deberá elegir un
representante quien recogerá el material de la práctica y lo devolverá
al fin de la misma.
10. Todo el grupo de práctica en el laboratorio es responsable por la
rotura y/o deterioro de material, reactivo y/o equipos del laboratorio
durante el desarrollo de las prácticas.
1.4 Cuidado para disección y estudios del cuerpo humano y sus órganos
1. Los órganos humanos empleados en los Laboratorios son restos de
personas que se utilizan con fines educativos y para investigación,
por lo que deben ser tratados con respeto.
2. Los tejidos humanos y otros materiales obtenidos durante la
disección del cuerpo donado (esto incluye prótesis, como
articulaciones artificiales, marcapasos, válvulas del corazón, etc.) no
deben ser extraídos del laboratorio bajo ninguna circunstancia.
3. No se debe transferir las partes del cuerpo de una mesa de trabajo
a otra.
4. Después de cada disección, el cuerpo donado debe envolverse con
los respectivos cobertores especialmente diseñados para
mantenerlo humectado y en buen estado.
2. Normas de trabajo
2. FUNDAMENTO:
El proceso de identificación y evaluación de los riesgos específicos
a los que se encuentran expuestos los responsables de los
laboratorios, docentes y estudiantes, es el punto de partida que
establece la necesidad de contar con protocolos de seguridad para
la realización de procedimientos y procesos, que permitirán el
manejo adecuado de las sustancias químicas , biológicas y residuos
producidos durante la ejecución de las prácticas de laboratorio, por
esta razón durante la práctica los estudiantes analizarán y aplicarán
medidas de seguridad y así evitar accidentes durante la ejecución
de prácticas.
3. MATERIALES:
Protocolo de seguridad de laboratorios.
Plan de manejo de residuos.
4. PROCEDIMIENTO:
Analizarán el protocolo de seguridad de laboratorios y el
plan de manejo de residuos.
Conformación de grupos de trabajo
El docente explica la importancia del cumplimiento de las
normas de bioseguridad dentro del laboratorio.
5. RESULTADO:
Los estudiantes elaboran un informe y lo presenta la siguiente práctica.
PRÁCTICA N°02
Material para Contener (To Contain: TC): Este tipo de material agrupa a los recipientes que se
emplean para contener o almacenar líquidos, soluciones o productos de reacciones como
precipitados o cristales. Algunos pueden ser fabricados para contener volúmenes exactos sin
posibilidad de medir volúmenes diversos, a esta categoría pertenecen:
o Vasos de precipitados
o Matraz Aforado
Material para Entregar o Dispensar (To Deliverate : TD): Este tipo de material se utiliza para
medir o transferir volúmenes con cierta precisión, ésta característica está dada en la clasificación
del material de acuerdo a la Oficina Nacional de Estándares o patrones de Norteamérica siendo la
Clase A más exacta por estar certificado, mientras que la Clase B es menos exacta. A esta
clasificación pertenece:
o Buretas
o Pipetas
o Probetas
Vasos de Precipitados
Son recipientes cilíndricos de vidrio, abiertos en un extremo y el otro cerrado con fondo plano. Son
fabricados en diversos tamaños y capacidades con o sin labio o pico de vertido, con o sin
graduación. Se llaman vasos de precipitados por qué en un inicio fueron utilizados para llevar a
cabo reacciones de precipitaciones, hoy en día se utilizan para contener líquidos, sólidos, realizar
reacciones diversas, recipiente para calentar o enfriar.
Generalmente tienen un 5% de tolerancia, por lo cual no se utiliza para medir volúmenes exactos.
Tubos de Ensayo
Son recipientes cilíndricos cerrados de un solo extremo de manera casi esférica. Se pueden
adquirir de diversos tamaños cuyas medidas indican el diámetro y la longitud en milímetros,
siempre en este orden, los más comunes son los siguientes:
Los tubos son fabricados con vidrio de borosilicato y pueden utilizarse para efectuar reacciones,
calentar, hacer pruebas de solubilidad, pruebas químicas, medios de cultivo, etc.
También conocidos como matraz volumétrico. Posee una forma de pera con un cuello largo y una
marca de aforo, lo que indica que han sido calibrados para contener un volumen exacto a cierta
temperatura. Los volúmenes van desde 5 mililitros hasta 5 litros.
El matraz aforado se utiliza para preparar soluciones estándar o de concentración exacta y para
diluir muestras. La tolerancia va de 0.02 a 0.5 mL según la capacidad del matraz, a mayor volumen
mayor tolerancia.
Pipetas
Son tubos de diámetro uniforme o ensanchado con un extremo terminado en punta, pueden
estar graduadas o con una sola marca (línea de aforo) de acuerdo a estas diferencias podemos
clasificarlas como Graduadas y Volumétricas.
Las pipetas graduadas permiten medir volúmenes diferenciales para lo cual tienen una serie de
líneas a lo largo de la pipeta, resaltando las unidades del resto. Son fabricadas en diferentes
capacidades y precisiones por ejemplo las pipetas de 5 y 10 mL poseen una precisión de 0.1 mL
mientras que las de 1 y 2 mL pueden tener una precisión de 0.1 o 0.01 mL.
Las pipetas pueden tener la graduación hasta la punta (pipeta terminal) o antes (pipeta
subterminal), la pipeta terminal, también llamada serológica, requiere que le soplen para verter el
volumen completo.
Las pipetas volumétricas poseen una ampolla y marca de aforo que nos indica hasta donde debe
llevarse el líquido para tener el volumen exacto, no permite medir volúmenes inferiores a la
capacidad de ésta. La tolerancia de estas pipetas va desde 0.006 hasta 0.08 mL.
Por último, es importante saber que existen pipetas automáticas que nos permiten medir
volúmenes más precisos, éstas pueden ser de volumen fijo o volumen variable,
Conocer los volúmenes mínimo y máximo de la punta intercambiable, en función del color.
Probeta
Es un tubo de diámetro uniforme y cerrado por un extremo donde se tiene una base fija o
removible, con capacidades que van de 10 mL a 2.0 L, con o sin labio de vertido y tapón. Poseen
marcas que permiten verter volúmenes inferiores al total de la probeta.
La exactitud de las probetas es inferior a las pipetas y bureta, por lo que se debe utilizar para
preparar soluciones cuya exactitud no sea un factor determinante.
Perilla de Seguridad
Este tipo de perilla también se conoce como perilla de tres vías o propipeta y tiene la función de
facilitar el uso de las pipetas graduadas y volumétricas mediante la entrada y salida de aire.
2. Extraer totalmente el aire de la perilla, para ello presionamos el punto A al mismo tiempo que
apretamos la parte central (C) de la perilla.
4. Para verter el líquido, presionamos E hasta haber liberado al recipiente el volumen deseado.
OBJETIVOS DE LA PRÁCTICA:
Identificar algunos de los materiales básicos de laboratorio y relacionar los nombres con su uso
MATERIALES:
Matraz Erlenmeyer
Vasos precipitados
Probetas
Buretas
Bureta
Tubo de ensayo
Vidrio de reloj
Embudo
Fiola
Embudos
Goteros
Cápsula de porcelana
Crisoles
Soporte vertical
Aro metálico
Tela metálica
Triángulo
Pinzas
Gradillas
Mechero de alcohol
Mechero Bunsen
Pinzas metálicas
Pinzas de madera
Mariposa
Frasco lavador
Escobilla
Papel de filtro
Mortero
Pinza de 3 dedos
Trípode
Espátula
Tapón de hule
Frasco reactivo
Frasco plástico
Frasco ámbar
EQUIPOS:
Balanza
Termómetro
Baño maría
Autoclaves
Phmétros
Campana de extracción
Centrífugas
Fotocolorímetros.
Referencias
Rivas, MJ. 2003. Introducción al trabajo de laboratorio. México, D.F.: Facultad de Estudios
Superiores Zaragoza, UNAM
https://guiadepracticas.wordpress.com/2017/09/29/reconocimiento-de-material-de-
laboratorio/
PRÁCTICA N°03
pH
SOLUCIÓN COLORIMETRÍA pHmetro
NaHCO3 0.05M.
Refresco
Yogurt
Miel
Leche
Jugo
Pisco
Zumo de lión
CONCLUSIÓN:
Si queremos tener valores aproximados podemos usar tiras colorimétricas comparativas,
indicadores y papeles coloreados para determinar el pH, como lo son las tiras reactivas
usadas en el experimento anterior; pero, sólo los métodos electroquímicos son los que
ofrecen resultados más exactos. Puesto que lo hemos comprobado con el potenciómetro
que sus resultados son mucho más concretos, ya que este instrumento es más preciso que
la tira reactiva que es un método más rápido y simple>; pero, da valores aproximados
solamente. En el pasado experimento pudimos identificar las bebidas y /o soluciones
ácidas o las alcalinas, dependiendo de qué tipo e mezcla eran.
REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS:
1) Daniel (18 de agosto el 2009) . Soluciones Neutras, ácidas y básicas. Mayo 2018
2) De La Cruz Villanueva.Potencial de Hidrógeno. Mi Ciencia Química. Diciembre
2011.
3) Hispavista. Buffer de soluciones. Química Cotidiana . Mayo 2018.
PRÁCTICA N° 04
“DESNATURALIZACIÓN DE PROTEINAS”
DESNATURALIZACIÓN DE PROTEÍNAS
Introducción
Material necesario
• La clara de un huevo.
• Leche.
• Vinagre.
Experimento 1
¿Qué ha sucedido?
Las cadenas de proteínas que hay en la clara de huevo, denominadas proteínas globulares,
se encuentran enrolladas adoptando una forma esférica. Al añadir etanol ocurre lo mismo que
cuando se fríe o cuece un huevo, las cadenas de proteína se desenrollan y se forman enlaces que
unen unas cadenas con otras. Este cambio de estructura da a la clara de huevo la consistencia y
color que se observa en un huevo cocinado. En las siguientes figuras se muestra, en primer lugar,
la clara de huevo en el vaso, a continuación, el efecto de la adición de etanol transcurrida media
hora y, por último, el resultado tras 24 h.
Experimento 2
¿Qué ha sucedido?
De forma similar a lo que ocurre con el huevo, el ácido presente en el vinagre (ácido
acético) o en el limón (ácido cítrico) es capaz de producir la desnaturalización de la proteína
denominada caseína que hay en la leche (en la figura observamos el efecto del vinagre sobre la
leche transcurridas 24 h).
PRÁCTICA N° 5
OBJETIVOS:
FUNDAMENTO TEORICO:
En cada organismo la fuente esencial de la información biológica son los ácidos nucleicos.
La forma y la actividad de las células están determinadas en gran medida por las instrucciones
genéticas contenidas en el ADN (o ARN de algún virus). Dos clases de ácidos nucleicos ADN y ARN,
almacenan información y la hacen accesible para la célula.
El análisis de los genes mediante varias técnicas, que de forma general se llaman “biología
molecular”, permiten diagnosticar con rapidez y precisión enfermedades hereditarias, infecciosas
y neoplásicas.
2 fresas
35 mL. de solución de extracción (1 mL de detergente concentrado + 70
mL de H2O + 10 g NaCl)
Etanol 95% helado
2 vasos Beaker de 250 mL.
1 probeta de 50 mL
Bagueta
Papel filtro
Baño maría a 60°C
Hielo molido en tecnopor.
Equipos necesarios
Baño maría
PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL:
2. Mezclar las fresas con la Solución de extracción y llevar al baño maría por 15 min.
3. Retirar la mezcla del baño y enfriar rápidamente colocando el Beaker en el baño de hielo por 5
min.
5. Adicionar al filtrado, dos volúmenes de etanol helado, dejando escurrir por el borde. Observar
que se formen dos fases, la superior alcohólica y la inferior acuosa en donde el ADN precipita en la
interface.
6. Sumergir el bagueta en el Beaker y con movimientos circulares, mezclar las fases. Se forman
hilos blanquecinos, que son aglomerados de moléculas de ADN.
ANOTE Y ESQUEMATICE
2) ¿Cuáles son las fuerzas que estabilizan las estructuras de los ácidos nucleicos? Explica.
BIBLIOGRAFÍA
Alberts, B., Jonson, A., Lewis, J., Raff, M., Roberts, K., Walter, W. Biología Molecular de la
Célula. 4ta Edición. Garland Science, Taylor & Francis Group, Londres.
Lodish, H., Berk, A., Matsudaira, P., Kaiser, C.,Krieger,M.,Darnell, J.,Scott,M. 2008. Biología
Celular y Molecular. 5ta Edición. Editorial Médica Panamericana.
Lehninger, Albert; Nelson, David. L.; Mitchael M. Cox. 2006. Principios de Bioquímica. 4 tª
Edición. Ediciones Omega.
PRÁCTICA N°06
REACCIONES ENZIMÁTICAS
1. Objetivos
• Reconocer a las enzimas como proteínas que aceleran y controlan las reacciones
químicas en los seres vivos.
• Identificar la presencia de diversas clases de enzimas en tejidos animales y vegetales.
• Aplicar los componentes teóricos en las reacciones enzimáticas observadas.
• Discutir la presencia de inhibidores enzimáticos que pueden preservar algunos
alimentos.
2. Marco Teórico
Un automóvil obtiene su energía de la oxidación del hidrocarburo gasolina a dióxido de
carbono y agua en una explosión controlada dentro de un motor en el que los gases
pueden alcanzar temperaturas de 2200 ºC. En contraste, la célula viva obtiene energía
oxidando el carbohidrato glucosa a dióxido de carbono y agua a una temperatura (en el
ser humano) de 37ºC.1
El ingrediente secreto en los organismos vivos es la catálisis, un proceso llevado a cabo
por enzimas proteínicas. Una reacción que requiere muchas horas para completarse no
puede ser útil, desde el punto de vista metabólico, para una bacteria que ha de
reproducirse en 20 minutos, o para una célula nerviosa humana que debe responder a un
estímulo de forma instantánea.
De hecho, la vida aprovecha hábilmente el hecho de que la mayoría de las reacciones
deban estar catalizadas.
Un catalizador es una sustancia que aumenta la rapidez o la velocidad de la reacción
química, sin verse alterada ella misma en el proceso global. La sustancia sobre la que
actúa una enzima se denomina sustrato de esa enzima. Y lo que se obtiene es
denominado producto de la reacción.
Podemos apreciar el poder de la catálisis enzimática con un ejemplo: la descomposición
del peróxido de hidrógeno en agua y oxígeno:
2H2O2 2H2O +O2
Esta reacción, aunque muy favorecida termodinámicamente, es muy lenta, a menos que
sea catalizada. Se puede comprar una botella de una solución de H 2O2 (agua oxigenada) y
guardarla en un armario durante muchos meses antes de que se degrade. Sin embargo, si
añadiera un trocito de ión férrico, observaría que la velocidad de la reacción aumenta
unas 1000 veces. La proteína hemoglobina que contienen hierro, es aún más eficaz para
incrementar la velocidad de esta reacción. Si uno aplica la solución de peróxido de
hidrógeno a un corte de un dedo, se observa un burbujeo inmediato del O 2 liberado: la
reacción se está produciendo ahora aproximadamente un millón de veces más
rápidamente que el proceso sin catalizar. Pero pueden alcanzarse velocidades aún más
rápidas. La catalasa una enzima presente en muchas células, aumenta la velocidad de
descomposición del H2O2 sin catalizar aproximadamente 1000 millones de veces. Algunas
reacciones celulares producen peróxido de hidrógeno que es un oxidante peligroso, por lo
que la catalasa se ha perfeccionado para defenderse de él.
Este ejemplo muestra que la velocidad de una reacción favorable depende en gran
medida, de que exista o no un catalizador y de la naturaleza del mismo.2
3. Materiales
Papa.
Cuchillo.
Manzana.
Mortero.
Cuchara o espátula.
Portaobjetos.
Pipeta Pasteur.
1 Vaso de precipitados 50 ml.
ÍNDICE