Subsecretaría de Educación Superior

TECNOLÓGICO NACIONAL DE MÉXICO

Instituto Tecnológico de Pachuca

INSTITUTO TECNOLÓGICO DE PACHUCA

Departamento de Ingeniería Química
Análisis instrumental
4Y6

Practica No. 12
Cromatografía en papel

Tema 3
Métodos cromatográficos
Equipo No. 1

Presenta:
Domínguez Mar Ángel Ernesto
Hernández Serna Vanessa
Romero Solórzano Perla Jazmín

Pachuca de Soto Hidalgo a 06 de Diciembre del 2018

Carretera México-Pachuca Km. 87.5, Col. Venta Prieta, Pachuca, Hidalgo. C.P. 42080

1 7113140, 7115119,
A. P. 276, Tels. : (01 771) 7113073, 7113596,
 ÍNDICE

Datos generales.............................................................................................................3

Competencia específica.................................................................................................3

Resultados..................................................................................................................... 3

Conclusiones y recomendaciones..................................................................................3

Fuentes de información..................................................................................................3

Glosario.......................................................................................................................... 4

Anexos........................................................................................................................... 6

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1.- Datos generales

Asignatura: Análisis Instrumental

Unidad III
Tema 3
Métodos cromatográficos
Practica No.12: Cromatografía en papel.

2.- Competencia especifica

Identifica los componentes de una mezcla de polvo para preparar bebidas

mediante su separación por medio de la cromatografía en papel, para determinar
la combinación de colorantes empleada en estos productos.

3.- Resultados

Con el método de cromatografía en papel pudimos observar en nuestra solución

saturada colorantes como rojo allura y azul brillante, esto con ayuda de la solución
isopropanol (35%) y agua (15%).

4.- Conclusiones y recomendaciones

la característica de la cromatografía en papel es la presencia de dos fases, la fase

estacionaria y la fase móvil, en nuestra practica pudimos observar que la clave de
separación en este tipo de cromatografía que la velocidad con la que se mueve
cada sustancia depende de su afinidad relativa por ambas fases. En nuestro caso
pudimos observar que la fase móvil fue el colorante vegetal rojo allura y la fase
estacionaria fue el colorante vegetal azul brillante.

5.- Fuentes de información

1. Bruice, P.Y., Química Orgánica. Pearson Educación, México, 1998.

2. McMurry, J., Química Orgánica, Cengage Learning, México, 2008.
3. Morrison R. T., Byd, R. N., Pearson Educación, México, 1998.

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6.- Glosario

1. Cromatografía: Método de análisis que permite la separación de gases o

líquidos de una mezcla por adsorción selectiva, produciendo manchas
diferentemente coloreadas en el medio adsorbente; está basado en la
diferente velocidad con la que se mueve cada fluido a través de una
sustancia porosa.
2. Cromatografía en papel: las interacciones del soluto con el papel hacen
que los compuestos se desplacen a velocidades diferentes.
Una pequeña mancha de disolución que contiene la muestra se aplica
sobre una tira de papel cromatográfico a una distancia aproximada de un
centímetro de la base. La muestra es adsorbida en el papel. Esto significa
que la muestra entra en contacto con el papel y puede establecer
interacciones.
3. Fase estacionaria: avanza lentamente (los más retenidos). Retrasa el paso
de los componentes, de forma que los componentes la atraviesan a
diferentes velocidades y se separan en el tiempo.
4. Fase móvil: avanza con mayor rapidez (menos retenidos). Fluye a través de
una fase estacionaria, arrastrando con ella a los compuestos de la mezcla.
5. Afinidad de separación: Los métodos de separación de mezclas son los
procesos físicos, que pueden separar los componentes que la conforman,
consiste en que una mezcla se somete a un procedimiento que la separa en
dos o más sustancias diferentes. En esta operación las sustancias
mantienen su identidad si algún cambio en sus propiedades químicas.
6. Medio cromatografico: Constituida simplemente por una tira de papel de
filtro. La muestra se deposita en un extremo colocando pequeñas gotas de
la disolución y evaporando el disolvente. Luego el disolvente empleado
como fase móvil se hace ascender por capilaridad.
7. Tiempo de retención: tiempo que tarda cada sustancia en abandonar el
sistema cromatográfico. Esta retención se ejerce en función de las
características moleculares de cada compuesto.
8. Elución: proceso por el cual todos los solutos terminan por abandonar la
columna.
9. Factor de retención: el cual se define como el cociente de dividir el
recorrido de la sustancia por el disolvente, esto es, la distancia media desde
el origen hasta el centro de la mancha (X) dividida por la distancia que
media desde el origen hasta el frente del disolvente (S).
10. Resistencia a la transferencia de materia: Se debe a que al pasar la fase
móvil por un canal entre las partículas de la fase estacionaria, no todas las
moléculas del soluto se transfieren a igual velocidad entre la fase móvil y la
fase estacionaria en cada plato teórico.
11. Cromatografía de intercambio iónico: Se trata de una cromatografía en
columna que utiliza una fase estacionaria con sustancias con componentes
con carga eléctrica. Se utiliza para separar compuestos cargados,
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 incluyendo aminoácidos, péptidos y proteínas. La fase estacionaria es
normalmente una resina de intercambio iónico que contiene grupos
funcionales cargados que interaccionan con grupos cargados de signo
opuesto del compuesto que se quiere retener.

12. Cromatografía de líquidos de alta resolución (HPLC): Se suele

denominar HPLC, y es una forma de cromatografía en columna que se
utiliza a menudo en bioquímica y química analítica. La muestra problema es
forzada a pasar a través de una columna (fase estacionaria) por un líquido
(fase móvil) a elevada presión, lo que disminuye el tiempo que los
componentes separados permanecen en la fase estacionaria, y por lo tanto,
el tiempo de difusión dentro la columna. En la salida de la comuna existe un
detector que indica la cantidad de soluto que está saliendo. Este proceso de
difusión dentro la columna comporta la aparición de picos anchos y pérdida
de resolución.
13. Cromatografía de permeación en gel (GPC): La cromatografía de
permeación en gel se conoce también como cromatografía de exclusión por
tamaño, porque separa las moléculas según su dimensión. Las moléculas
pequeñas entran en un medio poroso y por tanto les cuesta más salir de la
columna, dejando las partículas más grandes eluir primero. La GPC es una
técnica muy empleada para determinar la distribución del peso molecular en
polímeros, aunque suele proporcionar baja resolución.

14. Cromatografía de afinidad: La cromatografía de afinidad se basa en

interacciones no covalentes selectivas entre la muestra y moléculas
específicas. Es muy específica, pero no muy consistente. Se utiliza mucho
en bioquímica para la purificación de proteínas.
15. Cromatografía gas-líquido: a cromatografía gas-líquido se fundamenta en
el reparto del equilibrio de la muestra a analizar entre una fase estacionaria
líquida y una fase móvil gaseosa. Es una técnica útil para una gran variedad
de mezclas no polares, pero es poco eficiente para moléculas termolábiles.
16. HPLC: Cromatografía líquida de alta resolución Requiere de instrumental
especial que permita trabajar con las altas presiones requeridas.
17. Cromatograma: Diagrama donde se representan los resultados de la
separación de una mezcla mediante técnicas cromatográficas. En el eje x se
representa el valor medido de alguna propiedad física a partir de la cual se
ha detectado la presencia de una sustancia, o bien una unidad relativa que
la cuantifica, mientras que en el de las y el tiempo.

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7.- Anexos

Cromatografía en
papel.

Preparar la solución de isopropanol y agua.

Preparar una mezcla saturada con el

saborizante artificial en el tubo de ensayo.

Con ayuda de un vaso de precipitado poner

a fuego la mezcla saturada y esperar a que
el saborizante se disuelva mejor.

Con un tubo capilar tomar de la muestra

saturada.

En el papel filtro medir 1.5 cm de la base

final y colocar la muestra tomada con el tubo
capilar.

Con ayuda de una aguja e hilo colgar el

papel filtro en una base fija.

Poner en un vaso de precipitado la solución

de isopropanol de manera que toque muy
poco el papel filtro para que vaya
absorbiendo de a poco.

Observar cómo se separa el colorante por

medio del papel filtro.
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Cuestionario

1. Explique el fundamento de la separación de una mezcla por

cromatografía
Es la separación de los diferentes componentes de una mezcla que se
encuentran en un líquido o gas, es el resultado de las diferentes
interacciones de los solutos a medida que se desplazan alrededor o sobre
una sustancia líquida o sólida (la fase estacionaria). Las diversas técnicas
para la separación de mezclas complejas se fundamentan en la diversidad
de afinidades de las substancias por un medio móvil gas o líquido y un
medio absorbente estacionario (papel, gelatina, alúmina o sílice) a través
del cual circulan.
 
2. ¿Cuáles son las diferencias fundamentales entre cromatografía en
columna, en placa delgada y en papel?
 Cromatografía en papel: La muestra se deposita en un extremo
colocando pequeñas gotas de la disolución y evaporando el
disolvente. Luego el disolvente empleado como fase móvil se hace
ascender por capilaridad. La separación se realiza en función de la
afinidad de los solutos con las dos fases, las más solubles en agua
se quedarán cerca del punto donde se aplicó la muestra, y las menos
solubles en agua y más solubles en el disolvente llegarán más lejos.
Las sustancias separadas se identifican mediante diversos
procedimientos físicos o químicos
 Cromatografía en placa delgada: Se basa en la preparación de una
capa, uniforme, de un adsorbente mantenido sobre una placa de
vidrio u otro soporte. Los requisitos esenciales son, pues, un
adsorbente, placas de vidrio, un dispositivo que mantenga las placas
durante la extensión, otro para aplicar la capa de adsorbente, y una
cámara en la que se desarrollen las placas cubiertas.
 Cromatografía en columna: Utiliza una columna de vidrio vertical que
se llena con un soporte sólido adsorbente (fase estacionaria: los más
utilizados son gel de sílice (SiO2) y alúmina (Al2O3)). La muestra
que se quiere separar se deposita en la parte superior de este
soporte. El resto de la columna se llena con el eluyente (disolvente
que constituye la fase móvil) que, por efecto de la gravedad, hace
mover la muestra a través de la columna. Se establece un equilibrio
entre el soluto adsorbido en la fase estacionaria y el disolvente
eluyente que fluye por la columna.

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3. Mencione los principales usos, ventajas y desventajas de los
diferentes tipos de cromatografía

Ventajas Desventajas
o Velocidad de análisis o Instrumentación
o Alta resolución costosa
o Resultados o Difícil análisis
cuantitativos cualitativo
o Buena sensibilidad o No existe detector
o Automatización universal y sensible
o Amplio espectro de o Elevado costo de
aplicaciones operación
4. ¿Cómo se define, que utilidad y qué limitaciones tiene la relación
frontal (Rf)?
La relación entre las distancias recorridas por el soluto y por el eluyente
desde el origen de la placa se conoce como Rf, y tiene un valor constante
para cada compuesto en unas condiciones cromatográficas determinadas
(adsorbente, disolvente, tamaño de la cubeta, temperatura, etc.). Debido a
que es prácticamente imposible reproducir exactamente las condiciones
experimentales, la comparación de una muestra con otra debe realizarse
eluyendo ambas en la misma placa.

5. ¿Cuál es la expresión mediante la cual se calcula el R f?

Distancia recorrida por el centro de la mancha
Rf=
Distancia recorrida por el frente del solvente