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F. ¿Qué les motivó a investigar? Señalen la situación o problemática
sobre la cual se desarrolla esta investigación, considerando los antecedentes y el
problema en su entorno. Es recomendable que hagan mención a información obtenida
de diferentes fuentes bibliográficas consultadas
Informados sobre la capacidad antimicrobiana del cobre y de que su uso como bactericida
es limitado para la industria de alimentos por su reactividad con agentes ácidos y oxidantes,
no es tan durable como el acero inoxidable y forma una pátina que podría percibirse como
indeseable (http://www.cobrebactericida.org), nos propusimos investigar estas propiedades
en las monedas de uso cotidiano confeccionadas con aleaciones de cobre, con diferentes
porcentajes de este metal, comparar cuál de ellas es más efectiva como bactericida y
determinar de qué manera reaccionan frente a la oxidación en contacto con alimentos de
uso masivo. La capacidad antimicrobiana de las aleaciones de cobre fue reconocida en
2008 por U.S Environmental Protection Agency (EPA) que aprobó el registro de 275
aleaciones. (http://www.epa.gov/pesticides/factsheets/copper-alloy-products.htm).
Probablemente, dependiendo de los resultados, se abrirían nuevas oportunidades para el
uso de las aleaciones de cobre en el mercado de la industria alimentaria al mejorar o no
presentar las características reactivas del cobre y tener análogamente propiedades
antimicrobianas. Además podríamos derribar, en alguna medida, el mito de que las
monedas son una fuente de propagación y contagio bacteriano.
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H.- Diseño y metodología de investigación. Realicen una
descripción detallada (paso a paso) de cómo fue realizada la investigación. Dentro de
esta descripción consideren: Qué se está midiendo, cómo se está midiendo, número de
muestras, uso de grupo control, cada cuánto tiempo se realizan las mediciones, entre
otras. Recuerden que “Sólo se acepta el nuevo conocimiento, cuando el investigador indica
claramente el camino recorrido para obtener su descubrimiento, de modo que otros puedan
reproducir y verificar las observaciones y evidencias obtenidas”.
Experiencia 1:
Eficiencia bactericida de aleaciones de cobre.
Se seleccionaron monedas de diferente porcentaje de cobre y se le asignaron la siguiente
simbología:
- Aleación A: 92% de cobre; 6% de Níquel; 2% de Aluminio
- Aleación B: 89% de Cobre; 5% de Aluminio; 5% de Cinc; 1% de Estaño.
- Aleación C: 75% de cobre; 25% de Níquel.
- Aleación D: 70% de Cobre; 24% de Cinc; 6% de Níquel.
Las monedas se esterilizaron con radiación UV, 15 minutos por lado, en una campana de
bioseguridad.
Se trabajó con bacterias Escherichia coli, cepa no patógena, ATCC25922.
Determinación de la concentración inicial del cultivo de Escherichia coli :
Del cultivo líquido de Escherichia coli en medio LB, se extrajeron 0,5 ml. con micropipeta
para realizar un set de 8 diluciones seriadas 1:10 en tubos con 4,5 ml de caldo nutritivo en
tubos de ensayo de 10 ml. Las diluciones se efectuaron tomando 0,5 ml de una dilución y
colocándolo sobre 4,5 ml de caldo nutritivo en el tubo siguiente, agitando entre cada paso
hasta la dilución -8.
Para el conteo de las unidades formadoras de colonias (ufc) se extrajeron 0,1 ml de los
tubos -4,-5,-6,-7,-8 de la dilución seriada y se sembraron en placas de petri con agar
nutritivo, utilizando un asa de Drigaski que se pasa sobre el gar hasta que se siente áspero.
Las placas fueron incubadas en estufa a 37oC por 24 horas. Al día siguiente se realizó el
conteo de las colonias bacterianas (ufc). Se registra y se tabula.
De este cultivo se agregaron 0,005 ml a 20 ml de caldo nutritivo LB en frascos Schott como
cultivo inicial para los experimentos posteriores.
Todos los materiales usados fueron autoclavados.
Determinación de la capacidad bactericida de las monedas con diferente porcentaje
de cobre:
Se agregaron dos de cada una de las monedas de aleaciones A, B, C y D en frascos
Schott con el cultivo inicial y un control sin moneda.
Todos los experimentos se realizaron en duplicado.
Los frascos fueron incubados por 24 hrs a 37°C.
Para la determinación de la concentración bacteriana luego de la incubación con las
monedas, se extrajeron 0,5 ml. con micropipeta de cada frasco Shott para realizar un set de
8 diluciones seriadas 1:10 en tubos con 4,5 ml de caldo nutritivo en tubos de ensayo de 10
ml. Las diluciones se efectuaron tomando 0,5 ml de una dilución y colocándolo sobre 4,5 ml
de caldo nutritivo en el tubo siguiente, agitando entre cada paso hasta la dilución -8.
Para el conteo de las unidades formadoras de colonias (ufc) se extrajeron 0,1 ml de los
tubos -4,-5,-6,-7,-8 de la dilución seriada y se sembraron en placas de petri con agar
nutritivo, utilizando un asa de Drigalski que se pasa sobre el gar hasta que se siente áspero.
Las placas fueron incubadas en estufa a 37oC por 24 horas. Al día siguiente se realizó el
conteo de las colonias bacterianas (ufc).
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Experiencia 2:
Eficiencia bactericida y reactividad de aleaciones de cobre en contacto con
mayonesa contaminada.
Contaminación de mayonesa.
La mayonesa fue contaminada con un cultivo líquido de Echerichia coli, de concentración
1078.108 ufc/ml. De esta preparación se tomaron 2,5 ml. y se agregaron a 20 ml
aproximadamente de mayonesa casera homogenizando con espátula.
Reactividad de aleaciones de cobre en contacto con mayonesa contaminada.
Se colocaron 1 moneda de cada aleación, más una moneda de cobre puro, sobre una placa
de petri, en duplicado y sobre cada una de ellas 0,5 m. de la mayonesa contaminada con E.
coli. Se utilizaron como control 0,5 ml. de mayonesa contaminada sobre una placa de Petri
incubada a temperatura ambiente (control negativo 1) y otra placa de Petri con 0,5 ml
mayonesa contaminada incubada a 37oC (control negativo 2). Todas las placas se dejan
incubando por 24 horas a temperatura ambiente, a excepción del control negativo 2.
Al día siguiente, se observó el color de las monedas y se registraron las observaciones.
Eficiencia bactericida de aleaciones de cobre en contacto con mayonesa
contaminada.
Para comprobar la efectividad bactericida también en este experimento, se arrastró la
mayonesa de cada placa control, aleaciones y cobre puro con ayuda de espátulas y usando
guantes de látex. La mayonesa arrastrada fue suspendida en un tubo con 2ml. de PBS
(Buffer Fosfato Salino) cuidando que la mayonesa arrastrada quede en la solución y no
arriba del tubo. El objetivo del PBS es desprender a las bacterias de la mayonesa. Se
agitaron los tubos mediante Vortex. Para el conteo de las unidades formadoras de colonias
(ufc) se extrajeron 0,1 ml de las diluciones -4,-5,-6,-7,-8 de cada experimento y se
sembraron en placas de Petri con agar nutritivo, utilizando un asa de Drigaski que se pasa
sobre el gar hasta que se siente áspero. Las placas fueron incubadas en estufa a 37oC por
24 horas. Al día siguiente se realizó el conteo de las colonias bacterianas (ufc). Se registra
y se tabula.
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J. -Resultados Presente los resultados (valores) obtenidos y procesados de su
investigación. Usen tablas, gráficos u otra representación (2 como máximo, por el
espacio disponible) que muestren de manera resumida sus resultados para una mejor
comprensión.
Experiencia 1:
Tabla 1: Comparación del crecimiento bacteriano del cultivo control de E.coli con cultivos
incubados en contacto con aleaciones de cobre (monedas).
Cultivos Concentraciones
x10 ⁵ [ufc/ml]
Experiencia 2:
Tabla 2a: Comparación del crecimiento bacteriano en mayonesa contaminada con E. coli
control y en contacto con monedas.
Cultivos de mayonesa casera Concentración × 104 [ufc/ml.]
contaminada con E.coli
Cultivo inicial 980000
Control 1 a Temperatura ambiente 3140
Control 2 a 37oC 4352
Aleación A 1710
Aleación B 3088
Aleación C 2508
Aleación D 2852
Moneda de Cobre 2676
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Tabla 2b: Reactividad de las aleaciones de cobre en contacto con mayonesa contaminada con
E.coli
Monedas en contacto con Color después de la Reactividad Fotos
mayonesa contaminada incubación oxidativa
con E. coli
Control s/ moneda Amarillo de No
Temperatura ambiente mayonesa
24 hrs
Aleación B Amarillo de No
Temperatura ambiente Mayonesa
24 hrs.
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un poder bactericida en E.coli con una tendencia proporcional al porcentaje de cobre
presente. Si se tiene en cuenta el costo del cobre superior al de sus aleaciones, estos
resultados avalarían el uso de aleaciones de cobre de manera más masiva y económica en
el área alimentaria. Además, considerando que las monedas de circulación en nuestro país
contienen en su mayoría 92% de cobre ($10, $50, $100 antiguas y nuevas), se podrían
considerar como una fuente bactericida que pasa de mano en mano, derribando
parcialmente el mito que las monedas son una fuente de contagio y propagación de
bacterias, por lo menos para la Escherichia coli.
El incremento observado en la cantidad de colonias bacterianas desde el cultivo inicial
(1988×105) al control (87400×105) después de 24 horas de incubación a 37°C, indica un
crecimiento normal esperado dada las condiciones de temperatura, nutrientes, salinidad y
pH del caldo de cultivo.
En relación al experimento 2, se observa un significativo descenso en el número de
bacterias (medido en ufc) presentes en la mayonesa incubada en contacto con la aleación
A (1710×104), en comparación con los controles sin aleación a temperatura ambiente
(3140×104) y a 37oC (4352×104), lo que avala los resultados anteriores sobre la eficiencia
bactericida de las aleaciones de cobre. En ambas experiencias, la aleación A resultó ser la
más eficiente. Esto concuerda con los antecedentes bibliográficos que presumen una
eficiencia proporcional al porcentaje de cobre presente en la aleación. Sin embargo, lo
revelador es que esta eficiencia observada para el contacto con mayonesa casera, no es
así al realizar el mismo experimento con mayonesa envasada contaminada, donde no fue
posible la detección de E.coli luego de la incubación (resultados no mostrados). Esta
diferencia la atribuimos a la acidez que obliga la norma sanitaria para la conservación de
este alimento, pH < 4,0. En cambio, la mayonesa casera usada registró un valor de pH 5,5,
más cercano al pH neutro óptimo para el crecimiento de E.coli. También es importante
destacar que la concentración de E.coli en la mayonesa en contacto con la aleación A fue
inferior a la encontrada en contacto con cobre puro, lo que resulta ser un dato relevante y
digno de ser considerado en posteriores estudios. En cuanto a las otras aleaciones (B,C,D)
en contacto con mayonesa casera contaminada todas mostraron una reducción de la
concentración de E.coli en comparación a los controles sin aleación, tanto a temperatura
ambiente como a 37oC, no observándose diferencias significativas entre ellas, tampoco en
relación a la eficiencia antimicrobiana del cobre puro.
Respecto a la reactividad oxidativa de las aleaciones frente al contacto con mayonesa, se
observaron diferentes reactividades, dependiendo de la aleación (Tabla 2b). La aleación B
(89% de cobre), resultó ser la menos reactiva al no presentar oxidación, evidenciado al no
variar el color después de 24 horas de incubación. Este resultado es importante ya que si
consideramos las dos propiedades estudiadas: eficiencia bactericida y reactividad frente a
alimentos, la aleación B es la aleación que podría sustituir al cobre puro al presentar acción
antimicrobiana elevada y un comportamiento mejor frente a la oxidación en contacto con
mayonesa, lo que podría ser muy útil, por ejemplo, en almacenamiento de alimentos en el
área alimentaria. En relación a la reactividad con mayonesa del resto de las aleaciones, la
aleación A presentó un efecto menor que las aleaciones C y D y que el cobre puro.
Los resultados obtenidos, responden claramente la pregunta de investigación planteada en
el proyecto y avalan parcialmente la hipótesis propuesta, ya que existe una tendencia
bactericida proporcional al porcentaje de cobre presente en la aleación, y algunas
aleaciones resisten de mejor medida la acción oxidativa que el cobre puro,
coincidentemente estas dos propiedades se encuentran en las aleaciones A y B.
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L. Conclusiones. Describan en 3 o 4 oraciones lo más relevante de su
investigación. Consideren si se comprueba o rechaza la hipótesis, cómo responden
nuestros resultados a los objetivos planteados, qué otra experiencia y hallazgos
obtenidos de esta investigación pude servir a otros investigadores.
Al finalizar la investigación, concluimos:
1.- Se comprueba la capacidad bactericida de las aleaciones de cobre, existiendo una
tendencia positiva proporcional al porcentaje de cobre presente.
2.- La aleación de composición 89% de Cobre; 5% de Aluminio; 5% de Cinc; 1% de Estaño
es la más resistente a la oxidación en contacto con alimentos, seguida por la aleación de
composición 92% de cobre; 6% de Níquel; 2% de Aluminio. Entre estas aleaciones existe
una relación inversamente proporcional entre la reactividad oxidativa en contacto con
mayonesa y el porcentaje de cobre de las diferentes aleaciones.
3.- Las aleaciones de menor porcentaje de cobre 75 y 70 % son las más reactivas frente a
la oxidación en contacto con mayonesa, igualando a la reactividad del cobre puro en estas
condiciones.
4.- Las monedas de divulgación nacional con 92% de cobre son altamente efectivas como
bactericidas en la Escherichia coli.
N.- Bibliografía
1.- Valenzuela, Catalina, Caracterización reológica de mayonesa formulada con fibra de
trigo, 03 de Septiembre 2012
http://www.cybertesis.uchile.cl/tesis/uchile/2010/qf-valenzuela_cf/pdfAmont/qf-
valenzuela_cf.pdf
2.- Cobre Bactericida, aleaciones, 10 de Agosto 2012
http://www.cobrebactericida.org
3.- Banco Central de Chile, monedas, 17 Mayo 2012
http://www.bcentral.cl/index.asp
NOTA: Los espacios destinados a cada ítem dentro del formulario pueden ser adaptados según las
necesidades de cada trabajo, respetando el límite máximo de 10 carillas.
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