Universidad Nacional Agraria La

Molina

FACULTAD DE AGRONOMÍA
TEMA: ESTIMACIÓN DE LA VIABILIDAD POLÍNICA
CURSO: FITOMEJORAMIENTO
INTEGRANTE:
Galantini Chiroque, Gabriela Maria 20171034
SEMESTRE: 2020-II
GRUPO: *D
2021
 Cuestionario

1. Qué importancia tiene conocer la viabilidad del polen en el mejoramiento de

plantas.
Es de suma importancia ya que, como lo menciona Rodriguez, la viabilidad del polen
es sumamente importante ya que es una medida de la fertilidad masculina, por esto es
fundamental para el proceso de reproducción. No serviría tener una variedad mejorada
de cierta especie si su polen no es viable, ya que no se podría propagar por semilla
que además de ser lo más común y práctico en campo (exceptuando la propagacion
asexual si es que la especie lo permite) esta conserva la variabilidad genetica de la
especie y por ende transmite los genes deseados por los productores.

2. Explique los factores que afectan la viabilidad de polen.

La viabilidad del polen depende de factores medioambientales, como el fotoperiodo,
la irradiación, las bajas y altas temperaturas, la humedad relativa y concentración de
O2 y CO2, o alguna interacción entre estos factores. De estos factores el más
estudiado es la variable temperatura; las bajas temperaturas causan infertilidad en
muchas especies, como por ejemplo, berenjena, cebolla, sorgo y pimentón.
Además se puede afectar la viabilidad cuando las condiciones no son adecuadas en la
planta madre, como pH alto, toxicidad, estrés hídrico, este último provoca la
contracción perdiendo así su viabilidad.
La germinación del polen es influenciada también por la edad , la madurez de éste y
del momento de la cosecha.

3. Indique los equipos necesarios para determinar la viabilidad del polen.

● Tintura, pueden ser con azul tripán y mediante el test de la reacción fluoro
cromática con diacetato de fluoresceína.
● Vibrador electrónico, para la extracción del polen en capsulas de gelatina.
● Microscopio óptico a un aumento de 100 para prueba de germinación in vitro.
● Agitador magnético.
● Campana extractora.

4. Indique y explique otras técnicas existentes para determinar la viabilidad del

polen en cultivos de importancia económica.
Entre los métodos de evaluación, los más rápidos y precisos, son la tinción con
colorante vitales y la germinación en medios artificiales ambos con sus ventajas y
desventajas:

Tinción Germinación in Vitro

● Ventajas: metodo rapido y facil ● Ventaja: es más preciso ya que

● Desventajas: pueden depende del genotipo; las
sobreestimar la viabilidad y el condiciones ambientales; la
 poder germinativo real de los madurez del polen; la
granos de polen composición y el pH del medio.
● Desventaja: toma más tiempo

A. Prueba de tinción
● Ampliamente utilizada
● Rápida y sencilla
● Por ejemplo: En papa, una de las técnicas de tinción ampliamente
utilizada es la Gelatina de Acetocarmín Glicerol. Esta prueba mide la
integridad del citoplasma: los granos de polen se colorean de color
rojo cuando la membrana citoplasmática se encuentra íntegra
● Procedimiento:
○ Al centro de un portaobjeto, previamente identificado, colocar
1 o 2 gotas de Gelatina de Acetocarmín Glicerol al 2%.
○ Utilizando la punta de una aguja o con un palillo mondadientes
extraer el polen y colocarlo en la lámina portaobjeto, esparcir
el polen en el colorante con ligeros movimientos circulares.
○ Dejar reposar la muestra por 1 minuto y cubrirla con una
lámina cubreobjeto.
○ Mantener las láminas montadas en posición horizontal por
uno o dos días. Si se quiere guardar las muestras, colocarlas
en cajas diseñadas para este propósito y refrigerarlas a 4°C.
○ Observar bajo un microscopio óptico a un aumento de 200 o
400. Una tinción de color rojo intenso y un citoplasma límpido
es indicativo de un polen viable o fértil.
○ Si se observan anormalidades, como tétradas o granos de
polen con 4 núcleos, significa que la muestra de polen es
infértil.
○ Los conteos se realizan en 250 granos de polen en toda la
lámina, y los resultados se expresan como el porcentaje
respecto al número total de granos de polen.
B. Germinación in vitro
● La germinación del polen in vitro permite hacer estimaciones
confiables de la fertilidad. Esta técnica simula el desarrollo del tubo
polínico en los tejidos estilares, ya que el medio de cultivo utilizado
semeja en su composición al mucílago del estigma (mencionado por
el folleto del CIP)
● El medio de cultivo utilizado para la germinación y crecimiento del
tubo polínico de genotipos de papa contiene sucrosa (sacarosa),
ácido bórico y polisorbato 20.
● Procedimiento
○ Colocar 4 gotas del medio de cultivo sobre el interior de la
tapa de una placa de Petri de 5.5 cm de diámetro,
distribuyéndolas en los vértices de un cuadrado imaginario.
○ Adicionar pequeñísimas cantidades de polen de una misma
muestra sobre cada gota.
 ○ Preparar una cámara húmeda colocando un papel filtro
humedecido con agua destilada cubriendo el fondo de la placa
de Petri.
○ Cubrir la placa de Petri con la contratapa y dejar a una
temperatura de 20 a 24 o C hasta el día siguiente.
○ Colocar una gota de solución de yodo-yoduro de potasio en la
tapa de la placa de Petri donde se colocó la muestra de polen.
○ Cubrir con una lámina cubreobjeto de 22×40 mm, y proceder a
la observación bajo un microscopio óptico a un aumento de
100.
○ Se consideran granos de polen germinados solo aquellos que
emitan un tubo con una longitud mayor o igual al diámetro del
polen
○ Se hace un conteo y se pasa a porcentaje. Un porcentaje
promedio del 80% indicará un polen fértil.
C. Tinción azul tripan
● La tinción con azul tripán, también conocida como método de
exclusión del azul tripán. Se basa en que el colorante no puede pasar
dentro de la célula al tener ésta la membrana plasmática intacta. Por
tanto, los granos viables no se tiñen mientras que, cuando el
plasmalema está dañado, el colorante si penetra uniéndose a las
proteínas presentes dentro de la célula. El resultado es que los
granos no viables se tiñen de color azul-violeta intenso.
● Procedimiento:
○ Se prepara la solución de azul tripan
○ Se le añade una pequeña cantidad de polen (0.02g)
○ Luego se incuba durante 5 minutos a temperatura ambiente y
en oscuridad.
○ Se agita suavemente y se coloca en el porta objetos para que
finalmente se analice en el microscopio óptico.

D. La reacción fluoro cromática mediante DAF

● El DAF es un éster apolar, lo que le permite su paso a través de la
membrana hidrofóbica de la célula viva. Una vez dentro, el éster es
hidrolizado por enzimas esterasas, dejando libre la fluoresceína,
fluorocromo que cuando se excita con una longitud de onda adecuada
(490 nm) emite fluorescencia de color verde brillante. Como la
fluoresceína tiene una baja permeabilidad debido a su carácter polar,
no puede salir a través del plasmalema, y queda retenida,
acumulándose en aquellas células con el plasmalema bien
conservado.
● Como consecuencia, sólo los granos de polen con niveles de
actividad esterasa adecuados y con el plasmalema íntegro mostrarán
fluorescencia verdosa, indicativa de que estos granos son viables.
● Procedimiento:
○ Se prepara la solución, que consta de : diacetato de
fluoresceína, acetona y sacarosa al 15%.
 ○ Seguidamente se toma la solución preparada previamente
(100 µl)
○ Se le añade 0,02 gr de polen, se agita suavemente la mezcla
para luego incubar en oscuridad y a temperatura ambiente por
5 min.
○ Finalmente se analiza en un microscopio de fluorescencia.

E. Método de tetrazolio (bromuro de 2,5-difenil tetrazolio). La solución de prueba

consiste en una concentración de 1% de 2,5 - bromuro difenil de tetrazolio (o
tiazolil) diluidos en una solución de sacarosa al 5%. El polen se considera
viable cuando se vuelve color rosa 4 intenso o si se presenta líneas
irregulares negras sobre la superficie (Rodríguez y Dafni 2000). Se colocó
una gota de la tinción en una lámina porta-objetos, se agregaron
aproximadamente 100 granos de polen, se esperó de 7 a 10 minutos para su
lectura. El conteo se realizó con cada grano de polen

F. Evaluación de la viabilidad con agua pura. El agua pura es utilizada como

sustituto de la tinción de acetocarmín, ya que se puede lograr un efecto
similar al de la mezcla de la tinción. El conteo para esta prueba se puede
realizar al momento de aplicar el agua. El conteo se realizó contando cada
grano de polen
BIBLIOGRAFÍA
● Ordoñez, B. 2014. Determinación de la Viabilidad y Fertilidad del Polen. Centro
Internacional de la Papa (CIP), Lima, Perú. 8p
● Rodriguez, T et all. (2015). Viabilidad de polen, receptividad del estigma y tipo de
polinización en cinco especies Echeveria en condiciones de invernadero. (Version
electronica) Recuperado el 24 de febrero del 2021, de:
http://www.scielo.org.mx/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S2007-09342015000100
010#:~:text=La%20viabilidad%20del%20polen%20es,por%20la%20temperatura%20
y%20la
● Sin autor. URL:
http://ucv.altavoz.net/prontus_unidacad/site/artic/20061205/asocfile/2006120516372
4/lillo__maria_jose.pdf
● Rejon, J et all. (2010). Evaluation of different methods to determine pollen quality in
several olive (Olea europaea L.) cultivars. (Versión electrónica) Recuperado e 26 de
febrero de 2021, de:
https://gredos.usal.es/bitstream/handle/10366/120989/Evaluacion_de_diferentes_me
todos_para_es.pdf?sequence=1&isAllowed=y
● Hernandez, I. (2010). Evaluación de la viabilidad del polen almacenado de genotipos
de arándano (Vaccinium spp.). (Tesis de pregrado) .Escuela Agrícola Panamericana,
Honduras. Sitio web: https://bdigital.zamorano.edu/bitstream/11036/599/1/T2944.pdf