VI.

MÉTODO PARA EL TRABAJO PRÁCTICO

1. Tamaño de la muestra:

La muestra quedará conformada por 16 humanos cuyas edades oscilan entre

20 y 29 años; de género masculino, aparentemente sanos; los cuales serán
elegidos en forma aleatoria y firmarán un documento denominado
CONSENTIMIENTO INFORMADO ESCRITO, donde se describen los
criterios de inclusión y exclusión, para poder participar de este estudio.

2. Diseño del Modo de Administración de las tabletas de SMX/TMP:

El diseño es del tipo Cuadrado Latino, 2 x 2.

La muestra se dividirá en 2 grupos (I y II), de 8 integrantes cada uno,

asignados a cada grupo completamente al azar; según lo expresado en la
siguiente tabla:

GRUPO 1ª SEMANA 2ª SEMANA

GrupoI REFERENCIA MULTIFUENTE.

Grupo II MULTIFUENTE REFERENCIA

Se dividirá en dos etapas (semanas), correspondiendo la primera semana a

la administración de tabletas de sulfametoxazol (800 mg)/Trimetoprim (160
mg) del laboratorio Roche “REFERENCIA”con 200 ml de agua a los
voluntarios del grupo Iy de tabletas de sulfametoxazol (800 mg)/Trimetoprim
(160 mg) de un laboratorio nacional “MULTIFUENTE” también con 200 mL
de agua, a los voluntarios del grupo II. La segunda semana el grupo I tomará
el producto MULTIFUENTE y el grupo II el producto REFERENCIA.

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 Antes de la administración se debe verificar que se haya cumplido con lo
descrito en el CONSENTIMIENTO INFORMADO ESCRITO. Además luego
de administrado el fármaco, recibirán una dieta especial, teniendo en cuenta
que los alimentos que van a consumir no tengan interacciones con el principio
activo en estudio, un desayuno después de dos (2) horas y un almuerzo
después de seis (6) horas.

3. Recolección de la muestra de sangre:

Se tomará un total de 10 muestras de sangre total (5 mL): 1 basal al tiempo

cero (antes de la administración del fármaco), luego se procederá a la
recolección las muestras restantes (9) también de 5 mL cada una y en cada
tiempo establecido, el cual será el siguiente:

Muestra Nº1 Nº2 Nº3 Nº4 Nº5 Nº6 Nº7 Nº8 Nº9 Nº10

Tiempo(h) 0 0.5 1 2 4 6 9 12 24 48

Para la tomas de las muestras de cada paciente por punción venosa se

utilizará un catéter o bránula, aguja N° 20 x 1 ½ , estas se recibirán en viales
que contienen 0,5 mL de heparina al 1%.

4. Curva de calibración:

➢ Preparar una solución stock de 100 mg. de Sulfametoxazol (SX)

diluidos en 25 mL de etanol aforando a 100 mL con agua destilada.
➢ A partir de la solución stock, preparar 10 mL de 5 soluciones estándar
de SX en sangre: 0,01; 0,02; 0,04 y 0,06 mg/mL.
➢ Para obtener éstas concentraciones se tomarán 0,1; 0,2; 0,4 y 0,06
mL de la solución stock, se verterán a matraces aforados de 10 mL,

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 se mezclará con sangre, poco a poco con agitación suave y se aforará
al volumen establecido.
➢ Los estándares serán sujetos del tratamiento para cuantificación de
SX en sangre.
➢ Se elaborará una curva de calibración enfrentando las
concentraciones versus sus absorbancias, caracterizándola mediante
su ecuación correspondiente.

5. Cuantificación de sulfametoxazol en sangre

Se medirá 1 ml de sangre a un matraz Erlenmeyer de 125 mL, se añadirá 15

ml de agua y 4 ml de ácido tricloroacético 15% (ATC), se homogenizará y
filtrará a través de un filtro Whatman Nº 1. De éste filtrado se medirá 10 ml y
se colocará en tubo de vidrio con tapa. A continuación al tubo se añadirá 1
ml de solución de NaNO2 al 0.1%, se homogenizará y se dejará en reposo
durante 3 minutos. Luego se agregará 1 ml de sulfamato de amonio 0.5%
(NH4+NH2SO3- ), se homogenizará y se dejará en reposo por 2 minutos, se
volverá a homogenizar. Finalmente se añadirá 1 ml de solución de N-(1-
naftil) etilendiamina diclorhidrato, se homogenizará y se realizará la lectura
de la absorbancia en espectrofotómetro a 540 nm.

6. Procesamiento de las muestras sanguíneas

Las muestras sanguíneas seguirán el procedimiento de cuantificación de SX
en sangre. Utilizando la Las absorbancias se obtendrán las concentraciones
a partir de la ecuación de la curva de calibración.

7. Determinación de los Parámetros farmacocinéticas:

Para cada alumno se construirán sus perfiles de concentración sanguínea de
SX versus tiempo y se calcularán los siguientes parámetros
farmacocinéticos:
➢ Concentración Máxima (Cmáx):

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 A partir del perfil concentración sanguínea de SX versus tiempo se
elegirá la máxima concentración.
➢ Tiempo Máximo (Tmáx).
Se obtiene directamente de los datos de la concentración sanguinea,
corresponde al tiempo requerido para alcanzar la concentración
máxima.
➢ Área bajo la curva desde tiempo “0” a tiempo “t”( 𝑨𝑩𝑪𝟎𝒕 )
Para el cálculo de esta AUC se empleará el método trapezoidal; esta
ABC deberá ser por lo menos el 80% del 𝑨𝑩𝑪𝟎∞

➢ Área bajo la curva desde el tiempo cero a tiempo infinito 𝑨𝑩𝑪𝟎∞ :

Es el ABC extrapolada a tiempo infinito, lo cual representa la
exposición total. Se calcula mediante la siguiente fórmula:

Donde:
Cult: Es la última concentración mensurada.
: Es la velocidad de eliminación terminal.

8. Análisis de Datos:
Los resultados obtenidos serán procesados estadísticamente utilizando
medidas de tendencia central (promedio), desviación estándar y coeficiente
de variación porcentual.

En el caso de estudios de BE, realizar un ANOVA e Intervalo de Confianza

al 90% para inferir BE, para los parámetros 𝑨𝑩𝑪𝟎𝒕 , 𝑨𝑩𝑪𝟎∞ , Cmáx, con
transformación logarítmica.

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