Facultad De Ciencia y Tecnología

Departamento de Biología - Licenciatura de Biología

Laboratorio Actividad Enzimática

TITULO:

ACTIVIDAD ENZIMÁTICA DE LA CATALASA

Presentado por:

Brayan Stiven Avilez Quintero – 2020210003

Camilo Andres Pedraza Velasquez – 20202100050

Cristian David Meneses Gonzalez – 2020210041

John Alexander Vargas Guaraca – 2020210068

Docente:
Ligia Marlene Forero Rey MSC
Introducción:
Las enzimas son proteínas especializadas que se encuentran en todos los sistemas vivientes
ya que son fundamentales para llevar a cabo las transformaciones químicas que tienen lugar
para su mantenimiento. Actúan no solo como catalizadores sino como reguladores de los
procesos dinámicos del sistema vivo, tales como metabolismo, respiración, contracción y
fotosíntesis; muchas de ellas son asistidas o ayudadas por otras sustancias que le colaboran en
la reacción denominadas coenzimas, cuyas moléculas son capaces de transportar los
productos de una reacción hasta la reacción siguiente.
Hay Factores que afectan a las enzimas como la temperatura, el pH, la concentración del
sustrato, la concentración de la enzima y ciertas sustancias denominadas inhibidores.
En esta experiencia se pretende que el estudiante comprenda la importancia que tienen las
enzimas y las coenzimas en los procesos vitales y determine los factores que afectan la
velocidad de una reacción enzimática.

Objetivos:
 Identificar variables
 Establecer hipótesis y comprobarlas
 Verificar mediante una reacción secundaria la acción de una Enzima.
 Comprobar el papel fundamental que desempeñan las coenzimas.
 Determinar los principales factores que afectan la actividad de una enzima
 Comprobar los efectos que producen en la actividad de la Catalasa los cambios de
temperatura y pH.
 Comprobar la acción que tienen los inhibidores en la actividad enzimática

Materiales para la práctica:

Materiales Laboratorio Reactivos Equipos

 Trozo  1 pipeta de 5  250 ml. Agua  Baño de

pequeño de ml destilada María
hígado

 Guantes  10 tubos de  250 ml.  Centrifuga

desechables ensayo y una Peróxido de
gradilla Hidrógeno
concentrada
 1 pipeta de  50 ml. HCl al
1ml 1%

 2 tubos de  50 ml. NaOH

centrifuga al 1%
 (plásticos)
 1 mortero  10 ml.
con su mano HgCL2 al
0.5%
 1 espátula

 1 pipeteador

 1 cuchilla

Procedimientos:

1-Preparación de la Enzima
1-Tome aproximadamente 5 gramos de tejido con las manos limpias y ojalá utilice guantes
desechables, córtelo en trozos pequeños tratando que sean del mismo tamaño.
2- Coloque el tejido picado en un mortero y adiciónele por fracciones 20 ml de agua destilada y una
pequeña cantidad de arena lavada, triture hasta formar una pasta homogénea y fina.
3- Deje el tubo en reposo durante 5 minutos y luego páselo a un tubo de centrifuga
4- Centrifugue a 1500r.p.m. por 5 minutos, separe el sobrenadante en otro tubo ya que este contiene la
enzima y consérvelo, rotúlelo y manténgalo en la nevera hasta cuando vaya a usarlo.
2- Acción de la Concentración del sustrato.
Antes de realizarlo proponga una hipótesis de lo que sucederá al realizar el ensayo. Determine si fue positiva
o negativa

Para demostrar la reacción de la enzima, tome cinco tubos de ensayo márquelos y en el orden dado
coloque los siguientes reactivos:
NOTA: Prepara los tubos y agregue de ultimo la enzima, a partir de este momento mida el tiempo que tarda
en ocurrir la reacción.

Reactivos 1 2 3 4 5

Sol. de H2O2 (ml) 0 1 2 3 4

Agua destilada(ml) 4 3 2 1 0

Sol. de Enzima (ml) 1 1 1 1 1

Observe que ocurre en cada uno de los tubos. Determine el tiempo que tarda cada uno de los tubos en
reaccionar generando burbujas y anote los resultados.
Este sencillo experimento se puede repetir con distintos tejidos animales y vegetales, en los cuales
encontraremos diferentes intensidades de burbujeo, dependiendo de la cantidad de catalasa presente
en el tejido, puede colocar color de cocina para ver mejor las burbujas o colocar lavaloza líquido.
También puede comprobar la presencia del oxígeno acercando un fosforo de madera encendido y
notará como se intensifica la llama.
3- Acción de la concentración de enzima.
Antes de realizarlo proponga una hipótesis de lo que sucederá al realizar el ensayo. Determine si fue positiva
o negativa

Para demostrar el efecto de la concentración de la enzima, tome cinco tubos de ensayo márquelos y en
el orden dado coloque los siguientes reactivos:
NOTA: Prepara los tubos y agregue de ultimo la enzima, a partir de este momento mida el tiempo que tarda
en ocurrir la reacción.

Reactivos 1 2 3 4
5

Sol. de H2O2 (ml) 1 1 1 1 1

Agua destilada(ml) 4 3 2 1 0

Sol. de Enzima (ml) 0 1 2 3 4

Observe que ocurre en cada uno de los tubos. Determine el tiempo que tarda cada uno de los tubos en
reaccionar generando burbujas o en cual se produjo más burbujas anote los resultados.

4- Factores que afectan la actividad de la enzima.

Antes de realizarlos proponga una hipótesis de lo que sucederá al realizar cada ensayo. Determine si fue
positiva o negativa

a. Efecto de la temperatura sobre la actividad de la catalasa:

Tome uno 4 o 6 trozos de tejido fresco, colóquelo en un recipiente a hasta ebullición. Tome cuatro
frascos, enumérelos y coloque en cada uno de ellos las siguientes sustancias.
 Reactivos Tubo 1 Tubo 2 Tubo 3 Tubo 4
H2O2 ml. 1 1
H2O ml. 1 1
Tejido fresco trozo 1 1
Tejido hervido trozo 1 1

Observe que ocurre en cada frasco y anote los resultados

b. Efecto del PH sobre la actividad de la catalasa:

Tome tres tubos de ensayo, enumérelos y coloque en cada uno de ellos las siguientes sustancias.
Tenga la precaución de colocar de último la enzima

Reactivos Tubo 1 Tubo 2 Tubo 3

H2O2 ml. 1 1 1
NaOH ml. 0 1 0
HCl ml. 1 0 0
Agua destilada 0 0 1
Tejido fresco trozo 1 1 1

Observe cada uno de los tubos y anote sus resultados

c. Efecto de los metales pesados sobre la actividad de la catalasa:

Tome dos tubos de ensayo, enumérelos y coloque en cada uno de ellos las siguientes sustancias.
Tenga la precaución de colocar de último la enzima.

Reactivos Tubo 1 Tubo 2

H2O2 ml. 1 1
Tejido fresco trozo 1 1
HgCl2 ml. 1

Observe cada uno de los tubos y anote sus resultados

Análisis y Resultados:
Procedimiento N° 1 (Preparación de la enzima)
Se tomaron aproximadamente 5 gramos de hizo, se depositó en el macerador, donde ahí, se le
adiciono arena y agua, hasta tener una mezcla uniforme. Después se le deposito esta mezcla
en un tubo de ensayo.

Este tubo se cerró muy bien y se introdujo en la centrifugadora, por un tiempo de 3 minutos a
3000 RPM (revoluciones por minuto)
Finalmente, cuando la muestra se centrifugo y el líquido que quedo en la parte superior del
tubo que es la enzima, este mismo se colocó en un tubo de ensayo para los demás
procedimientos.

Procedimiento N° 2 (Acción de concentración del sustrato)

Hipótesis: La enzima reaccionara de manera distinta de acuerdo y en contacto con los
reactivos. Se creará espuma en distintas cantidades de acuerdo a la cantidad de catalasa en
cada tubo.
Reactivos 1 2 3 4 5

Sol. de H2O2 (ml) 0 1 2 3 4

 Agua destilada(ml) 4 3 2 1 0

Sol. de Enzima (ml) 1 1 1 1 1

Tubos 1 2 3 4 5
Tiempo de reacción
1 1 2 4 2
en segundos (S)

Procedimiento N° 3 (Acción de la concentración de enzima)

Hipótesis: Al momento de generarse la reacción saldrán burbujas las cuales se darán por la
reacción principalmente entre el hígado y la solución de H 2O2 (Peróxido de hidrogeno) y el
agua destilada disminuirá la reacción lo cual hará que salgan menos burbujas.
 Tubos de reacción 1 2 3 4 5
Tiempo de reacción
1 1 1 1 1
en segundos (S)

Tubos de reacción 1 2 3 4 5
Producción de burbujas
en escala de 1 a 5, (5 0 1 2 3 5
mayor)

Análisis después del experimento:

Al realizar los experimentos se pudo determinar que el agua destilada funciona como
inhibidor frente a la reacción entre peróxido de hidrogeno y la solución enzimática, además
de que aumenta la producción de burbujas cuando hay un alto nivel de solución enzimática
como en el caso del quinto tubo de ensaño, además de que no haya agua destilada para la
inhibición de la reacción haciendo así que los iones de oxígeno se puedan unir en mayor
medida con la solución enzimática,

Procedimiento N° 4 (Factores que afectan la actividad de la enzima)

A) Efecto de la temperatura sobre la actividad de la catalasa:
Hipótesis: Al aumentar la temperatura las reacciones con la enzima disminuyen en gran
medida ya que a altas temperaturas se pierden las estructuras de las proteínas.

TUBO 1 2 3 4
Observac Fue el Tubo con No se dio ninguna Se dio una reacción No se dio ninguna
iones. mayor cantidad generación de enzimática muy generación de
de burbujas ya burbujas o un tipo mínima al contener burbujas o un tipo de
que la reacción de reacción visible una menor reacción visible ya
del tejido vivo se ya que el agua cantidad de que el agua destilada
dio con H2O2 es destilada no cuenta estructuras de no cuenta con el ion
decir se pudo con el ion de orden superior de oxígeno para el
generar el oxígeno para el proteico como en proceso además de
proceso proceso. el caso de que el tejido igual
enzimático en el estructuras que el anterior había
cual se unen más (secundarias, llevado el proceso de
oxígenos al terciarias y desnaturalización de
tejido. cuaternarias) por proteínas.
estar a altas
temperaturas.
B) Efecto del PH sobre la actividad de la catalasa:

Tubo 1 2 3
Observacion No se da una reacción Se da la generación Se dio la generación de
es enzimática, ya que no burbujas, ya que los burbujas, pero en menor
se tiene el ion de dos reactivos H2O2 y medida en primera
oxígeno. NaOH cuentan con instancia por no tener el
los iones de oxígeno otro reactivo además de
para el proceso tener un inhibidor como
enzimático. lo es el agua destilada.
Hipótesis: Posiblemente al cambiar el pH fuera de este rango hizo más lenta la actividad de
la enzima.
C) Efecto de los metales pesados sobre la actividad de la catalasa:
Hipótesis: El metal cloruro de mercurio como catalizador en la reacción enzimática lo cual
hace aumentar el tiempo de reacción.
Tubo 1 2
Resultados Se da generación de Al momento de agregar
burbujas tras el reactivo de cloruro de mercurio HgCl2 a
H2O2 (peróxido de la reacción enzimática hizo que
hidrogeno) igual que en los aumentara el tiempo de la
anteriores procesos tras los reacción, además de que las
iones de oxígeno en el burbujas salían de mayor de
volumen.
proceso enzimático.
Conclusiones:
Como conclusión de este laboratorio se pudo llegar a evidenciar los factores y compuestos
químicos que pueden llegar a afectar la reacción de una enzima, pudimos evidenciar que
factores como el calor, el oxígeno y algunos metales pesados.
Por ejemplo, si se expone un trozo de hígado fresco o cocinado al agua la reacción de la
enzima será nula, pero si se expone cada uno de esos trozos al H 2O2 la reacción iba a ser
distinta, tal como se muestra en las evidencias de los diferentes experimentos que se
encuentran en el documento.
Del mismo modo nos llevó a cuestionarnos ¿Qué pasará si realizamos el mismo
procedimiento en otro órgano o tejido diferente al hígado?, o también ¿Qué pasaría si se
expone el hígado a experimentos más rigurosos para lograr extraer la enzima?
Sin embargo, esta experiencia nos llevó a considerar que la calidad del proceso de indagación
es alta. Contribuyendo a un mejor conocimiento de la catalasa como una enzima
perteneciente a la categoría de las oxidorreductasas que cataliza la descomposición del
peróxido de hidrógeno (H2O2) hacia oxígeno y agua.
Cuestionario:
1. ¿Qué influencia tiene la concentración del sustrato y la concentración de la enzima
sobre la velocidad enzimática?
Respuesta:
En la concentración del sustrato al aumentarse, también aumenta la velocidad de reacción
catalizada hasta un cierto punto. Una vez que todas las enzimas se han adherido, cualquier
aumento de sustrato no tendrá efecto alguno en la velocidad de reacción, ya que las enzimas
disponibles estarán saturadas y trabajando a su máxima capacidad.
Por otra parte, a concentraciones enzimáticas más altas, más moléculas estarán disponibles
para unirse al sustrato y catalizar la reacción. Dicho en otras palabras, mientras la
concentración de sustrato sea mayor que la concentración de la enzima, hay una relación
directa entre la concentración de la enzima y la actividad enzimática.
Cabe destacar, que cuando la concentración de enzima se mantiene constante, la adición de
más sustrato aumentará la velocidad de la reacción. Si la concentración del sustrato es
demasiado alta, puede saturar todas las moléculas de la enzima. Entonces la velocidad de la
reacción alcanza su máximo y la adición de más sustrato no aumenta más la velocidad de la
reacción.

2. Teniendo en cuenta que este es un Diseño Experimental, indique en cada caso cuál
es la variable dependiente y cuál es la variable independiente
Respuesta:
Variable Independiente:
 Las cantidades de hígado que se colocaron en los vasos de precipitado.
 La temperatura a la que fue calentada la porción de hígado.
 La medida de peróxido de hidrogeno que fue añadida al hígado.
 El nivel de PH

Variable Dependiente:
 La reacción de la catalasa

3. Elabore la gráfica de concentración de sustrato versus tiempo de la reacción.

Respuesta:

Gráfica hecha por: Pedraza C. Andres (2022)

Nota: La grafica muestra la reacción de dos variables las cuales son tiempo de reacción y la
concentración del sustrato en donde al aumentar la concentración del sustrato disminuye el
tiempo de la reacción, aunque es claro tener en cuenta que llegue el punto en el cual ya no
hay enzima disponible para la reacción y por tanto llega a la variable inicial al no aumentar la
velocidad de la reacción.

4. ¿Por qué los factores como temperatura, pH y metales pesados inciden en la actividad
de la enzima?
Respuesta:
 Temperatura: Cuando la temperatura en el ambiente de una enzima aumenta, el
tiempo de reacción de la enzima va a ser más rápido, pero si al contrario la
temperatura disminuye su capacidad de reacción va a ser más lenta. Sin embargo, al
encontrarse expuesta a temperaturas extremadamente altas la enzima se desnaturaliza
y deja de funcionar.
 PH: Toda enzima cuenta con un pH óptimo para su funcionamiento, pero si este pH
se ve afectado ya sea que disminuya o que se aumente a niveles extremos puede
causar que la enzima reaccione de manera más lenta o incluso que desnaturalice a
causa de los cambios en su pH.
 Metales pesados: Los metales pesados disminuyen la capacidad de que la enzima
para que pueda participar en reacciones químicas, es decir los metales pesado rompen
el ciclo de los elementos (enzima) que participan en una reacción.

5. ¿Qué ocurriría si un organismo carece de la enzima?

Respuesta: La carencia de enzimas en un organismo, puede llegar a ocasionar problemas de
salud, perdida de la movilidad de las partes del cuero donde actúan las enzimas, daño o
enfermedades cerebrovasculares, problemas o inconvenientes al digerir o procesar los
alimentos en nuestro organismo o en algunos casos puede llegar a causar la muerte.
En algunos casos se llega a consumir suplementos dietarios que suplementan esos alimentos
que nos brindan las enzimas que nuestro cuerpo no genere.

6. ¿Qué tipo de inhibidor es el Mercurio? Sustente su respuesta

Respuesta: Dependiendo de su forma química principalmente en el laboratorio se tienen en
cuenta los organomercurios en donde las actividades proteicas enzimáticas se ven inhibidas
fuertemente por un gran número de iones de mercurio. En este orden de ideas podemos
determinar que es un inhibidor competitivo donde los iones del cloruro de mercurio
competían con la enzima para generar la reacción en el sustrato.

Bibliografía
Enzima. (2022, 26 abril). En Wikipedia. https://es.wikipedia.org/wiki/Enzima

farmaciameritxell. (2012, 18 diciembre). ENZIMAS, ¿QUÉ SON? ¿INFLUYEN EN EL

ENVEJECIMIENTO? blog.hola.com. Recuperado 1 de mayo de 2022, de

https://blog.hola.com/farmaciameritxell/2012/12/enzimas-que-son-influyen-en-el-

envejecimiento.html

Instituto Tecnológico Superior (ITS) Paysandú. (2020). Factores que afectan la actividad

enzimática. Universidad del Trabajo del Uruguay.

https://uruguayeduca.anep.edu.uy/sites/default/files/inline-files/Factores%20que

%20afectan%20la%20actividad%20enzim%C3%A1tica.pdf

khan academy. (s. f.). Repaso de enzimas. Recuperado 1 de mayo de 2022, de

https://es.khanacademy.org/science/ap-biology/cellular-energetics/environmental-

impacts-on-enzyme-function/a/hs-enzymes-review#:~:text=Las%20enzimas

%20funcionan%20mejor%20dentro,temperatura%20la%20hace%20m%C3%A1s

%20lenta

López, I. S., Balbuena, L. M., & Hernández, A. J. (2015). El tema de la catalasa en los

diferentes niveles de enseñanza aprendizaje. Revista Iberoamericana de Producción

Académica y Gestión Educativa, 2, 1–15.

https://www.pag.org.mx/index.php/PAG/article/view/265/311