INFORME FINAL

PROYECTO DE INVESTIGACIÓN

EVALUACIÓN DE LA ACTIVIDAD VASCULAR DE DIFERENTES

PRODUCTOS OBTENIDOS A PARTIR DE Lourtegia
stoechadifolia, Espeletia schultzii Y Stevia lucida.

Investigadores

Estela Guerrero Dec León, a Juan A. Morán, bJosé Luis López

Pérez, Oralia Suarez, `Eily Mondolis

a
Facultad de Medicina, Universidad de Panamá, b Facultad de Farmacia, Universidad
de Salamanca, España, `Facultad de Farmacia, Universidad de Panamá

Panamá
Enero dei 2007 al Julio del 2008
INTRODUCCIÓN
 Introducción

A. Fuente de Productos Naturales

Durante millares de años la práctica médica se ha visto ligada a los productos

naturales (PNs) a través del uso medicinas tradicionales. Aunque la mayoría eran

obtenidas de plantas medicinales, esta no es la única fuente de PNs, ya que (os

animales y los microorganismos, también son una rica fuente de PNs con efectos

terapéuticos. La OMS define como plantas medicinales, cualquier especie vegetal

que contiene sustancias que pueden ser empleadas para propósitos terapéuticos o

cuyos principios activos pueden servir de precursores para la síntesis de nuevos

fármacos (OMS, 1979).

De acuerdo con esto, las plantas medicinales nos sirven como fuentes de PNs

que tengan actividad terapéutica y así usarlos como materia prima para la

fabricación de medicamentos, o como modelo estructural químico para la síntesis

de medicamentos semisintéticos y sintéticos.

Cabe señalar que hasta ahora no se ha explotado por completo esta fuente

natural de posibles medicamentos, ya que se estima que menos del 1 %, de las

más de 90 mil especies de plantas de los bosques de América Latina, han sido

investigadas químicamente. Se señala que se encuentra entre 215 y 500 mil el

número total de especies de plantas superiores en todo el mundo; de ellas sólo el

6% aproximadamente han sido estudiadas preliminarmente para conocer sus

actividades biológicas y el 15 % evaluadas fitoquímicamente. Sumado a esto, han

sido identificados 122 compuestos químicos a partir de 94 especies que son

empleados como medicamentos, de ellas el 80 % con usos etnobotánicos idénticos

o relacionados con el uso conocido de esos principios activos (Duke et al., 2008).
 Introducción

En esta constante búsqueda de sustancias con actividades terapéuticas se han

establecido etapas para el desarrollo de nuevos medicamentos, tales como:

• Eta a de Descubrimiento o de Investigaciones exploratorias: Es el

descubrimiento de nuevas moléculas con posibles actividades biológicas. Esto se

puede desarrollar mediante estudios pre-dirigidos, los cuales se basan en el

conocimiento de la medicina tradicional para el tratamiento de una enfermedad

(etnobotánica); o por estudios sistemáticos los cuales se realizan a partir de la

recolección sistemática de muestras naturales procedentes de un área de

biodiversidad determinada y el empleo de las mismas en ensayos terapéuticos

(bioprospección) (Marovac, 2001; Emelio et al., 1998; Malpica et al., 2005).

• Estudios pre.clínicos: Estudios y pruebas en el laboratorio a animales y

modelos fisiológicos, "in vivo" o "in vitro", para la evaluación o determinación de

posibles efectos biológico.

• Estudios Clínicos: Estudios y pruebas en seres humanos para la búsqueda de

seguridad y efectividad de la nueva sustancia evaluada. Estos estudios se dan en

persona sanas primeramente, seguido de estudios a pacientes, posteriormente a la

población en general y por ultimo se dan estudios de calidad de vida y

farmacoeconomía. Esto lleva muchas veces a una aprobación comercial regulada

para seguir evaluando posibles efectos adversos e interacciones medicamentosas,

todo siempre en el rango de conservar la seguridad y efectividad del producto

medicamentoso.

• Solicitud de Medicamento Nuevo: solicitud para comerciar un nuevo fármaco

para uso humano (Marovac, 2001; Emelio et al., 1998).

 Introducción

Resaltando la etapa de investigación exploratoria en la cual se desarrollan

estudios pre-dirigidos o etnobotánicos y estudios sistemáticos o bioprospección,

para poder obtener y desarrollar PNs, dentro de la etnobotánica se habla

Proyectos Etnobotánicos Interdisciplinarios que consta de varios pasos a seguir

entre los cuales tos más relevantes son:

1. Documentación del conocimiento tradicional de las plantas: Registros de usos

tradionales de las plantas medicinales dentro de un contexto cultural.

2. Determinaciones cuantitativas: Se efectúan aplicando técnicas cuantitativas

para el análisis de tos datos etnobotánicos con el fin de determinar el nivel de

significancia de una especie o comunidad vegetal para un grupo humano.

3. Evaluación fitoquímica, farmacológica y toxicológica: Se seleccionan aquellas

plantas medicinales de mayor importancia cultural para el grupo humano

estudiado. De los cuates se obtienen extractos y posteriormente PNs a los cuales

se les determinan sus composiciones químicas, se les estima su potencial

toxicológico y su actividad farmacológica, si es de acuerdo a los usos atribuidos o

al descubrimiento de nuevas propiedades terapéuticas (Bermúdez eta!., 2005).

En los estudios sistemáticos o de bioprospección, la bioprospección vegetal,

específicamente, se realiza mediante la recolección sistemática de todo el

material vegetal, seguido de la extracción, fraccionamiento y obtención de las

sustancias químicas, tamizando de manera funcional los extractos para usos

terapéuticos (gracias a bioensayos o ensayos químicos). Estos estudios de

bioprospección se están apoyando en la utilización de Softwares y bibliotecas

químicas y moleculares, que ayuden a la valorización de los recursos naturales. La

elucidación o caracterización química de principios activos completa la fase de

descubrimiento (Malpica eta!., 2005).

 Introducción

B. Uso de Productos naturales

Inicialmente los estudios clínicos, farmacológicos y químicos de estos PNs,

eran la base para la obtención de fármacos. Tal es el caso del ácido

acetilsalicítico, digitoxina, morfina, quinina y pilocarpina, todos ellos fármacos de

origen natural.

Durante esta primera época, et descubrimiento de la penicilina por Fleming,

revolucionó el desarrollo de nuevas moléculas de origen natural. De hecho, la

obtención de fármacos antimicrobianos como estreptomicina, cloranfenicol,

ctortetraciclina, la cefatosporina C, la eritromicina y vancomicina, a partir de esta

investigación antibiótica, son ejemplos de lo prolifero que resultó esta actividad.

Uno de los retos posteriores a esta primera era de investigación de PNs, fue la

implementación de tamizado basado en el mecanismo de acción, empleando

ensayos biodirigidos. A través de la continua mejora de los formatos de

investigación y producción, así como ta ganancia en tecnología robótica y de la

gerencia de datos, la investigación basada en el mecanismo de acción, se convirtió

en el principal apoyo de la investigación de alto rendimiento. Algunos de los

primeros compuestos identificados a principio de los años 70, donde ya se

empleaba esta nueva tendencia de investigación, incluyeron el ácido clavulánico y

la mevastatina, un fármaco inhibidos del HMG-CoA reductasa. De la Mevastatina se

obtiene la cabeza de serie para el desarrollo de un grupo de fármacos hoy

ampliamente empleados, las estatinas.

El uso de compuestos naturales, principalmente aquellos derivados de

plantas, para controlar enfermedades es una vieja práctica realizada a través de

tos siglos y que ha conducido al descubrimiento de más de ta mitad de todos tos

productos farmacéuticos modernos (Cuadro N°1) (Soejarto et al., 1989).

 Introducción

Cuadro N°1. Fármacos derivados de PNs introducidas en Estados Unidos y

Europa entre 2001 y 2005.
Año Nombre Genérico Producto Natural Indicación

001 Caspofungin (Cancidasl) Pneumocandin B Antifúngico

2001 Pimecrolimus (Elidell) Ascomycin Dermatitis atópica

2001 Telithromycin (Ketekl) Erythromycin Antibacterial

2002 Amrubicin hydrochloride (Calsedl) Doxorubicin Anticancer

2002 Biapenem (Omegacin1) Thienamycin Antibacterial

2002 Ertapenem (InvanzTM) Thienamycin Antibacterial

2002 Fulvestrant (Faslodexl) Estradiol Anticáncer

2002 Galantamine (Reminyt1) Galantamine Alzheimer

2002 Micafungin (Funguard1) FR901379 Antifúngico

2002 Nitisinone (Orfadin1) Leptospermone Antitirosinaemia

2003 Daptomycin (CubicinTM) Daptomycin Antibacterial

2003 Miglustat (Zavescal) 1-deoxynojirimycin Enf. de Gaucher

2003 Mycophenolate sodium (Myfortic1) Mycophenolic acid Inmunosupresion

2003 Pitavastatin (LivaLol) Mevastatin Dislipidemia

2003 Rosuvastatin (Crestor1) Mevastatin Disiipidemia

2004 Everotimus (CerticanTM) 5irolimus Inmunosupresion

2004 Talaporfin sodium (Laserphyrinl) Chlorophyll and L- Anticáncer

aspartic acid

2005 Doripenem (Finibaxl) Carbapenem Antibacterial

2005 Extenatide (Byettal) Incretin Antidibático

2005 Paciitaxel nanoparticles (Abraxanel) Taxol Anticáncer

2005 Pramtintide acetate (Symlinl Amylin Antidibático

2005 Tigecycline (Tigacil1) Tetracycline Antibacterial

2005 Zicontide (PrialtTM) MVIIA Manejo del dolor

Tomado sin autorización de Kin S. Lam (2007) Trends in Microbiology 15(6)

 Introducción

C. Enfermedades Cardiovasculares

Las enfermedades cardiovascutares (ECV), hoy por hoy, son la principal causa

de muertes a nivel mundial, posee el más alto índice de mortalidad (OMS, 2005) y

se estima que en el futuro, en una proyección para el 2030 seguirá estando entre

las principales causas de muertes, así lo reportan estudios financiados por la OMS

( Mathers et al., 2006).

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Figura N°1. Mortalidad mundial prevista por distintas causas, todas las edades.
Tomado de la OMS, 2005.

En Panamá, también se ven reflejados los estragos de las ECV, ya que para el

2004, se encontró entre las principales causas de muertes, en las llamadas

"Enfermedades del Sistema Circulatorio- (119x100, 000 hab.)(OPS, 2007).

D. Productos naturales en la farmacología cardiovascular

Debido a la gran morbi-mortalidad que producen las ECV, estas se han

convertido en una de las principales razones para la búsqueda de posibles

fármacos que contribuyan a la terapia de las ECV. Algunos autores señalan que las
 Introducción

principales contribuciones de las fuentes naturales están en el campo

cardiovascular (Gilani, 1998).

El inicio de la investigación de PNs empleados para el tratamiento de

afecciones cardiovasculares muy probablemente fue trazado por el

reconocimiento de las acciones cardiotónicas de los extractos de dos plantas:

Digitalis purpurea y Digitalis !anota (Ehrh.), que fueron aplicadas mucho antes de

que sus componentes activos fueran aislados y caracterizados estructuralmente.

Las publicaciones en el campo de la investigación cardiovascular abrieron así un

capítulo importante en la farmacología; y de tal suerte que los glucósidos

extensamente usados son las sustancias inotrópicas más potentes reconocidas.

Otro ejemplo de la obtención de PNs con utilidad en el tratamiento de patologías

cardiovasculares lo define claramente la reserpina. La reserpina es un alcaloide

extraído de la raíz de Rauwolfia serpentina (Benth). El descubrimiento de la

reserpina llevó a la obtención del primer agente tranquilizante terapéutico y uno

de los antihipertensivos de mayor utilidad en su época (Vakil, 1949).

En adición a los glucósidos cardiacos y la reserpina, un número de alcaloides

naturales son empleados corno fármacos en el control de varias condiciones

cardiovasculares. Por ejemplo, la quinidina, aislada de la corteza del árbol de

quina, es una droga antiarrítmica importante (Julian, 1976). Ajmatina y el

ajmalcina son también drogas antiarrítmicas aisladas de Rauwolfia serpentina y

que presentaron gran utilidad. Ergotamina, un alcaloide del cornezuelo de

centeno obtenido del hongo que infecta al centeno, es un vasoconstrictor cerebral

importante que es utilizado terapéuticamente para tratar dolores de cabeza tipo

migraña (Silberstein, 1997) (5ilberstein et al., 2003). La atropina, un alcaloide

 Introducción

obtenido de la Atropa belladona L, es empleado para contrarrestar las acciones

bradicardizantes debido a su capacidad para bloquear los receptores muscarínicos.

En la historia del desarrollo de agentes con actividad cardiovascular también

aparece Forskolin, un compuesto aislado del Coleus forskohlii ( Willd.) Briq, una

especie utilizada en los desórdenes cardiacos.

El descubrimiento de los efectos farmacológicos de los componentes del veneno

de la víbora (Bothrops jararaca (Wied-Neuwied)) condujo, en última instancia, al

descubrimiento del papel que desempeña la enzima convertidora de angiotensina

(ECA) en el desarrollo de la hipertensión arterial (Ferreira SH. 1965). Como una

consecuencia directa de esta observación, fue descubierto el teprotide, un

inhibidor específico de la ECA y de donde se desarrolló un sistema modelo para la

interacción de pequeños péptidos con la ECA (Ondetti et al., 1971). En última

instancia, el captopril fue diseñado como un inhibidor específico de la ECA,

empleado por vía oral para el control de la hipertensión. El éxito y la utilidad del

captopril condujeron al diseño y a las síntesis de otros inhibidores de la ECA, tales

como enalapril. De esta forma nace la era de nuevos compuestos cardiovasculares

denominados inhibidores de la enzima convertidora de angiotensina (IECAs).

Algunos de los PNs más interesantes en el campo de la farmacología cardiovascular

son los fármacos hipolipemiantes. Los más interesantes desde el punto de vista

terapéutico son las estatinas que, como ya hemos mencionado, son un grupo de

agentes que reducen los niveles plasmáticos de colesterol por inhibir la actividad

de la HMG-CoA reductasa, una enzima que limita la biosíntesis del colesterol. El

primer agente inhibidor de la HMG-CoA reductasa fue aislado a partir de

Penicillium sp. Compactin, hoy conocido como Mevastatina, primero fue divulgado
 Introducción

como agente antifúngico, pero al dilucidarse el mecanismo de acción constituyó la

base para la búsqueda de otros inhibidores de la HMG-CoA reductasa. Como era de

esperar, estos hallazgos iníciales condujeron al descubrimiento del lovastatina, un

metabolito secundario del hongo Aspergillus terreus. Lovastatina fue investigado

clínicamente, encontrándose que era un hipolipemiante eficaz y que además

producía un mínimo de efectos adversos. Aunque la lovastatina fue introducido al

mercado en 1989, muchos estudios fueron realizados para preparar análogos

mejorados, lo que condujo al desarrollo de otras estatinas como la simvastatina

(1991), privastatina (1991) y fluvastatina (1993).

Es de esta forma particular como los productos de origen natural escriben gran

parte de la historia del tratamiento de enfermedades cardiovasculares. A pesar

que en los últimos años se ha potenciado la investigación de productos de síntesis,

cada vez es mayor el número de investigadores que apuestan por la búsqueda de

moléculas activas a partir de PNs, por considerar que son estos la mayor fuente de

nuevos compuestos.
JUSTIFICACIONES DEL ESTUDIO
 Justificación

A nivel mundial se ve una alta incidencia de las enfermedades cardiovasculares lo

que motiva a muchos investigadores a centrar su atención en la búsqueda de

nuevas sustancias que ayuden a disminuir la morbi-mortalidad de estas

enfermedades.

Como es bien sabido desde la antigüedad el hombre ha utilizado las plantas como

alivio de múltiples padecimientos entre los cuales se encuentran las enfermedades

cardiovasculares. Este uso de plantas medicinales ha dado pie a la búsqueda y

comprobación de las funciones atribuidas a las mismas a través de lo que hoy

llamamos Proyectos Etnobotánicos Interdisciplinarios. Aunado a esto, hoy en día,

en la búsqueda de plantas que nos provean nuevos PNs, los cuales puedan

presentar propiedades biológicas, se ha estado llevando a cabo gracias a la

bioprospección, la cual permite que plantas a las cuales no se le conoce uso

alguno, sean estudiadas para así poder determinar si posee alguna propiedad

medicinal.

Esto abre una puerta al conocimiento de nuevos productos naturales con

propiedades biológicas diversas, entre las cuales se encuentran aquellas a nivel

cardiovascular.

1. En la búsqueda de nuevos productos naturales que sean la base a la posible

generación de fármacos útiles para el alivio y disminución de estas enfermedades

se están estudiando recientemente los diterpenos kauranos, pimaranos y labdanos.

Estos han mostrado actividad hipotensoras, vasorelajadoras por múltiples

mecanismos dependientes e independientes de endotelio; al igual que respuestas

inotrópicas positivas.

12
 Justificación
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2. En tre tos productos naturales con efectos a nivel cardiovascular se deben

mencionar a los fl avonoides pues poseen una actividad an ti agregante plaquetaria,

reducen los niveles plasmáticos de lipoproteínas de baja densidad (LDL), al igual

que tienen la capacidad de modular el tono vascular con propiedades

vasoretajadoras dependientes e independientes de endotelio.

3. Es importante señalar que el obje ti vo de los estudios que se realizan es la

búsqueda de nuevas sustancias no conocidas que puedan presentar propiedades a

nivel cardiovascular. Esto nos lleva a ir mas allá de los efectos fisiológicos de las

sustancias, llegando hasta sus diversas estructuras químicas en las cuales se

pudieran hacer posibles relaciones estructura-actividad; obteniendo así en un

futuro no solo un fármaco sino una familia de fármacos con múltiples cambios

químicos que se pudieren realizar de acuerdo a la estructura químicas y a la

actividad fisiológicas de las sustancias.

13
OBJETIVOS
 Objetivos

Objetivos Generales

• Evaluar (a actividad vascular de diferentes productos obtenidos a partir de

Pinus caribaea, Lourteigia stoechadifolia, Espeletia schultzii,
Myrsine coriacea, Stevia lucida, Badilloa venezuelensis y Ageratina
stevioides.

Objetivos Específicos

• Determinar las acciones vasculares de los diterpenoides labdanos: ULA-04,

ULA-05, y ULA-07, obtenidos a partir de Pinus caribaea; de los diterpenoides
labdanos ULA-08 y ULA-09, obtenidos de Lourteigia stoechadifolia.
n Determinar las acciones vasculares del diterpenoide isopimarano ULA-06,
obtenido a partir de Pinus caribaea.
n Determinar las acciones vasculares de los diterpenoides kauranos: ULA-13 y
ULA-14, obtenidos a partir de Espeletia schultzii.
• Determinar las acciones vasculares de la bencenoquinona ULA-1 5 obtenida a
partir de Myrsine coriacea.
• Determinar el efecto vascular de los sesquiterpenos longipinenos ULA-16 y
ULA-17, obtenidos de Stevia lucida.
• Describir las acciones vasculares de tos flavonoides ULA-10 Y ULA-11,
obtenidos de Lourteigia stoechadifofia; del flavonoides ULA-19, obtenido de
BadiUoa venezuelensis; y del flavonoides ULA-21, obtenido de Ageratina
stevioides.
• Dilucidar sitas acciones de los productos con mayor efecto vasodilatador, son
dependientes de la función endotetial.
• Describir los posibles mecanismos de acción implicados en las acciones de tos
productos que posean actividad vasodilatadora significativa.
METODOLOGÍA
 Metodología

1. ESTUDIOS EXPERIMENTALES

1.1 ANIMALES

Para la realización de este estudio se emplearon ratas Sprague-Dawley machos

(250-300 g), provenientes del. Bioterio de la Facultad de Medicina Veterinaria de la

Universidad de Panamá. Cada protocolo experimental requería la utilización de un

mínimo de 6 animales.

Los animales se alimentaron con una dieta estándar (Massury 7, Canadá) y se

mantuvieron en jaulas con seis animales en cada una, teniendo todas acceso libre

a la comida y bebida. Las ratas permanecieron bajo ciclos de 12 horas de luz y 12

horas de oscuridad, con control de temperatura a 22 + 1°C.

Todos los procedimientos experimentales descritos en esta investigación se

realizaron siguiendo las instrucciones del Manual "Guide for the Care and Use of

Laboratory Animas" del Institute of Laboratory Animal Resources (ILAR) of the

Natianal Research Cauncil.

1.2 MATERIALES

• Equipo de cirugía

• Micropipetas Labnet®

o Balanza analítica OHAUS® modelo AP 2105

0 Balanza para animales

• Baños de Órganos LEfICA® modelo LE 13206

• Ganchos de acero inoxidable (Tissue Holder LETICA®)

+ Sistemas de registro:
17
 Metodología

Transductores de fuerza (isométricos) TRi 201 LETCA®

Amplificador LETICA® modelo AMP 01612

Polígrafo 2006 con preamplificadores 150 506 LETICA®

1.3 REACTIVOS

Todos los reactivos fueron suministrados por (a Casa Fabricante SIGMA®

• Acetilcolina

• Fenilefrina

• Noradrenalina

• Dimetilsulfóxido

• L-Name

• Azul de metileno

• Indometacina

• Solución de Krebs: Esta solución esta compuesta por: NaCl 118 mM, KCl 4.7

mM, CaCl 2 2.5 mM, KH 2 PO4 1.2 mM, NaHCO 3 25 mM, MgSO4 1.2 y Glucosa 11

mM.

• Oxigenación: Carbógeno (95% Oz y 5% CO 2 ), suministrado por la Compañía

Aceti-Oxígeno.

1.4 MUESTRAS

Las muestras objeto de este estudio consisten en compuestos purificados

obtenidos de plantas, procedentes de la región de los Andes venezolanos, las

cuales fueron proporcionadas por el Departamento de Química de la Facultad de

Ciencias de la Universidad de Los Andes-Mérida, Venezuela.

18
 Metodología

Los compuestos evaluados fueron los siguientes:

• Diterpenos Labdanos: ULA-4, ULA-5 y ULA-7, obtenidos de Pinus caribaea;

ULA-8 y ULA-9, obtenidos de Lourteigia stoechcdifolia.

• Diterpenos Kauranos: ULA-13 y ULA-14, obtenidos de Espeletia schultzii.

• Diterpeno Isopimarano: ULA-6, obtenido de Pinus caribaea.

• Flavonoides: ULA-1a y ULA-11, obtenidos de Lourteigia stoechadifolia;

ULA-19, obtenido de Badilloa venezuelensis; y ULA-21, obtenido de

Ageratina stevioides.

• Benzoquinona: ULA-15, obtenida de Myrsine coriace.

• Sesquiterpenos Longipinenos: ULA-16 y ULA-17, obtenidos de Stevia lucida.

2. PROCEDIMIENTOS EXPERIMENTALES

2.1 Obtención de la muestra biológica

Siete días antes de cada experimento, los animales a emplear se sometieron a

las especificaciones de acondicionamiento descritas con anterioridad.

Se anestesiaron ligeramente las ratas y fueron sacrificados por exanguinación

carotídea, seguidamente se extrajo la aorta torácica descendente la cual se

colocó en un plato petri con solución Krebs. Esta solución se mantenía

constantemente carbogenada, con la doble finalidad de mantener a la aorta

oxigenada y conservar un pH de 7.4.

Con cuidado se eliminó el tejido conectivo y graso que rodeaba la aorta para

luego cortarla en segmentos de 4 mm. A través de la luz de cada segmento de

®
aorta se hacían pasar dos ganchos de acero inoxidable (Tissue Holder Letica ), uno

de los cuales se fijaba al fondo del baño de órganos y el otro se conectaba al

19
 Metodología

transductor isométrico TRl 201 Letica ® , que a su vez se conectaba a un

amplificador ISO 501 y a un polígrafo Letica ® para registrar la tensión del

segmento. Los anillos de aorta se colocaron en baños de órganos (Letica ® modelo

LE 13206) que contenían 15 mL de solución Krebs, la cual se mantenía a una

temperatura constante de 37 ± 0.5 °C con burbujeo continuo de carbógeno

durante todo el período de experimentación. Cada anillo montado fue ajustado a

una tensión de 2 g; luego se dejaron estabilizar 60 minutos, renovando la solución

de Krebs cada 15 minutos y reajustando la tensión a 2g cuando era necesario.

2.2 Efecto vasodilatador "in vitro", en anillos de aorta con endotelio intacto,

de los diferentes PNs en presencia de contracción inducida por Fenilefrina

(FE).

Dada la importancia del endotelio en la regulación del tono vascular, al inicio

de cada evaluación se comprobó la presencia de endotelio. Para esto se añadía

una dosis submáxima de acetilcolina (ACh) (1 x 10' 4 M) en presencia de una meseta

de contracción máxima inducida con fenilefrina (FE) (3 x 10 ,6 M). Se consideró que

el endotelio se encontraba intacto cuando se alcanzaba un porcentaje de

relajación igual o mayor al 60%.

Tras un período de estabilización de 60 minutos, se generó una contracción

máxima con FE (3 x 10 -6 M). En presencia de su efecto máximo observado, como

una meseta estable de contracción, se añadieron concentraciones acumulativas

crecientes del compuesto a evaluar: 1x10' 6 M, 1x10 E5 M y 1x10 4 M, esperando 15

minutos entre cada administración para ir observando su efecto. Debido a que el

dimetilsulfóxido (DMSO) fue empleado como agente disolvente de los compuestos

20
 Metodología

a ensayar, se considero pertinente realizar curvas dosis respuesta de este agente

como patrón de referencia para descartar interferencias del mismo sobre los

efectos observados. Cabe destacar que cada anillo fue expuesto a un solo

producto objeto de evaluación.

Para determinar si las acciones vasculares producidas por los compuestos

ensayados se debían a cambios funcionales, y no por lesión celular, después de la

curva concentración-respuesta los anillos se lavaban y se dejaban estabilizar

durante 60 minutos. Una vez terminado este periodo se realizaba una nueva

contracción con FE (3 x 106M).

Las muestras con mayor efecto relajante fueron seleccionadas para ser

sometidas a otros procedimientos protocolares.

2.3 Efecto vasodilatador "in vitro", en anillos de aorta con endotelio

denudado.

Con la finalidad de determinar si el efecto vasodilatador observado en el

experimento anterior, dependía de la presencia del endotelio vascular, se

procedió a remover el mismo haciendo pasar una aguja de acero inoxidable con la

superficie rugosa a través del lumen de la arteria. Se consideraba que la aorta

estaba desprovista de endotelio (endotelio denudado), cuando al agregar Ach

(1x10 -4 M), se evidenciaba un porcentaje menor o igual al 10% de relajación. Una

vez comprobada la ausencia de endotelio, se procedía a repetir el protocolo

experimental anterior (punto 2.2) con aquellos productos que reflejaron un efecto

vasodilatador mayor del 50%.

21
 Metodología

De los resultados obtenidos en ambos casos (evaluación del efecto

vasodilatador dependiente o independiente del endotelio), se derivaban

procedimientos protocolares posteriores.

3. Expresión y análisis de los resultados

Los resultados son expresados como la media ti S.E.M. de un n=6

experimentos.

La respuesta relajante se presenta como el porcentaje de relajación relativo

al efecto contráctil inducido por FE (3 x 10-6 M).

El análisis estadístico fue realizado a través del "t" de student.

22
RESULTADOS
 Resultados

1. BASES ESTRUCTURALES DE LOS PRODUCTOS EVALUADOS

Para la realización de este estudio se tomaron como referencia compuestos

pertenecientes a diferentes grupos químicos, obtenidos de diferentes plantas. Ya que

al estudiar agentes de diferentes familias puede proporcionarnos información básica

para el desarrollo de protocolos de descripción de mecanismos de acción.

Cuadro N°3. ESTRUCTURAS DE DITERPENOS KAURANOS

Código Especie/Familia Estructura Nombre

PM

Espeietia _ I
- Ac. ent-kaur-9,16-en-
ULA-13 300 schuitrir
19-oico
( Asteraceae)

4ca^

Espeletia _=
ULA-14 288 schultzii H ent-kaur-16-en-19-oI
(Asteraceae)
CHdi

24
 Resultados

Cuadro N°4. ESTRUCTURAS DE DITERPENOS LABDANOS

Código PM Especie/Familia Estructura Nombre

g/mol
(+)-Óxido de Manoílo
(3R,4aR,10aS,10bR)-
Pinus caribaea
dodecahydro-3,4a,7,7,10a-
ULA-04 290 (var hondurensis)
pentamethyl-3-vi nyl-1 H-
(Pinaceae)
benzo[f]chromene

(+)-2-Oxo-Óxido de Manolo
(3R,4aR,10a5,10bR)-
Pinus caribaea o ,o decahydro-3,4a,7,7,1Oa-
ULA-05 304 (var hondurensis) pentamethyl-3-vinyl-1 H-
(Pinaceae) benzo[ flchromen-9(1 ObH) -
one

(+)-Manool
Labda-8(1 7), 14-dien-1 3-ol.
Pinus caribaea (R) -5- ( (4aS, 55)-decahydro-
ULA-07 290 (var hondurensis) 1,1 , 4a-tri methyt-6-
( Pinaceae) methylenenaphthalen-5-yl)-
3-methylpent-1-en-3-ol

1,18-dihidroxi-oxido de
manolo
(3R,4aR,7R,1OR,10aS)-
Lourtegia
dodecahydro-7-
U LA-08 322 stoechadifolia
(hydroxyrnethyl)-3,4a, 7,1 Oa-
(Astereaceae)
tetramethyl-3 -vi nyl-1 H-
benzo[fi chromen-10-ol

Acido 1-hidroxi-oxido de
manoilo-18-carboxilato de

Lourtegia
r1i o metilo
Methyl
U! A-09 364 stoechadifolia 2((3R,4aR,7S,1 OR,10aS) -
(Astereaceae) ' i dodecahydro-10-hydroxy-
^_^3 3,4a,7, 1 Oa-tetramethyl-3-
vinyl-1 H-benzo[fi]chromen-7-
vllacetate

25
 Resultados

Cuadro N°5. ESTRUCTURAS DE FLAVONOIDES

PM
Código Especie/Familia Estructura Nombre
g/mol
Eupatorina
5,3' -dihidroxi-6,7,4' -
trimetoxyflavona
Lourtegia
5-hydroxy-2-(3-
ULA-10 344 stoechadifolia
hyd roxy-4-
(Astereaceae) H,CO^
methoxyphenyl)-6,7-
OH
dimethoxy-4H-
chromen-4-one
5-hidroxi-6,7,3,4-
tetrametoxif lavona
Lourteigia
5 -hydroxy-6,7-
ULA-11 358 stoechadifolia
dimethoxy-2 -(3,4-
(Astereaceae)
I I^ di methoxyphenyl) -4H -
chromen-4-one

5-hydroxy-3,6,7-
Badilloa
trimethoxy-2- (4-
ULA-19 358 venezuelensis
methoxyphenyl)-4H-
(Asteraceae) HICO OLn,,

chromen-4-one

5-hydroxy-2-(4-
Ageratina
hydroxyphenyt)-7-
ULA-21 284 stevioides
methoxy-4H-chromen-
(Compositae)
4-one

26
 Resultados

Cuadro N°6. ESTRUCTURAS DE DITERPENO ISOPIMARANO, BENZOQUINONA Y

SESQUITERPENOS LONGIP1NENOS.

Código PM Especie/Familia Estructura Nombre

3-Hidroxiisopimara-
8 (14 ),15-dieno.
(1 R,7R)-
Pinus caribaea 1 ^Z,J,4,4a,4b,5,6,7,9,1
ULA-06 304 (var hondurensis) i ^1
0,10a-dodecahydra-1-
(Pinaceae)
(hydroxymethyl) -1,4a,7-
trimethyl-7-
vinylphenanthren-2-ol
o
CH
Homorapanona
Myrsine coriacea 2,5-dihydroxy-3-
ULA 15 350
(Sw.) tridecylcyclohexa-2, 5-
MO (GH CH;
diene-1,4-dione
o

250 Stevia lucida

ULA-1 6 Longipin-2-en-7B-9a-
(Asteraceae)
dihidroxi-1-ona

Longipinentrienona
Stevia lucida Longipin-2-en-1,7,9-
ULA 17 246
(Asteraceae) trioxo

27
 Resultados

2. ACTIVIDAD VASCULAR

2.1 Efecto vasodilatador "in vitro", en anillos de aorta con endotelio intacto, de

los diferentes PNs en presencia de contracción inducida por Fenilefrina (FE).

A. DITERPENOS LABDANOS

En el Cuadro N° 1 y Figura N° 1 se pueden observar los efectos vasodilatadores

máximos obtenidos con la realización de curvas dosis-respuesta para los diferentes

productos de diterpenos labdanos ensayados. El efecto máximo vasodilatador se

observó con ULA-9 con 51.61 ± 7.62% , seguido de ULA-5 que tuvo un efecto

vasodilatador de 46.88 ± 2.78% El compuesto ULA-8 también produjo una

vasodilatación significativa frente al DM50, sin embargo, esta respuesta es

considerada discreta ya que fue inferior al 30%. Tal como se puede apreciar en la

Figura N° 4, el compuesto ULA-4 desarrolló una respuesta vasodilatadora significativa

con la concentración 1x10 -5 M, sin embargo, al igual que ULA-7, con la concentración

máxima evaluada no se observa un efecto vasodilatador.

Todos los efectos observados pueden ser atribuidos a mecanismos fisiológicos ya

que no presentaron efectos citotóxico al poder reproducirse la contracción en

presencia de FE, después de probados los productos.

28
 Resultados

Cuadro N° 1. Valores máximos de relajación (E ) y de concentración eficaz 50

(CE 50 ) de curvas concentración-respuesta en aortas de ratas SD, a diferentes
productos de diterpenos labdanos r =p<0.05 frente a DM50. nd= no determinado.

Producto CESO
(% Relajación)
(% (M)
DMSO 7. 69 ± 2.93 nd
ULA-4 6.12±5.24! nd
r
ULA-5 46.88±2.l8 nd
r
ULA-7 5.33 ± 6.84 nd
r
ULA-8 28.15 ± 6.00 nd
t
ULA-9 51.61 ± 7.62 1.0910X10-4

-20

20
Q
u

40

s0

80

100
9E-i7 IE -06 1E-OS 1E-04

Concentración (M)

Figura N° 1. Curvas concentración-respuesta a diferentes productos diterpenos

labdanos en anillos de aortas de ratas SD precontraídos con fenilefrina 3 x 10 -6 M.
r
=p<0.05 frente a DM50.

29
 Resultados

B. DITERPENOS KAURANOS

Las respuestas obtenidas con los productos diterpenos kauranos, se muestran en

el Cuadro N° 2 y la Figura N° 2 a traves de la representación de curvas

concentración-respuesta. El compuesto ULA-13 desarrolló un Emax de 79.27±7.41 % y

fue el único de los kauranos que mostró una actividad vasodilatadora significativa.

ULA-14 mostró un efecto no significativo de vasodilatación cuando la comparamos

con al curva concentración- respuesta del solvente.

También podemos decir que todos los efectos observados pueden ser atribuidos a

mecanismos fisiológicos, pues no presentaron efectos citotóxico al poder

reproducirse la contracción en presencia de FE, después de evaluados los productos.

Cuadro N° 2. Valores máximos de relajación (Emax) y de concentración eficaz 50

( C E50) de curvas concentración-respuesta en aortas de ratas SD, a diferentes
productos de diterpenos kauranos t =p< 0.05 frente a DMSO. nd= no determinado.

CE
Producto Emay
(% Relajación) (M)
DMSO 7.69±2.93 nd
U1.A-13 79.27±7.41t 1.7482X10-5
fi
U L A-14 26.36±7.89 nd

30
 Resul tados

0
10

20

C 30

40

j; 50

aj 60
a^ 70

80

90

100
1 E-07 9 E-06 lE-05 IE-04
Concentración (M)

Figura N° 2. Curvas concentración-respuesta a diferentes productos diterpenos

kauranos en anillos de ao rtas de ratas SO precontraídos con fenilefrina 3 x 10 .6 M.
T
=p<0.05 frente a DM50.
 Resultados

C. FLAVONOIDES

Los flavonoides presentan un gran efecto vasodilatador, ya que ULA-10, ULA-11 y

ULA-21 presentan relajaciones entre el 84-87%, y no se observa diferencia

significativa entre estas respuestas. El ULA-19 muestra una relajación del 72%, lo

que también es un efecto vasodilatador importante. Desde la primera dosis se

muestra una diferencia significativa entre el DMSO y los flavonoides, esta diferencia

sigue aumentando con las concentraciones subsiguientes.

Es importante mencionar que todos los flavonoides evaluados nos dieron efectos

de vasodilatación y no muestran efectos citotóxico. Una vez probados los productos

se pudo producir una contracción en presencia de FE.

Cuadro N° 3. Valores máximos de relajación (E ) y de concentración eficaz 50

(CE 50 ) de curvas concentración-respuesta en aortas de ratas SD, a diferentes
productos de flavonoides t =p< 0.05 frente a DMSO. nd= no determinado.

Producto Em" CESO

(% Relajación) (M)
DMSO 7.69 ± 2.93 nd
ULA-1 0 85.59 ± 10.93 1 7.1478X10-6
ULA-11 8730 ± 741' 4.517 4X 10 6
ULA-19 72.41 ± 5.56' 1.3597X10-5
ULA -21 84.42 ± 7.80' 4.2270X106

32
 Resultados

10

20

30

40
i •p

a 6fl
N
70

80

90

100
1 E-07 I E-06 1 E-05 1 E-04
Concentración (M)

Figura N° 3. Curvas concentración-respuesta a diferentes productos flavonoides en

6
anillos de aortas de ratas SD precontraídos con feniíefrina 3 x 10" M. t =p<0.05 frente
a DMSO.

33
 Resultados

D. DITERPENO ISOPIMARANO, SESQUITERPENOS LONGIPINENOS Y BENZOQUINONA

El diterpeno isopimarano ULA-6 en la segunda dosis muestra un efecto

vasoconstrictor y a lo largo de toda su actividad no se alejó significativamente del

DMSO. La benzoquinona ULA-15 mostró una vasorelajación de 30.38±7.61%, y es

importante destacar que no mostró efecto citotóxico ya que se revirtió la contracción

frente a este efecto vasoretajador. Los sesquiterpenos longipinenos ULA-16 Y ULA-17

mostraron efectos similares de entre 38-42% de vasodilatación, los cuales no tienen

diferencias estadísticamente significativas. Al igual que el resto de los productos se

pudo observar la contracción al final en presencia de FE.

Cuadro N° 4. Valores máximos de relajación (E ) y de concentración eficaz 50

(CE 5 o) de curvas concentración-respuesta en aortas de ratas SD, a diferentes
productos de diterpeno isopimarano, sesquiterpenos longipinenos y benzoquinona
f
=p<0.05 frente a DMSO. nd= no determinado.

Producto Emax CEso

(% Relajación) (M)
DMSO 7.69 ± 2.93 nd
ULA- 6 9.36 ± 6 • 92 r nd
ULA-15 30.38 ± 7.61 nd
ULA-16 '12.07±7.28' nd
ULA-17 3859±748' nd

34
 Resultados

20

r_

40

N
60

so

100
lE-O? 1E-06 1E-0S IE-04
Concentración (M}

Figura N° 4. Curvas concentración-respuesta a diferentes productos, diterpeno

isopimarano, sesquiterpenos longipinenos y benzoquinona, en anillos de aortas de
ratas SD precontraídos con fenitefrina 3 x 10 -6 M. t=p< 0.05 frente a DMSO.
 Resultados

2.2 Efecto vasodilatador "in vitro", en anillos de aorta con endotelio denudado.

Los productos naturales que mostraron una actividad vasodilatadora de más dei

50%, se seleccionaron con el fin de evaluar si la actividad vasodilatadora depende

completa o parcialmente dei endotelio, o simplemente no depende del. endotelio. En

el Cuadro N° 5 y Figuras N° 5 y 6, se compararon las respuestas de los productos con

endotelio denudado frente a los efectos de vasorelajación que se presentaban en las

curvas dosis-respuesta con endotelio intacto.

Se puedo observar en el Cuadro N° 11, que no hay diferencia significativa en el

efecto vasodilatador de ULA-9 en presencia y ausencia de endotelio. Igual se observa

con ULA- 13 que a pesar de generar un mayor efecto en ausencia del endotelio, este

no es significativo. En la CE 50 se vio un aumento de 1.0910X10 -4 M a 7.2911X10 5 M,

para ULA-9; y de 1.7082X10 5 M a 2.8481X10" 5 M, para ULA-13. Cabe destacar todos

estos aumentos comparados al aumento del DMSO E- muestra que no es un aumento

significativo puesto que no depende de la actividad per se del producto sino debido

a factores externos. También en ULA-11 no se vio afectado su actividad en ausencia

del endotelio, aunque a diferencia de ULA-9 y ULA-13 se observa una disminución

discreta de 87.30% a 81.75%, en aorta con endotelio y aorta sin endotelio,

respectivamente.

36
 Resultados

Cuadro N° 5. Valores máximos de relajación (E max ) y de concentración eficaz 50

(CE SO ) en curvas de concentración respuesta en aortas con endotelio (E+) y sin
endotelio (E-) de ratas SD, para diferentes productos naturales. '=p< 0.05 frente a
DMSO.

Producto Emax (E +) (M} Emax (E-) ( M)

DM SO 7.69 ± 2. 93 nd 17.4 0 ±5.13 nd

-4 1
ULA-9 51.61 ± 7 .62 ' 1. 09 10X10 62. 14 ±9.64 7.2911 X10 -5
1 -5 1
ULA-13 79.27±1.41 1. 708 2X 10 84.84 +3. 62 2 . 8 481X 10 -s

10

2á

30

40

so
1)
a
66

70

8D

06

140
I C-07 1E-0 7-0 5 í E-04

Conce,it, ación (M)

Figura N° 6. Curvas concentración-respuesta de ULA-9 en anillos de aortas con

endotelio denudado de ratas SD precontraídos con fenilefrina 3 x 10 -6 M. t=p<0.05
frente a DMSO E-, DMSO E+ y ULA-9 E+.

37
 Resultados

20

30

40
U
` tp SQ

^ bil

7e

00

90

100
1€-07 9€-06 a €-p5 IE-€14

Cono* ntración(M)

Figura N° 6. Cu rv as concen tración-respuesta de ULA-13 en anillos de aortas con

endotelio denudado de ratas SD precontraídos con fenilefrina 3 x 10 -6 M. t=p<0.05
frente a DMSO E-, DMSD E+ y ULA-13 E+.
 Resultados

2.3 Evaluación del efecto "in vitro" de las muestras con efecto vasodilatador

independiente del endotelio, sobre la curva concentración respuesta a

Noradrenalina (NA).

Se tomaron aquellos productos que presentaban actividad vasodilatadora

independiente del endotelio como ULA-9 para evaluar si ejercía efecto sobre la

contracción inducida por NA, se realizaron curvas concentración-respuesta a este

agente en presencia de los productos. No se incluyo en este protocolo a ULA-13, ya

que el mismo se agotó por lo tanto no hubo producto para este protocolo.

ULA-9 no inhibió de manera significativa la curva concentración respuesta a NA

en anillos de aortas, pues en ambos se alcanzó un efecto de contracción de 98%. Se

puede observar en la Figura N° 7, que la curva control y la curva en presencia de

ULA-9 para NA es muy similar, lo cual nos indica que no hubo ningún tipo de

inhibición.
 Resultados

11$

I aa

90

so

70
'o
ü 6

o JV

40

30

20

10

4
lE-77 lE lo 9E-09 1 -O IE-07 1E-O 1E-05 1E-04
Concentracíón(M)

Figura N° 7. Curva concentración respuesta a NA en presencia de tos productos ULA-9

en anillos de aortas de ratas 5D con endotelio.

40
DISCUSION
 Discusión

Este estudio de diferentes PNs, obtenidos de diferentes plantas nos da una rica y

variada perspectiva de cómo productos con diferentes estructuras químicas

pueden presentar efectos biológicos similares. En este caso el efecto a evaluar fue

la capacidad vasodilatadora de los diferentes PNs en anillos de aortas obtenidas de

ratas SD. Siempre frente a una contracción producida por FE un agonista a,

selectivo. Es importante mencionar que los PNs en este estudio no han sido

evaluados dentro del área vascular anteriormente.

A. Diterpenos Labdanos

Es interesante ver que tos Diterpenos Labdanos presentan actividad

vasodilatadora como se ha evidenciado en otros estudios realizados por Pereira de

Oliveira et al, 2006 y Lahlou et al, 2007; aunque en estos estudios el parámetro

principal a evaluar fue el efecto hipotensor, se dejó muy claro que al parecer la

principal vía para producir este efecto fue a través de mecanismos vasculares.

Solo uno de los diterpenos labdanos analizados en este estudio dio una actividad

de vasodilatación independiente de endotelio de manera significativa, el ULA-9.

Pero es importante mencionar que el ULA-5 se le acerco mucho, aunque no llegó

al 50% de relajación. Cabe destacar que estos diterpenos labdanos no pertenecen

a la misma planta ni siquiera a la misma familia de plantas; lo cual motiva a

pensar que probablemente estos compuestos puedan tener una actividad de

vasodilatación independiente del endotelio dentro de sus características

generales, pues en tos estudios mencionados anteriormente los diterpenos

labdanos que tuvieron actividad hipotensora lo hicieron independiente del NO y

otros con una dependencia parcial del NO y PGl 2, y su efecto se vio ligado al

42
 Discusión

bloqueo de la entrada de Ca z+ a través de canales tipo t de Ca e . Claro esta que

tiene sus excepciones ya que no todos tos diterpenos labdanos evaluados dieron

este efecto vasodilatación, probablemente, pequeñas pero significativas

diferencias entre los sustituyentes en sus estructuras químicas sean la razón por la

cual no todos produzcan este efecto. Siguiendo esta línea podemos mencionar que

los diterpenos tabdanos ULA-5 y ULA-9, al igual que los diterpenos tabdanos

evaluados en estudios anteriores como Labd-8 (17)- en-15-oic asid (Labd-8) y

Iabdano 8 (17), 12E, 14-labdatrien-18-oic acid (labdane-302), presentan dentro

de sus estructuras un grupo carbonilo per se como sustituyente, o un grupo

carbonilo sustituido, llamado entonces grupo acilo en donde R pueda ser "OH ó -

OCH 3 (Figura N°18) dando lugar a un sustituyente carboxílico o ester,

respectivamente. Aunque no es posible hacer una relación estructura actividad ya

que la cantidad de estructuras a comparar son muy pocas, podemos señalar que

entre las estructuras que tenemos, este grupo carbonilo ya sea sustituido o no, es

un factor que distingue de manera muy general a aquellos diterpenos tabdanos

que han presentado efecto vasodilatación.

C= /c=0 R: OH Grupo Carboxílico

R R: OCH3 Grupo Ester

Grupo carbonilo Grupo acilo

Figura N°18. Grupo Carbonilo

Existen muchos mecanismos de acción que se podrían estar desarrollando en el

efecto vasodilatación del ULA-9, pero partiendo de[ hecho que presentó un efecto

vasodilatación independiente del endotelio, y que el efecto contracturante se dio

43
 Discusión

por un agonista a, selectivo como lo es FE, se desarrollo el protocolo para

evidenciar si en su mecanismo de acción este implicado un efecto inhibidor a,. El

receptor at esta unido a la proteína G q que activa a ta enzima fosfolipasa C (PLC),

la cual hidroliza al 4,5-bifosfato de fosfotidilinositol (PIP 2 ) en dos segundos

mensajeros que son el diacilglicerol (DAG) y el 1,4, 5-trifosfato de inositol (IP 3 ). El

DAG activa a la proteincinasa C mientras que el IP 3 genera la liberación de Ca2+

del retículo sarcoplasmico el cual se une en un complejo con la calmoludina, una

proteína fijadora de calcio. Este complejo regula las actividades de otras enzimas,

incluyendo Las proteincinasas dependientes de calcio. Esto produce la contracción

del muscuto liso vascular (Katzung, 1999). Si se bloquea a receptor ai, no se puede

producir una vasoconstricción, y por ende un posible antagonismo producirá una

vasodilatación frente al efecto de un agonista ai.

Dentro de los resultados obtenidos en nuestro estudio se pudo observar que ULA-9

no ejerció ningún efecto inhibidor sobre el receptor a, , la curva dosis-respuestas a

NA no se modificó en la CE 50 ni en el Emax. Esto indica que probablemente su

mecanismo de acción vaya por la línea de un bloqueo a la entrada de calcio, como

lo evidenciaron estudios anteriores. De esta manera se abre un marco para futuros

protocolos con la finalidad de dilucidar el posible mecanismo de acción implicado

en el efecto vasorelajante de ULA-9.

B. Diterpenos Kauranos

De entre los diterpenos Kauranos el ULA-13 es el único que presenta actividad de

vasodilatación significativa la cual es independiente del endotelio. Cónsono a

nuestro estudio fueron los obtenidos por Ambrossio et al, 2004 y Tirapelli et al,
44
 Discusión

2005, donde los diterpenos kauranos mostraron actividad de vasodilatación de

72.27+3.79% en aortas con endotelio y de 73.28+5.91% en endotelio denudado. En

Al igual estos estudios, nuestros estudios muestran el efecto vascular de los

agentes kauranos independiente de la función endotelial. Esta similitud de los

resultados nos lleva a deducir, que probablemente, dentro de las características

comunes de los diterpenos kauranos esta su capacidad vasodilatadora que es

independiente del endotelio.

El estudio por Ambrossio et al, 2004 evalúa el rol del grupo carboxílico en este

carbono 19 (C-19) del ácido ent-kaur-16-en-19-oico, en este estudio se observó

una disminución del efecto vasodilatación cuando el mismo se metiló pero no se

eliminó dicho efecto por completo. En nuestros resultados se observa que el ULA-

14, el cual mostró un efecto muy discreto, tiene en su C-19 un grupo alcohol y no

un grupo carboxílico. Pero el ULA-13 si muestra un efecto significativo de

vasodilatación independiente del endotelio y posee un grupo carboxílico en el C-

19; al igual que los diterpenos kauranos evaluados en tos estudios ya mencionados.

Esto da a lugar a suponer que el grupo carboxílico en el C-19 pueda tener alguna

relación con el efecto vasodilatación de los diterpenos Kauranos. Claro esta, no

podemos asegurar que exista una relación estructura-actividad entre este grupo

carboxílico en el C-19 y el efecto vasodilatación o de importancia cardiovascular,

pues no contamos con las suficientes estructuras de diferentes diterpenos

kauranos; pero si crea un marco para considerar esta hipótesis y en un futuro

evaluar este parámetro.

45
 Discusión

C. Flavonoides

Los flavonoides evaluados en este estudio fueron cuatro: ULA-10, ULA-11, UL4-19

y ULA-21; de los cuales los cuatro presentaron una actividad de vasodilatación

muy significativa, aunque con diferencias, ya que ULA-11 fue la única en presentar

este efecto sin depender del endotelio. En los demás flavonoides su efecto

vasodilatación se vio disminuido de una manera muy significativa cuando el

endotetio fue denudado.

Estudios como los de Fitzpatrick et al.1993 y Perez-Vizcaino et al, 2002 evidencian

que ciertamente los flavonoides presentan efectos vasodilatador, aunque por su

versatilidad de ser dependientes e independientes del endotetio presentan

diferentes vías por los cuales pueden ejercen su mecanismo de acción. Y gracias a

esto es difícil hacer una relación estructura actividad en este estudio pues no

contamos con suficientes estructuras de flavonoides, además at compararla con

otros flavonoides estudiados como la quercetina y sus metabolitos podemos ver

que no hay casi diferencias entre una y otra, ya que presentan actividad de

vasodilatación dependiente e independiente de endotetio lo hace aun mas difícil

esta labor. Pero es un objeto de estudio muy interesante para estudios

posteriores.

D. Diterpeno Isopimarano, sesquiterpenos longipinenos y benzoquinonas.

Aunque el Diterpenos Pimarano, anteriormente muestran una buena actividad de

vasodilatación en el estudio de Tirapelti et al, 2008; en este estudio el diterpeno

isopimarano evaluado no dio una actividad de vasodilatacoón significativa. Como

46
 Discusión

también los dos sesquiterpenos longipinenos y la benzoquinona no mostraron

actividad vasoditatadora significativa en este estudio.

47
BIBL1OGRAF1A
Ambrosio SR, Tirapelti CR, da Costa FB, de Oliveira AM. (2006) Kaurane and
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