Descubrimiento de drogas de plantas medicinales

La investigación actual en el descubrimiento de fármacos a partir de plantas medicinales implica un

enfoque multifacético que combina aspectos botánicos, fitoquímicos, biológicos, y técnicas
moleculares. El descubrimiento de medicamentos en plantas medicinales continúa proporcionando
nuevas e importantes pistas contra varios objetivos farmacológicos incluyendo cáncer, VIH / SIDA,
Alzheimer, malaria y dolor. Varios medicamentos de origen vegetal de origen natural han sido
introducidos recientemente en el mercado de los Estados Unidos, incluido arteéter, galantamina,
nitisinona y tiotropio, o están actualmente involucrados en ensayos clínicos de fase tardía. Como
parte de nuestro proyecto de investigación del National Cooperative Drug Discovery Group
(NCDDG), numerosos compuestos de especies de plantas de bosques tropicales con actividad
potencial contra el cáncer han sido identificados. Nuestro grupo también ha aislado varios
compuestos, principalmente de especies de plantas comestibles o plantas utilizadas como
suplementos dietéticos, que pueden actuar como agentes quimiopreventivos. Aunque el
descubrimiento de fármacos de plantas medicinales continúa brindando una importante fuente de
nuevas fuentes de drogas, se encuentran numerosos desafíos, incluida la adquisición de
materiales vegetales, la selección e implementación de bioensayos de cribado de alto rendimiento
apropiados y la ampliación de compuestos activos.

D 2005 Elsevier Inc. Todos los derechos reservados.

Introducción

Las plantas se han utilizado como medicinas para miles de años (Samuelsson, 2004). Estos
medicamentos inicialmente tomaron la forma de medicamentos crudos como tinturas, tés,
cataplasmas, polvos, y otras formulaciones a base de hierbas (Balick y Cox, 1997; Samuelsson,
2004). Las plantas específicas que se utilizarán y los métodos de aplicación para dolencias
particulares fueron pasados a través de la historia oral. Finalmente, la información sobre las plantas
medicinales se registró en hierbas. En más reciente historia, el uso de plantas como medicinas ha
involucrado aislamiento de compuestos activos, comenzando con el aislamiento de morfina del
opio a principios del siglo XIX (Kinghorn, 2001; Samuelsson, 2004). Descubrimiento de
medicamentos a partir de medicamentos las plantas condujeron al aislamiento de drogas
tempranas como la cocaína, codeína, digitoxina y quinina, además de morfina, de algunos todavía
están en uso (Newman et al., 2000; Butler, 2004; Samuelsson, 2004). Aislamiento y caracterización
farmacológica compuestos activos de plantas medicinales hoy. Más recientemente, las técnicas de
descubrimiento de fármacos han sido aplicado a la estandarización de las hierbas medicinales,
para dilucidar compuestos marcadores analíticos. El siguiente proporciona una breve revisión de la
importancia de las plantas medicinales en el descubrimiento de fármacos incluyendo compuestos
notables aislados de esta fuente, nuestra investigación que implica quimiopreventivo contra el
cáncer y el cáncer descubrimiento de drogas usando plantas medicinales, y finalmente corriente
desafíos en relación con el descubrimiento de fármacos en plantas medicinales.

El descubrimiento de fármacos de plantas medicinales ha evolucionado a incluyen numerosos

campos de investigación y varios métodos de análisis. El proceso generalmente comienza con un
botánico, etnobotánico, etnofarmacólogo o ecólogo de plantas que recoge e identifica la (s) planta
(s) de interés. Colección puede involucrar especies con actividad biológica conocida para la cual
compuesto (s) no se han aislado (por ejemplo, tradicionalmente utilizados remedios herbales) o
pueden involucrar taxones recolectados al azar para un gran programa de cribado Es necesario
respetar el derecho de propiedad intelectual de un país determinado donde planta (s) de interés se
recogen (Baker et al., 1995). Fitoquímicos (químicos de productos naturales) preparar extractos de
la planta materiales, someter estos extractos a un examen biológico en ensayos
farmacológicamente relevantes, y comenzar el proceso de aislamiento y caracterización del (de
los) compuesto (s) activo (s) a través del fraccionamiento guiado por bioensayos. La biología
molecular tiene convertido en esencial para el descubrimiento de medicamentos de plantas
medicinales a través del determinación e implementación del examen apropiado ensayos dirigidos
hacia molecular fisiológicamente relevante objetivo. La farmacognosia encapsula todos estos
campos en una distinta ciencia interdisciplinaria.

La definición y práctica de farmacognosia han sido evolucionando desde que el término se

introdujo por primera vez alrededor de 200 años Hace (Kinghorn, 2001; Samuelsson, 2004), como
el uso de drogas de plantas medicinales ha progresado desde la formulación de crudo drogas para
el aislamiento de compuestos activos en el descubrimiento de fármacos. La Sociedad Americana
de Farmacognosia se refiere a la farmacognosia como '' el estudio de lo físico, químico, bioquímico
y propiedades biológicas de drogas, sustancias farmacológicas o potencial drogas o drogas de
origen natural, así como la búsqueda para nuevas drogas de fuentes naturales ''. Como se practica
hoy, La farmacognosia implica el amplio estudio de productos naturales de diversas fuentes,
incluidas plantas, bacterias, hongos y organismos marinos. La farmacognosia incluye tanto el
estudio de suplementos dietéticos botánicos, incluidos remedios herbales (Tyler, 1999; Cardellina,
2002), así como la búsqueda de cables de medicamentos compuestos que pueden continuar a
través de desarrollo en la Administración de Alimentos y Medicamentos (FDA) - medicinas
aprobadas El descubrimiento de fármacos de plantas medicinales es más frecuentemente asociado
con el segundo de estos dos esfuerzos. Colegas en Suecia han sugerido una revisión definición de
farmacognosia para este tipo de actividades, a saber, como '' una ciencia molecular que explora de
forma natural relaciones estructura-actividad existentes con un potencial de drogas '' (Bruhn y
Bohlin, 1997).

Importancia de las plantas medicinales en el descubrimiento de fármacos

Numerosos métodos se han utilizado para adquirir compuestos para el descubrimiento de

fármacos, incluido el aislamiento de las plantas y otras fuentes naturales, química sintética,
combinatoria química y modelado molecular (Ley y Baxendale, 2002; Geysen et al., 2003;
Lombardino y Lowe, 2004). A pesar del reciente interés en el modelado molecular, combinatoria
química y otras técnicas de química sintética por compañías farmacéuticas y organizaciones de
financiación, naturales productos, y en particular las plantas medicinales, siguen siendo una
importante fuente de nuevas drogas, nuevas pistas de drogas y nueva sustancia química entidades
(NCE) (Newman et al., 2000, 2003; Butler, 2004). En tanto 2001 como 2002, aproximadamente una
cuarta parte del bestseller drogas en todo el mundo eran productos naturales o derivados de
productos naturales (Butler, 2004). También hay cuatro nuevos medicamentos derivados de
plantas medicinales que se han introducido recientemente al mercado de EE. UU. (Fig. 1, 1-4).
Arteether (1, nombre comercial Artemotil \) es un potente antipalúdico medicamento y se deriva de
la artemisinina, un sesquiterpeno lactona aislada de Artemisia annua L. (Asteraceae), una planta
utilizado en la medicina tradicional china (TCM) (van Agtmael et al. al., 1999; Graul, 2001). Otros
derivados de la artemisinina están en varias etapas de uso o ensayos clínicos como medicamentos
contra la malaria en Europa (van Agtmael et al., 1999). Galantamina (2, también conocida como
galantamina, nombre comercial) Reminyl \) es un producto natural descubierto a través de un
plomo etnobotánico y primero aislado de Galanthus woronowii Losinsk. (Amaryllidaceae) en Rusia
a principios de 1950 (Heinrich y Teoh, 2004; Pirttila et al., 2004).
Fig. 1. Ejemplos de nuevos medicamentos de plantas medicinales introducidos recientemente en el
mercado o
en ensayos clínicos de fase tardía.

aprobado para el tratamiento de la enfermedad de Alzheimer, ralentizando el proceso de

degeneración neurológica al inhibir la acetilcolinesterasa (AChE), así como la vinculación y la
modulación del receptor de acetilcolina nicotínico (nAChR) (Heinrich and Teoh, 2004; Pirttila et al.,
2004).

Nitisinone (3, nombre comercial Orfadin \) es un recién lanzado medicamento derivado de plantas
medicinales que funciona en la rara herencia enfermedad, tirosinemia, demostrando la utilidad de
productos como estructuras de plomo (Frantz y Smith, 2003). Nitisinone es una modificación de
mesotriona, un herbicida basado en el producto natural leptospermone, un constituyente de
Callistemon citrinus Stapf. (Myrtaceae) (Hall et al., 2001b; Mitchell y otros, 2001). Las tres de estas
tricetonas inhiben la misma enzima, 4-hidroxifenilpiruvato deshidrogenasa (HPPD), tanto en
humanos como en maíz (Hall et al., 2001b; Mitchell y otros, 2001). Inhibición de la enzima HPPD
en el maíz actúa como un herbicida y da como resultado la reducción de biosíntesis de
plastoquinona y tocoferol, mientras que en humanos la inhibición de la enzima HPPD previene el
catabolismo de la tirosina y la acumulación de bioproductos tóxicos en el hígado y los riñones (Hall
et al., 2001b).

El tiotropio (4, nombre comercial Spiriva \) ha sido recientemente lanzado al mercado de los
Estados Unidos para el tratamiento de enfermedades crónicas enfermedad pulmonar obstructiva
(EPOC) (Mundy y Kirkpatrick, 2004; Frantz, 2005). Tiotroprium es un inhalado broncodilatador
anticolinérgico, basado en ipratropio, un derivado de atropina que ha sido aislada de Atropa
belladonna L. (Solanaceae) y otros miembros de la Familia de solanáceas (Barnes et al., 1995;
Dewick, 2002; Mundy y Kirkpatrick, 2004). El tiotropio ha aumentado eficacia y efectos más
duraderos en comparación con otros medicamentos disponibles para la EPOC (Barnes, 2002;
Mundy y Kirkpatrick, 2004).

Los compuestos 5-7 (figura 1) están todos en ensayos clínicos de fase III o registro y son
modificaciones sutiles de las drogas actualmente en uso clínico (Butler, 2004). M6G o morfina-6-
glucurónido (5) es un metabolito de la morfina de Papaver somniferum L. (Papaveraceae) y se
usará como medicamento alternativo para el dolor con menos efectos secundarios que la morfina
(Lotsch y Geisslinger, 2001). Vinflunina (6) es una modificación de vinblastina de Catharanthus
roseus (L.) G. Don (Apocynaceae) para su uso como agente anticanceroso con eficacia mejorada
(Bonfil et al., 2002; Okouneva et al., 2003). Exatecan (7) es un análogo de camptotecina de
Camptotheca acuminata Decne. (Nyssaceae) y se está desarrollando como un agente
anticancerígeno (Butler, 2004; Cragg y Newman, 2004). Modificaciones de las existentes los
productos naturales ejemplifican la importancia del descubrimiento de fármacos de plantas
medicinales como NCE y como posibles nuevas pistas de drogas. La calanolida A (8) (Fig. 1) es
una dipyranocoumarin natural producto aislado de Calophyllum lanigerum var. Austrocoriaceum
(Whitmore) P.F. Stevens (Clusiaceae), un malasio árbol de la selva (Kashman et al., 1992; Yang et
al., 2001; Yu et al. al., 2003). Calanolide A es un medicamento contra el VIH con un único y
mecanismo de acción específico como un reverso no nucleósido inhibidor de la transcriptasa
(ITINN) del VIH tipo 1 y es efectivo contra cepas de VIH resistentes al AZT (Currens et al., 1996;
Buckheit y otros, 1999; Yu et al., 2003).

Exatecan (7) es un análogo de la camptotecina de Camptotheca acuminata Decne. (Nyssaceae) y

se está desarrollando como un agente contra el cáncer (Butler, 2004; Cragg y Newman, 2004). Las
modificaciones de productos naturales existentes ejemplifican la importancia del descubrimiento de
fármacos de plantas medicinales como NCE y como posibles nuevas pistas de drogas.

La calanolida A (8) (Fig. 1) es un producto natural de dipyranocoumarin aislado de Calophyllum

lanigerum var. austrocoriaceum (Whitmore) P.F. Stevens (Clusiaceae), un árbol de la selva de
Malasia (Kashman et al., 1992, Yang et al., 2001, Yu et al., 2003). Calanolide A es un fármaco anti-
VIH con un mecanismo de acción único y específico como un inhibidor no nucleósido de la
transcriptasa inversa (ITINN) del VIH tipo 1 y es eficaz contra cepas de VIH resistentes a AZT
(Currens et al., 1996; Buckheit y otros, 1999, Yu et al., 2003). Calanolide A se encuentra
actualmente en ensayos clínicos de Fase II (Creagh et al., 2001).

Los productos naturales han jugado un papel importante como nuevas entidades químicas (ECN):
aproximadamente el 28% de las ECN entre 1981 y 2002 fueron productos naturales o derivados de
productos naturales (Newman et al., 2003). Otro 20% de NCEs durante este período de tiempo se
consideraron imitaciones de productos naturales, lo que significa que el compuesto sintético se
derivó del estudio de productos naturales (Newman et al., 2003). Combinando estas categorías, la
investigación sobre productos naturales representa aproximadamente el 48% de los NCE
reportados entre 1981 y 2002. Los productos naturales proporcionan un punto de partida para
nuevos compuestos sintéticos, con diversas estructuras y, a menudo con múltiples estereocentros
que pueden ser un desafío sintético (Clardy y Walsh, 2004, Nicolaou y Snyder, 2004, Peterson y
Overman, 2004, Koehn y Carter, 2005).

Se ha demostrado que muchas características estructurales comunes a productos naturales (por

ejemplo, centros quirales, anillos aromáticos, sistemas de anillos complejos, grado de saturación
de moléculas y número y proporción de heteroátomos) son muy relevantes para los esfuerzos de
descubrimiento de fármacos (Lee y Schneider, 2001; Feher y Schmidt, 2003; Clardy y Walsh, 2004;
Piggott y Karuso, 2004; Koehn y Carter, 2005). Además, dado que la escalada de interés en la
química combinatoria y la posterior comprensión de que estas bibliotecas compuestas no siempre
pueden ser muy diversas, muchos químicos sintéticos y medicinales están explorando la creación
de productos naturales y bibliotecas de productos naturales que combinen las características
estructurales de los productos naturales con el compuesto. generando potencial de química
combinatoria (Hall et al., 2001a, Eldridge et al., 2002, Burke et al., 2004, Ganesan, 2004, Tan,
2004). Los medicamentos derivados de plantas medicinales pueden servir no solo como nuevos
medicamentos, sino también como fármacos adecuados para la optimización por parte de los
químicos medicinales y sintéticos.

Incluso cuando no se encuentran nuevas estructuras químicas durante el descubrimiento de

fármacos de plantas medicinales, los compuestos conocidos con nueva actividad biológica pueden
proporcionar pistas importantes de fármacos. Ya que la secuenciación del genoma humano, miles
de nuevos objetivos moleculares han sido identificados como importantes en diversas
enfermedades (Kramer y Cohen, 2004). Con el advenimiento de ensayos de cribado de alto
rendimiento dirigidos a estos objetivos, los compuestos conocidos de plantas medicinales pueden
mostrar prometedores y posiblemente actividad selectiva. Se ha demostrado ya que varios
compuestos conocidos aislados de plantas medicinales tradicionalmente utilizadas actúan sobre
dianas moleculares recientemente validadas, como se ejemplifica con la indirrubina, que inhibe
selectivamente la ciclina dependientes quinasas (Hoessel et al., 1999; Eisenbrand et al., 2004) y
kamebakaurin, que se ha demostrado que inhibe la NF-nB (Hwang y otros, 2001; Lee et al., 2002).

También se ha demostrado que otros compuestos conocidos actúan sobre nuevos objetivos
moleculares, reviviendo así el interés en los miembros de estas clases de compuestos de plantas
frecuentemente aislados. Tres ejemplos son cucurbitacina I, obtenida del conjunto de diversidad
del Instituto Nacional del Cáncer (NCI) de compuestos conocidos y que se encontró que es
altamente selectiva para inhibir la vía JAK / STAT3 en tumores con STAT3 activado (Blaskovich et
al., 2003), h-lapachona , que selectivamente mata las células cancerosas sobre las células
normales a través de la activación del punto de control directo durante el ciclo celular (Li et al.,
2003), y el ácido betulínico, con citotoxicidad selectiva del melanoma a través de la activación de
p38 (Pisha et al., 1995; Tan et al., 2003; Cichewicz y Kouzi, 2004).

El descubrimiento de fármacos de plantas medicinales ha jugado un papel importante en el

tratamiento del cáncer y, de hecho, la mayoría de las nuevas aplicaciones clínicas de metabolitos
secundarios de plantas y sus derivados en el último medio siglo se han aplicado para combatir el
cáncer (Newman et al., 2000, 2003; Butler, 2004). De todos los medicamentos contra el cáncer
disponibles entre 1940 y 2002, El 40% fueron productos naturales per se o productos naturales
derivados, y otro 8% se consideró imitaciones de productos naturales (Newman et al. al., 2003).
Los agentes anticancerosos de plantas actualmente en uso clínico se pueden categorizar en cuatro
clases principales de compuestos: vinca (o Catharanthus) alcaloides, epipodofilotoxinas, taxanos y
camptotecinas. Vinblastina y vincristina se aislaron de Catharanthus roseus (L.) G. Don
(Apocynaceae) (anteriormente Vinca rosea L.) y se han utilizado clínicamente durante más de 40
años (van Der Heijden et al., 2004). Los alcaloides de la vinca y varios de sus derivados
semisintéticos bloquean la mitosis con detención metafásica al unirse específicamente a la
tubulina, lo que resulta en su despolimerización (Okouneva et al., 2003). Podofilotoxina se aisló de
la resina de Podophyllum peltatum L. (Berberidaceae) pero se encontró que era demasiado tóxico
en ratones, por lo que los derivados se hicieron con el primer fármaco aprobado clínicamente como
etopósido (Gordaliza et al., 2004). El epipodofilotox- se unen a la tubulina, causando roturas de la
cadena de ADN durante la fase G2 del ciclo celular al inhibir irreversiblemente la topoisomerasa II
del ADN (Gordaliza et al., 2004). El paclitaxel se aisló originalmente de Taxus brevifolia Nutt.
(Taxaceae) y se introdujo clínicamente en el mercado de EE. UU. A principios de la década de
1990 (Wall y Wani, 1996; Oberlies y Kroll, 2004). Los taxanos, incluidos paclitaxel y derivados,
actúan uniendo la tubulina sin permitir la depolymerización o interferencia con el ensamblaje de
tubulina (Schiff et al., 1979; Horwitz, 2004). La camptotecina se aisló de Camptotheca acuminata
Decne. (Nyssaceae) pero originalmente mostró mielosupresión inaceptable (Wall y Wani, 1996;
Cragg y Newman, 2004). Se revivió el interés por la camptotecina cuando se descubrió que
actuaba por inhibición selectiva de la topoisomerasa I, implicada en la escisión y el reensamblaje
del ADN (Cragg y col.Newman, 2004). Juntos, los taxanos y los camptothecins representaron
aproximadamente un tercio del cáncer global mercado en 2002, más de 2.750 millones de dólares
(Oberlies y Kroll, 2004). Numerosos derivados de las cuatro clases compuestas tienen sido
sintetizados, algunos de los cuales están actualmente en uso clínico. Todas de estos productos
naturales han dado lugar a importantes biológicos descubrimientos relacionados con sus
mecanismos de acción únicos.

Con una subvención del Grupo Nacional de Descubrimiento de Drogas Cooperativas (NCDDG, por
sus siglas en inglés) financiada por el Instituto Nacional del Cáncer de EE. UU. (NCI) titulada
"Nuevas estrategias para combatir el cáncer de origen vegetal".

Agentes '' (U01 / U19 CA52956), nos hemos esforzado por descubrir nuevos agentes
anticancerosos a partir de plantas medicinales (véase la revisión más reciente, Kinghorn et al.,
2003). La colaboración actual se encuentra ahora entre la Universidad Estatal de Ohio (OSU,
responsable de química de aislamiento, dereplicación y núcleo administrativo), Universidad de
Illinois en Chicago (UIC, responsable de selección de plantas, adquisición y gestión de información,
así como bioensayos de fibra hueca e in vitro), Research Triangle Institute (RTI) , un instituto
privado de investigación y un colaborador responsable de química de aislamiento y bioensayos in
vitro), y Bristol-Myers Squibb (BMS, nuestro colaborador industrial que realiza bioensayos,
optimización del plomo y desarrollo de compuestos), con un coordinador del programa del NCI.

Hasta 2003, se habían recolectado 5886 accesiones de plantas que representaban 2582 especies
de 1358 géneros en 288 familias. Las recolecciones de plantas han ocurrido principalmente en
bosques tropicales debido a su capacidad para apoyar especies altamente diversas con un gran
número de taxones endémicos amenazados debido a la pérdida de hábitat (Burslem et al., 2001;
Pitman y Jo ̈ rgensen, 2002). Se lleva a cabo un acuerdo formal de recolección de plantas por
escrito con la fuente países antes de todas las colecciones de plantas. Los extractos solubles en
cloroformo se preparan a partir de una pequeña muestra de cada accesión (Wall et al., 1996) y
luego se cribaron en una batería de bioensayos in vitro que incluyen un panel de prueba de líneas
de células tumorales humanas en UIC, así como paneles de diversos ensayos mecanísticos y
basados en células en RTI y BMS. Ejemplos de ensayos basados en mecanismos incluyen un
ensayo de inhibición del proteasoma (Almond y Cohen, 2002; Adams, 2004) y un ensayo de
inhibición de la histona deacetilasa (HDAC) (Johnstone, 2002; Villar-Garea y Esteller, 2004). Los
extractos activos se someten luego a LC'MS '' derrumbamiento '' para determinar si el extracto
contiene compuestos citotóxicos previamente aislados (Cordell y Shin, 1999; Jones et al., 2003;
Kinghorn et al., 2003). Los extractos se priorizan para un trabajo fitoquímico adicional si no se
encuentran masas de compuestos citotóxicos conocidos. El fraccionamiento guiado por bioensayo
se utiliza para aislar y caracterizar el (los) compuesto (s) activo (s), el más prometedor de los
cuales se somete a ensayo en el ensayo de fibra hueca in vivo (Hollingshead et al., 1995; Mi et al.,
2002). Se realizan estudios biológicos adicionales (por ejemplo, mecanismo de acción y modelos
de xenoinjerto) para el seguimiento de compuestos de interés significativo.

Numerosos tipos de compuestos bioactivos han sido aislados como parte de este proyecto de
NCDDG, incluyendo alcaloides, cumarinas, cucurbitacinas, diarilheptanoides, ácidos grasos,
flavonoides, iridoides, lignanos, limonoides, naftoquinonas, oligorhamnosides, physalins, derivados
de fenantreno, poliacetilenos, estilbenoides, sesquiterpenoides y triterpenoides (Kinghorn et al.,
1995, 1999, 2003; Kinghorn, 2001). Varios de estos compuestos están actualmente en
investigación adicional (Fig. 2) que incluyen ácido betulínico (9), pervilleína A (10) y silvestrol (11).

El ácido betulínico (9), un triterpeno pentacíclico, es un metabolito secundario común de las

plantas, principalmente de las especies Betula (Betulaceae). Durante el curso de este programa
NCDDG, el ácido betulínico se aisló de Ziziphus mauritiana Lam. (Rhamnaceae) recolectadas en
Zimbabwe (Pisha et al., 1995). El extracto es soluble en acetato de etilo mostró citotoxicidad
selectiva contra células de melanoma humano (MEL-2). El ácido betulínico era aislado utilizando
fraccionamiento guiado por bioensayo que incluye cromatografía sobre gel de sílice y técnicas de
cristalización. Este compuesto fue selectivamente citotóxico contra varias líneas celulares de
cáncer de melanoma humano (dosis efectiva mitad MEL-1 máxima (ED50) = 1,1 Ag / ml, MEL-2
ED50 = 2,0 Ag / ml, y MEL-4 ED50 = 4,8 Ag / ml). Se descubrió que el ácido betulínico era activo in
vivo usando ratones atímicos portadores de melanomas humanos, con poca toxicidad.

Otros estudios biológicos indicaron que el ácido betulínico funciona por inducción de apoptosis
(Pisha et al., 1995). El desarrollo preclínico hacia una formulación tópica está en curso,
encabezado por el Dr. Tapas K. Das Gupta de la Universidad de Illinois en Chicago.

Pervilleine A (10), junto con otros ocho alcaloides tropanos, se aisló de las raíces de Erythroxylum
pervillei Baill. (Erythroxylaceae) recolectada en el sur de Madagascar (Silva et al., 2001). Se
descubrió que el extracto soluble en cloroformo era selectivamente citotóxico contra una línea
celular de cáncer epidermoide oral resistente a múltiples fármacos (MDR) (KB-V1) en presencia del
agente anticanceroso vinblastina. Las pervilleínas se aislaron usando fraccionamiento guiado por
bioensayo que incluía cromatografía en gel de sílice y cromatografía de óxido de aluminio.
Pervilleine
Fig. 2. Compuestos de NCDDG del proyecto "Nuevas estrategias para plantas" agentes
anticáncer derivados '' actualmente en proceso de investigación.

A fue selectivamente citotóxico contra KB-V1 en presencia de vinblastina (ED50 = 0,3 Ag / ml). Se
llevaron a cabo más estudios in vitro relacionados con la inhibición de MDR en comparación con
agentes MDR existentes que incluyen verapamil (Mi et al., 2001). Luego se probó la pervilleína A
en el modelo de fibra hueca in vivo con resultados prometedores que indican que con células KB-8-
5, la pervilleína A puede ser más efectiva que el verapamilo para revertir la MDR (Mi et al., 2001).
Evaluación in vivo adicional está planificado para pervilleine A, incluidas las pruebas en un modelo
de ratón de xenoinjerto para MDR.

Silvestrol (11) se aisló por primera vez de los frutos de Aglaia sylvestris (M. Roemer) Merrill
(Meliaceae) (más tarde identificado de nuevo como Aglaia foveolata Pannell) recogidos en
Indonesia (Hwang et al., 2004). El extracto soluble en cloroformo resultó ser citotóxico para varias
líneas celulares de cáncer humano y, más importante aún, el extracto fue activo en la prueba in
vivo P-388 sistema. El fraccionamiento guiado por bioensayo se realizó usando cromatografía de
gel de sílice y cromatografía líquida de alta presión (HPLC) de fase inversa que conduce al
aislamiento de silvestrol. Silvestrol fue citotóxico contra pulmón (Lu1, ED50 = 1,2 nM), próstata
(LNCaP, ED50 = 1,5 nM) y células de cáncer de mama (MCF-7, ED50 = 1,5 nM), así como contra
células endoteliales de vena umbilical (HUVEC, ED50 = 4.6 nM).

Silvestrol se probó después en el bioensayo de fibra hueca in vivo y exhibió citotoxicidad

dependiente de la dosis sin pérdida de peso significativa. Silvestrol también mostró actividad a un
máximo dosis tolerada de 2.5 mg / kg / inyección cuando se administra por vía intraperitoneal dos
veces al día durante 5 días en el modelo de leucemia murina P-388 (Hwang et al., 2004). Los
estudios biológicos son en curso para determinar el (los) mecanismo (s) de acción para el
silvestrol. Tras la recolección de los materiales de la planta y el posterior reaislamiento, el silvestrol,
o uno de sus análogos, será sometido para continuar estudios y, con suerte, desarrollo preclínico.

Dos de estos compuestos, el ácido betulínico y la pervilleína A, se están desarrollando en el marco

del programa de Acceso Rápido a la Intervención (RAID) en NCI, que facilita la traducción a la
clínica de terapias importantes originarios de la comunidad académica (ver http:
//dtp.nci/nih.gov/docs/raid/raid_pp.html). Actualmente, se están llevando a cabo más estudios sobre
silvestrol a través de los auspicios de nuestro proyecto NCDDG.

Debido a que la quimioprevención del cáncer está diseñada para ocurrir antes del inicio del
diagnóstico de cáncer, se puede tolerar poca o ninguna toxicidad (la quimioprevención también
puede aplicarse para prevenir la recurrencia del cáncer, en cuyo caso los niveles de toxicidad
ligeramente más altos son aceptables). Como tal, las hierbas medicinales, botánicos, suplementos
dietéticos y plantas comestibles se han sugerido como potencialmente importante en la
quimioprevención del cáncer debido a su larga historia de consumo humano (Park y Pezzuto, 2002;
Reddy et al., 2003; Surh, 2003; Kinghorn et al., 2004). Varios compuestos prometedores derivados
de plantas están en ensayos clínicos a través de los auspicios del Instituto Nacional del Cáncer de
EE. UU. como posibles agentes quimiopreventivos contra el cáncer, incluida la curcumina (Fase I
de colon), genisteína (Fase I de mama y endometrio), isoflavonas de soja (Fase II de próstata),
indol-3-carbinol (Fase I de mama recurrencia), alcohol perílico (mama de fase I), diversas formas
de ácido retinoico (más de 100 ensayos clínicos en curso), fenetil isotiocianato (Fase I del pulmón),
té verde / galato de epigalocatequina (Fase II de mama, Fase I de cáncer no especificado, Fase II
de recurrencia de vejiga) y resveratrol (Fase I de cáncer no especificado) (Kell-Off et al., 2000;
Greenwald, 2002). Estos y otros agentes quimiopreventivos fitoquímicos prometedores funcionan
mediante diversos mecanismos de acción dirigidos a la iniciación, promoción y progresión de la
carcinogénesis.

A través de una subvención de Project Program financiada por el NCI titulada "Inhibidores
naturales de la carcinogénesis" (P01 CA48112), hemos intentado descubrir un cáncer prometedor.
agentes quimiopreventivos de plantas (ver una revisión reciente, Kinghorn et al., 2004). Esta
colaboración entre Purdue University y UIC ha involucrado aspectos de la adquisición de plantas,
extracción, pruebas in vitro e in vivo, aislamiento, elucidación de estructuras, estudios
mecanísticos, escalamiento compuesto, química, cromatografía líquida-espectrometría de masas
(LC-MS), cultivo de órganos mamarios de ratón (MMOC), bioestadística y biología estructural.

A lo largo de la duración de este proyecto, se han recogido más de 5000 accesiones de plantas de
más de 10 países. Se hizo hincapié en las plantas que se sabe que son comestibles  y endémico de
su país de origen, con acuerdos adecuados de distribución de beneficios en vigor antes de la
recolección de plantas. Pequeñas muestras de materiales de plantas secas se extraen utilizando
un estándar el esquema de partición del disolvente y los extractos solubles en acetato de etilo se
presentan para pruebas biológicas en un panel de bioensayos in vitro Se han empleado y
actualizado diversos tipos de ensayos a medida que se obtiene nueva información sobre los
objetivos de quimioprevención apropiados, que incluyen antimutagenicidad, antioxidante,
diferenciación de células HL-60, inducción de quinina reductasa, inhibición de aromatasa, inhibición
de ciclooxigenasa-1 y -2, inhibición de la proteína cinasa C, inhibición de la ornitina descarboxilasa
y bioensayos de antagonistas / agonistas del receptor de estrógenos (Pezzuto et al., 1999). Los
extractos activos luego se someten a un fraccionamiento guiado por bioensayos para aislar y
caracterizar los compuestos activos, los más prometedores de los cuales se prueban en un ensayo
de MMOC para identificar inhibidores de 7,12 - dimetilbenz (a) antraceno (DMBA) - lesiones
inducidas en un entorno ex vivo (Mehta et al., 1997; Mehta et al., 2001). Otros estudios de
inhibición de tumorigénesis a término completo, se realizan para los compuestos más
prometedores.

A partir de 2003, se aislaron casi 30 tipos diferentes de compuestos activos como parte de este
proyecto con más de 250 compuestos activos totales obtenidos (Kinghorn et al., 2004). Varios de
los compuestos más interesantes se muestran en la Fig. 3, incluyendo resveratrol (12),
ixocarpalactona A (13), isoliquiritigenina (14) y cuatro flavonoides de Broussonetia papyrifera Vent.
(Urticaceae) (15-18).

Resveratrol (12), o 3,5,4V-trihydroxy-trans-stilbene, fue aislado durante el curso de este proyecto

de Cassia quinquangulata Rich. (Caesalpiniaceae) recolectadas en Perú (Janet al., 1997). Se
encontró que el extracto soluble en acetato de etilo inhibe la enzima ciclooxigenasa-1 (COX-1)
(88% de inhibición a 69 Ag / ml) y se sometió a fracción guiada por bioensayo fraccionado. Se
encontró que el resveratrol inhibe la COX-1 con una ED50 de 15 AM y no tiene actividad sobre la
COX-2, lo que indica la selectividad del compuesto. Luego se descubrió que el resveratrol inhibe el
desarrollo de lesiones preneoplásicas inducidas por DMBA en un Modelo de carcinogénesis
MMOC (Jang et al., 1997). Probado en dos etapas [usando DMBA como iniciador y 12-O-
tetradecanoilforbol 13-acetato (TPA) como promotor] ratón a término modelo, se encontró que el
resveratrol inhibe la tumorogénesis. Se están llevando a cabo estudios biológicos adicionales del
resveratrol (Bhat et al., 2001; Bhat y Pezzuto, 2001) y otro grupo de la Universidad de Michigan ha
comenzado los ensayos clínicos de Fase I para determinar la capacidad del resveratrol para
prevenir el cáncer en voluntarios sanos (ver http://cancer.gov/clinicaltrials/CCUM-2004-0535). . La
Ixocarpalactona A (13) fue aislada durante nuestro proyecto de la planta comestible Physalis
philadelphica Lam. (Solanaceae),
Fig. 3. Ejemplos de compuestos quimiopreventivos altamente activos de medicamentos
plantas aisladas como parte del proyecto '' Inhibidores Naturales de la Carcinogénesis ''.

Comúnmente conocido como tomatillo, cultivado a partir de semillas (Su et al., 2002). Los
tomatillos se utilizan como ingrediente en alimentos latinoamericanos, como enchiladas y salsas.
Un acetato de etilo soluble. Se descubrió que el extracto de las hojas y los tallos inducen la enzima
quinina reductasa (QR), una enzima de la Fase II responsable del metabolismo de los
carcinógenos químicos (Dinkova-Kostova y Talalay, 2000). El fraccionamiento guiado por
bioensayo condujo al aislamiento de ixocarpalactona A, así como a otros numerosos aislados.
Ixocarpalactona A indujo QR con una concentración requerida para duplicar la actividad (CD) de
0.32 AM, una concentración para inhibir el 50% de crecimiento celular (IC50) de 7.54 AM, y un
índice de quimiopreventivos (IC = IC50 / CD) de 24. Ixocarpalactona A también inhibió la
transformación de las células epidérmicas murinas JB6. Isoliquiritigenin (14) fue aislada durante
este proyecto de las semillas de Dipteryx odorata Willd. (Fabaceae), un suplemento dietético
botánico comúnmente conocido como tonka bean, recolectado en Perú (Jang et al., 2003). El
extracto soluble en acetato de etilo estaba activo en el bioensayo QR y se sometió a bioensayo.
fraccionamiento guiado Isoliquiritigenin se aisló como un componente activo con un valor CD de 3.8
AM, IC50 de 27.3 AM, y un CI de 7.2. La isoliquiritigenina se ensayó luego a 10 \ mu g / ml en el
bioensayo ex vivo de MMOC y se encontró que era activa inhibiendo la inducción del 76% de las
lesiones. Isoliquiritigenin parece ser digno de más pruebas biológicas.

Cuatro potentes inhibidores de la aromatasa [(2S) -abyssinone II (15), 3V- [g-hydroxymethyl- (E) -g-
methylallyl] -2,4,2V, 4V-tetrahydroxychalcona 11V-O-cumarato (16), (2S) -2V, 4V-dihidroxi-2VV- (1-
hidroxi-1-metiletil) dihidrofuro [2,3-h] flavanona (17) e isolicoflavonol (18)] fueron aislados de la
planta comestible Broussonetia papyrifera Vent. (Urticaceae), recolectada en Illinois (Lee et al.,
2001). El extracto soluble en acetato de etilo de esta planta inhibió la enzima aromatasa, que es la
enzima limitante de la velocidad en la producción de estrógeno. Se ha descubierto que la inhibición
de la aromatasa en mujeres posmenopáusicas reducir la recurrencia del cáncer de mama
(Johnston y Dowsett, 2003; Smith y Dowsett, 2003). Los compuestos 15-18 fueron aislado
utilizando fraccionamiento guiado por bioensayo y se encontró que inhibe la aromatasa (15: IC50 =
0,4 AM, 16: IC50 = 0,5 AM, 17: IC50 = 0,1 AM, 18: IC50 = 0,1 AM). Estos cuatro compuestos se
están desarrollando actualmente en el marco del programa Acceso rápido a la intervención
preventiva (RAPID) a través de NCI (ver http://dcp.nci.nih.gov/cb/announcements/rapid.html).

Retos en el descubrimiento de fármacos de plantas medicinales

A pesar de los éxitos evidentes del descubrimiento de fármacos de plantas medicinales, los
esfuerzos futuros se enfrentan a muchos desafíos. Pharmacognosists, phytochemists, y otro
producto natural

Los científicos necesitarán mejorar continuamente la calidad y la cantidad de compuestos que

ingresan a la fase de desarrollo de fármacos para mantenerse al día con otros esfuerzos de
descubrimiento de fármacos (Butler, 2004).

Se ha estimado que el proceso de descubrimiento de medicamentos toma un promedio de 10 años

hacia arriba (Reichert, 2003) y cuesta más de 800 millones de dólares (Dickson y Gagnon, 2004).
Gran parte de este tiempo y dinero se gasta en los numerosos clientes potenciales que se
descartan durante el proceso de descubrimiento de medicamentos. De hecho, ha sido estimó que
solo uno de cada 5000 compuestos principales avanzará exitosamente a través de ensayos
clínicos y se aprobará su uso. La identificación del plomo es el primer paso en un largo proceso de
desarrollo de medicamentos (Fig. 4). Optimización de leads (involucrando química medicinal y
combinatoria), el desarrollo del plomo (que incluye farmacología, toxicología, farmacocinética,
ADME [absorción, distribución, metabolismo y excreción] y administración de fármacos) y los
ensayos clínicos requieren un tiempo considerable.

El descubrimiento de fármacos de plantas medicinales ha sido tradicionalmente más largo y más

complicado que otros descubrimientos de fármacos métodos. Como tal, muchas compañías
farmacéuticas han eliminado o reducido su investigación de productos naturales (Butler, 2004;
Koehn y Carter, 2005). En NCI, los contratos para la colección de plantas que han estado operando
durante casi 20 años en las Américas, África, Madagascar y el sudeste asiático recientemente
suspendido debido a la reasignación de fondos del NCI para nuevas iniciativas destinadas a
mejorar el diagnóstico y la prevención, así como a agilizar la traducción de medicamentos del
desarrollo. fase de desarrollo clínico (Dr. G.M. Cragg, Instituto Nacional del Cáncer, Frederick,
Maryland, comunicación personal con A.D. Kinghorn). Además, a medida que la farmacia
académica se va redirigir su enfoque hacia la producción de farmacéuticos clínicos y comunitarios,
el énfasis en la industria farmacéutica investigación y desarrollo relacionados con el descubrimiento
de medicamentos de plantas medicinales y productos naturales en farmacias académicas está
disminuyendo. Aunque la tendencia hacia la pérdida de puestos de docencia e investigación en
farmacognosia ha estado en la evidencia en las instituciones de educación farmacéutica de EE.
UU., varios pasos positivos se pueden ver recientemente para revertir esta tendencia, como el
desarrollo del Centro Nacional de Investigación de Productos Naturales en la Universidad de
Mississippi, el establecimiento de los Institutos Nacionales de Salud (NIH) Botánico Centros en la
Universidad de Illinois en Chicago y la Universidad de Arizona, y la creación de una cátedra de
química de productos naturales y farmacognosia en The Ohio. State University, actualmente en
manos de uno de los coautores de esta revisión (A.D. Kinghorn). Farmacognosis y producto natural
los científicos también pueden buscar un empleo adecuado en otra

Fig. 4. Esquema del descubrimiento y desarrollo típico de fármacos de plantas medicinales (figura
cortesía del Dr. Robert W. Brueggemeier, Facultad de Farmacia, The Universidad del Estado de
Ohio).

departamentos académicos tales como biología, química, ecología y nutrición para continuar las
investigaciones de investigación en plantas medicinales.

Debido a que el descubrimiento de medicamentos de plantas medicinales ha sido tradicionalmente

tan lento, se deben emplear metodologías más rápidas y mejores para la recolección de plantas, el
cribado de bioensayos, el aislamiento de compuestos y el desarrollo de compuestos (Do y Bernard,
2004; Koehn y Carter, 2005). Se necesitan estrategias innovadoras para mejorar el proceso de
recolección de plantas, especialmente con las cuestiones legales y políticas que rodean acuerdos
de distribución de beneficios (Rosenthal, 2002; Soejarto et al., 2004). Redirigir las colecciones de
plantas del desarrollo tropical los países que poseen tierras de los EE. UU. (por ejemplo, las Islas
Vírgenes de EE. UU. y Samoa Americana) pueden ser una de esas estrategias.

El diseño, la determinación y la implementación de bioensayos adecuados, clínicamente relevantes

y de alto rendimiento es un proceso difícil para todos los programas de descubrimiento de
fármacos (Knowles y Gromo, 2003; Kramer y Cohen, 2004). Aunque el diseño de ensayos de
cribado de alto rendimiento puede ser un desafío (Walters y Namchuk, 2003), después de que se
lleva a cabo un ensayo de selección, las bibliotecas de compuestos y extractos pueden analizarse
para determinar su actividad biológica. La detección de bibliotecas de extracto puede ser
problemático, pero las nuevas técnicas, incluida la prefracción de extractos, pueden aliviar algunos
de estos problemas (Butler, 2004; Koehn y Carter, 2005). Desafíos en el cribado de bioensayos
sigue siendo un tema importante en el futuro del descubrimiento de fármacos a partir de plantas
medicinales.
Mejorar la velocidad del aislamiento de compuestos activos requerirá la incorporación de nuevas
tecnologías. Aunque la resonancia magnética nuclear (RMN) y la espectrometría de masas (MS)
están actualmente en amplio uso para la identificación de compuestos, nuevos métodos de uso de
RMN y MS podrían aplicarse a medicamentos plantar el descubrimiento de fármacos para facilitar
el aislamiento del compuesto (Eldridge et al., 2002; Pellecchia et al., 2002; Glish y Vachet, 2003).
Además, el uso de cristalografía de rayos X de alto rendimiento podría ser

aplicado al descubrimiento de plomo en plantas medicinales (Blundell et al., 2002).

El desarrollo compuesto de drogas descubiertas a partir de plantas medicinales también enfrenta

desafíos únicos. Los productos naturales se suelen aislar en pequeñas cantidades que son
insuficientes para la optimización del plomo, el desarrollo del plomo y los ensayos clínicos. Es
necesario colaborar con químicos sintéticos y medicinales para determinar si la síntesis o la semi-
síntesis podrían ser posible (Ley y Baxendale, 2002; Federsel, 2003; Lombardino y Lowe, 2004).
Otra técnica para mejorar el desarrollo de compuestos de productos naturales puede implicar la
creación de bibliotecas de productos naturales y similares a productos naturales que combinan las
características de los productos naturales con la combinación química (Hall et al., 2001a; Lee y
Schneider, 2001; Eldridge et al., 2002; Feher y Schmidt, 2003; Burke et al.,2004; Ganesan, 2004;
Piggott y Karuso, 2004; Tan, 2004; Koehn y Carter, 2005).

En conclusión, los productos naturales descubiertos a partir de plantas medicinales (y sus

derivados) han proporcionado numerosos medicamentos utilizados clínicamente. Incluso con todos
los desafíos que enfrenta El descubrimiento de medicamentos a partir de plantas medicinales
puede predecir que los productos naturales aislados de plantas medicinales siguen siendo un
componente esencial en la búsqueda de nuevos medicamentos.

Expresiones de gratitud

El apoyo de las subvenciones de los NIH U01 / U19 CA52956 (Investigador Principal, A.D.
Kinghorn) y P01 CA48112 (Investigador Principal, J.M. Pezzuto) es muy agradecido.

M.J. Balunas reconoce una beca universitaria de la Universidad de Illinois en Chicago.

Agradecemos a muchos excelentes profesores y colegas del personal, asociados postdoctorales,
estudiantes graduados y colaboradores taxonomistas que han participado en nuestros proyectos
de investigación y cuyos nombres están incluidos en la sección de referencias a continuación.