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Perspectivas y Resúmenes
Dar forma a los cromosomas
mitóticos: de los conceptos clásicos a
los mecanismos moleculares
Marc Kschonsak y Christian H. Haering-
Cómo se empaquetan los genomas eucarióticos en cromosomas
cilíndricos compactos en preparación para las divisiones celulares
sigue siendo una de las principales cuestiones sin resolver de la
biología celular. Los enfoques novedosos para estudiar la topología
de las hélices de ADN dentro de los núcleos de las células intactas,
junto con el modelado computacional y las mediciones
biomecánicas precisas de los cromosomas aislados, han avanzado
nuestra comprensión de la arquitectura cromosómica mitótica. En
este ensayo de revisión, discutimos, a la luz de estos conocimientos
recientes, el papel de la arquitectura de la cromatina y las funciones
y posibles mecanismos de los complejos de proteínas SMC y otras
máquinas moleculares en la formación de cromosomas mitóticos.
Con base en la información disponible, Proponemos un modelo
paso a paso de condensación cromosómica mitótica que contempla
la generación secuencial de enlaces intracromosómicos por
complejos de condensina en el contexto de enlaces
intercromosómicos mediados por cohesina, asistidos por
topoisomerasa II. Él
.
El escenario descrito da como resultado cromosomas en metafase en
forma de varilla listos para su segregación a los polos celulares.
Palabras clave:
condensación cromosómica; segregación cromosómica;
cohesina; condensana; mitosis; complejo SMC;
topoisomerasa II
DOI 10.1002/bies.201500020
Laboratorio Europeo de Biología Molecular (EMBL), Heidelberg, Alemania
* Autor correspondiente:
Christian Haering
Correo electrónico: christian.haering@embl.de
Abreviaturas:
EM,microscopio de electrones;NEBD,ruptura de la envoltura nuclear;SAXOS,dispersión de
rayos X de ángulo pequeño.
Bioensayos 37: 0000–0000,- 2015 Los autores. Bioensayos publicados por WILEY Periodicals, Inc. Este es un artículo de
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use con fines comerciales. propósitos
Revisar ensayos
Introducción: visiones clásicas de la
estructura cromosómica
La segregación de información genética de células madre a
hijas durante las divisiones mitóticas es uno de los eventos más
espectaculares del ciclo de división celular. La segregación
exitosa requiere la reorganización extensa de las fibras de
cromatina en cromosomas mitóticos cilíndricos compactos.
Aunque este proceso de “condensación” ha fascinado a los
científicos desde su primera descripción a fines del siglo XIX [1],
los mecanismos moleculares subyacentes aún no se conocen
por completo.
Se cree que los cromosomas mitóticos implican varios niveles de
organización (revisado en la Ref. [2]). El primer nivel, y el mejor
comprendido, es la envoltura de 146 pb de ADN en 1,7 vueltas alrededor
de un octámero de proteínas histonas para formar un nucleosoma, una
estructura que se ha resuelto a una resolución casi atómica [3, 4] (Fig.
1A). Los arreglos lineales de nucleosomas conectados por regiones
espaciadoras de ADN dan lugar a fibras de cromatina de -11 nm de
diámetro, que, cuando se obtienen imágenes por microscopía
electrónica después de la fijación química en condiciones bajas en sal,
aparecen como "cuentas en una cuerda" [5, 6].
Se cree que el siguiente nivel de organización resulta de
las interacciones entre nucleosomas adyacentes en la
misma hélice de ADN y la unión de la histona H1 del
enlazador, creando una fibra de -30 nm de diámetro. La
fibra de 30 nm se puede observar fácilmente cuando las
matrices de nucleosomas se reconstituyen en secuencias de
ADN particulares in vitro [7]. En los últimos años se han
discutido vívidamente diferentes hipótesis sobre la
disposición de los nucleosomas en la fibra. Las versiones
actuales incluyen modelos de solenoide interdigitado de un
arranque [8] y modelos en zigzag de dos arranques [9, 10]
(Fig. 1A). Estudios recientes sugieren que la elección entre
conformaciones depende de las longitudes de los ADN
enlazadores que conectan los nucleosomas; por lo tanto,
pueden coexistir diferentes estructuras [11]. Sin embargo,
es cuestionable si la mayor parte de la cromatina dentro del
núcleo de una célula se pliega en fibras de 30 nm.
www.bioessays-journal.com1
 M. Kschonsak y CH Haering
UN) B)
Revisar ensayos
dos comienzos
un comienzo
30nm
Tamaño de bucle de 80-120 kb
11nm Fibra de 11 nanómetros Bucle lineal
Figura 1.Niveles de organización cromosómica.UN:Modelos de dibujos animados de nucleosomas
compuestos por ADN (tubo gris oscuro) envuelto alrededor de un octámero de histonas H2A, H2B,
H3 y H4 (cilindro gris claro) y fibras de 30 nm de una salida (solenoide) y dos salidas (zigzag).B:Pasos
propuestos para plegar una fibra de nucleosoma de 11 nm en un cromosoma mitótico mediante la
formación de bucles de 80 a 120 kb de tamaño, seguida de compresión a lo largo del eje longitudinal
del cromosoma y reducción del diámetro del cromosoma por compresión lateral.
así como de patrones de difracción de dispersión de rayos X de
ángulo pequeño (SAXS) e imágenes crio-EM de eritrocitos de pollo
nucleados [13, 14]. Sin embargo, la evidencia de la existencia de
fibras regulares de 30 nm en los cromosomas mitóticos sigue
siendo controvertida (ver más abajo).
Nuestra comprensión de cómo las fibras de cromatina terminan en cromosomas mitóticos en
forma de varilla en los siguientes niveles de organización es, en el mejor de los casos, rudimentaria.
Sobre la base de la apariencia tubular de las fibras de -400 nm de diámetro obtenidas mediante la
propagación de cromosomas mitóticos aislados de células humanas cultivadas después de la fijación
química, Crick y sus colegas propusieron que las fibras de 30 nm podrían colocarse en un (super)
solenoide [15]. Por lo tanto, los cromosomas mitóticos podrían estar formados por un plegamiento
helicoidal jerárquico de fibras de cromatina. Sedat y Manuelidis derivaron un modelo similar de
enrollamiento sucesivo de cromatina a partir de imágenes de microscopía óptica y electrónica de
núcleos aislados y cromosomas mitóticos [16]. Basado en micrografías electrónicas de cromosomas
en metafase humanos purificados que se habían fijado después del agotamiento de las histonas o la
hinchazón mediante la eliminación de cationes divalentes, En cambio, Laemmli y sus colegas
sugirieron que las fibras de cromatina se adhieren a un eje cromosómico central, del cual emergen
como bucles radiales de varias diez kilobases (kb) de longitud [17, 18]. En contraste con el modelo de
plegamiento jerárquico, que en principio podría explicarse únicamente por interacciones nucleosoma-
nucleosoma, el modelo de bucle radial requería un andamio de proteína en el eje cromosómico para
anclar las bases de los bucles de cromatina. Sorprendentemente, el material denso en electrones en
forma de un cromosoma en metafase rodeado por un halo de ADN podría ser visualizado por EM [17].
que en principio podría explicarse únicamente por las interacciones nucleosoma-nucleosoma, el
modelo de bucle radial requería un andamio de proteína en el eje del cromosoma para anclar las
bases de los bucles de cromatina. Sorprendentemente, el material denso en electrones en forma de
un cromosoma en metafase rodeado por un halo de ADN podría ser visualizado por EM [17]. que en
principio podría explicarse únicamente por las interacciones nucleosoma-nucleosoma, el modelo de
bucle radial requería un andamio de proteína en el eje del cromosoma para anclar las bases de los
bucles de cromatina. Sorprendentemente, el material denso en electrones en forma de un
cromosoma en metafase rodeado por un halo de ADN podría ser visualizado por EM [17].
Aunque los dos modelos difieren sustancialmente en la
naturaleza de los eventos de plegamiento que tienen lugar durante
2 Bioensayos 37: 0000–0000,- 2015 Los autores. Bioensayos publicados por WILEY Periodicals, Inc.
Perspectivas y Resúmenes ....
compresión axial Compresión lateral
la formación de cromosomas mitóticos, ambos
explican elegantemente cómo los cromosomas
pueden plegarse en formas cilíndricas, en lugar de
esféricas. En este ensayo de revisión, discutimos
cómo los estudios recientes han dado lugar a
nuevos conocimientos sobre la estructura de los
cromosomas mitóticos y exploramos las
contribuciones de algunos de los principales
máquinas moleculares involucradas en el proceso de condensación
cromosómica.
Las nuevas tecnologías para estudiar la arquitectura
de la cromatina desafían los modelos clásicos de
plegamiento cromosómico
Los modelos de plegamiento jerárquico postulan la fibra de 30 nm como
el primer paso hacia la formación de cromosomas mitóticos. De hecho,
los patrones de difracción de rayos X de los cromosomas en metafase
HeLa aislados después de la fijación química respaldan la existencia de
estructuras de 32 nm [19]. Sin embargo, análisis recientes de
micrografías crioelectrónicas de núcleos de células HeLa o cromosomas
mitóticos aislados en un estado hidratado mostraron simplemente una
textura homogénea sin evidencia de la presencia de fibras regulares de
30 nm [20, 21]. Los experimentos SAXS con los mismos cromosomas
después de la incubación en tampones que contenían poliaminas y EDTA
tampoco dieron indicios de estructuras con una periodicidad regular de
30 nm, ni arreglos regulares más grandes [22]. Los patrones de
difracción de -30 nm, que se describieron para los cromosomas que no
habían sido incubados en estos tampones, en cambio, podría haber sido
causado por la agregación de ribosomas en la superficie del cromosoma
[23]. De manera similar, las fibras de 30 nm observadas por EM
convencional podrían haber resultado del aislamiento de cromosomas
en Mg bajo.2þ
condiciones o del proceso de fijación. Si bien todavía es concebible que
pequeños tramos de cromatina se ensamblen en matrices de 30 nm
incluso dentro de los cromosomas mitóticos nativos, estos nuevos datos
argumentan que la mayor fracción de cromosomas mitóticos consiste en
fibras de cromatina dispuestas irregularmente [24].
.... Perspectivas y Resúmenes
Este arreglo podría describirse mejor como una estructura fractal
dinámica o "fusión de polímeros", que puede explicarse por un cambio
de interacciones entre nucleosomas adyacentes a una interdigitación de
nucleosomas distantes, causada por las altas concentraciones de
nucleosomas en los cromosomas mitóticos condensados.
Más conocimientos sobre la estructura de los cromosomas mitóticos
provienen de experimentos de micromanipulación. La elasticidad de flexión y
estiramiento de los cromosomas mitóticos aislados de células anfibias es
consistente con varillas de una sección transversal uniforme [25] y argumenta
en contra de la noción de un andamio rígido en los ejes de los cromosomas,
que previamente se había inferido de la alta flexibilidad de flexión de las
cromátidas ensambladas enXenopo extractos de huevo [26]. La rigidez mucho
mayor de los cromosomas aislados deXenopoimplica que el ensamblaje
cromosómico en extractos podría no recapitular completamente la formación
de cromosomas mitóticos in vivo. Es importante destacar que la escisión del
ADN dentro de estos cromosomas aislados elimina rápidamente su elasticidad
y finalmente los desintegra por completo. Sin embargo, los cromosomas
simplemente se vuelven más suaves pero permanecen elásticos después de
una proteólisis leve. Estos hallazgos sugieren que la integridad de los
cromosomas mitóticos está determinada en gran medida por la continuidad
de la hélice del ADN y no por un andamiaje de proteína lineal [27-29].
Dekker y sus colegas describieron recientemente un enfoque
completamente diferente para estudiar la estructura de los cromosomas
mitóticos basado en experimentos de captura de conformación
cromosómica (Hi-C y 5C) en combinación con simulaciones de polímeros
[30]. Hi-C y 5C se basan en la identificación mediante secuenciación
paralela masiva de productos de ligadura entre loci genómicos distantes
que se han acercado físicamente en 3D. En células humanas en interfase,
estas técnicas identificaron interacciones intracromosómicas de largo
alcance dentro de compartimentos a escala de megabases y dentro de
dominios asociados topológicamente (TAD) más pequeños.
Sorprendentemente, estos patrones desaparecieron en las células
detenidas en un estado similar al de la prometafase. Las probabilidades
de contacto medidas para los cromosomas mitóticos no pudieron
describirse mediante simulaciones de polímeros de un modelo de
plegamiento jerárquico. pero en cambio coincidió con las predicciones
hechas por modelos de bucles consecutivos de 80 a 120 kb de tamaño,
independientemente de si las bases de los bucles estaban restringidas a
un eje central o no. El tamaño de los bucles fue consistente con la
longitud de los bucles de ADN observados previamente en imágenes EM
de cromosomas mitóticos sin histonas [17, 31]. La simulación de la
compresión axial homogénea después de la formación del bucle dio
como resultado formas cilíndricas con dimensiones similares a las
medidas para los cromosomas mitóticos humanos (Fig. 1B).
¿Se puede explicar la condensación
cromosómica por cambios en las interacciones
de los nucleosomas?
¿Pueden los cambios en la estructura de la cromatina explicar los
cambios en la arquitectura cromosómica que ocurren durante la
mitosis? Al entrar en mitosis, la histona H3 es fosforilada en los
residuos de serina 10 y 28 (H3S10 y H3S28) por las cinasas Aurora
[32, 33] y en el residuo de treonina 3 (H3T3) por la cinasa Haspin
[34]. Dado que estas fosforilaciones generalmente coinciden con la
condensación cromosómica, se han sugerido como el factor
impulsor de la mitosis cromosómica.
Bioensayos 37: 0000–0000,- 2015 Los autores. Bioensayos publicados por WILEY Periodicals, Inc.
M. Kschonsak y CH Haering
formación. De acuerdo con esta noción son los hallazgos de que la
mutación de H3S10 a un residuo de alanina no fosforilable da como
resultado defectos de segregación cromosómica en la levadura de fisión
Revisar ensayos
y micronúcleos que se dividen mitóticamente del protozoo ciliado.
Tetrahymena thermophila [35, 36]. Las mutaciones simultáneas de
H3S10 y H3S28 a alanina en la levadura en ciernes, por el contrario, no
tienen un efecto apreciable sobre la segregación cromosómica [32] o la
conversión gradual del grupo de genes de ARN ribosomal (ADNr) en una
estructura en forma de bucle [37, 38 ]. Además, la incubación de células
humanas cultivadas con el ácido okadaico, inhibidor de la fosfatasa, da
como resultado la fosforilación de H3S10 en la gran mayoría de las
células, aunque los cromosomas se condensan solo en una fracción muy
pequeña de las células [39]. Finalmente, undrosófilaEl mutante de la
proteína Borealin asociada a la quinasa Aurora B todavía muestra un
grado notable de condensación cromosómica, aunque la fosforilación de
H3S10 ya no se puede detectar en el mutante [40]. Estas observaciones
implican que la fosforilación de H3 no puede ser el determinante
universal de la condensación cromosómica mitótica. Esta conclusión está
respaldada por los hallazgos de que en el maíz, la fosforilación de H3S10
y H3S28 solo puede detectarse en regiones cromosómicas pericéntricas y
solo tarde durante la profase mitótica, es decir, después de que los
cromosomas mitóticos ya han comenzado a formarse [41]. Sin embargo,
es concebible que, en las plantas, la fosforilación de H3T3 por la cinasa
Haspin podría compensar la falta de fosforilación de H3S10 y H3S28 en
los brazos cromosómicos (revisado en [42]).
No obstante, un informe reciente propuso un papel específico de la
fosforilación de H3 durante la condensación cromosómica en la
levadura. La activación de residuos fotorreactivos introducidos en la
histona H2A generó enlaces cruzados con la cola N-terminal de la histona
H4 [43]. La pequeña fracción de H4 entrecruzado observada en las
células en interfase aumentó -tres veces cuando las células entraron en
mitosis, lo que sugiere que la interacción entre H2A y H4 podría estar
relacionada con la condensación cromosómica. Además, la mutación de
H3S10 a alanina impidió la reticulación y la desacetilación específica de la
mitosis del residuo 16 de lisina de la histona H4 (H4K16). Con base en
estas observaciones, los autores propusieron que la desacetilación de
H4K16, como resultado del reclutamiento mediado por fosfo-H3S10 de la
desacetilasa Hst2, promueve la interacción de la cola de la histona H4
con un parche acético en la histona H2A de los nucleosomas vecinos, lo
que resulta en la condensación cromosómica [43]. Sin embargo, la
sugerencia de que este mecanismo impulsa la condensación en la
levadura es problemática por varias razones. Como se mencionó
anteriormente, la mutación de H3S10 a alanina no afecta notablemente
la división celular ni la condensación del ADNr [32, 37] y produce solo
defectos mínimos en la condensación de un cromosoma de fusión de
levadura durante la anafase [43]; significativamente menor que los
defectos causados, por ejemplo, por la inactivación de la condensación
(ver más abajo) [44]. Asimismo, la deleción del gen que codifica la
desacetilasa Hst2 no tiene un efecto evidente sobre las divisiones
celulares y da como resultado defectos de condensación meramente
marginales. Incluso teniendo en cuenta las dificultades para obtener
poblaciones del ciclo celular sincrónico mediante el lavado de nocodazol,
se habría esperado observar la desacetilación de H4K16 y el
entrecruzamiento de H2A-H4 cuando los cromosomas se condensan a
medida que las células pasan de la detención a la anafase [45], lo cual no
fue así. el caso [43]. Si bien es probable que las modificaciones de la
cromatina, como la acetilación y la desacetilación, desempeñen un papel
en la regulación de las propiedades mecánicas de las fibras de cromatina
durante
3
 M. Kschonsak y CH Haering
segregación [46], la evidencia de que estas modificaciones impulsan la
formación de cromosomas mitóticos sigue siendo limitada.
Además de la fosforilación de la histona H3, varios residuos dentro
del extremo C del conector histona H1 son fosforilados por la quinasa
Revisar ensayos
dependiente de ciclina Cdk1 durante la profase [47]. Sin embargo, la
eliminación de todos los genes que codifican las proteínas H1 de la
histona enlazadora en células de pollo cultivadas no tiene un efecto
aparente en la formación de cromosomas mitóticos [48] y la eliminación
de los genes H1 entetrahymenasolo aumenta levemente los volúmenes
cromosómicos, sin afectar la segregación cromosómica [49]. Del mismo
modo, la eliminación del gen que codifica una proteína similar a la
histona H1 en la levadura en ciernes no tiene consecuencias obvias para
la división celular [50]. No obstante, las histonas de tipo H1 podrían
afectar las propiedades mecánicas de los cromosomas mitóticos, ya que
el agotamiento de las histonas enlazadoras deXenopolos extractos de
huevo dan como resultado la conversión de sustratos de ADN no
replicados o replicados en cromátidas más frágiles o cromosomas
drásticamente alargados, respectivamente [51, 52].
¿Las modificaciones de la cromatina influyen en
la acción de las máquinas moleculares que dan
forma a los cromosomas mitóticos?
De acuerdo con la noción de que las asociaciones cromatina-cromatina
por sí solas no pueden explicar la formación de la metafase
Caja 1
complejos de condensación
Los complejos de condensina eucariota están compuestos por cinco
subunidades, incluido un heterodímero de proteínas de Mantenimiento
Estructural de los Cromosomas (SMC2 y SMC4), una proteína de la familia
de las kleisinas que se une a los dominios de la cabeza de la ATPasa de la
SMC llamados CAP-H (o CAP-H2 para Condensina II ), y dos proteínas
denominadas CAP-G (o CAP-G2 para Condensina II) y CAP-D2 (o CAP-D3
para Condensina II). Las dos últimas proteínas están compuestas en gran
parte porun-Huntingtin helicoidal,
Figura.Arquitectura de los complejos de condensación I y II.
4 Bioensayos 37: 0000–0000,- 2015 Los autores. Bioensayos publicados por WILEY Periodicals, Inc.
Perspectivas y Resúmenes ....
cromosomas, las simulaciones de modelos poliméricos basados en
interacciones aleatorias de nucleosomas dan como resultado
arquitecturas esféricas en lugar de cilíndricas [53]. Por tanto, deben
existir otros factores que determinen la forma de los cromosomas
mitóticos. En los últimos años se ha visto la identificación de varias
máquinas moleculares que juegan un papel central en la formación de
los cromosomas mitóticos, incluida la condensina (ver Cuadro 1), la
topoisomerasa IIun (topografía IIun; Recuadro 2), y cohesina (Recuadro
3). Sin embargo, la función de estas máquinas puede ser controlada por
las modificaciones de histonas mitóticas descritas en la sección anterior.
Se ha propuesto, por ejemplo, la fosforilación de H3S10 para
mejorar la flexibilidad de la fibra de cromatina, lo que podría permitir un
acceso más fácil a las proteínas que no son histonas, como la condensina
o la topo II.un [54]. Alternativamente, la fosforilación de histonas podría
crear una plataforma de unión directa para estas proteínas [35]. El
descubrimiento de que la prevención de la fosforilación de la histona H3
por el agotamiento o la inhibición de la quinasa Aurora B reduce los
niveles cromosómicos de condensina total en Caenorhabditis eleganso
en cultodrosófilacélulas [55-57] o específicamente de condensina I en
células humanas cultivadas [58] es consistente con cualquiera de las
hipótesis. Aunque el agotamiento de la quinasa Aurora B también reduce
en gran medida la fosforilación de la histona H3 enXenopoextractos de
huevo, sus efectos sobre la asociación cromosómica de condensina en
este sistema modelo varían entre diferentes estudios [59-61].
Otra hipótesis sugiere que la fosforilación de las
histonas H1 y H3 libera restricciones en la condensina y
El factor de elongación 3, la subunidad A de la proteína fosfatasa 2A y
los motivos repetidos de la quinasa lipídica (HEAT) TOR1.
En los vertebrados, la condensina I se localiza en el eje central de
los cromosomas mitóticos en patrones alternos con la condensina II
[90] o la topo II [91] y obtiene acceso a los cromosomas solo después
de NEBD; en un momento en que los cromosomas ya se han
condensado en un grado considerable [71,72]. La condensación II, por
el contrario, se puede detectar en el núcleo a lo largo del ciclo celular y
muestra poca o ninguna renovación una vez que se acumula en los
cromosomas al comienzo de la profase [96]. Condensina I, II y topo II
unse asocian con los cromosomas independientemente unos de otros
[71]. Agotamiento de la condensina I o de ambos complejos de
condensina de la fase MXenopoLos extractos de óvulos impiden la
transformación de la cromatina espermática añadida en formas de
cromosomas mitóticos, lo que sugiere que los complejos de
condensina son esenciales para la condensación cromosómica [72,
114]. Sin embargo, el agotamiento de la condensación I y/o II en otros
sistemas modelo tiene efectos variables sobre la dinámica y los niveles
de la condensación cromosómica (revisado en [115]). Sin embargo,
dichos cromosomas pierden rápidamente su apariencia en forma de
bastón bajo esfuerzos físicos, por ejemplo, cuando se estiran sobre
portaobjetos de vidrio o en condiciones hipotónicas, e
invariablemente no se segregan durante la anafase [70, 71, 90, 96, 98].
Aún no se comprende cómo los complejos de condensina contribuyen
a la formación de cromosomas mitóticos. Condensina I purificada de
Xenopolos extractos de huevo pueden unir sustratos de ADN, influir
en los cambios en la topología del ADN que introducen las
topoisomerasas y compactar las hélices de ADN de una manera
dependiente de ATP en experimentos con pinzas magnéticas [63, 116,
117].
.... Perspectivas y Resúmenes
Caja 2
topoisomerasa IIun
Las topoisomerasas de tipo II cambian la topología de los
sustratos de ADN al introducir una ruptura de doble cadena en
una hélice de ADN, pasar una segunda hélice a través del sitio de
ruptura y volver a sellar la ruptura inicial. El paso de la hebra es
estimulado por la hidrólisis de dos moléculas unidas de ATP
(revisado en [118]). Dado que las topoisomerasas eucarióticas de
tipo II muestran, a diferencia de las girasas procarióticas de tipo
II, ninguna preferencia por la preferencia manual del paso de la
hebra, pueden introducir y eliminar enlaces de ADN topológicos
igualmente. Sin embargo, la direccionalidad de la reacción hacia
este último es esencial para la resolución de las catenanas de las
cromátidas hermanas durante la mitosis.
Los genomas de los vertebrados codifican dos isoformas de
topoisomerasa II, alfa y beta. topoisomerasa IIun (topografía IIun)
topografía IIun-conversión mediada por cruces de ADN del conector del
nucleosoma de un estado superenrollado negativo a uno positivo [62].
Este modelo se basa en el descubrimiento de que los complejos de
condensina promueven la introducción de superenrollamientos positivos
en el ADN plasmídico [57, 63–65]. La torsión superhelicoidal positiva
podría ser introducida por complejos de condensina, presumiblemente
en las regiones cortas libres de nucleosomas a las que se une
preferentemente la condensina [66]. La torsión podría luego extenderse
a lo largo de la fibra de cromatina por topo IIun-la conversión mediada
por la mano de los cruces de ADN del conector nucleosomal hasta que el
enrollamiento excesivo da como resultado la formación de bucles de
plectonema que compactan los cromosomas [62]. La unión de la histona
H1 al ADN conector y la díada del nucleosoma, cerca de la cola de la
histona H3, podría limitar la propagación de la torsión y, por lo tanto, es
posible que sea necesario eliminar H1 de los cromosomas tras su
fosforilación. Sin embargo, aún no está claro si la fosforilación de la
histona H1 afloja la asociación de la proteína con la cromatina. Los
informes de que una versión no fosforilable de la histona H1 exhibe una
unión reducida aXenopocromosomas [67] y que una mutación fosfo-
imitante de un solo sitio objetivo de la quinasa Aurora B dentro del
extremo N de la variante de histona humana H1.4 da como resultado un
menor recambio de H1.4 en los cromosomas mitóticos [68] argumentan
más bien en contra de esta hipótesis.
Habiendo descartado cambios en la arquitectura de la cromatina
como el único determinante de la arquitectura cromosómica mitótica,
ahora nos enfocamos en los mecanismos de acción de la condensina,
topo IIun, cohesina y otros componentes de la maquinaria de
condensación cromosómica. A la luz de los nuevos datos disponibles
derivados del análisis de la topología de la cromatina en mitótica
Bioensayos 37: 0000–0000,- 2015 Los autores. Bioensayos publicados por WILEY Periodicals, Inc.
M. Kschonsak y CH Haering
se localiza en el eje cromosómico de los cromosomas mitóticos [69,
91, 119, 120], pero puede decorar brazos cromosómicos completos
cuando está presente en un gran exceso [121]. La rápida rotación de
Revisar ensayos
topo IIunen cromosomas de mamíferos mitóticos [94, 122, 123] y el
hallazgo de que topo IIunpuede extraerse incluso a bajas
concentraciones de sal de los cromosomas ensamblados enXenopo
extractos de huevo sin afectar notablemente las estructuras
cromosómicas axiales [93] sugieren que topo IIunno es parte de un
"andamio cromosómico" estable.
La evidencia de que topo II, sin embargo, juega un papel central
durante la condensación cromosómica mitótica proviene de la
observación de cromosomas en metafase extendidos y no resueltos
después de la inactivación de las células de levadura de infisión de
topo II [124]. Además,Xenopoextractos de huevo empobrecidos de
topo IIunya no puede respaldar la conversión de la espercromatina o
los núcleos de eritrocitos de pollo, que contienen poco topo II, en
cromosomas bien estructurados [93, 125].
Figura.Cambio de la lateralidad de los cruces de ADN por
topoisomerasas tipo II. Los dos extremos de la doble hebra se
rompen en un segmento, la hélice del ADN (gris oscuro)
permanece unida covalentemente a los residuos de tirosina del
sitio activo del dímero topo II, mientras que el segundo segmento
(gris claro) pasa a través del espacio en una reacción dependiente
de ATP (flecha) , seguido de una nueva ligadura de la hélice de
ADN escindida. Si ambos segmentos son del mismo ADN, esta
reacción cambia la lateralidad de los cruces de ADN.
cromosomas por biología molecular y estructural, biofísica y
enfoques de modelado de polímeros discutidos anteriormente,
intentaremos sintetizar un marco de tres pasos para la
formación de cromosomas mitóticos.
Un modelo de tres pasos para la formación de
cromosomas mitóticos
Paso 1: bucle de cromatina lineal
Las estructuras lineales de la cromatina se vuelven visibles por
microscopía óptica al comienzo de la profase mitótica [69]. Eliminación
de subunidades SMC de condensación enC. elegansembriones o en
células de pollo cultivadas retrasa significativamente la aparición inicial
de tales estructuras similares a hilos [55, 57, 70], lo que sugiere que los
complejos de condensina deben desempeñar un papel en este proceso.
El agotamiento de las subunidades de condensina II, pero no de las
subunidades de condensina I, provoca los mismos efectos en células
humanas cultivadas [71-73]. También se pueden observar estructuras de
cromatina inusuales durante la profase después de la eliminación de la
subunidad condensina II kleisina en células madre neuronales de ratón,
mientras que la morfología cromosómica no se ve afectada
notablemente por la eliminación de la subunidad condensina I kleisina
[74]. Estas observaciones sugieren que la condensina II es esencial para
iniciar la formación de cromosomas individualizados temprano durante
la profase.
Todavía no se comprende completamente cómo se activa la condensana II en la
profase temprana. Lo más probable es que la activación sea iniciada por
5
 M. Kschonsak y CH Haering
Caja 3
complejos de cohesina
Revisar ensayos
Figura.Arquitectura del complejo de cohesina y mecanismo
de cohesión de cromátidas hermanas. "Ac" indica acetilación
del dominio ATPasa SMC3.
fosforilación de la subunidad CAP-D3 por Cdk1, que luego da como
resultado el reclutamiento de quinasa tipo polo Plk1 para una
mayor fosforilación de todas las subunidades no SMC de
condensina II [75]. Además, se ha informado que la asociación de la
condensina II con los cromosomas está controlada por una
interacción directa con la proteína fosfatasa 2A (PP2A) [76] y por la
proteína microcefalina humana MCPH1 [77]. Por lo tanto, la carga
inoportuna de condensina II en los cromosomas podría ser
responsable del fenotipo de condensación cromosómica prematura
descrito en las células de pacientes MCPH1 [78].
A la luz de las simulaciones de polímeros discutidas
antes [30], la formación de las primeras estructuras lineales
es consistente con la unión de sitios adyacentes en una fibra
de cromatina para formar bucles consecutivos de 80–120 kb
de longitud (Fig. 1B). Dado que la condensina II es necesaria
para el inicio de la condensación cromosómica durante la
profase temprana, es tentador especular que la condensina
II es responsable de la formación de bucles, por ejemplo, al
actuar como enlazador de la cromatina. Una forma en que
uno podría imaginar que tales enlaces se generan es
atrapando dos fibras de cromatina de 11 nm dentro de la
gran estructura en forma de anillo de la condensina [79]. En
lugar de multimerizarse en un andamio de proteína
continuo [31], los complejos de condensina podrían crear
enlaces individuales por pares (Fig. 2A, B).
En este escenario, ¿cómo podría el enlace por condensación II crear
bucles consecutivos de 80 a 120 kb de tamaño? Durante la profase temprana,
las conexiones frecuentes entre los brazos de cromátidas hermanas formados
por complejos de cohesina podrían permitir que la condensina II cree enlaces
solo dentro de las regiones entre dos sitios de unión de cohesina (Fig. 2B). Tal
mecanismo implicaría que los tamaños de bucle
6 Bioensayos 37: 0000–0000,- 2015 Los autores. Bioensayos publicados por WILEY Periodicals, Inc.
Perspectivas y Resúmenes ....
Los complejos de cohesina son similares en forma y composición
de subunidades a los complejos de condensina. Se cree que
mantienen unidas las cromátidas hermanas replicadas al atrapar
ambos ADN hermanos dentro de la arquitectura en forma de
anillo creada por sus subunidades de mantenimiento estructural
de los cromosomas (llamadas SMC1 y SMC3) y kleisina (llamadas
RAD21 o SCC1) (revisado en [88, 126, 127]). Los modelos
alternativos sugieren que interactúan dos o más anillos de
cohesina, cada uno de los cuales rodea una sola hélice de ADN
(revisado en [128]). Similar a la condensina, la subunidad de
kleisina se une a las subunidades de repetición HEAT llamadas
SCC3 o SA1/SA2 y PDS5.
Los anillos de cohesina se bloquean alrededor de los ADN
hermanos en la bifurcación de replicación naciente de una manera
que depende de la interacción estable del extremo N de la subunidad
de kleisina con el dominio ATPasa SMC3. Esta interacción está
regulada por la acetilación de este último. En las células de los
metazoos, la mayoría de los complejos de cohesina se disocian de los
brazos cromosómicos al abrir esta interfaz. Los complejos de cohesina
en las regiones centroméricas y la cohesina residual en los brazos
cromosómicos luego se eliminan al inicio de la anafase a través de la
escisión de la subunidad kleisina por la separasa proteasa, que
desencadena la segregación de las cromátidas a los polos celulares.
están determinados por las distancias genómicas de las decenas de
miles de sitios de unión de cohesina en las células humanas [80] y
podrían explicar por qué la cohesina limita la asociación de la condensina
II con los cromosomas [81]. Sin embargo, es igualmente posible que los
tamaños de los bucles estén determinados por las propiedades
intrínsecas de la condensación II o por factores adicionales. Un desafío
de este modelo es que la condensina II necesitaría generar enlaces solo
dentro de la misma cromátida y no entre diferentes cromosomas.
Podría, por ejemplo, ser concebible que los complejos de condensina
fueran capaces de rastrear la fibra de cromatina mientras se aferraban a
sus sitios de unión originales y, por lo tanto, sobresalir un bucle de
cromatina [82, 83]. La fijación de tales bucles aseguraría que la
condensación conectara dos segmentos de la misma cromátida.
Alternativamente, la generación de enlaces de condensina podría
favorecer topologías intracromosómicas particulares, por ejemplo,
cruces de ADN de una mano específica. La última hipótesis es
consistente con los cambios mediados por topoisomerasa en la
topología de los sustratos de ADN plasmídico en presencia de complejos
de condensina (véanse los recuadros 1 y 2). Presumiblemente, los
conocimientos sobre la naturaleza de las capacidades de los complejos
de condensina para organizar las fibras de cromatina deberán esperar la
reconstitución in vitro de su asociación con las plantillas de cromatina.
Paso 2: Compresión axial
Además de la formación de bucles, los modelos de polímeros requieren
un segundo paso para simular con precisión la formación de
cromosomas cilíndricos: la compresión a lo largo del eje longitudinal del
cromosoma [30]. Los experimentos de imágenes cuantitativas de
histonas marcadas con fluorescencia son de hecho consistentes con
.... Perspectivas y Resúmenes M. Kschonsak y CH Haering

B) ensamblado enXenopoextractos de huevo en los que se

ha agotado la condensación II o se ha impedido que se
cargue en los cromosomas [77, 89, 90]. Por el contrario,

Revisar ensayos
a veces se pueden observar cromosomas de
Topo IIα
prometafase de forma normal en células humanas
desprovistas de subunidades de condensina II por
interferencia de ARN [71]. En estos casos, podría ser
Condensina II

Condensina II
posible que las cantidades residuales de condensina II,
que han escapado al agotamiento, sean suficientes
para los dos primeros pasos de la condensación
cromosómica. La carga aberrante de condensina II en
Bucle lineal
los cromosomas podría dar como resultado
UN) cohesina
cromosomas en metafase más cortos y más gruesos
observados en las células de pacientes MCPH1 [77].

C) De acuerdo con una contribución de topo IIun

Profase temprana al paso de compresión axial está la observación de
que la enzima se acumula en los ejes de las
cromátidas en células humanas cultivadas durante
fase G2 Profase tardía la profase [91]. Derribo de topo IIunen células de
pollo cultivadas da como resultado cromosomas en
metafase más largos y delgados [92] y agotamiento
compresión axial
metafase de topo IIunen Xenopolos extractos de óvulos
bloquean la transformación de la cromatina
D) espermática en cromosomas de fase M [93].
Aunque el agotamiento o la inhibición de topo IIun
en las células humanas aumenta la fracción de
Condensina I cromosomas parcialmente condensados,
eventualmente se forman cromosomas en
metafase de forma normal [94]. Asimismo, la
inhibición de la topo IIun con un anticuerpo o un
inhibidor de molécula pequeña no tiene efecto
sobre los cromosomas mitóticos una vez que se
Compresión lateral han ensamblado en Xenopoextractos de huevo
[93]. Estos hallazgos sugieren que topo IIunpodría
Figura 2.Un modelo de ligamiento de tres pasos para la condensación de un cromosoma de mamífero. Las desempeñar un papel únicamente en el ensamblaje
cromátidas hermanas (líneas grises claras y oscuras) que se mantienen unidas por su atrapamiento dentro de
cromosómico durante la profase, pero no en el
los anillos de cohesina (amarillo) se organizan en conjuntos lineales de bucles por la condensina II (púrpura).
mantenimiento posterior de la estructura
Los tamaños de bucle pueden estar limitados a 80–120 kb por la acción restringida de la condensina II dentro
de la región entre dos sitios de unión de cohesina. La liberación de la mayor parte de la cohesina de los brazos cromosómica mitótica. Dado que se requiere topo
cromosómicos por la vía de la profase permite la generación de enlaces entre diferentes bucles por la II para la resolución de concatenaciones de
condensina II, lo que da como resultado una compresión lineal a lo largo del eje longitudinal del cromosoma. cromátidas hermanas [95], es concebible que los
Topografía IIun (verde) podría ayudar en este proceso al catalizar el paso de la hebra intracromátida. La unión entrelazamientos de cromátidas hermanas puedan
de la condensina I (rojo) después de NEBD da como resultado una compresión lateral al sujetar los bucles que
restringir la formación de enlaces de larga distancia
sobresalen del cromosoma y, por lo tanto, ayuda a eliminar la cohesión del brazo residual y dirige la
por la condensina II de manera similar a como lo
decatenación entre cromátidas por topo IIuna.
harían los enlaces de cromátidas hermanas
mediados por cohesina. Cohesión
condensación procediendo en dos pasos distintos [84]. El segundo entre cromátidas hermanas, ya sea mediada por cohesina o por
paso tiene lugar entre la profase tardía y la prometafase temprana concatenaciones, por lo tanto, debe resolverse para permitir la
[85] y coincide con la liberación de cohesina de los cromosomas a formación adecuada de cromosomas en metafase. Desde topo IIun
través de la acción de la “vía de la profase”. Junto con la eliminación el agotamiento también afecta la transformación en cromosomas
de concatenaciones entre hermanas por topo IIun,este paso da de tipo mitótico de las cromátidas no replicadas [93], topo IIunaún
como resultado la resolución de los brazos de las cromátidas podría ser necesario para catalizar el paso de la hebra
hermanas (revisado en [86–88]). Una posibilidad es que la liberación intracromátida durante la formación de los cromosomas (Fig. 2C, D).
de cohesina ahora podría permitir que la condensina II se una a
sitios más distantes en el genoma y, por lo tanto, comprima las
fibras de cromatina en la dirección del eje cromosómico (Fig. 2C). Paso 3: compresión lateral
De acuerdo con el papel de la condensina II en el paso de compresión
axial están los hallazgos de que los cromosomas en metafase parecen más Si la mayor parte de la condensación de los cromosomas se ha completado
largos y/o rizados después del agotamiento de las subunidades de condensina incluso antes de que la mayor parte de la condensina I tenga acceso a los
II en células humanas o de pollo cultivadas, o cuando cromosomas [71, 85, 96], ¿qué función tiene la condensina I para la

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formación de cromosomas mitóticos? cromosomas ensamblados en
Xenopolos extractos de huevo contienen aproximadamente cinco veces
la cantidad de condensana I en comparación con la condensación II [90].
La reducción de la proporción de condensina I da como resultado la
Revisar ensayos
formación de cromosomas más cortos y más anchos [81]. Por lo tanto, se
ha sugerido que la condensina I reduce el diámetro del cromosoma. El
apoyo a esta propuesta también proviene del informe de que la
degradación dependiente de caspasa de la subunidad kleisina de la
condensina I en células humanas, detenida por venenos del huso
durante largos períodos de tiempo, da como resultado un aumento en el
ancho cromosómico [97].
Sin embargo, el ancho de los brazos del cromosoma humano no
parece cambiar una vez que la condensina I se une después de NEBD
[96], lo que sugiere que podría ocurrir un paso de compactación lateral
en algunos tipos de células pero no en otros. Sin embargo, aún podría
ser concebible que, incluso en las células HeLa, la condensina I sea
esencial para "enrollar" las fibras de cromatina individuales que
sobresalen del cilindro cromátide, por ejemplo, aquellas que todavía
están conectadas a la otra cromátida hermana por complejos de
cohesina que escaparon. la vía de la profase (Fig. 2D). Tal escenario
podría explicar cómo la condensina I contribuye a la eliminación
completa de la cohesina de los brazos cromosómicos en estas células
[71]. Además, se cree que la unión de la condensina I estabiliza
mecánicamente las cromátidas, ya que las regiones centroméricas que
están bajo tensión por su unión a los microtúbulos del huso se estiran
mucho después del agotamiento de la condensina I en células de mosca
o humanas [96, 98] o después de la eliminación de una subunidad SMC
de condensina en células de pollo cultivadas [99]. La estabilización por
complejos de condensina es presumiblemente esencial no solo en los
centrómeros sino en todo el cromosoma, ya que los brazos
cromosómicos con frecuencia no siguen a los centrómeros hasta los
polos celulares después de la inactivación del único complejo de
condensina presente en la levadura [100, 101].
Asumiendo que la condensina I también funcionó como un
enlazador de cromatina similar a la condensina II, ¿cómo podría su
acción dirigir la compresión lateral en lugar de la axial? Si, para
cuando la condensina I llegó a los cromosomas, la condensina II ya
había generado un número saturado de enlaces de cromatina a lo
largo del eje cromosómico (Fig. 2C), la unión de la condensina I no
daría como resultado un mayor acortamiento del cromosoma en la
dirección longitudinal. El único cambio conformacional posible que
aún podría tener lugar es, en cambio, en la dirección lateral (Fig.
2D). Sin embargo, bajo ciertas circunstancias, la condensina I podría
inducir un mayor acortamiento del eje cromosómico: cuando las
células cultivadas humanas se detienen con venenos para husos
como el nocodazol, los cromosomas se acortan en un tercio
adicional de su longitud. Este acortamiento adicional se reduce
considerablemente después del agotamiento de la condensana I
[71]. La condensación I también podría asumir parte de la función
de la condensación II en los dos primeros pasos de condensación,
ya que la compactación simplemente se retrasa en las celdas sin
condensación II [71, 81, 84, 96].
Otra proteína que podría contribuir al paso de compresión lateral es
la cromoquinesina KIF4A. KIF4A contiene un dominio motor dirigido al
extremo positivo de los microtúbulos en su extremo N, seguido de un
dominio de dimerización de bobina enrollada y un dominio de cola del
extremo C que se une a la cromatina (revisado en la Ref. [102]). Durante
la mitosis, KIF4A se localiza en los ejes de los brazos cromosómicos en
células humanas y de pollo [89, 92, 103], probablemente a través del
reclutamiento por parte de PP2A [76]. Sorprendentemente, humanos o
8 Bioensayos 37: 0000–0000,- 2015 Los autores. Bioensayos publicados por WILEY Periodicals, Inc.
Perspectivas y Resúmenes ....
los cromosomas de pollo de las células detenidas en prometafase o
metafase, respectivamente, se vuelven más cortos y más anchos
después del agotamiento de KIF4A [92, 103]. Por lo tanto, KIF4A podría
contrarrestar la compresión axial mediada por condensina II o contribuir
al paso de compresión lateral mediado por condensina I. Sin embargo, el
fenotipo del agotamiento de KIF4A no puede explicarse únicamente por
una disminución de la condensina unida a los cromosomas, ya que la
arquitectura cromosómica se ve afectada más drásticamente por el
agotamiento conjunto de KIF4A y SMC2 que por el agotamiento de
cualquiera de las proteínas solas [92].
La condensación cromosómica continúa más
allá de la metafase.
Los tres pasos de condensación (bucle de cromatina lineal,
compresión axial y compresión lateral) describen un escenario que
se acumula en cromosomas en metafase en forma de varilla listos
para su segregación a los polos celulares. Sorprendentemente, los
cromosomas aún no han alcanzado su máxima compactación en
este punto. Las mediciones de los volúmenes cromosómicos en
células cultivadas de mamíferos vivos muestran que la
compactación es máxima unos minutos después del inicio de la
anafase [85]. La compactación adicional durante la anafase se debe
al acortamiento cromosómico axial y depende de las actividades de
la cromoquinesina Kid [104] y la cinasa Aurora B [85]. Del mismo
modo, la levadura en ciernes Aurora quinasa es esencial para el
mantenimiento de una disposición lineal compacta del grupo de
ADNr en las células detenidas después del inicio de la anafase [38];
como es la condensana, que se acumula en el ADNr durante la
anafase de una manera que depende de la red de liberación
temprana de anafase (FEAR) de la fosfatasa Cdc14 [105, 106].
Además de la compactación del ADNr, se puede observar un mayor
acortamiento de los brazos cromosómicos durante la anafase en la
levadura en gemación [44] y fisión [107]. Dado que la extensión del
acortamiento del brazo aumenta para un cromosoma de fusión
extralargo, se sugirió que las células poseen un mecanismo de
"regla cromosómica" mediado por Aurora quinasa que ajusta el
grado de condensación de la anafase a la longitud del cromosoma
[44]. El propósito del acortamiento adicional de los brazos
cromosómicos durante su segregación podría ser promover su
eliminación del plano medio celular antes del inicio de la citocinesis
y/o el empaquetamiento de todos los cromosomas en un solo
núcleo tras la reformación de la envoltura nuclear.
¿Actúan los complejos de condensina como
enlazadores estructurales o remodeladores
cromosómicos?
Uno podría pensar en dos mecanismos fundamentalmente diferentes sobre
cómo los complejos de condensina podrían impulsar la formación de
cromosomas mitóticos: las condensinas podrían reconfigurar activamente la
topología cromosómica [62, 108] o actuar como enlazadores estáticos que
estabilizan mecánicamente la fibra de cromatina al unir sitios distantes dentro
de la misma fibra. [79]. Los hallazgos de que los complejos de condensina
pueden restringir las superenrollamientos en sustratos circulares de ADN in
vitro (ver Cuadro 1) respaldan la hipótesis anterior.
.... Perspectivas y Resúmenes
Sin embargo, los cambios en la superhelicidad del ADN podrían ser causados
por la forma en que las condensas se unen a la hélice del ADN en lugar de ser
el resultado de una actividad enzimática. Imágenes espectroscópicas de
electrones de complejos entre ensamblados in vitroXenopolos complejos de
condensina y el ADN sugieren que la doble hélice está envuelta en dos vueltas
cerradas, posiblemente alrededor de los dominios de la cabeza de la ATPasa
SMC [109]. Las condensinas también podrían unirse preferentemente a sitios
de cruces de ADN, en consonancia con su mayor afinidad de unión por
sustratos de ADN estructurado [63, 110].
Si la condensación simplemente promoviera topo IIun-cambios mediados en la
conformación cromosómica, su actividad probablemente ya no se requería para el
mantenimiento de un cromosoma plegado. Sin embargo, cuando la condensina se inactiva
en las células de levadura solo después de que se hayan formado los cromosomas mitóticos,
dichos cromosomas no logran segregarse [38, 111]. La energía para cualquier cambio activo
en la topología de la cromatina probablemente tendría que provenir de la hidrólisis de ATP
por parte de las subunidades SMC. En comparación con las proteínas motoras como las
cromoquininas, las actividades ATPasa que se han medido para las condensinas o sus
dímeros SMC son inferiores en uno o dos órdenes de magnitud [63, 66, 112]. Aunque no
podemos descartar que aún no se hayan encontrado las condiciones óptimas para la
activación de la ATPasa de la condensina, los datos disponibles sugieren que las reacciones
de unión e hidrólisis del ATP podrían actuar más como un interruptor conformacional que
como un motor. Por estas razones, favorecemos la hipótesis de que los complejos de
condensina funcionan como enlazadores estructurales. La idea de la estabilización
cromosómica por una red de enlaces mediados por condensina es además consistente con
las propiedades micromecánicas de los cromosomas mitóticos aislados [27, 29] y con
modelos basados en datos de captura de conformación cromosómica [30]. Dichos enlaces
no tendrían por qué ser estáticos, sino que podrían generarse y disolverse en un equilibrio
dinámico, como sugiere la alta rotación medida para la condensina I [96]. 29] y con modelos
basados en datos de captura de conformación cromosómica [30]. Dichos enlaces no
tendrían por qué ser estáticos, sino que podrían generarse y disolverse en un equilibrio
dinámico, como sugiere la alta rotación medida para la condensina I [96]. 29] y con modelos
basados en datos de captura de conformación cromosómica [30]. Dichos enlaces no
tendrían por qué ser estáticos, sino que podrían generarse y disolverse en un equilibrio
dinámico, como sugiere la alta rotación medida para la condensina I [96].
Conclusiones y perspectivas de futuro
La estructura de los cromosomas mitóticos ha sido tema de debates
controvertidos en las últimas décadas. Los nuevos enfoques, desde
mediciones precisas de las propiedades mecánicas de los cromosomas
aislados hasta las técnicas basadas en la secuenciación del ADN de
próxima generación utilizadas para determinar la conformación de las
fibras de cromatina dentro del núcleo de la célula, han proporcionado
nuevos e importantes conocimientos sobre la arquitectura cromosómica.
En combinación con modelado computacional y formas de manipular
proteínas cromosómicas clave, incluidas condensina, cohesina, topo IIun,
y KIF4A, estos nuevos enfoques tienen el potencial de revolucionar
nuestra comprensión de uno de los ensamblajes macromoleculares más
grandes de la célula. Los estudios futuros podrían implicar la eliminación
específica de los principales componentes estructurales de los
cromosomas mitóticos durante las mediciones de micromanipulación o
la coordinación de la posición de los complejos de condensina con la
información de proximidad genómica de los experimentos de Hi-C
durante los diferentes pasos de la condensación cromosómica,
idealmente en células individuales. Los avances tecnológicos adicionales,
por ejemplo, en la microscopía de superresolución, podrían en algún
momento permitir el seguimiento in vivo de la fibra de cromatina en los
cromosomas mitóticos [113].
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M. Kschonsak y CH Haering
Sin embargo, comprender la formación de los cromosomas mitóticos no
solo requerirá la generación de un mapa tridimensional de la fibra de
cromatina, sino que dependerá de un conocimiento profundo de los
Revisar ensayos
mecanismos detrás de las máquinas moleculares que generan estas
topologías y su interacción con la fibra de cromatina. Los conocimientos
de los estudios bioquímicos y estructurales serán cruciales para apreciar
la acción de los complejos de condensina y desentrañar las funciones de
otras proteínas recientemente identificadas involucradas en la
condensación cromosómica. El modelo del enlazador de condensinas, si
es correcto, plantea preguntas desafiantes que deben abordarse: qué
causa que las condensasinas se acumulen en los ejes del cilindro
cromosómico, cómo los complejos de condensinas unen específicamente
dos hélices de ADN de la misma cromátida, y ¿qué determina que la
condensina II cree específicamente enlaces que acortan el eje
cromosómico, mientras que la condensina I crea específicamente
enlaces que disminuyen el diámetro de la cromátida? Los próximos años
prometen ser algunos de los más emocionantes en la historia de la
investigación cromosómica.
Expresiones de gratitud
Agradecemos a todos los miembros del grupo Haering por sus
comentarios y sugerencias. El trabajo en el laboratorio de los
autores está financiado por EMBL y otorga HA5853/1-2 y
HA5853/2-1 de la German Research Foundation.
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