Práctica No.

1
USO ADECUADO DE EQUIPO BÁSICO DE LABORATORIO
Simulación del uso de micropipetas y espectrofotómetro
________________________________________________________________________________

GUÍA GENERAL DE LA PRÁCTICA EN MODALIDAD VIRTUAL

Actividad Descripción Fecha

Entrega de pre- Los estudiantes deberán entregar un pre-laboratorio Previo a iniciar

laboratorio que incluye: la práctica de
laboratorio
● Diagrama de flujo de los procedimientos:
Simulación de uso de micropipetas y simulación de Semana del 31
uso de un espectrofotómetro. de enero al 4 de
febrero.
● Resolución del cuestionario que se presenta al final
del instructivo.
El pre-laboratorio se elabora de forma INDIVIDUAL y se
entrega como PDF a través de la plataforma Moodle del
Laboratorio PREVIO A INICIAR LA PRÁCTICA.

Exámenes cortos Examen pre-laboratorio: se realizará durante los Examen pre:

primeros 10 minutos de la práctica de laboratorio. Se
evaluarán las bases teóricas de la práctica (detalladas Semana del 31
en el instructivo y/o cuestionario). de enero al 4 de
febrero.
Examen post-laboratorio: se realizará durante los
Examen post:
primeros 10 minutos de la práctica de la semana
siguiente. Se evaluará la comprensión e interpretación Semana del 7 al
de los resultados obtenidos y algunos aspectos 10 de febrero
importantes de los procedimientos realizados.
NOTA: Encender las cámaras web para realizar los
exámenes cortos.

Explicación del Los instructores de laboratorio darán una explicación Día de la

fundamento de los aspectos básicos de los tipos de pipetas y su práctica
teórico de la utilización correcta, así como los aspectos generales de
práctica, del la espectrofotometría por medio de una presentación Semana del 31
de enero al 4 de
procedimiento de de PowerPoint. Los instructores explicarán el
la práctica y breve procedimiento a realizar durante la práctica y febrero.
demostración de resolverán dudas de los estudiantes.
las simulaciones
virtuales.
Evaluaciones en Durante el desarrollo de la práctica, los estudiantes Día de la
tiempo real deberán ir respondiendo evaluaciones en formularios práctica
de Google. Al responderlas, también estarán
registrando su asistencia. Semana del 31
de enero al 4 de
febrero.

Material de apoyo a. Simulador del uso de pipetas de volumen Día de la

variable “LabXchange” práctica
https://www.labxchange.org/library/pathway/l
x-pathway:2cd1b2af-481a-4b2e-ad51- Semana del 31
5904c2ec16fe/items/lx-pb:2cd1b2af-481a- de enero al 4 de
febrero.
4b2e-ad51-
5904c2ec16fe:lx_simulation:43defd7f?source=
%2Flibrary%2Fclusters%2Flx-cluster%3Aabe

b. Simulador del uso de un espectrofotómetro

https://web.mst.edu/~gbert/Color_Lg/color.ht
ml?103

Otras páginas web y videos relacionados se listan en el

instructivo.
IMPORTANTE: Se recomienda que los estudiantes se
familiaricen con el uso de los simuladores previo a la
práctica.

Foro de preguntas Los estudiantes pueden hacer preguntas respecto al Semana previa a
tema de la práctica en el transcurso de la semana la práctica
previa a la semana de la práctica utilizando el “Foro de
discusión” en la plataforma Moodle. Los instructores Semana del 25
al 29 de enero.
de laboratorio responderán las preguntas.
Reporte de Cada grupo de laboratorio realizará un video-reporte, Semana
laboratorio: siguiendo el formato que pueden descargar del posterior a la
Moodle del Laboratorio y se deberá entregar una práctica
Video-reporte semana después de realizada la práctica. Se habilitará
la entrega en la plataforma Moodle, y se deberá subir Semana del 7 al
un documento en PDF que contenga el link del enlace 10 de febrero
donde se encuentre el vídeo en YouTube, con los antes de las
permisos respectivos para que se pueda visualizar, en 14:00 horas del
el documento en PDF, también deberán de colocar las día que
referencias (y no incluirlas en el vídeo-reporte). corresponde a
la práctica de
Para subir el vídeo-reporte a YouTube se subirá una
guía a la plataforma del Moodle para aplicarla. laboratorio de
cada grupo.
PONDERACIÓN DE LA PRÁCTICA

Actividad Punteo por Punteo total Porcentaje de la

práctica de laboratorio nota de
laboratorio
sobre la zona
total del curso
Exámenes cortos pre práctica 0.40 p 4.5 p
Exámenes cortos post práctica 0.40 p 4.5 p
Cuestionarios de retroalimentación 0.30 p 3.0 p
Reportes / video-reportes 0.40 p 4.5 p
20%
Pre-laboratorios (diagramas de flujo y 0.25 p 1.0 p
cuestionarios)
Examen final de laboratorio - 2.5 p
Total 1.75 p 20 p

INTRODUCCIÓN

En el laboratorio de bioquímica es común trabajar con sustancias cuya naturaleza,

alto costo y/o dificultad de obtención obligan al analista a realizar mediciones con pequeñas
cantidades o soluciones de bajas concentraciones de las mismas. El trabajo con pequeños
volúmenes, sobre todo en mediciones cuantitativas, hacen necesario el uso de instrumentos
para medir y dispensar los volúmenes necesarios de manera sencilla, eficiente, exacta y
precisa. Esto se logra a través del uso de pipetas manuales o automáticas.

Por otro lado, uno de los métodos fisicoquímicos más empleados en el análisis
bioquímico es el de la medida de la absorción o emisión de energía radiante por medio de
aparatos llamados genéricamente espectrofotómetros. Con estas mediciones se puede
caracterizar o cuantificar analitos específicos de muestras complejas, o bien medir el efecto
de éstos sobre sistemas que recrean las condiciones de los organismos con el fin de estudiar
su metabolismo.

En esta práctica, los estudiantes utilizarán simuladores virtuales que demuestran el

uso correcto de pipetas para medir volúmenes exactos, y el uso de un espectrofotómetro
con el fin de conocer los mecanismos generales de su funcionamiento y la utilización
adecuada de los mismos.

MICROPIPETAS AUTOMÁTICAS

En bioquímica, muchos experimentos utilizan volúmenes pequeños de líquidos, en

el rango de mililitros (mL) o microlitros (µL). Para la medición y transferencia de estos
volúmenes se utilizan micropipetas automáticas, las cuales realizan esta operación de
manera exacta y reproducible. Las micropipetas utilizadas con más frecuencia en el
laboratorio de bioquímica permiten medir volúmenes desde 0.2 hasta 1000 μL y pertenecen
a la instrumentación básica en el laboratorio (Miller, Sass, Wong, & Nienhuis, 2004).

Principio de operación y tipos de micropipetas

La micropipeta mecánica (de pistón), funciona transmitiendo la fuerza manual
ejercida por el operador sobre un émbolo que se encuentra unido a un pistón. El pistón se
desplaza a lo largo de un cilindro de longitud fija forzando el desplazamiento de un volumen
definido de líquido hacia afuera de la micropipeta (Organización Panamericana de la Salud,
2009).
Las partes básicas de una micropipeta son: émbolo, pistón y cámara de aire;
además, todas las micropipetas actuales utilizan puntas desechables (tips) para contener el
líquido y minimizar los riesgos de contaminación del instrumento (Organización
Panamericana de la Salud, 2009). El tamaño de los tips varía en función del volumen que
dispensa la micropipeta, así mismo se observa variación en el color de los tips el cual se
asocia a rangos específicos de funcionamiento (Gilson, 2018).
Con respecto al mecanismo de funcionamiento, se reconocen dos tipos de
micropipetas ilustrados en el Figura 1:

• Pipeta de desplazamiento de aire, en la que se observa una cámara de aire que se

encuentra entre la cabeza del pistón y el líquido que se desplaza en el cilindro.

• Pipeta de desplazamiento positivo o directo, en la cual el pistón se encuentra en

contacto directo con el líquido, careciendo de cámara de aire. Este tipo de micropipeta
presenta mayor riesgo de contaminación.

Figura 1. Tipos de pipetas (Organización Panamericana de la Salud, 2009).

Con respecto al volumen dispensado, las micropipetas pueden ser de volumen fijo
o variable. Las micropipetas de volumen variable presentan la ventaja que permiten ajustar
el volumen a ser dispensado dentro de un rango determinado en las especificaciones de la
micropipeta. En el laboratorio, las micropipetas utilizadas con mayor frecuencia son P2,
P10, P20, P100, P200 y P1000; el número después de la letra P se refiere al número máximo
de microlitros que la micropipeta está diseñada para transferir. Se recomienda seleccionar
siempre la micropipeta con menor rango de volumen que pueda transferir el volumen
deseado (Gilson, 2018; Miller et al., 2004).
Tabla 1. Rango de funcionamiento de micropipetas
Rango de Color de la punta
Micropipeta
funcionamiento (μL) (tip) utilizada
P2 0.2-2 Blanco
P10 1-10 Blanco
P20 2-20 Amarillo (o blanco)
P100 10-100 Amarillo
P200 20-200 Amarillo
P1000 100-1000 Azul

USO DE MICROPIPETAS
Especificando el volumen a transferir
Por lo general las micropipetas presentan tres números en el indicador de
volumen (Figura 2). Para especificar el volumen de trabajo es necesario girar el botón de
ajuste hasta alcanzar el volumen deseado. Nunca se debe colocar el indicador de
volumen más allá de los límites de trabajo (superior e inferior) de la micropipeta, esto
puede dañarla (Miller et al., 2004).

Figura 2. Ajuste de volumen de y algunas partes de la micropipeta (Gilson, 2018)

Transferencia exacta de volúmenes
En las micropipetas que trabajan por desplazamiento de aire, el operador presiona
un émbolo que mueve el pistón interno hacia dos diferentes posiciones, como se observa
en la Figura 3. La primera posición (primer tope), se utiliza para llenar la micropipeta y la
segunda posición (segundo tope) es utilizada para dispensar todo el contenido de la punta
(purga).

Figura 3. Posiciones del émbolo (Organización Panamericana de la Salud, 2009)

A continuación, se presentan las recomendaciones generales necesarias para emplear

correctamente una micropipeta:

• Utilizar siempre la micropipeta en posición vertical.

• Verificar el rango de volumen dispensado por la micropipeta.
• Seleccionar el volumen a aspirar haciendo girar suavemente el botón de ajuste.
• Colocar el tip adecuadamente evitando contaminarlo si se requiere esterilidad.
• Introducir el tip en la solución que se desea aspirar. La profundidad mínima de
inmersión del tip será de 2 a 5 milímetros (mm).
• Humedecer previamente el tip operando un par de veces la micropipeta con la
solución de trabajo. Cuando se dispensen volúmenes menores a 10 μl no es necesario
pre-humedecer el tip.
• Después de llenar la micropipeta, remover cualquier gota que se adhiera al tip. Esto
se logra tocando suavemente la pared del recipiente que contiene la solución con la
punta del tip.
• Dispensar el líquido contenido en la pipeta tocando la punta del tip con la pared del
recipiente receptor a una altura de 8 a 10 mm por encima de la superficie del líquido.
 La punta del tip debe tomar un ángulo de 30 a 45° con respecto a la pared del
recipiente. (Organización Panamericana de la Salud, 2009)

Llenado de la micropipeta
La Figura 4 ilustra los pasos indicados en la presente sección.

• Destapar la caja de tips y sujetar uno insertando el eje más delgado de la micropipeta
dentro del tip y presionando firmemente. Esto debería producir un sello hermético
entre el tip y el eje de la micropipeta.
• Tapar de nuevo la caja de tips para evitar contaminación. En algunas ocasiones se
requiere el uso de tips estériles.
• Evitar contaminar el tip tocándolo con las manos o topándolo con algún recipiente.
• Presionar el émbolo de la micropipeta hasta la primera posición (primer tope).
• Sumergir el tip de 3 a 5 mm por debajo de la superficie de la solución. Mantener la
micropipeta en posición vertical (1B).
• Liberar suavemente el émbolo dejando que el tip absorba el líquido (2A). Verificar
que el émbolo se desplace hasta la posición límite superior y esperar unos segundos
antes de retirar el tip del líquido para garantizar que el volumen completo de la
muestra ha ingresado al tip. Cuando se transfiera el volumen máximo que aspira la
micropipeta es necesario aspirar con suavidad para evitar que la solución tenga
contacto con el eje inferior de la micropipeta y contaminarla. Si la micropipeta se
contamina, es necesario limpiarla inmediatamente con un paño húmedo.
• Jamás recostar una micropipeta con solución en el tip sobre la mesa de trabajo.

Dispensando el contenido de la micropipeta

La Figura 4 ilustra los pasos indicados en la presente sección.

• Colocar la punta del tip contra la pared del recipiente en el cual será dispensado el
líquido (3A). La tensión superficial ayudará a dispensar el contenido de la micropipeta.
No es recomendable expulsar el líquido al aire. Si el recipiente receptor ya tiene algún
volumen de líquido, evitar que la punta del tip quede sumergida en el mismo.
• Dispensar el contenido de la pipeta presionando suave y firmemente el émbolo hacia
la primera posición (primer tope), manteniendo siempre el contacto entre la punta
del tip y la pared del recipiente (4B).
• Presionar el émbolo hasta la segunda posición (segundo tope), para expulsar
cualquier fracción del líquido que hubiera podido quedar en la punta de la pipeta (5C).
• Mantener el émbolo presionado mientras se retira la micropipeta del recipiente
receptor. Una vez retirada la micropipeta, liberar suavemente el émbolo (6A).
 • Utilizar el botón de expulsión para descartar el tip (6A).
• NOTA IMPORTANTE: Ser consistente con la forma como se usa la pipeta evita errores
aleatorios generados por el operador.

Figura 4. Método de uso de micropipetas (Organización Panamericana de la Salud, 2009)

ESPECTROFOTÓMETRO

Los espectrofotómetros miden la transmitancia o indirectamente la absorbancia de

una sustancia o mezcla de sustancias. La absorbancia es la captura de energía luminosa por
parte de una molécula cuando se encuentra con un fotón. La energía puede volver a emitirse
como luz o convertirse en calor. La cantidad de energía absorbida depende de la longitud de
onda de la luz. Esta propiedad se usa ampliamente para medir la concentración de
moléculas absorbentes en una muestra; la técnica se llama espectrofotometría de
absorbancia. La absorbancia se produce cuando la frecuencia o longitud de onda de la luz
coincide con la frecuencia de las vibraciones moleculares o con las diferencias de nivel de
energía de los electrones a medida que cambian de energía (Morris, 2015)

En espectrofotometría, la energía que incide sobre una muestra es una radiación

monocromática (energía radiante de una sola longitud de onda, o por razones prácticas, una
banda muy estrecha de longitudes de onda). Las medidas de la radiación transmitida se
realizan mediante aparatos muy sensibles como el espectrofotómetro. Este consta
básicamente de una fuente de radiación, un dispersor de longitud de onda (prisma de
cuarzo, vidrio o cloruro de sodio (NaCl), una fotocélula y un detector (fotomultiplicador)
(Skoog et al., 2018).
 Cuando se encuentra un sistema coloreado o un color producido en una reacción, y
se desea hacer una determinación espectrofotométrica del constituyente, es necesario
hacer una selección de la longitud de onda analítica más apropiada para el efecto (en
nanómetros -nm-), luego se debe obtener la absorbancia y lograr de esa forma obtener la
concentración de dicho constituyente aplicando la ley de Beer (Skoog et al., 2018).

El método espectrofotométrico se rige por dos leyes fundamentales la ley de

Lambert, la cual establece que cuando pasa un haz de luz monocromática por un medio
homogéneo, la disminución de la intensidad del haz de luz incidente es proporcional al
espesor del medio. Y la ley de Beer indica que la intensidad de un haz de luz monocromática
disminuye exponencialmente al aumentar aritméticamente la concentración de la sustancia
absorbente, cuando este haz pasa a través de un medio homogéneo. Ambas leyes se
combinan en una sola, generando la Ley de Lambert-Beer (Morris, 2015).

La gran difusión de esta técnica es consecuencia de: (1) el amplio intervalo de

longitudes de onda o de frecuencias de energía radiante y sus diferentes modos de
interacción con la materia; (2) la existencia en el mercado de instrumentos de medida cada
vez más precisos; (3) las ventajas inherentes al método (Morris, 2015).

Determinación del espectro de absorción

El espectro de absorción de un analito en solución se puede obtener con la ayuda de

un espectrofotómetro mediante un “barrido”. Esto es, la determinación de la absorbancia
del compuesto de interés a las distintas longitudes de onda del espectro. La longitud de
onda seleccionada para las mediciones posteriores es normalmente aquella en la que el
analito muestre la mayor absorbancia o en la que se observe la máxima diferencia entre la
absorbancia del compuesto y el reactivo (Bender, 1992).

Curva de calibración
Después de determinar la longitud de onda a la cual deben de realizarse las medidas,
se debe calibrar el método. Para ello, se miden una serie de patrones o estándares con
concentraciones conocidas del analito de interés. Las medidas de transmitancia (o
absorbancia) se realizan ajustando la escala de medida del espectrofotómetro a 100% de
transmitancia (o cero de absorbancia), cuando el rayo luminoso pasa a través de una
muestra blanco (como blanco se conoce a la preparación que debe tener una composición
idéntica a la de la muestra sin el analito que se ha de determinar) (Bender, 1992).

Con los datos de transmitancia o absorbancia para las diferentes concentraciones de

los estándares se construye una curva de calibración, por medio de la cual se determinan
las concentraciones de las muestras desconocidas aplicando la ley de Lambert-Beer (Bender,
1992).
La fórmula matemática que relaciona la absorbancia con la concentración del analito
en solución es la siguiente: A = Ɛ b c (Donde “A” es la absorbancia, “Ɛ” es el coeficiente de
absortividad molar, “b” es la distancia que viaja la luz a través del recipiente que contiene la
muestra en centímetros, y “c” es la concentración del analito en molaridad). La absorbancia
también se puede calcular con el valor de transmitancia aplicando la siguiente relación
matemática: “A = Log (1/T)” Donde “A” es absorbancia, “T” es transmitancia y “Log” se
refiere al logaritmo base diez.

Uno de los propósitos de la presente práctica es la comprensión de los fundamentos

de la espectrofotometría, por medio de un simulador virtual y posteriormente obtener e
interpretar la concentración de dos muestras desconocidas.

REFERENCIAS
Bender, G. (1992). Métodos instrumentales de análisis en química clínica. Editorial Acribia,
S.A.
Gilson. (2018). GUIDE TO PIPETTING Third Edition. Retrieved from
https://de.gilson.com/pub/media/docs/GuideToPipettingE.pdf
Miller, J. S., Sass, M. E., Wong, S. J., & Nienhuis, J. (2004). Micropipetting: An Important
Laboratory Skill for Molecular Biology. American Biology Teacher, 66(4), 291–296.
https://doi.org/10.2307/4451672
Morris, R. (2015). Spectrophotometry. Current Protocols in Essential Laboratory
Techniques, 11(1), 2.1.1-2.1.30. https://doi.org/10.1002/9780470089941.et0201s11
Organización Panamericana de la Salud. (2009). Manual de mantenimiento para guias de
laboratorio. Organización Mundial de La Salud, 107–120. Retrieved from
https://www.paho.org/es/documentos/manual-mantenimiento-para-guias-
laboratorio
Skoog, D. A., Holler, J., & Crouch, S. (2018). Principios de análisis instrumental. Cengage
Learning.

OBJETIVOS
Al finalizar la práctica el estudiante estará en capacidad de:

● Conocer acerca del uso correcto de una micropipeta automática.

● Seleccionar adecuadamente la pipeta necesaria para trabajar según el volumen que
se desea medir.
● Determinar por medio del simulador virtual el espectro de absorción de una sustancia
conocida.
● Comprender y explicar la utilidad del blanco y los estándares en espectrofotometría.
● Aprender a determinar la concentración de un analito específico en una solución por
métodos espectrofotométricos y cálculos matemáticos.
RECURSOS VIRTUALES Y MATERIALES:
c. Fundamento de la Ley de Beer-Lambert, usando la plataforma Spectrophotometry de
University of Missouri - Rolla (Bertrand, 2002).
http://web.mst.edu/~gbert/Color_Lg/color.html?103
d. Simulador del correcto uso de las pipetas, de “LabXchange”
https://www.labxchange.org/library/pathway/lx-pathway:2cd1b2af-481a-4b2e-
ad51-5904c2ec16fe/items/lx-pb:2cd1b2af-481a-4b2e-ad51-
5904c2ec16fe:lx_simulation:43defd7f?source=%2Flibrary%2Fclusters%2Flx-
cluster%3Aabe
e. Programa o aplicación para grabar videos.
f. Zoom o Google Meet.
g. Excel (y/o calculadora, hojas, lápiz, lapicero).

ACTIVIDAD SIMULACIÓN VIRTUAL (Uso de micropipetas)

En el laboratorio, el instructor explicará el correcto uso de una micropipeta por medio de

un simulador virtual. Posteriormente en forma asincrónica lo estudiantes replicarán el
ejercicio individualmente.

1. Entrar al enlace de LabXchange (ver inciso b, recursos virtuales y materiales), para el

inicio de la simulación. Es recomendable utilizar el navegador de una computadora
para realizar estas simulaciones. También se recomienda activar la vista de pantalla
completa en el navegador (presionando F11) para poder visualizar todo el campo.
2. Realizar todos los pasos indicados en el simulador. Manipularlo las veces que
considere necesario, porque al final del simulador se apreciará, por medio del
diámetro de la solución pipeteada en papel filtro que tan exacto se pipeteó.
3. Tomar una captura de pantalla con los resultados que obtenga al pipetear las
diferentes soluciones en el papel filtro.
4. Los resultados de cada participante del grupo, se colocarán en un solo documento,
debidamente identificados. Este documento tendrá un valor en la nota del reporte de
laboratorio. Responder las preguntas que se encuentran al final del simulador, como
ejercicio para estimar cuánto aprendió.

ACTIVIDAD SIMULACIÓN VIRTUAL (Uso del espectrofotómetro)

Se estudiará el fundamento de la Ley de Beer-Lambert, usando la plataforma

Spectrophotometry (Inciso a, recursos virtuales y materiales). El instructor de laboratorio
presentará la forma en la que funciona el simulador virtual del espectrofotómetro, y
explicará la utilidad y las herramientas del simulador virtual, tales como:
● Términos de absorbancia y transmitancia.
● Cómo se establece la longitud de onda a trabajar.
● Cómo ajustar a cero con el blanco de reactivo.
● Cómo se introduce y se exporta cada celda de cubeta en el lector.
 ● La cubeta 0, se utiliza como blanco (agua).
● Las cubetas 1, 2 y 3, pueden ser llenadas con diferentes proporciones de agua,
solución azul y roja, preparando para cada una diferentes mezclas.
● Las cubetas 4 y 5 son muestras desconocidas con diferentes proporciones de agua,
solución azul y roja.
● La forma de cómo pueden realizar el barrido o scan (en el simulador únicamente se
puede realizar a las cubetas 1, 2 y 3, las otras solo pueden leerse).

PROCEDIMIENTO (Espectrofotometría):

Durante la práctica de laboratorio se realizará el siguiente proceso en conjunto con

el instructor de laboratorio. Mismo que tendrán que replicar por grupo de laboratorio, de
forma asincrónica, con algunas variaciones que le serán dadas por su instructor, del cual
tendrán que elaborar un video, que contará como reporte de laboratorio. Los aspectos a
evaluar se encuentran en el apartado de “EVALUACIÓN DE VÍDEO” en este instructivo. La
entrega de dicho video será a más tardar el próximo día de laboratorio, antes de iniciar la
siguiente práctica.

1. Primero, se ajustará el espectrofotómetro a cero con la cubeta 0 (blanco).

2. La cubeta 1 será llenada únicamente con solución roja (se puede diluir con agua).
3. La cubeta 2 se llenará únicamente con solución azul (se puede diluir con agua).
4. La cubeta 3, tendrá tanto solución azul como solución roja (se puede diluir con agua
también).
5. Realizar un barrido para las cubetas 1, 2 y 3 para establecer la longitud de onda en
la cual se lee la mayor absorbancia para cada solución azul y roja (individual y
mezcla).
6. Elaborar gráficas independientes de “longitud de onda vs absorbancias” de los
barridos de la solución 1, 2 y 3, en un documento de Excel. Y explicar cuál será la
longitud de onda a emplear.
7. Leer la absorbancia de todas las cubetas a las longitudes de onda donde se
determina la mayor absorbancia, según los barridos del paso anterior. No olvidarse
de ajustar a cero en cada longitud de onda a leer.
8. Determinar las concentraciones de las muestras desconocidas en partes por millón
(ppm) utilizando una regla de tres con los valores de absorbancia obtenidos con los
estándares de concentraciones conocidas, realizar la prueba en check results para
corroborar que todo se haya realizado adecuadamente.
9. Si hubiera algún error, repetir el proceso, revisar los datos y/o corroborar.
10. Realizar una grabación por grupo de laboratorio, siguiendo las instrucciones que se
detallan en el siguiente inciso.
EVALUACIÓN DE VÍDEO (Espectrofotometría)
Los aspectos que se evaluarán en el video-reporte que se realice de forma grupal,
son los siguientes:

Aspecto a evaluar Porcentaje

Presentación de grupo breve (un nombre y un apellido de c/u), sección de laboratorio 5
y carrera.
Explicación y realización de los incisos del 1 al 8, para ello ya se tuvo que haber 15
realizado las pruebas respectivas previamente.
Utilizar la proporción de colorante rojo, azul y agua según las indicadas por los 5
auxiliares.
Explicar que es un blanco y cuál de las cubetas en la simulación lo representa, que el 5
procedimiento que realice evidencie que lo utiliza.
Explicar que es un estándar y cuál (o cuáles) de las cubetas cumple con esa función. 5
Explicar la gráfica realizada en Excel, de los barridos de las cubetas 1, 2 y 3, y qué 10
longitudes de onda utilizaría para la determinación de las absorbancias y por qué.
Explicar brevemente la forma en la que determina los cálculos. Mostrar una captura (o 20
procedimiento) del procedimiento para la determinación de la concentración de las
muestras desconocidas.
Explicar e interpretar los resultados de las muestras desconocidas (proporción de cada 20
solución) mostrar que si se obtuvo a la concentración esperada en el apartado check
results. Explicar si se pudo demostrar la Ley de Beer-Lambert con este experimento.
Dominio del tema, explicación precisa y clara. 10
Tiempo: de 4 a 6 minutos. 5
TOTAL 100

OTROS RECURSOS VIRTUALES DE APOYO: Los siguientes Links los puede utilizar como
apoyo y afianzar los conocimientos adquiridos en esta práctica.
a. Simulador de la Ley de Beer-Lambert: https://phet.colorado.edu/sims/html/beers-
law-lab/latest/beers-law-lab_en.html
b. Vídeo con explicación del correcto uso de micropipetas, para enriquecer la
explicación: “Uso de micropipetas”: Por medio del link:
https://www.youtube.com/watch?v=ezD70S1Ju5c
c. Para conocer paso a paso el proceso del pipeteo:
https://www.labxchange.org/library/pathway/lx-pathway:2cd1b2af-481a-4b2e-
ad51-5904c2ec16fe/items/lx-pb:2cd1b2af-481a-4b2e-ad51-
5904c2ec16fe:lx_simulation:994080b0?source=%2Flibrary%2Fclusters%2Flx-
cluster%3Aabe
DIAGRAMA DE FLUJO

Esquematizar el procedimiento a seguir en ambas simulaciones virtuales de la

práctica de laboratorio, el cual puede realizarse a mano o a computadora. Se debe seguir el
instructivo proporcionado en el Moodle para la elaboración de los diagramas. Es importante
familiarizarse con el uso de los simuladores previo a la práctica para facilitar su desarrollo.

ANOTACIONES Y CÁLCULOS
Tomar nota de los resultados y dejar registro de todos los cálculos realizados.

RESULTADOS

-Generar captura de pantalla al finalizar la simulación del uso de micropipetas y elaborar

un único documento por grupo de laboratorio debidamente identificado.

-En espectrofotometría, graficar el espectro de absorción de cada solución 1, 2 y 3

(longitud de onda vs absorbancia) utilizando Microsoft Excel para incluir en el video-
reporte.

-Registrar los datos solicitados en la siguiente tabla para el reporte.

Absorbancias y concentraciones:

Cubeta Absorbancia Concentración Cubeta Absorbancia Concentración

(ppm) (ppm)
0 --- 0 ---
1 1
2 2
3 3
4 4
5 5
Longitud Longitud
de onda de onda
Solución Solución
usada usada
CUESTIONARIO
Conteste las siguientes preguntas como parte de su prelaboratorio, NO OLVIDE CITAR LAS
REFERENCIAS UTILIZADAS.

1. ¿Qué pipeta(s) utilizaría para medir cada uno de los siguientes volúmenes con mayor
exactitud? 1 µL, 12 µL, 30 µL, 75 µL, 200 µL, 725.5 µL

2. ¿Qué sucedería si usted coloca incorrectamente el “tip” en la pipeta? Y ¿Por qué razón
no se debe aspirar una solución teniendo inclinada la pipeta?

3. Investigue qué es el pipeteo inverso y para qué tipo de muestras o soluciones se utiliza.

4. Busque un esquema del espectro electromagnético, identifique sus diferentes

regiones, su relación con la longitud de onda y la energía de la radiación que se
encuentra en cada región. ¿Qué regiones del espectro pueden analizarse utilizando
un espectrofotómetro?

5. ¿Cuáles son los principales componentes de un espectrofotómetro y cuáles son sus

funciones? Utilice un esquema para responder esta pregunta.

6. ¿Qué es el espectro de absorción de una sustancia y qué relación tiene el “barrido”

con este término? ¿Por qué se utilizan las regiones de mayor absorbancia para
cuantificar dicha sustancia?

7. Defina: Blanco y estándar en términos de espectrofotometría.

8. ¿Cómo se construye una curva de calibración en un análisis espectrofotométrico y

para qué sirve?

9. Si una solución 100 mM de un analito “X” posee una absorbancia de 0.537 a una
longitud de onda específica para cuantificar este analito. ¿Cuál será la concentración
de una muestra desconocida que contiene este único analito la cual posee una
absorbancia de 0.658? (No olvide dejar constancia de su razonamiento y cualquier
procedimiento o cálculo que realice).

10. ¿Cuál es el rango de absorbancia que un espectrofotómetro puede medir? ¿Es posible
obtener lecturas de absorbancia de 5.0? Explique su respuesta