Quimioluminiscencia

2016

2 Luminiscencia

La luminiscencia es definida como la emisión de luz asociada con la disipación de energía de una
sustancia electrónicamente excitada.

Si los electrones de un componente luminiscente son estimulados por una luz en estado normal, estos
dan energía en forma de luz cuando ellos regresan al estado fundamental.

3 Tipos de luminiscencia

Fotoluminiscencia (fluorescencia): la sustancia es estimulada por fotones de luz.

Bioluminiscencia: una reacción química mediada por enzimas es responsable de la excitación.

Quimioluminiscencia: se define como la emisión de luz, normalmente en la región visible o infrarrojo

cercano, causada por los productos de una reacción específica química, en la cual se involucran las
siguientes sustancias según el sistema automatizado que sea utilizado: éster de acridina, peróxido-ácido,
hidróxido de sodio, fosfatasa alcalina.

5 Quimioluminiscencia

Es la producción de luz a partir de una reacción química.

Dos compuestos químicos reaccionan para formar un intermediario en estado excitado (alta energía),
que se desexcita liberando parte de su energía como fotones de luz para alcanzar su estado
fundamental.

6 Las reacciones quimioluminiscentes no suelen liberar calor, porque en su lugar la energía se libera en
forma de luz.

7 Inmunoensayos quimioluminiscentes

Emplean como sonda moléculas sintetizadas o compuestos naturales que generan quimioluminiscencia.

Para que se dé la quimioluminiscencia es necesario que la reacción produzca un exceso de energía, lo

cual es bastante frecuente sobre todo en reacciones redox.
Pero el hecho de que el exceso de energía se disipe con emisión de quimioluminiscencia depende en
gran medida de la estructura molecular de los intermedios o productos de reacción.

8 El inmunoensayo enzimático, que emplea enzimas como sondas, se desarrolló y rápidamente obtuvo
gran popularidad.

Las enzimas pueden amplificar las señales dependiendo de la actividad catalítica de la enzima.

En un intento de mejorar los sustratos y aumentar la sensibilidad, se han introducido compuestos

cromóforos, fluoróforos, y más tarde, compuestos quimioluminiscentes.

Dependiendo del sustrato elegido, el método de ensayo se podría definir como IEF O IEQ.

9 A diferencia de los fluoróforos , la mayoría de los compuestos quimioluminiscentes requieren una

estimulación química, en lugar de energía lumínica, para generar una emisión de luz.

La reacción de óxidación-reducción es un proceso común en los ensayos quimioluminiscentes.

10 La amplificación de la señal no se espera de las sondas quimioluminiscentes porque las moléculas

quimioluminiscentes generan un solo fotón por descomposición molecular.

Las sustancias quimioluminiscentes de enzimas pueden amplificar el número de eventos en un orden de

magnitud 6 veces mayor que el I125. Esto se le atribuye a la capacidad de amplificación catalítica que
poseen las enzimas.

11 Quimioluminiscencia directa

Generalmente un sustrato y un oxidante en presencia de algunos cofactores reaccionan para formar un

producto o intermedio de la reacción, algunas veces en presencia de una catalizador.

Alguna fracción del producto o intermedio podrá formarse en un estado electrónico excitado que puede
a continuación relajarse a su estado fundamental con emisión de fotón.

12 Quimioluminiscencia indirecta

El mecanismo es el mismo para la formación del intermedio electrónicamente excitado, pero este
intermedio no puede emitir directamente el fotón para dar quimioluminiscencia y requiere la presencia
de un fluoróforo al cual le transfiere la energía, de forma que el fluoróforo se excita y al volver a su
estado fundamental emite un fotón.

13 El catalizador, enzima o ión metálico, reduce la energía de activación y proporciona el ambiente

adecuado para la producción de una alta eficiencia quimioluminiscente durante el proceso.

Los cofactores necesarios en ocasiones para convertir uno o más de los sustratos en una forma capaz de
reaccionar e interaccionar con el catalizador o para proporcionar un grupo saliente eficaz cuando
requiere un marcado para producir el emisor excitado.

14 Instrumentación

La luz emitida en el transcurso de una reacción química o bioquímica esta relacionada con la
concentración de las especies participantes y por tanto, es proporcional a la concentración de las
especies participantes.

Por esta razón, la medida de luz emitida es un indicador de la cantidad de analito presente y al
instrumento básico que es capaz de realizar estas medidas se llama luminómetro.

15 Una de las ventajas más importantes de la quimioluminiscencia como técnica analítica es la

simplicidad de la instrumentación, que incluye como componentes principales:

Una célula de reacción

Un compartimiento cerrado de luz

Un dispositivo de inyección y mezcla de reactivos

Un detector de luz

Un procesador de señal

16 Fundamento de CLIA

17 CLIA

Es la cuantificación de una sustancia, utilizando una reacción antígeno anticuerpo, un marcador como
indicador de la reacción que puede ser un éster de acridina u otro que en combinación con peróxido
ácido o hidróxido de sodio, en contacto con la muestra y el analizador proporcionan la reacción
quimioluminiscente.
El peróxido-ácido provee el agente oxidante para el éster de acridina. El hidróxido proporciona un
cambio de pH necesario para que la reacción de oxidación ocurra.

18 La emisión de luz es causada por los productos de una reacción química específica. La combinación de
las propiedades de aplicación de una enzima y una reacción de detección usando quimioluminiscencia o
bioluminiscencia proporciona una alta sensibilidad analítica

19 El ensayo de CLIA es de tipo sándwich, en el cual, el antígeno en la muestra del paciente es sometido
en la reacción sándwich, el anticuerpo se encuentra covalentemente unido a partículas paramagnéticas y
el anticuerpo secundario está marcado con éster de acridina. Una reacción directa existe entre la
concentración de antígeno en la muestra del paciente y la cantidad de luz emitida durante la oxidación
del éster de acridina.

20 Beneficios de los sistemas quimioluminiscentes

Los inmunoensayos por quimioluminiscencia evitan los desechos tóxicos y los resultados que se
obtienen son equiparables con RIA.

Cuentan con refrigeración integrada, conservando los reactivos en buen estado con el mínimo de
manipulación por parte del operador.

Cuentan con un lector para evitar confusiones y disminuyendo el tiempo de programación.

El rango de tiempo para la obtención de los resultados de perfiles.

La estabilidad de las calibraciones es de 28 días optimizando el costo de la prueba y la estabilidad de los

reactivos va de 8 a 12 meses.

Tiene la capacidad de procesar un promedio de 60 muestras simultáneamente.

Monitoreo de la cantidad de reactivos disponibles

Las curvas de calibración pueden ser consultadas en cualquier momento.

21 Equipos con tecnología quimioluminiscente

ThunderBolt

Architect i1000SR

IS 1200

Hitachi CLA-1
Bio-Flash

AccuLite TSH

22 Muchas gracias…