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Bioluminicencia
Bioluminicencia
2016
2 Luminiscencia
La luminiscencia es definida como la emisión de luz asociada con la disipación de energía de una
sustancia electrónicamente excitada.
Si los electrones de un componente luminiscente son estimulados por una luz en estado normal, estos
dan energía en forma de luz cuando ellos regresan al estado fundamental.
3 Tipos de luminiscencia
5 Quimioluminiscencia
Dos compuestos químicos reaccionan para formar un intermediario en estado excitado (alta energía),
que se desexcita liberando parte de su energía como fotones de luz para alcanzar su estado
fundamental.
6 Las reacciones quimioluminiscentes no suelen liberar calor, porque en su lugar la energía se libera en
forma de luz.
7 Inmunoensayos quimioluminiscentes
Emplean como sonda moléculas sintetizadas o compuestos naturales que generan quimioluminiscencia.
8 El inmunoensayo enzimático, que emplea enzimas como sondas, se desarrolló y rápidamente obtuvo
gran popularidad.
Las enzimas pueden amplificar las señales dependiendo de la actividad catalítica de la enzima.
Dependiendo del sustrato elegido, el método de ensayo se podría definir como IEF O IEQ.
11 Quimioluminiscencia directa
Alguna fracción del producto o intermedio podrá formarse en un estado electrónico excitado que puede
a continuación relajarse a su estado fundamental con emisión de fotón.
12 Quimioluminiscencia indirecta
El mecanismo es el mismo para la formación del intermedio electrónicamente excitado, pero este
intermedio no puede emitir directamente el fotón para dar quimioluminiscencia y requiere la presencia
de un fluoróforo al cual le transfiere la energía, de forma que el fluoróforo se excita y al volver a su
estado fundamental emite un fotón.
Los cofactores necesarios en ocasiones para convertir uno o más de los sustratos en una forma capaz de
reaccionar e interaccionar con el catalizador o para proporcionar un grupo saliente eficaz cuando
requiere un marcado para producir el emisor excitado.
14 Instrumentación
La luz emitida en el transcurso de una reacción química o bioquímica esta relacionada con la
concentración de las especies participantes y por tanto, es proporcional a la concentración de las
especies participantes.
Por esta razón, la medida de luz emitida es un indicador de la cantidad de analito presente y al
instrumento básico que es capaz de realizar estas medidas se llama luminómetro.
Un detector de luz
Un procesador de señal
16 Fundamento de CLIA
17 CLIA
Es la cuantificación de una sustancia, utilizando una reacción antígeno anticuerpo, un marcador como
indicador de la reacción que puede ser un éster de acridina u otro que en combinación con peróxido
ácido o hidróxido de sodio, en contacto con la muestra y el analizador proporcionan la reacción
quimioluminiscente.
El peróxido-ácido provee el agente oxidante para el éster de acridina. El hidróxido proporciona un
cambio de pH necesario para que la reacción de oxidación ocurra.
18 La emisión de luz es causada por los productos de una reacción química específica. La combinación de
las propiedades de aplicación de una enzima y una reacción de detección usando quimioluminiscencia o
bioluminiscencia proporciona una alta sensibilidad analítica
19 El ensayo de CLIA es de tipo sándwich, en el cual, el antígeno en la muestra del paciente es sometido
en la reacción sándwich, el anticuerpo se encuentra covalentemente unido a partículas paramagnéticas y
el anticuerpo secundario está marcado con éster de acridina. Una reacción directa existe entre la
concentración de antígeno en la muestra del paciente y la cantidad de luz emitida durante la oxidación
del éster de acridina.
Los inmunoensayos por quimioluminiscencia evitan los desechos tóxicos y los resultados que se
obtienen son equiparables con RIA.
Cuentan con refrigeración integrada, conservando los reactivos en buen estado con el mínimo de
manipulación por parte del operador.
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22 Muchas gracias…