Instrumentación química

LII. Tendencias actuales en cromatografía de permeación en gel.

Primera parte: teoría y equipamiento
I. Introducción
Este informe se presenta como un complemento de un artículo anterior titulado
"Cromatografía de permeación en gel", que se publicó en 1966 como parte de la serie
"Temas de instalación química" (1). Los últimos cuatro años han visto muchos cambios
en la naturaleza de la cromatografía de permeación en gel (GPC). Si bien era casi
exclusivamente un método de fraccionamiento de polímeros, ahora ha ocupado su
lugar como una técnica de separación de aplicación general junto con otras técnicas de
cromatografía en fase líquida más comúnmente conocidas, por ejemplo, adsorción
líquido-sólido, partición líquido-líquido, intercambio iónico, De hecho, GPC es, para
fines prácticos, un tipo especial de reparto líquido-líquido en el que la fase estacionaria
es el disolvente contenido dentro de los poros del gel y la fase móvil es el disolvente
fuera de las partículas del sustrato de la columna. El desarrollo de nuevos sustratos de
columna de aplicación más universal que son capaces de "clasificar" moléculas en
función del tamaño y la forma moleculares ha ampliado el alcance de la GPC a
sustancias de muy, alto y muy bajo peso molecular, para su uso con una amplia
variedad de solvente, tanto acuoso como orgánico, y para separaciones y
purificaciones a escala industrial.
No existe un nombre universalmente aceptado para la técnica descrita en este
documento. El nombre "permeación en gel", que fue acuñado por John C. Moore de
Dow Chemical Co., ha persistido en la literatura sobre polímeros, pero ya no es
totalmente adecuado, ya que ahora hay sustratos que son capaces de separar
moléculas sobre la base de apresto, que no son geles, por ejemplo, vidrio poroso,
sílice, etc. La "filtración en gel", utilizada durante mucho tiempo por los bioquímicos,
tampoco es completamente aceptable, porque el proceso tiene su sentido habitual.
Otras expresiones que se han utilizado incluyen "cromatografía de tamiz molecular",
"cromatografía de difusión restringida" y otras. Todos estos términos son el resultado
de intentos de elegir un nombre basado en la sospecha de meohanismo de la
separación o en el tipo de El sustrato de columna se ha mantenido en el presente
informe principalmente para evitar confusiones. Aparece en gran parte de la literatura
citada y, para el caso, en casi toda la literatura no biomédica que trata este tema.
Se han publicado varias críticas excelentes (2-4) sobre esta técnica versátil, incluido un
libro titulado "Cromatografía en gel" (6). Varias veces al año se ofrece un curso breve
de dos días titulado "Fundamentos de la cromatografía de permeación en gel" en
varios lugares de los Estados Unidos con el patrocinio de la American Chemical Society.
El curso está dirigido a la persona que ha tenido poca o ninguna exposición a GPC y
que está interesada en realizar separaciones por tamaño.

1
Una serie de seminarios internacionales sobre GPC se han celebrado y se seguirán
celebrando al menos una vez al año con el patrocinio de Waters Associates, Inc.,
Framingham, Mass. A continuación, se resumen los que ya se han celebrado o se han
programado:
1 de enero de 196 y Cleveland
2ndSept. 1617,196.5-Boston
3 al 19 y 20 de mayo de 1966 - Ginebra
4-22-24 de mayo de 1967-Miami
5th-Summer, 1968-Londres
6to-4et. 7-9,196 y Miami
7º-4ct. 15/12/1969 - Mónaco
8-1-3 de julio de 1970-Praga
9th4ct. 5-8, 1970 – Miami
Waters publicó los preprints de los artículos presentados y algunos de los más
recientes aún están disponibles en ellos. También han preparado una extensa
bibliografía sobre GPC que contiene referencias a varios cientos de artículos.
El comité ASTM D-20 está actualmente involucrado en la formulación de una
terminología estandarizada para GPC, así como una práctica recomendada aceptable.
Un experimento "round robin" seguramente seguirá a la aceptación de un
procedimiento adecuado.
La cromatografía líquida y, en consecuencia, la GPC están experimentando un
renacimiento similar al que experimentó la cromatografía de gases a fines de la década
de 1950. El desarrollo de la instrumentación adecuada y la necesidad desesperada de
una técnica de maniobra aplicable a sustancias no volátiles térmicamente lábiles han
sido en gran parte responsables de este renacimiento.

11. Mecanismo de separación

Altgelt (6) publicó una excelente revisión de la teoría y la mecánica de las separaciones
de GPC. Se han propuesto al menos tres mecanismos para describir el proceso de
separación de GPC, y todos probablemente operan simultáneamente con uno o más
dominantes bajo un conjunto dado de parámetros operativos. GPC es un proceso
cromatográfico de partición líquido-líquido en el que las moléculas de soluto se
distribuyen entre dos fases líquidas: el líquido contenido en los poros del gel y el
líquido fuera del gel, es decir, en el volumen intersticial. De acuerdo con el mecanismo
de la aclusión estérica se asume que:

 diferentes fracciones del volumen total de poros son accesibles para moléculas
de diferentes tamaños porque las partículas de gel contienen una distribución

2
 de tamaños de poros. las moléculas grandes encuentran un número
relativamente pequeño de poros en los que pueden entrar un número
relativamente grande de poros.
 hay equilibrio difusional; el tiempo necesario para que las moléculas de soluto
entren y salgan de las partículas de gel es mucho menor que el tiempo de
residencia de la zona del soluto.
Por lo tanto, se esperaría que el proceso tuviera una velocidad de flujo en estado
permanente (no controlado por difusión) en un rango relativamente amplio de
velocidades lineales, y esto es, de hecho, lo que se observa con mayor frecuencia de
manera experimental. Se define así un coeficiente de distribución:

Kd=Vi,acc./Vi
y el volumen de retención de una especie dada se convierte en

VR=Vo+KdVi
Donde:
Vi. .... = volumen de poro accesible
Vi = volumen total de poros
V, = volumen intersticial
Los efectos de la exclusión estérica deberían ser más evidentes cuando la mayor parte
de las moléculas de soluto es más grande que muchos de los poros del gel.
En el mecanismo de difusión restringida, se supone que el proceso es, en un grado
significativo, controlado por difusión, es decir, no hay equilibrio de difusión. Los
volúmenes de retención observados deberían entonces verse afectados por cambios
en la tasa de flujo; las formas de las bandas cromatográficas anchas observadas para la
mezcla polidispersa también deben depender del caudal. La ausencia de un equilibrio
difuso debería ser más pronunciada como velocidades lineales muy altas, y es bajo tal
condición que el mecanismo de dilución estricto sería el dominante.
Se han propuesto varias teorías termodinámicas para la separación. Marsden ha
distinguido entre las contribuciones de entalpía y entropía a Kd (7). DeVries relaciona
Vr con el volumen molar del soluto y la distribución del tamaño de los poros del gel (8).
Casassa (9) propone una teoría que explica la separación sobre la base de la existencia
de diferentes conformaciones de cadena dentro de poros esféricos, cilíndricos o en
forma de placa. Concluye que la distribución de soluto entre las dos fases se rige
completamente por la pérdida de entropía conformacional al entrar en los poros.
Carmichael (10) relaciona el comportamiento de las moléculas de espirales aleatorias
en poros uniformes con la probabilidad de que la distancia de la raíz cuadrada media
de un extremo a otro de las moléculas sea menor que el radio medio de los poros.

3
Recientemente se ha propuesto un efecto de exclusión secundario (11) para dar
cuenta de las separaciones excepcionalmente buenas observadas con columnas
operadas en condiciones aparentemente sobrecargadas, es decir, con hasta diez veces
la carga de muestra normalmente utilizada. Brevemente, si se coloca una mezcla de
moléculas grandes y pequeñas en R. gel, las moléculas pequeñas se difundirán más
rápidamente en los pares de gel. En consecuencia, las moléculas más grandes
encontrarán relativamente pocos poros desocupados y se reducirá la probabilidad de
que se diluyan en un par ocupado. Lo más probable es que las moléculas más grandes
se muevan más abajo en la columna hasta que encuentren pares desocupados. El
resultado neto es una mejora de la separación.

Ill. Resolución
Clásicamente, la resolución de dos picos cromatográficos se ha definido como

Donde:
Rw = no. de resolución de anchos de pico; Vr2 y Vr1, = volúmenes de retención, en el
pico máximo, para las dos especies; W1 y W2 = anchos de base extrapolados para las
dos especies.

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La resolución de la línea de base se observa cuando Rw = 15. Sin embargo, esta
ecuación no nos dice nada sobre los factores que afectan la resolución. Se puede
derivar una ecuación.

en el que el primer factor representa la selectividad, el segundo, la capacidad y el

tercero, la dispersión aleatoria.
El término de selectividad se refiere a los coeficientes de distribución de las dos
especies de solutos y a los diferentes que son. Cuanto mayor sea la diferencia entre K1
y K2, mayor será la diferencia entre VR1 y VR2. Por lo tanto, la resolución de un par de
solutos dado podría aumentarse eligiendo un gel tal que aumente la diferencia entre
K1 y K2.
El término de capacidad está relacionado con la relación de capacidad, K ', que incluye
términos que involucran tanto el coeficiente de distribución como la cantidad de fase
de papelería en la columna. La magnitud de K 'realmente determina cuánto tiempo
permanecerá un soluto en la columna. Los valores pequeños de K 'dan como resultado
pequeños volúmenes de retención.
El término de dispersión aleatoria es una función del número de platos teóricos, N, en
la columna. La separación, per se, no se logra mediante un N grande; un recuento alto
de placas solo asegurará un mínimo de expansión de una banda cromatográfica de
otra manera estrecha y bien formada. La dispersión aleatoria incluye los efectos de las
desigualdades de flujo dentro de la columna debido a la falta de homogeneidad en la
densidad de empaquetamiento en la columna, el desequilibrio del soluto entre las dos
fases y la difusión longitudinal, principalmente en la fase móvil.

IV. Equipo
Dado que la GPC es un tipo específico de cromatografía líquida, gran parte del equipo
que se usa habitualmente para las técnicas cromatográficas en columna de fase líquida
más clásicas puede emplearse para este método de fraccionamiento. Es valioso aquí
esbozar brevemente algunos de los diversos tipos de aparatos que son aplicables, pero
no se intentará proporcionar una lista completa de toda la parafernalia disponible;
Primero veremos los tipos de componentes que se pueden usar en enfoques de
"hágalo usted mismo" y luego veremos qué está disponible comercialmente en forma
de cromatógrafos líquidos completos.
La Figura 1 es un diagrama de flujo que describe los diversos componentes que pueden
incluirse en un sistema cromatográfico de líquidos completo. La única parte que es
absolutamente esencial, por supuesto, es la columna de fraccionamiento, porque es en
la columna donde la separación real de a. tiene lugar la mezcla en sus componentes;
además, es simplemente la naturaleza del sustrato de la columna lo que clasifica a un
cromatógrafo como un instrumento GPC, es decir, cuando se usa un sustrato que

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separa moléculas sobre la base del tamaño molecular, uno se refiere al instrumento
como s. cromatógrafo de permeación en gel. De lo contrario, es simplemente un
cromatógrafo de líquidos. Todos los componentes, con la excepción de la columna, se
eligen para mejorar la reproducibilidad y / o confiabilidad o para hacer que el
funcionamiento sea más conveniente. La GPC se puede realizar, en su forma más
simple, con una columna cromatográfica de vidrio abierta empaquetada con un
sustrato adecuado. El solvente generalmente se suministra desde un depósito en la
parte superior de la columna mediante alimentación por gravedad. La recogida de
fracciones no puede implicar más que cambiar periódicamente un recipiente situado
debajo de la base de la columna, siendo el método de detección la observación visual
(en el caso de sustancias coloreadas) o la eliminación del disolvente de las fracciones
recogidas seguida de una conservación y / o pesaje. del residuo de muestra contenido
en cada recipiente. En el otro extremo, uno podría incluir en su instrumento "recortes"
como la inyección automática de muestras y la recolección de fracciones, múltiples
detectores cromatográficos de líquidos, disposición para reciclar toda o parte de la
muestra a través de la misma columna para mejorar la resolución, y una computadora
digital para control de diversas funciones y parámetros operativos (temperatura,
presión, caudal, control de ciclo, etc.) así como procesamiento automático de datos. Al
menos un fabricante (Problematits, Inc., Waltham, Mass.) Ha descrito tal sistema
integrado diseñado alrededor de a. pequeña computadora dedicada. Por supuesto, un
aumento generalizado resulta en un aumento de los costos, a menudo más allá de los
límites que pueden justificarse sobre la base de la utilidad de la técnica en sí (más
conocida como "pago" en el lenguaje del contable). La Tabla 1 enumera los fabricantes
de componentes de cromatografía líquida.

A. Bombas
Tres diseños de bombas básicas probablemente representan la mayoría de las bombas
dosificadoras de líquidos disponibles comercialmente: (1) Las bombas peristálticas son
útiles, principalmente, para aplicaciones de baja presión para caudales en o cerca de
aquellos en condiciones de alimentación por gravedad. No son sistemas de
desplazamiento positivo y la velocidad de avance para una velocidad determinada del
motor generalmente no es reproducible día a día.

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(2) Las bombas de jeringa están disponibles en capacidades de volumen desde unos
pocos mililitros hasta varios litros (sin rellenar) para operar hasta varios miles de libras
de presión. No tienen pulso y, por lo tanto, se pueden usar con detectores sensibles al
flujo y a la presión sin sistemas de amortiguación de pulsaciones. Sus principales
inconvenientes son la necesidad de recargas periódicas y su gran volumen interno; en
los casos en que se desee la operación de reciclaje, las bombas de jeringa no se
pueden usar, los componentes de la muestra fraccionada se volverían a mezclar
cuando se dirigieran al depósito de disolvente grande en la bomba.
(3) Las bombas de pistón alternativo, disponibles para operar con presiones de hasta
varios miles de libras, pueden usarse fácilmente para trabajos de cromo convencional y
reciclado.

B. Columnas
Hay muchos diseños de columnas disponibles, tanto de metal como de vidrio, de
longitud fija y longitud ajustable. Las columnas de longitud variable a menudo incluyen
un émbolo que pasa a través del accesorio final de la columna, que se puede mover
hacia adentro o hacia afuera para obtener una longitud de empaque determinada
dentro de la columna. Un "kit de columna" está disponible en Laboratory Data.
Control, Inc., que incluye accesorios de extremo de pequeño volumen junto con tubos
de diámetro interior de precisión para ensamblar una variedad de columnas. Las
columnas empaquetadas se pueden comprar a algunos de los fabricantes de
instalaciones completas.
Según se informa, se puede lograr una resolución extremadamente alta mediante el
uso de columnas muy estrechas (1-2 mm de diámetro) empaquetadas con materiales
muy finos (malla 200 y más pequeños). Las altas presiones que a menudo se requieren
para lograr caudales prácticos con columnas estrechas, por supuesto, hacen que las
consideraciones de diseño de instrumentos sean más estrictas (bombas de alta
presión, "plomería" y detectores de bajo volumen, seguridad, etc.) y esto debe tenerse
en cuenta al considerar su usar.
B. Detectores
Se han usado y / o están disponibles comercialmente muchos tipos de detectores
cromatográficos de líquidos. Estos se basan en una variedad de propiedades físicas de
moléculas en 8dución. Algunos dependen de la presencia de una funcionalidad
química específica. Otros no lo hacen y son más universales en su ámbito de
aplicación. A menudo, se utilizan múltiples detectores, uno, no específico (por
ejemplo, un refractómetro diferencial) para indicar la elución de todos los
componentes de la muestra, otro, uno específico (por ejemplo, un fotómetro UV), para
detectar la presencia de un tipo químico específico. en el eluido. Con sistemas
detectores duales adecuadamente seleccionados, se puede, por tanto, obtener
información relativa a la distribución del peso molecular del baño y la relación entre la
MWD y la composición química de los copolímeros. Por ejemplo, Cantow (12) y
Runyon (13) han informado del uso de dos detectores, un refractómetro diferencial,

8
para monitorear el fraccionamiento GPC de copolímeros de estireno-butadieno: el
primero responde a todos los componentes del polímero, independientemente del
tipo químico, mientras que el este último es sensible solo a los bloques de estireno
aromático en el copolímero. A continuación, se incluye una descripción de algunos
detectores cromatográficos de líquidos:
(1) Refractómetro diferencial: extremadamente sensible, con algunas unidades
comerciales capaces de detectar una diferencia en el índice de refracción de
10-7 o incluso 10-8 unidades de R.I. Los detectores basados en el índice de
refracción son de aplicación casi universal, ya que no dependen de la presencia
de grupos funcionales específicos. Además, dado que muchos sistemas
poliméricos exhiben un índice de refracción constante en un amplio intervalo
de pesos moleculares, a menudo es posible relacionar la respuesta del
detector con la cantidad de muestra que eluye de la columna cromatográfica.
Esta es la razón por la que el refractómetro diferencial ha encontrado una
amplia aceptación en las funciones de GPC en las que se calculan los
promedios y distribuciones de peso molecular.
Estos detectores son extremadamente sensibles al flujo y la temperatura (muchos
solventes orgánicos exhiben un coeficiente de temperatura de aproximadamente 10 -4
unidades R.I. / ºC).
(2) Los fotómetros ultravioleta y visible están disponibles como sistemas de haz
simple y doble. El uso de estos detectores se limita a aquellas aplicaciones en
las que los solutos de interés absorben radiación de la longitud de onda
empleada y el disolvente no. Para solutos específicos que tienen altos
coeficientes de extinción, U.V. y los fotómetros visibles ofrecen una
sensibilidad extrema con buena temperatura y estabilidad de flujo.

(3) Se permite que el efluente de la columna de ionización de llama caiga y moje

un alambre, cadena o banda metálica en movimiento que luego erra un horno
mantenido a una temperatura lo suficientemente alta como para evaporar
completamente el solvente del elemento en movimiento, pero sin alterar el
residuo. muestra. Este material residual se pasa luego directamente a través
de un detector de ionización de llama donde se piroliza e ioniza o primero se
piroliza en un horno de alta temperatura y luego el pirolizado se "sopla" en el
detector de ionización de llama. En ambos casos, la celda de ionización de
llama es similar a la que se usa con los instrumentos de cromatografía de gases
y la corriente de ionización medida debe estar relacionada con la cantidad de
muestra en el elemento móvil y la proporción relativa de carbono contenida
en las moléculas de muestra. En la práctica, los efectos secundarios de la
ionización complican la situación y la relación señal / ruido observado deja
mucho que desear. En consecuencia, los detectores de ionización de llama
actualmente disponibles no han ganado una amplia aceptación por los
cromatógrafos de líquidos. Además, estos detectores se limitan a aquellas

9
 aplicaciones en las que se puede eliminar el disolvente del elemento móvil sin
eliminar ninguno de los solutos (componentes de la muestra).
(4) Los detectores de calor de adsorción generalmente consisten en una
"microcolumna" que contiene una pequeña cantidad de adsorbente en la que
está incrustado un elemento sensor de temperatura (por ejemplo, un
termistor). El calor de adsorción y desorción se detecta y mide como un
cambio en la temperatura de la columna adsorbente. El detector fino suele ser
muy sensible y útil para la detección cualitativa; no es adecuado para trabajos
cuantitativos, lo que requiere una calibración frecuente.
(5) Los detectores de conductividad eléctrica generalmente consisten en un par
de electrodos metálicos contenidos en una microcélula junto con un circuito
de medición de puente de Wheatstone. Las aplicaciones se limitan a aquellos
sistemas que conducen electricidad. Los desarrollos futuros en la dirección de
puentes de conductividad sin electrodos de alta frecuencia podrían extender
su utilidad a conductores deficientes.
(6) La detección de infrarrojos, hasta ahora, se ha limitado a modificaciones
caseras de espectrofotómetros de infrarrojos de grabación convencionales (14,
16). Las aplicaciones se limitan a muestras que contienen grupos funcionales
que exhiben fuertes bandas de absorción dentro del rango de longitud de
onda del instrumento. La sensibilidad es relativamente baja, excepto en los
casos en que se puede controlar una mano de absorción extremadamente
fuerte (por ejemplo, carbonilo, C-H, etc.)
(7) Los detectores polarográficos aún no están comercialmente disponibles. Sin
embargo, un diseño práctico podría implicar la aplicación de un potencial fijo o
de variación rápida (en el caso de instrumentos oscilográficos) a un par de
electrodos estáticos; un electrolito de soporte se introduciría en la corriente
de líquido que fluye justo delante del detector. Un registro tanto del potencial
de media onda como de la corriente de difusión proporcionaría información
tanto cualitativa como cuantitativa sobre las especies presentes.
(8) Los detectores gravimétricos que implican el pesaje continuo automático
directo del efluente cromatográfico (para obtener la densidad), o la
evaporación automática del disolvente y el pesaje del residuo resultante de
microfracciones discretas, parecerían ofrecer un detector muy valioso para la
cromatografía líquida. Bien podría representar un avance tan importante en la
cromatografía líquida como el catarómetro (termómetro
(9) detector de conductividad) en la cromatografía de gases. Se ha demostrado
que ambos enfoques mencionados anteriormente son factibles en estudios
basados en el uso de una electrobalanza como sensor, e informados por
Radawski y Williams, pero no parece que se disponga de un instrumento
comercial en un futuro previsible (16). "La necesidad es la madre de los
inventos, ya que la necesidad lo dicta, no hay duda de que próximamente
aparecerán sistemas de detección específicos que se basan en otras
propiedades moleculares como la polarización (constante dieléctrica), el

10
 efecto piezoeléctrico, la viscosidad, el efecto kelvin” cubo eléctrico “(medición
de deflexión de gotitas de líquido cargadas en un campo), ¿y ...?

C. Sistemas completos
Los instrumentos disponibles comercialmente para realizar separaciones de
tamaño molecular en fase líquida se pueden clasificar, para nuestros propósitos,
como
1. cromatógrafos de permeación en gel
2. cromatógrafos de líquidos de uso general
Aunque las separaciones basadas en diferencias de tamaño molecular se pueden
realizar con todos los cromatógrafos de líquidos equipados con un sustrato de
columna adecuado, algunos son más adecuados desde el punto de vista de la
conveniencia y la eficiencia de separación alcanzable. Generalmente, la máxima
eficiencia se puede lograr con sistemas que contienen un mínimo de volumen
muerto con columnas de calibre estrecho que contienen empaquetamiento
(sustrato) finamente dividido con una distribución de tamaño de partícula
estrecha. Algunos de los instrumentos más nuevos se han diseñado con esta
capacidad. Algunos son modulares, otros no; algunos tienen varios detectores,
inyección automática, recolección de fracciones, sistemas de bombeo de alta
presión, etc. como opciones. La Tabla 2 es un resumen de algunos de los
cromatógrafos de líquidos disponibles comercialmente. Los analizadores
biomédicos especializados se han omitido principalmente porque tendrían que ser
modificados extensamente para hacerlos convenientemente aplicables a las
separaciones GPC.

V. Sustratos de columna
Muchos sustratos de columna nuevos están disponibles comercialmente desde el
informe anterior (1). Se pueden clasificar en rígidos, semirrígidos o blandos. Los
sustratos rígidos, caracterizados por su volumen de poro fijo, bastante uniforme,
alta permeabilidad de la columna y capacidad de ser "húmedo" tanto por agua
como por disolventes orgánicos incluyen sílice y vidrio porosos. estas sustancias no
se ven afectadas por la mayoría de los disolventes y, por tanto, permiten lograr
separaciones en disolventes que degradan muchos sustratos orgánicos.

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Los sustratos semirrígidos también exhiben altas permeabilidades de columna, lo que
permite el funcionamiento a altos caudales, son en su mayoría compatibles con
disolventes orgánicos (aunque al menos uno ha sido modificado para que sea
humectable por sistemas de disolventes acuosos) y están disponibles en un amplio
espectro. de permeabilidades para aplicaciones de alta resolución que involucran
tanto monómeros como polímeros de alta.
En esta clase se incluyen muchos de los poliestirenos reticulados disponibles
comercialmente (styragel, poragel, aquapak), algunas resinas de intercambio iónico y
un gel de acetato de polivinilo desarrollado recientemente comercializado con el
nombre 2 merck-O-gel-OR2.2 Este último el sustrato complementa los geles de
poliestireno ya que se puede usar con muchos disolventes que no se pueden usar con
los geles de poliestireno, por ejemplo, alcoholes inferiores.
Los geles blandos se aplican principalmente a sistemas acuosos y exhiben bajas
permeabilidades de columna (útiles solo a velocidades de flujo bajas). sus rangos de
permeabilidad son variables y dependen del grado de "hinchamiento del solvente"
cuando se sumergen en un solvente dado. En este grupo se incluyen dextranos
reticulados (Sephadex), almidón, caucho, poliestirenos ligeramente reticulados, geles
de agarosa y poliacrilamida. La elección de un sustrato de columna para un
fraccionamiento determinado depende principalmente de las restricciones impuestas
por la combinación de soluto / disolvente. el relleno de la columna debe ser
humectable en el sistema de interés y no debe ser degradado por él; Si se indica la
operación a una temperatura elevada (para disolver la muestra o mejorar la difusión
molecular), entonces el sustrato de la columna debe ser estable a esa temperatura. Los
geles blandos, debido a su compresibilidad inherente, no se pueden usar a presiones
elevadas, se limitan a la operación en cortes relativamente bruscos en sus límites de
exclusión, a menudo una propiedad deseable para lograr separaciones específicas.
Numerosos trabajadores han ofrecido muchas otras generalizaciones, pero el hecho de
la vida sigue siendo eso. Una vez que se han tenido en cuenta las consideraciones de
compatibilidad, la elección del "mejor tipo de columna para el trabajo" se sigue
haciendo sobre la base de prueba y error.
La tabla 3 enumera muchos de los sustratos de columna disponibles comercialmente
que se pueden usar para separaciones de tamaño molecular junto con algunas de sus
propiedades informadas.

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