CINETICA Enzimática

 Cinética enzimática

 Teoría de Michaeli‐Menten

 Teoría de Briggs‐Haldane

 Análisis de los datos cinéticos: transformaciones de la ecuación de Michaelis‐Menten

 Medida de actividad enzimática

 Influencia del pH y la temperatura de las reacciones enzimáticas

 Cinética de las reacciones enzimáticas con dos o más substratos

La cinética enzimática estudia la velocidad de las reacciones catalizadas por enzimas.

Informan acerca del mecanismo de la reacción catalítica y de la especificidad del enzima. La

medida se realiza siempre en las condiciones óptimas de pH, temperatura, presencia de
cofactores, etc, y se utilizan concentraciones saturantes de sustrato.

La velocidad puede determinarse bien midiendo la aparición de los productos o la desaparición

de los reactivos.

CONCEPTOS BÁSICOS DE CINÉTICA QUÍMICA

Reacción de orden cero, la velocidad de formación del producto es independiente de la

concentración de sustrato: v = k

Reacción de primer orden la velocidad de formación de los productos es directamente

proporcional a la concentración del sustrato: v = k [A]. Así, en la reacción:

(hidrólisis de la sacarosa proporcional a la concentración de sacarosa)

Reacción de segundo orden es aquella en la que la velocidad de formación del producto

depende:

1. de la concentración de dos sustratos (como en una reacción de condensación): v = k

[A1] [A2]

2. del cuadrado de la concentración de un único sustrato (reacción de dimerización): v =

k [A]2
Al seguir la velocidad de aparición de producto (o de desaparición del sustrato) en función del
tiempo se obtiene la llamada curva de avance de la reacción, o simplemente, la cinética de la
reacción.

Problema: la velocidad de acumulación del producto disminuye porque se consume el

sustrato.

Se procede a medir la velocidad inicial de la reacción (v0).

La (v0) es igual a la pendiente de la curva de avance a tiempo cero

Para estudiar la cinética enzimática:

• Medir el efecto de la concentración inicial de sustrato sobre la velocidad inicial de la

reacción

• Mantener la cantidad de enzima constante.

Si [S]0 es pequeña, la velocidad inicial es directamente proporcional a la concentración de

sustrato, y por tanto, la reacción es de primer orden.

Si [S]0 es alta el enzima se encuentra saturada por el sustrato, y la velocidad ya no depende de

[S]0. En este punto, la reacción es de orden cero y la velocidad es máxima (Vmax).

}
MODELO CINETICO DE MICHAELIS-MENTEN

Las reacciones catalizadas por enzimas ocurren en dos etapas: (1) se forma el complejo
enzima‐sustrato y (2) el complejo enzima‐sustrato da lugar a la formación del producto,
liberando el enzima libre:

k1, k2 y k3: constantes cinéticas individuales de cada proceso o constantes microscópicas de

velocidad.

Así:

v1 = k1 [E] [S] , v2 = k2 [ES] , v3 = k3 [ES]}

 Se distingue entre enzima libre (E) y enzima unido al sustrato (ES), de forma que la
concentración total de enzima, [ET], es:

ET] = [E] + [ES] (ET es constante)

Como [E] = [ET] - [ES],

resulta que: v1= k1[S] [ET] - k1 [S] [ES]

MODELOS CINETICOS
Por lo tanto, en el estado estacionario, la velocidad de formación del producto es:

Se define la velocidad máxima de la reacción: Vmax = k3 [ET]

Tanto con las suposiciones de Michaelis-Menten, como con las del estado estacionario, se
llega a la expresión más conocida de la ecuación de Michaelis-Menten:

CALCULO DEL KM DE UNA ENZIMA

La representación gráfica de la ecuación de Michaelis-Menten (v0 frente a [S]0) es hiperbólica.

Vmax : valor máximo al que tiende la curva experimental

KM : concentración de sustrato a la cual la velocidad de la reacción es la mitad de la V max.